HPLC法測定腦脈醒神膠囊中三七皂苷R1的含量

張瑜++曾聰彥胡玉良++卓斌++陳健聰

【摘要】目的：建立腦脈醒神膠囊中三七皂苷R1含量測定的方法，為其制定質量標準提供依據(jù)。方法：采用C18色譜柱；流動相：乙腈-水梯度洗脫；流速：10mL/min；柱溫：25℃；檢測波長：203nm。結果：三七皂苷R1進樣量在005～03μg之間與峰面積呈良好的線性關系，r=09993，平均回收率9930%，RSD為074%（n=6）。結論：本方法簡便、準確、可靠，可用于腦脈醒神膠囊制劑的質量控制。

【關鍵詞】腦脈醒神膠囊；三七皂苷R1；HPLC；含量測定

【中圖分類號】R9141【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2016）21-0004-03

Determination of Notoginsenoside R1 in Naomai Xingshen Capsules by HPLC

ZHANG YuZENG Congyan*HU YuliangZHUO BinCHEN Jiancong

Affiliated Zhongshan Hospital of Guangzhou University of TCM，Zhongshan 528401 ，China

Abstract：Objective To establish a method for the determination of Notoginsenoside R1 in Naomai Xingshen Capsule and control its quanlity. Methods Separation and determination of allantoin were accessed by using an C18 column and a mobile phase of acetonitrile- water gradient elution.The flow rate was 10mL/min，temperature at 25℃ and detection wavelength at 203nm. Results The linear range was 005～03μg，r=09993，marked recovety rate was 9930%，and RSD=074%（n=6）.Conclusion The method in this paper could provide an evidence for quality control of Naomai Xingshen Capsule.

Keywords：Naomai Xingshen Capsule；Notoginsenoside R1；HPLC；Content Determination

腦脈醒神膠囊系由三七、枳實、大黃、梔子、黃芩、桃仁、丹參等十七味中藥經(jīng)提取加工制成的膠囊劑，具有活血化瘀、化痰開竅、通腑瀉熱、開竅醒腦的功效，臨床用于腦外傷、中風之神昏、頭暈頭痛、大便秘結等。其中三七為方中主藥，而三七皂苷R1又是三七中的主要活性成分之一?，F(xiàn)代藥理研究表明，三七皂苷R1能改善微循環(huán)并適度延長凝血時間，[1]是三七活血化瘀的有效成分，這與腦脈醒神膠囊活血化瘀功效一致，提示三七皂苷R1為該制劑中主要活性成分。為了更好地控制產(chǎn)品質量，保證臨床用藥安全有效，研究建立了高效液相色譜法（HPLC）測定該制劑中三七皂苷R1含量的方法現(xiàn)報道如下。

1儀器與材料

11儀器Agilent1260高效液相色譜儀；色譜柱：Venusil XBP C18（L）柱（250mm×46mm，5μm，Agela Technologies）。

[JP2]12材料三七皂苷R1對照品（批號：110745-200617，中國食品藥品檢定研究院）；腦脈醒神膠囊（批號：20140313、20150302、20160130）。乙腈為色譜純（批號：AC-12960217，瑞典OCEANPAK公司）；甲醇為分析純（批號：1506031，西隴化工股份有限公司）。[JP]

2方法與結果

21色譜條件以十八烷基硅烷鍵全硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A ，水為流動相 B，按表1的規(guī)定進行梯度洗脫；流速為10mL/min；柱溫為25℃；檢測波長為 203nm；進樣10μL。理論板數(shù)按三七皂苷R1峰算應不低于3000。

22對照品溶液制備精密稱取三七皂苷R1對照品適量，加甲醇溶解，制成每lmL含50μg的溶液，作為對照品溶液。

23供試品溶液制備取本品10粒，內容物研細，精密稱取約1g，置于塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，放置過夜，置80℃水浴上保持微沸2h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

24陰性干擾試驗取缺三七陰性樣品，按照“23”項下供試品溶液制備方法制備缺三七陰性樣品溶液，再按“21”項下色譜條件分析，結果在與對照品保留時間相同的位置上無峰出現(xiàn)，表明腦脈醒神膠囊中其他成分對三七皂苷Rl的測定無干擾。見圖1。

25線性范圍考察精密吸取對照品溶液1、2、3、4、5、6μL，進樣，按“21”項下色譜條件進行測定，以峰面積積分值為縱坐標，三七皂苷R1對照品進樣量為橫坐標。繪制標準曲線，得回歸方程為Y=47218X+11542，r=09993。結果表明三七皂苷R1進樣量在005～03μg之間呈良好的線性關系。

26精密度試驗取同一對照品溶液按“21”項下色譜條件重復進樣測定6次，三七皂苷R1峰面積的RSD為140%，結果表明精密度良好。

27重復性試驗取同一批樣品（批號：20160130）6份，分別按“23”項下的方法制備供試品溶液，各進樣20μL，按“21”項下色譜條件進行測定，結果三七皂苷R1峰面積的RSD為120%，表明方法重現(xiàn)性良好。

28穩(wěn)定性試驗取樣品（批號：20160130）適量，按“23”項下的方法制成供試品溶液，放置0、1、2、4、8、24h，分別進樣20μL，按“21”項下色譜條件進行測定，結果三七皂苷R1峰面積的RSD為111%，表明樣品溶液室溫放置24h穩(wěn)定。

29回收率試驗精密稱取已知含量的樣品（批號：20140313）6份，分別添加三七皂苷R1對照品適量，按“23”項下的方法制成供試品溶液，各進樣10μL，按“21”項下色譜條件進行測定，計算回收率，結果見表2。

210樣品含量測定取3個批號的樣品，按 “23”項下方法制備供試品溶液，分別精密吸取20μL進樣，測定三七皂苷R1峰面積，根據(jù)峰面積用標準曲線法計算樣品含量。結果見表3。

3討論

三七具有散瘀止血，消腫定痛的作用[2]，現(xiàn)代藥理實驗研究表明其在抗凝血、抗冠心病、擴張血管及保護腦損傷等方面作用明顯[3]，是腦脈醒神膠囊處方中具有活血化瘀作用的主要藥物，故建立其有效成分含量測定方法，可進一步加強對腦脈醒神膠囊的整體質量控制。實驗中供試品溶液的制備方法及色譜條件均參照2015年版《中國藥典》一部中三七含量測定項下的方法和條件[2]，流動相曾采用不同比例的甲醇-水、乙腈-水等度洗脫，結果分離效果均不佳，且分析時間較長。后采甲醇-水、乙腈-水進行梯度洗脫，結果發(fā)現(xiàn)乙腈-水較甲醇-水分離效果好，也大大節(jié)省了分析時間，并能有效排除其他成分干擾，這與有關文獻報道的一致[4]。實驗表明，采用文中方法測定腦脈醒神膠囊中三七皂苷R1的含量重現(xiàn)性好，專屬強，穩(wěn)定可靠，方便快捷，可作為腦脈醒神膠囊的質量控制方法之一。

參考文獻

[1]劉東平，楊軍，丁丹. 三七及其有效成分對血液系統(tǒng)的藥理活性研究概況[J].中醫(yī)藥信息，2012，29（4）：172-174.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：11-12.

[3]梅全喜.簡明實用中藥藥理手冊[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2009：328-331.

[4]張虹，李淑芳. 高效液相色譜法測定三七接骨丸中三七皂苷R1的含量[J].中醫(yī)藥臨床雜志，2012，24（5）：461-462.

（編輯：梁志慶）