復(fù)方新會陳皮含片中橙皮苷、川陳皮素、橘皮素的含量測定

梁志云 昌水平 張明 蔣三元

【摘 要】 目的：建立復(fù)方新會陳皮含片中新會陳皮指標(biāo)性成分的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法，以Inertsil ODS-SP柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）為色譜柱，以乙腈-水為流動相梯度洗脫，橙皮苷的檢測波長為283 nm，川陳皮素、橘皮素的檢測波長為330nm，流速為1 mL·min-1，柱溫30 ℃。結(jié)果：橙皮苷、川陳皮素、橘皮素與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系;回歸方程分別為y=427363x-38147（r=0.9999），y=155126x-13930（r=0.9999），y=86681x-19198（r=0.9997）;平均加樣回收率分別為96.72%（RSD=0.6%），98.93%（RSD=0.6%），99.14%（RSD=0.6%）。結(jié)論：建立的新會陳皮指標(biāo)性成分的含量測定方法簡便，重復(fù)性好，可用于復(fù)方新會陳皮含片的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 復(fù)方新會陳皮含片;橙皮苷;川陳皮素;橘皮素;含量測定

【中圖分類號】R284.1?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2021）16-0036-03

Content Determination of Hesperidin，Nobiletin and Tangeretin in Compound Xinhui Citri Reticulatae Pericarpium Buccal Tablets

LIANG Zhiyun CHANG Shuiping ZHANG Ming JIANG Sanyuan

Jiangmen Xin Hui Hospital of Traditional Chinese Medicine，Jiangmen 529100，China

Abstract：Objcetivet To establish the method for the content determination of the index component in xinhui citri reticulatae pericarpium of buccal tablets. Methods? Chromatographic conditions were as follows： Inertsil ODS-SP column （150 mm× 4.6 mm，5 μm） was used with mobile phase of acetonitrile-water system， gradient elution was at a flow rate of 1.0 ml·min-1.The detection wavelength of hesperidin was set at 283 nm.The detection wavelength of nobiletin and tangeretin were set at 330nm.The column temperature was 30 ℃.Results There was a good linear relationship between hesperidin， nobiletin， tangeretin and peak area integral.The regression equations respectively were y=427363x-38147（r=0.9999），y=155126x-13930（r=0.9999），y=86681x-19198（r=0.9997）.The average recovery rates respectively were 96.72%（RSD=0.6%），98.93%（RSD=0.6%），99.14%（RSD=0.6%）.Conclusion The method for the content determination of the index component in xinhui citri reticulatae pericarpium is simple and reproducible， which can be used for the quality control of compound xinhui citri reticulatae pericarpium buccal tablets.

Keywords：Compound Xinhui Citri Reticulatae Pericarpium Buccal Tablets; Hesperidin; Nobiletin; Tangeretin; Content Determination

廣陳皮是茶枝柑Citrus reticulata “Chachi”的干燥成熟果皮，以新會陳皮為道地藥材，與其他產(chǎn)地的陳皮所含的成分存在差異，按陳皮的檢測方法其質(zhì)量無法達(dá)到法定要求，2020年版《中國藥典》對廣陳皮進(jìn)行了修訂，要求作橙皮苷、川陳皮素、橘皮素三種成分的含量測定[1]。現(xiàn)代藥理研究[2]表明，新會陳皮的黃酮類成分有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗過敏等作用，其中橙皮苷、川陳皮素、橘皮素是促進(jìn)胃腸動力的活性物質(zhì)，橙皮苷的抗氧化活性最強(qiáng)，川陳皮素能舒張支氣管起到平喘的治療效果，橘皮素具有很好的祛痰、理氣作用。復(fù)方新會陳皮含片是以道地藥材新會陳皮為主藥的制劑，具有順氣化痰，祛風(fēng)健胃的功效，用于風(fēng)寒咳嗽、痰多嘔逆。該含片制劑研制過程中，雖然做了橙皮苷的含量測定研究[3]，但并不能真正達(dá)到制劑質(zhì)量控制的要求。因此，本文重新探討了復(fù)方新會陳皮含片中橙皮苷、川陳皮素、橘皮素三種成分的含量測定，更好地控制其含片的內(nèi)在質(zhì)量，對保證制劑在臨床用藥中的良好療效有著重要意義。

1 儀器與試藥

LC-20A高效液相色譜儀（日本島津）;XY4-180E超聲波清洗機(jī)（上海析宇儀器有限公司）;AUW120D十萬分之一電子分析天平（日本島津）。

橙皮苷對照品（批號：190802），川陳皮素（批號：200322），橘皮素（批號：190918），均購于成都植標(biāo)化純生物技術(shù)有限公司。復(fù)方新會陳皮含片（批號：20190906，20191010，20191115，由江門市新會區(qū)中醫(yī)院制備，規(guī)格：每片重0.8 g）;甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Inertsil ODS-SP柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）;檢測波長：283 nm（0～15 min）、330 nm（15～40 min）;流速：1 mL·min-1;柱溫：30 ℃;進(jìn)樣量：10 μL;梯度洗脫條件見表1。

2.2 混合對照品溶液的制備 精密稱取橙皮苷對照品5.78 mg、川陳皮素對照品7.84 mg、橘皮素對照品3.36 mg，分別置20 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。按8∶1∶1比例，依次精密吸取上述三種對照品溶液置同一個10 mL量瓶中，搖勻，制成混合對照品溶液，其濃度分別為橙皮苷289 μg·mL-1、川陳皮素39.2 μg·mL-1、橘皮素16.8 μg·mL-1。

2.3 供試品溶液的制備 取復(fù)方新會陳皮含片研磨成粉末，精密稱取粉末約0.5 g，置10 mL量瓶中，加甲醇溶液至刻度，超聲處理45 min，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的量，搖勻，0.45 μm微孔濾膜過濾，取濾液作為供試品溶液。

2.4 陰性對照溶液的制備 取缺少陳皮藥材的陰性對照樣品，同供試品“2.3供試品溶液的制備”項(xiàng)下操作，制備陰性對照溶液。

2.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)考察 在上述色譜條件下，精密吸取2.2項(xiàng)下混合對照品溶液、2.3項(xiàng)下供試品溶液和2.4項(xiàng)下陰性對照溶液各10 μL，分別注入高效液相色譜儀，測定。結(jié)果表明，供試品的保留時(shí)間和峰型與混合對照品一致，且陰性對照無干擾。見圖1。

2.6 線性關(guān)系 精密吸取混合對照品溶液1、5、10、15、20 μL，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算其回歸方程分別為：橙皮苷y=427363x-38147（r=0.9999），川陳皮素y=155126x-13930（r=0.9999），橘皮素y=86681x-19198（r=0.9997）。橙皮苷、川陳皮素、橘皮素分別在0.289～5.78 μg、0.0392～0.784 μg、0.0168～0.336 μg的線性范圍內(nèi)，與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2”項(xiàng)下混合對照品溶液10 μL，在上述色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積值并計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。橙皮苷的RSD為0.68%，川陳皮素的RSD為1.27%，橘皮素的RSD為0.94%，表明精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液 10 μL，在0、2、4、6、8、10、12、24 h進(jìn)樣，測定并記錄峰面積值。試驗(yàn)結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定，供試品中橙皮苷的RSD為1.06 %，川陳皮素的RSD為1.62%，橘皮素的RSD為0.81%。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取復(fù)方新會陳皮含片0.5 g（批號：20191010），共6份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測定并記錄峰面積，計(jì)算三種成分的含量。橙皮苷的平均含量為9.4624 mg·g-1，RSD為0.73%;川陳皮素的平均含量為0.9249 mg·g-1，RSD為0.34%;橘皮素的平均含量為0.6088mg·g-1，RSD為0.21%。說明本方法重復(fù)性良好。

2.10 加樣回收試驗(yàn) 取已知三種成分含量的復(fù)方新會陳皮含片（批號：20191010），精密稱取樣品約0.25 g，共5份，分別置于10 mL量瓶中，加入一定量的對照品溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。注入高效液相色譜儀，進(jìn)樣測定并記錄峰面積，計(jì)算橙皮苷、川陳皮素、橘皮素的含量。結(jié)果見表2。

2.11 樣品含量測定 取三批復(fù)方新會陳皮含片樣品，按“2.3”項(xiàng)下制備方法制備供試品溶液，注入高效液相色譜儀，外標(biāo)法計(jì)算樣品中橙皮苷、川陳皮素、橘皮素的含量。結(jié)果見表3。

3 討論

廣陳皮（新會陳皮）是廣東十大道地中藥材之一。對新會陳皮的橙皮苷、川陳皮素、橘皮素成分含量測定研究已有報(bào)道[4-7]，2020年版《中國藥典》一部，陳皮項(xiàng)下對廣陳皮橙皮苷、川陳皮素、橘皮素含量列為質(zhì)量檢測指標(biāo)。復(fù)方新會陳皮含片中主藥就是新會陳皮，以藥粉直接入藥，參照藥典實(shí)驗(yàn)，結(jié)果按藥典流動相梯度洗脫中，可能是復(fù)方制劑中成分較復(fù)雜的關(guān)系，川陳皮素峰與橘皮素峰之間分離度較差，雜峰影響較大，不能完全分離出指標(biāo)成分峰，經(jīng)多次調(diào)整流動相比例與分析時(shí)間，按表1梯度洗脫結(jié)果樣品中三種成分峰基線分離度大于1.5，峰形良好，且保留時(shí)間適宜。

藥典要求廣陳皮中含橙皮苷不得少于2.0%，含川陳皮素和橘皮素的總量不得少于0.42%。復(fù)方新會陳皮含片實(shí)驗(yàn)用量的廣陳皮折算，含橙皮苷約3.8%，含川陳皮素和橘皮素的總量約為0.53%，結(jié)果表明新會陳皮原材料質(zhì)量良好。

本文建立的高效液相色譜法測定復(fù)方新會陳皮含片中橙皮苷、川陳皮素、橘皮素的含量方法，簡便、準(zhǔn)確，穩(wěn)定性好，能較好的控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，是有效的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)資料。

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（收稿日期：2021-01-15 編輯：劉 斌）

基金項(xiàng)目：江門市新會區(qū)科技局項(xiàng)目（No.201601）。

作者簡介：梁志云（1989-），女，漢族，本科，主管中藥師，研究方向?yàn)橹兴幹苿┭芯俊-mail：190020601@qq.com