高效液相色譜法測定阿苯達(dá)唑原料藥的含量

張樂

摘 要： 為建立一種阿苯達(dá)唑原料藥含量測定的高效液相方法，采用方法：色譜條件：Agilent ODS C18（5μm，3.0×150mm）色譜柱;以甲醇為流動相A;磷酸二氫鈉水溶液（11g→800ml）為流動相B，甲醇—磷酸二氫鈉水溶液=65：35時，流速為0.8ml/min，阿苯達(dá)唑?qū)φ掌分鞣灞Ａ魰r間為3.044min;分離度良好，掃描波長為292nm，柱溫：30℃，結(jié)果阿苯達(dá)唑原料及溶劑峰均得到良好分離。阿苯達(dá)唑在2μg/ml～1200μg/ml濃度范圍內(nèi)線性良好（R2=0.99999，n=6），平均回收率98.0%，RSD為0.5%，定量限為0.1μg/ml，并得出結(jié)論：高效液相色譜法靈敏、準(zhǔn)確，專屬性強，重現(xiàn)性好，可用于阿苯達(dá)唑原料藥含量的測定及質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞： 阿苯達(dá)唑 高效液相色譜法 紫外分光光度法 含量測定

阿苯達(dá)唑（Abendazole）是一種抗寄生蟲的廣譜藥物，對阿苯達(dá)唑線蟲、棘球蚴、絳蟲、吸蟲等具有較好的驅(qū)除作用[1-2]，在獸醫(yī)臨床廣泛應(yīng)用。我們通常會采用高氯酸滴定法和紫外分光光度法來測定阿苯達(dá)唑原料粉的含量，這兩種方法在《中華人民共和國獸藥典》[3]中都有提到，但高氯酸滴定法和紫外分光光度法[4]受環(huán)境因素的影響較大，使得結(jié)果的專屬性較差，準(zhǔn)確度偏低。并且在獸藥廠生產(chǎn)時可以看到，有些不良商家以次充好，僅僅用滴定法或紫外的方法都不能準(zhǔn)確、有效地檢測原料含量，所以本文利用高效液相色譜法[5-6]，建立一種檢測阿苯達(dá)唑原料藥的方法。本文通過實際應(yīng)用表明該方法可以準(zhǔn)確快速地測定阿苯達(dá)唑原料藥的含量，并且更有效地排除其他外界因素的影響，更好地通過含量測定控制阿苯達(dá)唑原料藥的質(zhì)量。本方法專屬性強，重現(xiàn)性高，可以為阿苯達(dá)唑原料藥含量測定提供新的參考。

1.材料

1.1試劑。阿苯達(dá)唑?qū)φ掌罚ㄖ袊幤飞镏破窓z定所）;阿苯達(dá)唑原料（連云港市亞輝醫(yī)藥化工有限公司，批號：9011237）;甲醇，色譜級;磷酸二氫鈉;高氯酸，分析純;水，自制超純水。

1.2儀器。LC-20A島津高效液相色譜儀;Agilent ODS C18（5μm，3.0×150mm）色譜柱;FA1004型電子天平;μV-5500PC型紫外可見光光度計;DHG-9030A電熱鼓風(fēng)干燥箱。

2.方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗。Agilent ODS C18（5μm，3.0×150mm）色譜柱;以甲醇為流動相A;磷酸二氫鈉水溶液（11g→800ml）為流動相B，通過篩選不同比例的流動相，得出當(dāng)甲醇—磷酸二氫鈉水溶液=65：35時，流速為0.8ml/min，阿苯達(dá)唑?qū)φ掌分鞣灞Ａ魰r間為3.044min;拖尾因子1.00;分離度為3.3，表明主峰和雜質(zhì)峰分離度良好，因此選擇其作為最佳的色譜條件;通過紫外分光光度計在200nm～400nm處掃描，得出在292nm處有最大紫外吸收，故確定掃描波長為292nm;柱溫：30℃;進(jìn)樣量：10μl。理論板數(shù)阿苯達(dá)唑峰計算不低于2000。

2.2對照品溶液的制備。取阿苯達(dá)唑?qū)φ掌吩陔娮犹炱缴暇_稱定10mg置200ml量瓶中，移取5ml冰乙酸使對照品溶解，再用流動相稀釋至刻度線處，將定容后的對照品溶液超聲50min，配得0.05mg/ml對照品溶液。

2.3原料藥供試品溶液的制備。稱取阿苯達(dá)唑供試品原料0.1g，用流動相A稀釋制成每1ml中約含1mg的溶液，搖勻。將搖勻定容的溶液超聲10min，精確移取，用流動相B稀釋制成1ml中約含0.05mg/ml的溶液。

2.4重復(fù)性實驗。取0.05mg/ml阿苯達(dá)唑?qū)φ掌啡芤?0μl，注入液相色譜儀，檢測其峰面積，重復(fù)上述實驗6次，計算6次峰面積的RSD值為0.4%，表示其重復(fù)性良好。

2.5穩(wěn)定性實驗。取0.05mg/ml阿苯達(dá)唑?qū)φ掌啡芤悍胖?、4、6、8、12、24、36、48h，注入液相色譜儀進(jìn)樣，計算各時間的色譜峰面積的RSD值為0.5%，說明在常溫放置條件48小時內(nèi)，溶液穩(wěn)定性良好。

2.6定量限。將2.2項下的對照品溶液用無水乙醇逐級稀釋，信噪比10：1時，檢出濃度為0.1μg/ml為定量限。

2.7線性及范圍。將2.2項下配制的阿苯達(dá)唑?qū)φ掌啡芤簼舛葹?、2、3、4、5、6、10μg/mL分別進(jìn)樣20μL測定峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以對照品峰面積對其濃度進(jìn)行線性回歸，回歸方程：Y=381274.4237X+5349.3，R2=0.99999，表明2μg/ml-1200μg/ml濃度范圍內(nèi)峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.8加樣回收率。分別精確量取原料品溶液配制的1mg/ml供試品溶液3ml置6個100ml容量瓶中，再精密量取對照品溶液配制的1mg/ml對照品溶液2ml和5ml各3份，分別加入該6個容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度。超聲15min，用0.45μl微孔濾膜過濾，進(jìn)樣為10μl，測定各自的阿苯達(dá)唑含量，計算回收率、平均回收率及RSD值，測定結(jié)果見表一：

2.9含量測定。按2.3實驗步驟配制0.10mg/ml供試品溶液，用外標(biāo)法測定阿苯達(dá)唑含量（高效液相色譜圖見圖一，圖二），并將測定結(jié)果紫外分光光度法測定結(jié)果進(jìn)行對比。表二數(shù)據(jù)表明，我們所建立的高效液相色譜法能夠準(zhǔn)確測定阿苯達(dá)唑百分含量。

3.結(jié)果與討論

3.1本文通過使用紫外分光光度法進(jìn)行波長掃描，得出阿苯達(dá)唑原料在292nm處有最大吸收波長，從而作為最佳波長掃描范圍。

3.2本文通過研究不同的流動相比例和流速，最終確定在甲醇—磷酸二氫鈉水溶液=60：40時，流速為0.8ml/min，主峰和有關(guān)物質(zhì)分離度良好，因此選擇其作為最佳的色譜條件。

3.3本文所建立的方法優(yōu)點在于：通過與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對照，專屬性強，耗時短，出峰時間早，主峰和雜質(zhì)峰分離度良好，可以很清晰地看出有關(guān)物質(zhì)的存在，在獸藥廠進(jìn)行原料藥檢測時，可以很好地發(fā)現(xiàn)不良商家的以壞充好的意圖。傳統(tǒng)的滴定分析法和紫外分光光度法，僅說明被測物質(zhì)可能是阿苯達(dá)唑，不能確定就是阿苯達(dá)唑原料，可能其他一類或混合物質(zhì)也有可能具有相同的吸收波長，專屬性和準(zhǔn)確度都相對低于高效液相色譜法。本文建立的方法可以更準(zhǔn)確地測定阿苯達(dá)唑原料藥的含量及更好地控制阿苯達(dá)唑原料藥的質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)：

[1]Pourgholami MH，Woon SL，Almajd R，et al.In vitro and in vivo sup-pression of growth of hepatocellular carcinoma cells by albendazole[J].Cancer Lett，2001，165（1）：43-49.

[2]Rolin S，Souhaili-el Amri H，Batt AM，et al.Study of the in vitro bioac-tivation of albendazole in human liver microsomes and hepatoma celllines[J].Cell biol Toxicol，1989，5（1）：1-14.

[3]中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典（一部）[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2010：113-114.

[4]中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所.獸藥檢驗操作規(guī)程[M].北京：中國農(nóng)業(yè)科技技術(shù)出版社，2005：66-68.

[5]中華人民共和國國家藥典委員.中華人民共和國藥典（二部）[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2015：557-558.

[6]劉志輝.HPLC法測定阿苯達(dá)唑的含量及有關(guān)物質(zhì)[J].中國藥師，2014（3）：37-42.