• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    氧糖

    • miRNA-589-5p調(diào)控氧糖剝奪人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的機制
      -589-5p對氧糖剝奪誘導(dǎo)的HBMEC損傷的調(diào)控機制及其與組蛋白脫乙酰酶(HDAC)3、核因子E2相關(guān)因子(Nrf)2/血紅素加氧酶(HO)-1信號通路之間的關(guān)系。1 材料與方法1.1材料 HBMEC購自中國上??茖W(xué)研究院細(xì)胞庫;改良Eagle培養(yǎng)基(DMEM)培養(yǎng)液購自美國Invitrogen;胎牛血清購自浙江天杭生物科技股份有限公司;Lipofectamin3000轉(zhuǎn)染試劑購自賽默飛世爾科技(中國)公司;真核表達(dá)載體pcDNA3.1均購自Promeg

      中國老年學(xué)雜志 2024年6期2024-03-22

    • 水凝膠負(fù)載bFGF對氧糖剝奪條件下樹突狀細(xì)胞的影響①
      DC2.4 細(xì)胞氧糖剝奪(oxygen-glucose deprivation,OGD)模型,初步探究負(fù)載bFGF的緩釋水凝膠貼片對OGD 條件下DC2.4細(xì)胞的影響。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 細(xì)胞系 細(xì)胞采用DC2.4 小鼠樹突狀細(xì)胞購自武漢普諾賽生命科技有限公司(貨號:CL-0545)。1.1.2 主要試劑 明膠(國藥集團化學(xué)試劑有限公司);戊二醛(福晨化學(xué)試劑有限公司);CCK-8(上海Bimake生物科技有限公司);高糖DMEM 培養(yǎng)基

      中國免疫學(xué)雜志 2023年11期2023-11-30

    • lncRNA CRNDE靶向miR-212-5p調(diào)控氧糖剝奪誘導(dǎo)的大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元損傷
      皮質(zhì)神經(jīng)元,建立氧糖剝奪(OGD)誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷模型,旨在觀察CRNDE能否靶向miR-212-5p影響OGD誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷,以期為缺血缺氧性腦損傷的治療提供新的作用靶點。1 材料與方法1.1 實驗動物及試劑 雄性SD大鼠,清潔級,7日齡,體質(zhì)量10.30 ~13.16 g,河南省實驗動物中心,許可證號:SYXK(豫)2019-0003;胎牛血清(FBS),浙江天杭生物科技股份有限公司;DMEM培養(yǎng)基和細(xì)胞計數(shù)試劑盒-8(CCK-8),北京索萊寶科技有

      蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報 2023年6期2023-08-02

    • 氧糖剝奪影響人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接相關(guān)蛋白的機制研究
      。本研究旨在探究氧糖剝奪影響人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)緊密連接相關(guān)蛋白的機制,以期為缺血性腦血管病的臨床防治提供新的思路。1 材料與方法1.1 主要實驗試劑與儀器 實驗試劑:DMEM購于Corning公司(貨號:R10-017-CV),Gibco?胎牛血清(fetal bovine serum,F(xiàn)BS)購于Invitrogen(貨號:16000-044),青霉素-鏈霉素溶液(

      實用心腦肺血管病雜志 2023年2期2023-02-22

    • NLRP3炎癥小體在bEnd.3細(xì)胞氧糖剝奪及復(fù)氧復(fù)糖后的表達(dá)觀察
      對象,觀察在不同氧糖剝奪及復(fù)氧復(fù)糖時間點NLRP3炎癥小體及其下游因子的表達(dá)變化。1 材料和方法1.1 實驗細(xì)胞bEnd.3細(xì)胞系購于ATCC1.2 主要試劑、材料和儀器DMEM無糖培養(yǎng)基(Gibico),DMEM培養(yǎng)基(Gibico),胎牛血清(Gibico),胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)(Solarbio),抗NLRP3抗體(ABMART),抗β-actin抗體(Affinity),鼠二抗(Cell Signaling Technology)

      中國實驗診斷學(xué) 2023年2期2023-02-21

    • 八味沉香散含藥血清對H9c2細(xì)胞氧糖剝奪損傷的保護機制研究 Δ
      法,進(jìn)一步研究在氧糖剝奪損傷細(xì)胞模型中,八味沉香散含藥血清改善心肌缺血損傷的可能機制,以期為八味沉香散的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù),促進(jìn)其現(xiàn)代化研究。1 材料1.1 細(xì)胞與動物本研究所用細(xì)胞為大鼠H9c2細(xì)胞(貨號CL-0089),購自武漢普諾塞生命科技有限公司。SPF級雄性SD大鼠50只,體質(zhì)量200~220 g,購自西安交通大學(xué)[實驗動物使用許可證號:SYXK(青)2020-0001],飼養(yǎng)于青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系實驗中心(正常光照、自由飲食)。本實驗所有操作

      中國藥房 2023年1期2023-01-14

    • 刺五加提取物對人神經(jīng)細(xì)胞SH-SY5Y氧糖剝奪再灌注損傷的保護作用研究*
      SY5Y 細(xì)胞的氧糖剝奪再灌注(Oxygen and Glucose Deprivation/Reperfusion,OGD/R)模型來模擬腦缺血/再灌注過程,發(fā)現(xiàn)一種刺五加提取物可以減輕SH-SY5Y細(xì)胞氧糖剝奪再灌注后的損傷,并通過MTT 法檢測細(xì)胞活力、流式細(xì)胞術(shù)檢測凋亡率、熒光顯微鏡檢測活性氧水平、檢測胞內(nèi)抗氧化酶活力及脂質(zhì)氧化產(chǎn)物、檢測胞內(nèi)ATP 水平等手段,證實了其通過抑制氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡和保護線粒體功能來實現(xiàn)對SH-SY5Y細(xì)胞的保護作用。

      世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化 2022年5期2022-09-29

    • 右美托咪定對氧糖剝奪再復(fù)氧下Huvecs的保護機制*
      Huvecs)在氧糖剝奪再復(fù)氧條件下的損傷[4],但具體的細(xì)胞內(nèi)分子機制還有待于進(jìn)一步深究。為此本研究擬在前期研究的基礎(chǔ)上探究DEX預(yù)處理對Huvecs的保護機制。1 材料與方法1.1 細(xì)胞培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株Huvecs(由陸軍軍醫(yī)大學(xué)高原軍事醫(yī)學(xué)系贈)復(fù)蘇后培養(yǎng)于含10%胎牛血清的高糖培養(yǎng)基內(nèi),置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中貼壁培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞約80%融合時,用0.05%胰蛋白酶消化傳代培養(yǎng)。1.2 試劑藥物DEX:江蘇恒瑞制藥有限公司;高糖培養(yǎng)基

      重慶醫(yī)學(xué) 2022年3期2022-03-23

    • 左歸丸含藥血清對大鼠海馬神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪損傷的保護作用及機制研究
      混合細(xì)胞以及細(xì)胞氧糖剝奪處理[6],在細(xì)胞水平研究左歸丸含藥血清對細(xì)胞氧糖剝奪損傷的作用及機制。1 材料與方法1.1 實驗材料1.1.1 實驗動物:健康SPF級SD雄性大鼠,出生后1~3 d,體重200 g左右,購自西安交通大學(xué)動物實驗中心。動物生產(chǎn)許可證號:SYXK(陜)2020-005。1.1.2 主要試劑:左歸丸(Z11020735),購自北京同仁堂股份有限公司;0.3 g/L戊巴比妥鈉(H31020240),購自上海新亞藥業(yè)有限公司;相關(guān)一抗購自美

      陜西醫(yī)學(xué)雜志 2022年1期2022-01-21

    • 榅桲總黃酮對氧糖剝奪誘導(dǎo)的人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響及機制研究
      著·榅桲總黃酮對氧糖剝奪誘導(dǎo)的人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響及機制研究劉禹岐,郗歐,劉怡彤110000 沈陽,遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院腦病一科(劉禹岐、郗歐),康復(fù)科(劉怡彤)探究榅桲總黃酮(TFCOM)對氧糖剝奪(OGD)誘導(dǎo)的人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HBMEC)損傷的影響及可能機制。體外培養(yǎng) HBMEC,建立 OGD 模型。用 10、20、40 μg/ml TFCOM 干預(yù) OGD 誘導(dǎo)的 HBMEC,CCK8 法檢測細(xì)胞增殖活性,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡,

      中國醫(yī)藥生物技術(shù) 2021年6期2021-12-21

    • 外源性H2S對氧糖剝奪再灌注后SH-SY5Y細(xì)胞損傷的保護作用
      。因此,本研究以氧糖剝奪再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)后的SH-SY5Y細(xì)胞作為神經(jīng)細(xì)胞的體外缺血再灌注損傷模型,探討H2S對神經(jīng)細(xì)胞缺血再灌注損傷的保護作用機制。1 材料與方法1.1 試劑與儀器NaHS購自Sigma公司(美國),牛血清、DMEM培養(yǎng)基、2.5 mL/L胰蛋白酶液及10×PBS均購自HyClone公司,二甲亞砜(DMSO)購自Gibco公司。Tris堿、甘氨酸PMSF、S

      西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版) 2021年5期2021-10-14

    • 腦心通通過抑制TRPM7抗神經(jīng)元氧糖剝奪/復(fù)氧損傷
      為研究對象,建立氧糖剝奪/復(fù)氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)損傷模型,由于中藥復(fù)方用于離體實驗存在諸多問題,本研究采用腦脊液藥理學(xué)的給藥方法,觀察腦心通的神經(jīng)保護作用以及對TRPM7的影響,以期為腦心通治療缺血性腦卒中提供實驗依據(jù)。1 材料1.1 動物Wistar 大鼠,體質(zhì)量(180±20)g [天津中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心,SCXK(津)2009-0004];大耳白家兔,體質(zhì)量(2±0.2

      中南藥學(xué) 2021年8期2021-09-04

    • 活性多肽GRGDS 對氧糖剝奪誘導(dǎo)PC12 細(xì)胞損傷的保護作用及其機制研究
      肽GRGDS 對氧糖剝奪損傷后的PC12 細(xì)胞是否具有保護作用。1 材料1.1 細(xì)胞株P(guān)C12 細(xì)胞購自ATCC 細(xì)胞庫,培養(yǎng)在含有10%胎牛血清的完全培養(yǎng)液中,每12 h 觀察一次細(xì)胞的生長狀態(tài),每24 h 更換一次細(xì)胞培養(yǎng)液,待細(xì)胞長到80%進(jìn)行傳代。1.2 藥物與試劑活性多肽GRGDS(上海淘普生物科技有限公司);高糖DMEM 培養(yǎng)液、DMEM 無糖培養(yǎng)液(Gibco 公司);凋亡試劑盒、蛋白質(zhì)提取試劑盒(上海碧云天生物技術(shù)有限公司);抗體:β-肌動

      藥學(xué)實踐雜志 2021年4期2021-07-28

    • PKA-PINK1/Parkin信號通路在氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖后大鼠皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡和焦亡中的作用
      原代星形膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪-復(fù)糖復(fù)氧模型,以揭示PKA-PINK1/Parkin信號通路在神經(jīng)系統(tǒng)缺血再灌注損傷中發(fā)揮的作用。1 材料與方法1.1實驗動物及分組 24 h內(nèi)的SD新生大鼠,共168只,北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司負(fù)責(zé)提供(SYXK(京)2012-0036)。分離腦組織后,行原代大鼠皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng),并將所分離培養(yǎng)的原代大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞分為4組,每組42只,分別為對照組(C組)、氧糖剝奪組(oxygen-glucose deprivat

      河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 2021年2期2021-04-13

    • 沉默Apaf-1基因?qū)?span id="j5i0abt0b" class="hl">氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖PC12細(xì)胞線粒體凋亡通路的影響①
      PC12細(xì)胞建立氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖細(xì)胞模型,模擬神經(jīng)細(xì)胞體外缺血再灌注損傷環(huán)境,靶向抑制Apaf-1蛋白表達(dá),在細(xì)胞水平探討Apaf-1對氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖PC12細(xì)胞線粒體凋亡通路的影響,為腦缺血再灌注損傷的靶向治療提供新的思路和實驗依據(jù)。1 材料與方法1.1材料1.1.1細(xì)胞 PC12細(xì)胞(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞)購自BOSTER公司,經(jīng)NGF誘導(dǎo)后具有神經(jīng)元特性。1.1.2主要試劑與儀器 opti-MEMⅠ培養(yǎng)基、胎牛血清(美國Gibco公司);脂

      中國免疫學(xué)雜志 2021年1期2021-01-26

    • 黃芪甲苷通過抑制細(xì)胞凋亡減輕氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖PC12細(xì)胞損傷的研究
      究對象,通過建立氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖細(xì)胞模型模擬CIRI對神經(jīng)細(xì)胞的損傷過程,研究黃芪甲苷對腦缺血再灌注所致神經(jīng)元損傷的保護作用及機制。1 材料與方法1.1 細(xì)胞PC12細(xì)胞(經(jīng)NGF 誘導(dǎo)高分化),由河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院中心實驗室主任許順江教授惠贈。1.2 主要試劑黃芪甲苷(HY-N0099,MCE);胎牛血清,購自浙江天杭生物科技股份有限公司;DMEM basic(1×)、胰蛋白酶、1×PBS緩沖液,均購于美國Gibco公司;Earle's平衡鹽溶液(1

      中醫(yī)藥學(xué)報 2020年11期2020-12-03

    • 氧糖剝奪再灌注對小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響
      質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞系制作氧糖剝奪再灌注(OGD/R)模型模擬體內(nèi)腦卒中損傷,觀察不同時長OGD/R 后小膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變,探討OGD/ R 對小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響。1 材料及方法1.1 細(xì)胞、試劑、儀器(1)細(xì)胞BV2 永生化的鼠小膠質(zhì)細(xì)胞由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院(中國)細(xì)胞培養(yǎng)中心提供。(2)試劑DMEM/F12 培養(yǎng)基(美國Gibco 公司),胎牛血清(美國Gibco 公司),EBSS 平衡鹽溶液(中國solarbio 公司);白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)E

      嶺南急診醫(yī)學(xué)雜志 2020年5期2020-11-09

    • 高聚原花青素新型降解產(chǎn)物生物活性研究
      2和PC12細(xì)胞氧糖剝奪模型來研究新型降解產(chǎn)物對兩種細(xì)胞損傷的保護作用,并從構(gòu)效關(guān)系角度探究降解產(chǎn)物活性的變化規(guī)律,對新型降解產(chǎn)物的潛在生物活性及構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行初步探索。1 材料和儀器1.1 材料與試劑葡萄籽原花青素提取物購自天津尖峰有限公司。硫普羅寧購自瑪雅生物科技有限公司;L-抗壞血酸購自瑞士Fluka公司;過硫酸鉀、醋酸鈉、三氯化鐵、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉均購自博迪化工有限公司;醋酸購自科密歐化工有限公司;濃鹽酸、甲醇(分析級)、乙酸乙酯(分析級)購自

      中外葡萄與葡萄酒 2020年6期2020-10-29

    • 二氮嗪對氧糖剝奪后BV-2細(xì)胞凋亡及caspase-3表達(dá)的影響
      和三氣培養(yǎng)箱創(chuàng)造氧糖剝奪條件對BV-2細(xì)胞進(jìn)行處理,可模擬缺血缺氧狀態(tài)下的細(xì)胞微環(huán)境。本研究擬通過氧糖剝奪誘導(dǎo)的BV-2細(xì)胞探討二氮嗪對缺血缺氧狀態(tài)下小膠質(zhì)細(xì)胞的影響。1 材料與方法1.1 主要儀器及試劑HERA Cell 150 三氣培養(yǎng)箱(美國 Billups-Rothenberg 公司),F(xiàn)ACScalibur流式細(xì)胞檢測分析儀(美國 BD 公司),Eclipse NI正置熒光顯微鏡+圖像采集系統(tǒng)(日本尼康公司 ),RPMI1640培養(yǎng)基、新生胎牛血

      中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 2020年1期2020-01-09

    • HT22海馬神經(jīng)元細(xì)胞氧糖剝奪再灌注模型的建立
      引起再灌注損傷。氧糖剝奪再灌注(OGD/R)模型通過剝奪細(xì)胞的營養(yǎng)及氧氣供給模擬人體缺血再灌注損傷過程,是目前較為理想的體外實驗?zāi)P蚚3]。海馬對缺氧的耐受力較差,因此選擇海馬神經(jīng)元細(xì)胞建立穩(wěn)定的氧糖剝奪再灌注模型,對缺血性腦中風(fēng)疾病的研究具有重要意義[4]。本研究以HT22海馬神經(jīng)元細(xì)胞為研究對象,采用缺氧小室(見圖1)對細(xì)胞進(jìn)行缺氧、不同時間的復(fù)氧建立氧糖剝奪再灌注模型,通過觀察細(xì)胞形態(tài),檢測細(xì)胞存活率,同時測定不同條件下細(xì)胞培養(yǎng)基中乳酸脫氫酶(LDH

      廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報 2020年1期2020-01-07

    • 毛蕊異黃酮抑制氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖PC12細(xì)胞凋亡研究
      量的毛蕊異黃酮對氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖PC12細(xì)胞的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同劑量毛蕊異黃酮均可改善PC12細(xì)胞生長狀態(tài),提高細(xì)胞存活率,但其具體作用機制尚不明確。本實驗應(yīng)用氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖PC12細(xì)胞模型,模擬體外CIR損傷環(huán)境,探討毛蕊異黃酮拮抗氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖PC12細(xì)胞損傷的凋亡作用機制。1 材料1.1 細(xì)胞PC12細(xì)胞(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞系,經(jīng)NGF誘導(dǎo)后,高分化具有交感神經(jīng)元特性,批號:CX0247)購于BOSTER公司。1.2 主要試劑毛蕊異黃

      中國藥理學(xué)通報 2019年12期2019-12-11

    • 鹿紅方對氧糖剝奪模型心臟干細(xì)胞自噬和抗凋亡能力的影響
      紅方(LHF)對氧糖剝奪模型CSCs自噬和CSCs抗凋亡能力的影響。1 材料與方法1.1 實驗材料1.1.1 CSCs及實驗藥物 CSCs購自Lonza公司;鹿紅方由上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院制劑室提供,由鹿角片、紅花、仙靈脾、補骨脂、女貞子、山萸肉、沉香按15∶9∶30∶20∶15∶30∶6 比例配制。鹿紅方水提物制備方法如下:將藥材置不銹鋼鍋中,加適量水浸泡1 h,置于電磁爐上,先用大火煮沸后,再用小火保持微沸煎煮1 h,18層紗布過濾,濾液備用;另外

      中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志 2019年12期2019-07-26

    • 不同時間氧糖剝奪再灌注對SH-SY5Y細(xì)胞線粒體自噬及功能的影響*
      線粒體被認(rèn)為是在氧糖剝奪再灌注(oxygen and glucose deprivation,OGD/R)中保護細(xì)胞免受缺血應(yīng)激的必要條件[5]。線粒體自噬是由自噬選擇性清除線粒體的過程,線粒體自噬可以識別并去除異常線粒體,維持線粒體的內(nèi)穩(wěn)態(tài),線粒體蛋白中Beclin1、P62的表達(dá)水平能很好地反應(yīng)胞內(nèi)線粒體自噬的活性[6]。本研究對人神經(jīng)母細(xì)胞瘤(SH-SY5Y)細(xì)胞體外構(gòu)建不同時間的OGD/R模型,觀察OGD/R后SH-SY5Y細(xì)胞線粒體膜電位及活性氧

      貴州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 2019年4期2019-05-08

    • 聚肌胞苷酸對氧糖剝奪損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞TLR3信號通路的影響
      腦缺血小鼠及體外氧糖剝奪損傷處理的星形膠質(zhì)細(xì)胞TLR3-TRIF信號通路下游IFN-3的表達(dá)起到抑制炎癥反應(yīng)的作用。但現(xiàn)階段尚未明確其具體作用機制,因此本研究采用Western blot檢測氧糖剝奪損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞模型TLR3信號通路中的相關(guān)蛋白質(zhì)表達(dá)的變化,進(jìn)一步探討Poly I:C對神經(jīng)細(xì)胞的保護作用機制。1.材料與方法1.1 實驗動物及主要試劑SD乳鼠,購自于凱學(xué)生物科技(上海)有限公司。Poly I:C(購自于上海玉博生物科技有限公司),TRIF、

      醫(yī)藥前沿 2019年36期2019-03-23

    • 右美托咪定通過調(diào)控TLR4表達(dá)對神經(jīng)細(xì)胞氧糖剝奪損傷保護作用的機制研究
      ,本研究通過構(gòu)建氧糖剝奪損傷細(xì)胞模型,從炎癥反應(yīng)上分析右美托咪定調(diào)控TLR4表達(dá)對神經(jīng)細(xì)胞氧糖剝奪損傷的保護機制。1 材料和方法1.1 實驗材料PC12細(xì)胞購于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所。采用DMEM培養(yǎng)基(含10%胎牛血清)于37℃和5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)常規(guī)培養(yǎng)。以0.25%胰蛋白酶消化傳代,收集第3代長勢良好的對數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行實驗。1.2 主要試劑與儀器右美托咪定購于江蘇恒瑞醫(yī)藥公司,DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清和胰蛋白酶購于美國Gibco公司,Triz

      中國比較醫(yī)學(xué)雜志 2019年1期2019-02-13

    • 米諾環(huán)素促進(jìn)PC12細(xì)胞氧糖剝奪/復(fù)氧后神經(jīng)突生長及機制研究*
      素對PC12細(xì)胞氧糖剝奪損傷具有保護作用,可以顯著提高細(xì)胞的存活率且促進(jìn)神經(jīng)突的生長[3],但其具體機制尚不明確。肌球蛋白輕鏈磷酸酶(myosin light chain phosphatase,MLCP)是Rho激酶(ROCK)的下游底物之一,活化的ROCK滅活MLCP,使其不能水解MLC的磷酸基團,從而提高細(xì)胞內(nèi)MLC的磷酸化水平,導(dǎo)致生長錐的崩解及軸突回縮[4]。所以本研究旨在觀察米諾環(huán)素對氧糖剝奪/復(fù)氧后PC12細(xì)胞神經(jīng)突生長的影響,并探討MLCP

      重慶醫(yī)學(xué) 2018年22期2018-08-29

    • 紅景天苷通過JAK2/STAT3通路抑制退變髓核細(xì)胞的炎癥反應(yīng)和凋亡
      報道。本研究通過氧糖剝奪培養(yǎng)正常人髓核細(xì)胞構(gòu)建退變髓核細(xì)胞模型,觀察紅景天苷對退變髓核細(xì)胞的影響并探討其可能的機制,為治療椎間盤髓核細(xì)胞退變引起的腰椎間盤突出提供理論依據(jù)。1 材料和方法1.1 材料人髓核細(xì)胞(human nucleus pulposus cells, HNPCs) 購自上海中喬新舟生物科技有限公司,進(jìn)口于美國ScienCell研究實驗室;紅景天苷(純度>98%)購自南京朗朗科技銷售有限公司,10 mg 紅景天苷溶于1 mL 無菌PBS 配

      中國骨質(zhì)疏松雜志 2018年5期2018-08-02

    • 17-AAG在氧糖剝奪后復(fù)糖復(fù)氧誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡中的作用
      70的表達(dá)來抑制氧糖剝奪復(fù)糖復(fù)氧模型(oxygenglucose deprivation and recovery,OGD/R)誘導(dǎo)的大鼠海馬神經(jīng)元凋亡。為驗證此設(shè)想,本研究擬以大鼠海馬神經(jīng)元OGD/R為基礎(chǔ),探索17-AAG對神經(jīng)元的保護作用以及HSP70在17-AAG發(fā)揮神經(jīng)保護作用中的角色。1 材料與方法1.1 實驗動物與試劑 出生1d的SD大鼠購自第三軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心。DMEM培養(yǎng)基、無糖DMEM、胎牛血清和B27添加劑均購自美國Gibco公司

      解放軍醫(yī)學(xué)雜志 2018年4期2018-05-10

    • 血栓通膠囊對氧糖剝奪/復(fù)氧致 HUVEC 細(xì)胞緊密連接損傷的改善作用
      型,考察PNS對氧糖剝奪/復(fù)氧(oxygen-glucose deprivation and re-oxygenation,OGD/R)致細(xì)胞緊密連接損傷的改善,從體外角度考察PNS對缺血致內(nèi)皮緊密連接損傷的保護作用,探討PNS有效單體成分,為PNS口服制劑的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。1 材料和方法1.1 藥品與試劑血栓通膠囊原料三七總皂苷,哈爾濱珍寶制藥有限公司提供,為類白色至淡黃色無定形粉末,味苦,微甘,批號20111201,主要單體成分為Rg1(31.1

      中國比較醫(yī)學(xué)雜志 2018年2期2018-03-05

    • 腺苷預(yù)處理對氧糖剝奪復(fù)氧糖后星形膠質(zhì)細(xì)胞中血管內(nèi)皮生長因子和血管生成素-1水平的影響
      分為正常對照組、氧糖剝奪組和腺苷預(yù)處理組。正常對照組細(xì)胞不進(jìn)行氧糖剝奪,在氧糖剝奪期及復(fù)氧糖期均更換高糖DMEM。氧糖剝奪組細(xì)胞在氧糖剝奪期更換為無糖、無血清的DMEM;腺苷預(yù)處理組細(xì)胞在氧糖剝奪前24 h給予含100μmol·L-1腺苷的高糖DMEM培養(yǎng),氧糖剝奪期將培養(yǎng)基更換為無糖、無血清DMEM。氧糖剝奪期,將氧糖剝奪組和腺苷預(yù)處理組細(xì)胞放入含體積分?jǐn)?shù)95%氮氣、體積分?jǐn)?shù)5%CO2的自制缺氧倉內(nèi)缺氧8 h;在復(fù)氧糖期,氧糖剝奪組及腺苷預(yù)處理組細(xì)胞培養(yǎng)

      新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報 2018年2期2018-02-09

    • PGC-1α過表達(dá)逆轉(zhuǎn)OGD/R誘導(dǎo)的神經(jīng)元線粒體功能降低和凋亡*
      α)基因過表達(dá)對氧糖剝奪/復(fù)氧(OGD/R)誘導(dǎo)的神經(jīng)元線粒體功能及細(xì)胞凋亡的影響。方法采用RT-PCR的方法從C57BL/6乳鼠大腦皮層獲取PGC-1α的全基因序列,并克隆到真核表達(dá)載體pEGFP-N1上,經(jīng)PCR初步鑒定后轉(zhuǎn)染原代皮層神經(jīng)元,Western blot鑒定PGC-1α的表達(dá)情況,成功構(gòu)建PGC-1α真核表達(dá)載體pEGFP-N1-PGC-1α。分別將轉(zhuǎn)染pEGFP-N1和pEGFP-N1-PGC-1α載體的皮層神經(jīng)元進(jìn)行OGD/R處理,分別

      中國病理生理雜志 2017年11期2017-11-22

    • 苦碟子注射液對氧糖剝奪損傷的C6膠質(zhì)細(xì)胞凋亡與自噬調(diào)節(jié)作用?
      】苦碟子注射液對氧糖剝奪損傷的C6膠質(zhì)細(xì)胞凋亡與自噬調(diào)節(jié)作用?鄭 宏1,張昕洋2,魯雨荍1,曾子修2,梁 曉2,劉雪梅1△ (1. 北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院,北京 100078; 2. 北京中醫(yī)藥大學(xué),北京 100029)目的: 研究苦碟子注射液對氧糖剝奪損傷C6膠質(zhì)細(xì)胞凋亡與自噬的調(diào)節(jié)作用,明確其對氧糖剝奪損傷膠質(zhì)細(xì)胞的保護作用。方法: 采用氧糖剝奪/復(fù)氧(OGD/R)的方法建立C6膠質(zhì)細(xì)胞損傷模型,按隨機數(shù)字表法分為空白對照組、氧糖剝奪/復(fù)氧模型組、苦碟

      中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志 2017年8期2017-09-18

    • 氧糖剝奪對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞通透性的影響*
      100850)氧糖剝奪對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞通透性的影響*韓 雪1, 黃 欣2, 朱玲玲2△, 范 明1,2△(1. 首都醫(yī)科大學(xué)神經(jīng)生物學(xué)系, 北京 100069; 2. 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所認(rèn)知科學(xué)研究室, 北京 100850)目的:建立體外氧糖剝奪模型模擬腦缺血缺氧損傷, 探討氧糖剝奪對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECS)屏障功能的影響。方法:細(xì)胞培養(yǎng)至完全融合后換成無糖培養(yǎng)基置于低氧手套箱(0.3% O2)分別處理0.5 h、1 h、2 h和4

      中國應(yīng)用生理學(xué)雜志 2017年2期2017-06-05

    • 淫羊藿苷對氧糖剝奪PC12細(xì)胞單胺類遞質(zhì)含量的影響
      41)淫羊藿苷對氧糖剝奪PC12細(xì)胞單胺類遞質(zhì)含量的影響莫鎮(zhèn)濤 李文娜 翟玉榮 石京山1龔其海1(遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)藥理教研室,廣東 珠海 519041)目的 研究淫羊藿苷對氧糖剝奪PC12細(xì)胞單胺類遞質(zhì)紊亂的調(diào)節(jié)作用。方法 采用PC12細(xì)胞氧糖剝奪(2 h)損傷模型,將10-7、10-6、10-5mol/L淫羊藿苷預(yù)給藥1 h加氧糖剝奪期間給藥2 h后,用MTT法檢測細(xì)胞活力,ELISA法檢測細(xì)胞上清液的去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羥色胺(

      中國老年學(xué)雜志 2017年8期2017-05-10

    • 缺血再灌注損傷腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞Necroptosis模型的建立
      管內(nèi)皮細(xì)胞,采用氧糖剝奪及復(fù)氧復(fù)糖方法,篩選出擬缺血再灌注損傷時間點。在擬缺血再灌注模型基礎(chǔ)上,予Casepase抑制劑z-VAD-FMK 20 μmol/L干預(yù),采用CCK-8檢測細(xì)胞活性;透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu);Annexin V-FITC/PI(Propidium Iodide)雙染色法檢測細(xì)胞死亡方式。結(jié)果:確定氧糖剝奪2 h復(fù)氧復(fù)糖8 h,作為擬缺血再灌注時間點;z-VAD-FMK作用于擬缺血再灌注損傷BMECs后,細(xì)胞活性無統(tǒng)計學(xué)意義;z-V

      世界中醫(yī)藥 2017年4期2017-04-22

    • 氧糖剝奪再灌注引起的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡與NF-κBp65和COX-2蛋白表達(dá)的關(guān)系
      肖 雁, 官志忠氧糖剝奪再灌注引起的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡與NF-κBp65和COX-2蛋白表達(dá)的關(guān)系黃 赟1, 董艷軍2, 肖 雁1, 官志忠1目的 探討氧糖剝奪再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)后SH-SY5Y細(xì)胞凋亡情況及NF-κB信號通路NF-κBp65、COX-2蛋白的表達(dá)。方法 將SH-SY5Y細(xì)胞分為正常對照組、氧糖剝奪4 h/再灌注24 h組(OGD/R)組。利用流式細(xì)胞術(shù)分別

      中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志 2017年2期2017-03-16

    • 腺苷預(yù)處理星形膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪復(fù)氧糖后CX3CL1、GLT-1表達(dá)的變化
      處理星形膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪復(fù)氧糖后CX3CL1、GLT-1表達(dá)的變化王 潔 韓艷艷 李 娟 毛向雷 牛草原 李艷艷 蘭春偉 譚 軍(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院,河南 新鄉(xiāng) 453000)目的 探討在缺氧復(fù)氧情況下腺苷預(yù)處理誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸轉(zhuǎn)運體蛋白(GLT-1)和趨化因子(CX3CL1)的表達(dá)變化。方法 原代培養(yǎng)的大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞分為正常組、模型組和腺苷預(yù)處理組。模型組:細(xì)胞接受5 h氧糖剝奪/復(fù)氧糖24 h處理;腺苷預(yù)處理組:細(xì)胞在氧糖剝奪前24 h加入

      中國老年學(xué)雜志 2017年2期2017-02-14

    • HT22細(xì)胞氧糖剝奪再灌注及Grasp65過表達(dá)干預(yù)后高爾基體的形態(tài)變化及其可能機制研究
      勝?HT22細(xì)胞氧糖剝奪再灌注及Grasp65過表達(dá)干預(yù)后高爾基體的形態(tài)變化及其可能機制研究王 佳1, 熊 炬2, 周文勝2目的 探討HT22細(xì)胞氧糖剝奪再灌注及Grasp65過表達(dá)干預(yù)后高爾基體的形態(tài)變化及其可能機制。方法 利用小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞系HT22為研究對象,HT22細(xì)胞經(jīng)氧糖剝奪再灌注損傷及Grasp65過表達(dá)干預(yù)后,采用MTT法檢測細(xì)胞存活率;Hoechest33258熒光染色法評估細(xì)胞凋亡;并應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)觀察高爾基體的形態(tài);應(yīng)用We

      中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志 2016年12期2017-01-12

    • 體外培養(yǎng)的乳鼠皮層神經(jīng)元氧糖剝奪后軸突損傷的實驗觀察
      的乳鼠皮層神經(jīng)元氧糖剝奪后軸突損傷的實驗觀察田青 葉文華 陶玉倩目的 建立乳鼠皮層神經(jīng)元體外培養(yǎng)模型,觀察氧糖剝奪處理對神經(jīng)元軸突損傷的影響。方法 取出生24 h內(nèi)的SD大鼠大腦皮層神經(jīng)元,采用逐漸降低培養(yǎng)液中血清濃度和添加阿糖胞苷的方法培養(yǎng)、純化神經(jīng)元,觀察其形態(tài)并鑒定。建立氧糖剝奪模型,隨機分為正常對照組和氧糖剝奪處理組(2、4、6、8 h各1組)。采用噻唑藍(lán)比色法測定神經(jīng)元活性,βⅢ-tubulin 免疫熒光染色觀察軸突形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果 神經(jīng)元培養(yǎng)3

      新醫(yī)學(xué) 2016年11期2016-12-06

    • 糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的蛋白激酶在缺血大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞中的保護作用
      馬神經(jīng)元細(xì)胞根據(jù)氧糖剝奪(腦缺血)誘導(dǎo)時間不同分為正常海馬神經(jīng)元細(xì)胞組,氧糖剝奪誘導(dǎo)120 min組、氧糖剝奪誘導(dǎo)120 min后正?;謴?fù)10 min組、氧糖剝奪誘導(dǎo)120 min后正?;謴?fù)30 min組和氧糖剝奪誘導(dǎo)120 min后正?;謴?fù)60 min組。采用Annexin V-FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)對樣品進(jìn)行檢測,區(qū)分實驗樣本中正常、壞死、凋亡細(xì)胞。結(jié)果隨著氧糖剝奪(腦缺血)時間的延長而神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的數(shù)量呈現(xiàn)不斷增加的趨勢;而隨著氧糖剝奪(腦缺血)

      中國老年學(xué)雜志 2016年6期2016-04-14

    • 乙酰葛根素對氧糖剝離致神經(jīng)元損傷的干預(yù)作用
      01乙酰葛根素對氧糖剝離致神經(jīng)元損傷的干預(yù)作用李 蘭 劉東梅安徽醫(yī)學(xué)高等??茖W(xué)校護理學(xué)部 安徽合肥 230601本文主要通過三組實驗來研究乙酰葛根素氧糖剝離對神經(jīng)細(xì)胞損傷的干預(yù)作用。研究方法在氧糖剝離的基礎(chǔ)上建立細(xì)胞模型;利用6-聯(lián)脒-2-苯基吲哚(DAPI)法觀察神經(jīng)細(xì)胞的凋亡率;利用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測細(xì)胞核因子(或稱為K基因結(jié)合核因子)、蛋白質(zhì)(HIF-1α)以及P53基因的表達(dá);利用蛋白印跡法或免疫印跡的實驗方法測定熱休克蛋白

      東方食療與保健 2016年7期2016-03-08

    • 內(nèi)皮祖細(xì)胞對氧糖剝奪/復(fù)氧損傷神經(jīng)元的保護作用
      著·內(nèi)皮祖細(xì)胞對氧糖剝奪/復(fù)氧損傷神經(jīng)元的保護作用李子惠1,柏盈盈1,居勝紅2(1.東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院 分子與功能影像實驗室,江蘇 南京 210009;2.東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院 放射科,江蘇 南京 210009)目的:研究內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)共培養(yǎng)對氧糖剝奪/復(fù)氧(OGD/R)損傷神經(jīng)元是否有保護作用。方法:分離培養(yǎng)新生小鼠的海馬神經(jīng)元,利用缺氧培養(yǎng)室建立神經(jīng)元OGD/R模型。分離培養(yǎng)小鼠骨髓源性EPCs,采用Transwell小室建立EPCs與OGD/R損

      東南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版) 2015年3期2015-03-22

    • 基于Activin A途徑的大黃素神經(jīng)保護機制的研究
      制備神經(jīng)元細(xì)胞的氧糖剝奪(OGD)模型,并在此基礎(chǔ)上,給予大黃素干預(yù),分別檢測細(xì)胞的生存力;應(yīng)用酶聯(lián)免疫方法檢測細(xì)胞培養(yǎng)基的Activin A的表達(dá)含量;應(yīng)用Western blotting 對caspase-3蛋白的檢測。結(jié)果pc-12細(xì)胞經(jīng)牛膝多肽刺激后轉(zhuǎn)化為類神經(jīng)元樣細(xì)胞,在OGD后的pc-12細(xì)胞呈明顯的梯度變化;實驗組細(xì)胞的生存力明顯提高,其培養(yǎng)基的Activin A含量升高明顯,caspase-3蛋白的表達(dá)與單純應(yīng)用氧糖剝奪組比較,表達(dá)降低(P

      中國實驗診斷學(xué) 2015年11期2015-03-10

    • 吡拉格雷鈉對氧糖剝奪/復(fù)氧后星形膠質(zhì)細(xì)胞水腫及AQP4表達(dá)的影響
      外星形膠質(zhì)細(xì)胞行氧糖剝奪/復(fù)氧處理,建立細(xì)胞水腫模型,觀察TSF對星形膠質(zhì)細(xì)胞水腫模型的治療效果及其對AQP4表達(dá)的影響。1 材料與方法1.1 實驗動物及材料1.1.1 實驗動物 出生3 d內(nèi)的SD新生乳鼠(由江蘇大學(xué)動物中心提供)。1.1.2 材料及試劑 戊巴比妥鈉(美國Sigma公司);胎牛血清,0.25%胰蛋白酶(含0.025%EDTA),DMEM無糖培養(yǎng)基,DMEM培養(yǎng)基(美國Sig-ma公司);D-Hanks緩沖液;3-氧 - 甲基-[1-3H]

      中國藥理學(xué)通報 2015年12期2015-02-27

    • Netrin-1促進(jìn)氧糖剝奪后腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞存活☆
      trin-1促進(jìn)氧糖剝奪后腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞存活☆丁喬*廖松潔*闕嘉麗*李晨光*余劍*目的通過建立體外氧糖剝奪模型模擬缺血缺氧環(huán)境,觀察軸突導(dǎo)向因子netrin-1對腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞氧糖剝奪損傷后的作用。方法體外培養(yǎng)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞,免疫熒光法檢測其netrin-1受體結(jié)直腸癌缺失基因(deleted in colorectal cancer,DCC)及uncoordinated(UNC)5H2的表達(dá);并使用不同濃度netrin-1作用于氧糖剝奪損傷的腦微血

      中國神經(jīng)精神疾病雜志 2015年3期2015-02-06

    • SN50對缺血再灌注損傷中TNF-α影響的實驗研究
      ,再將細(xì)胞模型在氧糖剝奪條件下進(jìn)行培養(yǎng),通過體外實驗來觀察和了解SN50對缺血再灌注損傷中TNF-α表達(dá)的影響,為眼部缺血性疾病的臨床治療提供理論探索。1 材料與方法1.1 試劑與儀器 SN50(Biomy公司 美國),TNF-α ELISA Kit(美國Invitrogen公司),RPMI 1640培養(yǎng)液(美國Gibco公司),胎牛血清(美國Gibco公司),MTT(美國Invitrogen公司),細(xì)胞培養(yǎng)瓶與細(xì)胞培養(yǎng)皿(美國Corning公司),ROR

      東南國防醫(yī)藥 2014年5期2014-12-07

    • 氯化鋰對人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞氧糖剝奪模型PARP/AIF凋亡信號通路的影響
      300)氯化鋰對氧糖剝奪的SH-SY5Y細(xì)胞具有較強的保護作用,1.0 mmol/L氯化鋰為細(xì)胞保護的有效劑量,其作用機制之一可能是對 AIF信號通路的抑制〔1〕。本實驗擬采用氧糖剝奪的SH-SY5Y細(xì)胞模型模擬腦缺血再灌注損傷進(jìn)一步闡述氯化鋰對PARP-1/AIF信號通路的影響,為鋰劑用于缺血性腦血管病的治療奠定理論基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1主要儀器設(shè)備 二氧化碳(CO2)培養(yǎng)箱;低溫高速離心機;BB6220型三氣培養(yǎng)箱;倒置相差顯微鏡;顯微照相系統(tǒng);超

      中國老年學(xué)雜志 2014年3期2014-09-12

    • 突觸蛋白Synapsin在氧糖剝奪模型中的表達(dá)及意義
      PC12細(xì)胞進(jìn)行氧糖剝奪處理,建立缺血性腦損傷模型,采用Western blot方法檢測不同時間氧糖剝奪模型細(xì)胞中的Synapsin蛋白表達(dá),探討Synapsin蛋白在氧糖剝奪模型中的表達(dá)及意義。1 材料與方法1.1 細(xì)胞株P(guān)C12細(xì)胞株(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤)購自北京銀紫晶生物技術(shù)公司。1.2 主要試劑和儀器DMEM培養(yǎng)基購自美國Gibco公司;胎牛血清購自北京鼎國公司;鼠神經(jīng)生長因子(NGF)、胰蛋白酶均購自美國Sigma公司;抗突觸素抗體購自武漢博士

      中國實驗診斷學(xué) 2014年3期2014-08-25

    • HMGB1基因沉默對氧糖剝奪/復(fù)氧所致星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷的保護作用
      星形膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行氧糖剝奪/復(fù)氧以模擬在體腦缺血再灌注損傷,觀察HMGB1表達(dá)的變化情況,探討RNA干擾抑制HMGB1表達(dá)是否對氧糖剝奪/復(fù)氧的星形膠質(zhì)細(xì)胞具有保護作用。1 材料與方法1.1 實驗動物 新生24h內(nèi)Sprague-Dawley大鼠40只,雌雄兼有,由重慶醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供,許可證號:SCXK(渝)2012-0001。1.2 主要試劑 DMEM高糖、胎牛血清(美國Gibco),無糖DMEM培養(yǎng)基(中國鈕因華信),慢病毒載體HMGB1siR

      解放軍醫(yī)學(xué)雜志 2014年4期2014-03-02

    • 腺苷預(yù)處理對OGD星形膠質(zhì)細(xì)胞NGF和BDNF的影響
      細(xì)胞用于實驗,在氧糖剝奪(oxygen-glucose deprivation,OGD)處理前實驗組給予100μmol/L的腺苷預(yù)處理,研究其對內(nèi)源性NGF、BDNF表達(dá)的影響。1 材料與方法1.1實驗動物出生24h內(nèi)的SD大鼠,雌雄不限,體質(zhì)量10~12g。1.2實驗方法將SD大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞的分離、消化、培養(yǎng)、鑒定,通過分組處理,隨機分為3組:正常對照組(normal control group)、氧糖剝奪組(OGD group)、腺苷預(yù)處理組(ADO

      中國實用神經(jīng)疾病雜志 2013年4期2013-10-11

    • 腦必通膠囊對局灶性腦缺血大鼠腦血流量及內(nèi)皮細(xì)胞iNOS表達(dá)的影響
      [3]。2.4 氧糖剝奪模型的建立 先將培養(yǎng)HUVEC細(xì)胞的培養(yǎng)液換成無糖DMEM培養(yǎng)基,然后轉(zhuǎn)移置缺氧培養(yǎng)氣室中,同時打開有白色塑料鉗夾的聚丙烯管道的進(jìn)氣口和出氣口,將入口處的聚丙烯管道于包含有所需的混合氣體的源頭相連,向氣室內(nèi)充入95%的N2和5%的CO2氣體,將氣流自動控制在每分鐘20 L,大約4 min氣室被完全充滿后,切斷氣體來源,關(guān)上白色的塑料鉗夾以緊閉氣室,最后將這個氣室置于37℃溫育。氧糖剝奪的時間分別是1、3、6、12、24 h。2.5

      中成藥 2013年2期2013-08-28

    • 米非司酮對孕酮防護PC12細(xì)胞氧糖剝奪損傷的影響*
      胞證明孕酮可減輕氧糖剝奪(oxygen-glucose deprivation,OGD)對神經(jīng)元的損傷。然而孕酮的防護作用是通過核受體介導(dǎo)的基因途徑,還是通過膜受體介導(dǎo)的非基因途徑目前尚不清楚[2]。本文在PC12細(xì)胞的OGD損傷模型,觀察孕酮核受體拮抗劑米非司酮(mifepristone,MIF)阻斷孕酮核受體前后細(xì)胞形態(tài)、存活率、培養(yǎng)液中葡萄糖含量的變化,探討核受體介導(dǎo)的基因途徑在孕酮抗OGD損傷中所扮演的角色。1 材料與方法1.1 材料與試劑大鼠嗜鉻

      中國應(yīng)用生理學(xué)雜志 2013年2期2013-03-25

    • 氧糖剝奪對體外培養(yǎng)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)Cdh1蛋白表達(dá)的影響及機制*
      培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪(oxygen-glucose deprivation,OGD)后Cdh1蛋白的表達(dá)變化,及其是否與細(xì)胞外液葡萄糖含量有關(guān),為進(jìn)一步明確缺血缺氧性腦損傷的發(fā)病機制提供實驗依據(jù)。1 材料與方法1.1 星形膠質(zhì)細(xì)胞的體外純化培養(yǎng)根據(jù)McCarthy 等[3]報道的方法,取新生1~2 d SD 大鼠,75%乙醇消毒,無菌操作下取出全腦浸于4℃預(yù)冷D-h(huán)anks液中,用眼科鑷快速剝除腦膜及小腦,夾取皮層置于另一玻璃皿中。仔細(xì)剪碎皮層組織后,

      華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版) 2012年3期2012-12-23

    • PC12細(xì)胞轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元樣細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定及氧糖剝奪模型的制備
      能,同時應(yīng)用體外氧糖剝奪(oxygen-glucose deprivation,OGD)來模擬體內(nèi)腦缺血過程,為探討缺血缺氧狀態(tài)下對神經(jīng)元的活力、凋亡、信號通路機制的研究定物質(zhì)基礎(chǔ)。1 材料和方法1.1 實驗細(xì)胞大鼠PC12細(xì)胞株購自北京金紫晶生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤細(xì)胞庫)。鼠神經(jīng)生長因子(NGF)(Sigma公司,美國)。1.2 實驗方法1.2.1 PC12細(xì)胞的培養(yǎng)、傳代 將細(xì)胞懸液加入含有DMEM完全培養(yǎng)基,培養(yǎng)液2-3天更換一次。

      中國實驗診斷學(xué) 2012年5期2012-11-23

    • PC12細(xì)胞轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元樣細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定及氧糖剝奪模型的制備
      能,同時應(yīng)用體外氧糖剝 奪 (oxygen-glucose deprivation,OGD)來模擬體內(nèi)腦缺血過程,為今后進(jìn)一步探討缺血缺氧狀態(tài)下對神經(jīng)元的活力、凋亡、信號通路機制的研究奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。1 材料和方法1.1 實驗細(xì)胞大鼠PC12細(xì)胞株購自北京金紫晶生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤細(xì)胞庫)。鼠神經(jīng)生長因子(NGF)(Sigma公司,美國)。1.2 實驗方法1.2.1 PC12細(xì)胞的培養(yǎng)、傳代 將細(xì)胞懸液加入含有DMEM完全培養(yǎng)基,培養(yǎng)液2

      中國實驗診斷學(xué) 2012年12期2012-11-05

    • 促紅細(xì)胞生成素預(yù)處理對氧糖剝奪后星形膠質(zhì)細(xì)胞水腫及AQP4表達(dá)的影響☆
      hEPO預(yù)處理對氧糖剝奪后星形膠質(zhì)細(xì)胞水腫及其AQP4表達(dá)的影響,并探討其意義。1 材料與方法1.1 研究對象 新生2 d內(nèi)的SD大鼠(重慶醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供)50只,胎牛血清(美國Gibco),無糖DMEM培養(yǎng)基(中國 鈕因華信),神經(jīng)膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(美國Sigma),乳酸脫氫酶試劑盒(美國 Hyclone),RT-PCR試劑盒(美國 Ferments),AQP4 多克隆抗體(美國 Santa Cruz)。1.2 星形膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)[8]取新

      中國神經(jīng)精神疾病雜志 2012年1期2012-09-14

    • 孕酮對氧糖剝奪損傷的PC12細(xì)胞的保護作用*
      為依靠葡萄糖的無氧糖酵解來獲取能量。然而,無氧糖酵解產(chǎn)生ATP的效率下降,要滿足腦細(xì)胞對能量的需求,就需要大量葡萄糖作為底物,葡萄糖進(jìn)入腦細(xì)胞必須借助細(xì)胞膜上的GLUT3進(jìn)行跨膜轉(zhuǎn)運。因此GLUT3表達(dá)的多少就成為決定缺血時腦細(xì)胞對葡萄糖利用效率的首要因素,在腦缺氧缺血損傷的病理過程中起關(guān)鍵作用,是干預(yù)腦缺氧缺血損傷的重要靶點。探索缺氧缺血時增強神經(jīng)元葡萄糖供給和攝取能力的調(diào)控因素具有重要意義。本實驗室前期在缺氧缺血新生鼠和缺血-再灌注大鼠已經(jīng)證實孕酮(p

      中國病理生理雜志 2012年2期2012-09-14

    • 大鼠皮層小膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪模型的制備
      。本實驗采用體外氧糖剝奪(oxygen-glucose deprivation,OGD)模型來模擬腦損傷過程,為研究缺血過程中小膠質(zhì)細(xì)胞的腦保護作用提供了可靠、實用的方法。1 材料與方法1.1 實驗動物出生1~2d Wistar大鼠。購自吉林大學(xué)中心實驗室。1.2 實驗方法1.2.1 大鼠皮層小膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)和鑒定 采用酶消化法結(jié)合機械分離法進(jìn)行培養(yǎng)[2]。應(yīng)用倒置顯微鏡觀察不同時期細(xì)胞形態(tài)及生長情況。在培養(yǎng)第8天用OX42免疫細(xì)胞化學(xué)染色進(jìn)行鑒定。1.

      中外醫(yī)療 2011年35期2011-06-15

    高清欧美精品videossex| 精品久久久噜噜| 91狼人影院| av.在线天堂| 精品人妻视频免费看| 国产成人精品婷婷| 欧美成人a在线观看| 欧美3d第一页| 国产成人午夜福利电影在线观看| 日本黄大片高清| 久久久久久伊人网av| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲精品成人av观看孕妇| 丝袜喷水一区| h日本视频在线播放| 日本午夜av视频| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 欧美精品亚洲一区二区| 精品一区二区三卡| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲综合色惰| 大片免费播放器 马上看| 国产v大片淫在线免费观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲av国产av综合av卡| 日韩av免费高清视频| av一本久久久久| 夫妻午夜视频| 成人漫画全彩无遮挡| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产精品一区www在线观看| 日韩亚洲欧美综合| 国产淫片久久久久久久久| 少妇 在线观看| 久热久热在线精品观看| 国产中年淑女户外野战色| a级毛色黄片| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 精品午夜福利在线看| 久久青草综合色| 国产免费一区二区三区四区乱码| av不卡在线播放| 久久99热6这里只有精品| 乱码一卡2卡4卡精品| 精品人妻一区二区三区麻豆| 97在线人人人人妻| 国产免费又黄又爽又色| 97超碰精品成人国产| 日韩欧美一区视频在线观看 | 久久久久精品性色| 国产69精品久久久久777片| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 少妇精品久久久久久久| 色5月婷婷丁香| 国产日韩欧美在线精品| 国产淫语在线视频| 国产一区二区三区综合在线观看 | 亚洲色图av天堂| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 成人亚洲精品一区在线观看 | 精品人妻视频免费看| 国产精品福利在线免费观看| 久久久久精品久久久久真实原创| 日本与韩国留学比较| 免费人妻精品一区二区三区视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| 99视频精品全部免费 在线| 国产有黄有色有爽视频| 在线看a的网站| 国产女主播在线喷水免费视频网站| freevideosex欧美| 国产成人91sexporn| 观看av在线不卡| 哪个播放器可以免费观看大片| 国产成人91sexporn| 九色成人免费人妻av| 高清不卡的av网站| 性色avwww在线观看| 美女福利国产在线 | 国产精品一二三区在线看| 国产中年淑女户外野战色| 亚洲精品456在线播放app| 九九爱精品视频在线观看| 美女中出高潮动态图| 九草在线视频观看| 插逼视频在线观看| 久久鲁丝午夜福利片| 免费看不卡的av| 成人亚洲精品一区在线观看 | 多毛熟女@视频| 国产伦精品一区二区三区四那| 久久av网站| 永久网站在线| 一区在线观看完整版| 一边亲一边摸免费视频| 99久久综合免费| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 国产日韩欧美亚洲二区| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 久久久久久九九精品二区国产| 大码成人一级视频| 美女福利国产在线 | 国产成人精品一,二区| 国产深夜福利视频在线观看| 久久久久久久久久久丰满| 91精品国产九色| 欧美成人精品欧美一级黄| 免费看av在线观看网站| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 大片免费播放器 马上看| 久久精品久久精品一区二区三区| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 精品国产三级普通话版| 久久精品久久久久久噜噜老黄| xxx大片免费视频| 久久久精品94久久精品| 成人无遮挡网站| 嘟嘟电影网在线观看| 国产免费又黄又爽又色| 91精品一卡2卡3卡4卡| 久久久久久久久久人人人人人人| 永久网站在线| 国产av码专区亚洲av| 亚洲精品自拍成人| 观看av在线不卡| 国产精品欧美亚洲77777| 91在线精品国自产拍蜜月| 日本一二三区视频观看| 嘟嘟电影网在线观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| av专区在线播放| 国产黄片美女视频| h日本视频在线播放| 免费大片黄手机在线观看| 免费看不卡的av| 亚洲在久久综合| 五月开心婷婷网| 亚洲精品,欧美精品| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲国产色片| 身体一侧抽搐| 身体一侧抽搐| 久久久亚洲精品成人影院| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 熟女电影av网| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 亚洲av日韩在线播放| 男女边摸边吃奶| 中文欧美无线码| 26uuu在线亚洲综合色| 久久久久久久久大av| www.色视频.com| 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲av福利一区| 青青草视频在线视频观看| 深爱激情五月婷婷| 久久 成人 亚洲| 丰满少妇做爰视频| 丰满少妇做爰视频| 91精品国产国语对白视频| av国产精品久久久久影院| 青青草视频在线视频观看| 亚洲,一卡二卡三卡| 亚洲va在线va天堂va国产| 最后的刺客免费高清国语| 久久国内精品自在自线图片| 午夜福利视频精品| 麻豆成人午夜福利视频| 久久亚洲国产成人精品v| 欧美bdsm另类| 女性被躁到高潮视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产淫片久久久久久久久| 亚洲国产精品999| 精品久久久久久电影网| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产在线免费精品| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产视频内射| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲欧美日韩东京热| 日韩中文字幕视频在线看片 | 国产精品.久久久| 亚州av有码| 亚洲精品第二区| 色综合色国产| 日韩av免费高清视频| 国产精品久久久久久精品古装| 久久久久久久久久人人人人人人| 日韩强制内射视频| 欧美高清性xxxxhd video| 国产高潮美女av| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产色婷婷99| 视频区图区小说| 一区二区三区免费毛片| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲精品视频女| av国产精品久久久久影院| 一级爰片在线观看| 日本色播在线视频| 国产 精品1| 成人免费观看视频高清| 男女国产视频网站| 最近最新中文字幕大全电影3| 久久久亚洲精品成人影院| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国产成人精品一,二区| 国产精品无大码| 久久国内精品自在自线图片| 九草在线视频观看| 97在线视频观看| 老熟女久久久| 街头女战士在线观看网站| 免费大片18禁| 久久久a久久爽久久v久久| 一区二区三区精品91| 亚洲国产最新在线播放| 国产精品99久久久久久久久| 国产男女内射视频| 亚洲图色成人| 国产精品福利在线免费观看| 国产淫片久久久久久久久| 免费大片黄手机在线观看| 色哟哟·www| 亚洲不卡免费看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 美女cb高潮喷水在线观看| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产精品av视频在线免费观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 九草在线视频观看| 精品久久久久久久久av| 久久久久久久久久久丰满| 久久99精品国语久久久| 国内精品宾馆在线| 亚洲经典国产精华液单| 国产精品爽爽va在线观看网站| 新久久久久国产一级毛片| 国产亚洲5aaaaa淫片| 日韩免费高清中文字幕av| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 大片电影免费在线观看免费| 老熟女久久久| 免费观看a级毛片全部| 久久久久网色| 老司机影院毛片| 亚洲国产精品一区三区| 成人综合一区亚洲| 美女国产视频在线观看| 91精品国产九色| 日韩人妻高清精品专区| 最近手机中文字幕大全| 国产在线免费精品| 青青草视频在线视频观看| 青春草视频在线免费观看| 又大又黄又爽视频免费| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产免费一级a男人的天堂| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 99久久精品一区二区三区| 久久久成人免费电影| 超碰97精品在线观看| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲欧美清纯卡通| 伦理电影大哥的女人| 搡老乐熟女国产| 成年免费大片在线观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 久久 成人 亚洲| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 夫妻午夜视频| 男人添女人高潮全过程视频| 成人国产av品久久久| av在线播放精品| 久久这里有精品视频免费| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 免费在线观看成人毛片| 男的添女的下面高潮视频| 一本久久精品| 看免费成人av毛片| 一级二级三级毛片免费看| 亚洲第一av免费看| 色婷婷av一区二区三区视频| 欧美日韩亚洲高清精品| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 黄色怎么调成土黄色| 性色av一级| 日韩欧美一区视频在线观看 | 性高湖久久久久久久久免费观看| 日本色播在线视频| 好男人视频免费观看在线| 国产大屁股一区二区在线视频| 全区人妻精品视频| 成人特级av手机在线观看| 特大巨黑吊av在线直播| 人体艺术视频欧美日本| 欧美另类一区| 国产在线一区二区三区精| 深夜a级毛片| 99热6这里只有精品| 男女免费视频国产| 毛片女人毛片| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 丰满少妇做爰视频| av天堂中文字幕网| 美女内射精品一级片tv| 少妇高潮的动态图| 日日摸夜夜添夜夜爱| 高清视频免费观看一区二区| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 亚洲精品第二区| 1000部很黄的大片| 国产老妇伦熟女老妇高清| 熟女电影av网| 亚洲精品国产av成人精品| h日本视频在线播放| 国产黄片视频在线免费观看| 久久av网站| 亚洲精品国产成人久久av| 青春草视频在线免费观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 99久久人妻综合| 五月伊人婷婷丁香| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 黄片无遮挡物在线观看| 欧美丝袜亚洲另类| 久久99蜜桃精品久久| 韩国av在线不卡| 在线观看av片永久免费下载| 欧美xxxx性猛交bbbb| 亚洲精品aⅴ在线观看| 免费观看的影片在线观看| h日本视频在线播放| 国精品久久久久久国模美| 中文资源天堂在线| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 免费看不卡的av| 欧美少妇被猛烈插入视频| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 免费黄频网站在线观看国产| 97超视频在线观看视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 中国三级夫妇交换| 少妇精品久久久久久久| 日韩大片免费观看网站| 国产成人a区在线观看| 一本色道久久久久久精品综合| av黄色大香蕉| 一级毛片 在线播放| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产精品国产三级国产av玫瑰| videos熟女内射| 少妇人妻 视频| 国产精品蜜桃在线观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久99热6这里只有精品| 美女高潮的动态| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 少妇人妻精品综合一区二区| 久久久午夜欧美精品| 在现免费观看毛片| 久久久久久九九精品二区国产| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 成人漫画全彩无遮挡| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 精品少妇久久久久久888优播| 99国产精品免费福利视频| 深爱激情五月婷婷| 看免费成人av毛片| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 欧美另类一区| 国产伦理片在线播放av一区| 国产综合精华液| 一个人看视频在线观看www免费| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 久久久久久久久久成人| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲色图av天堂| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 免费观看在线日韩| 欧美精品亚洲一区二区| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 天堂中文最新版在线下载| 免费大片18禁| 亚洲国产精品国产精品| 欧美日韩综合久久久久久| 99九九线精品视频在线观看视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| av在线观看视频网站免费| 高清欧美精品videossex| 国产精品.久久久| 成人特级av手机在线观看| 内地一区二区视频在线| 日韩av不卡免费在线播放| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 涩涩av久久男人的天堂| 男女边摸边吃奶| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| av专区在线播放| 亚洲国产av新网站| 久久久久久久大尺度免费视频| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 成年人午夜在线观看视频| 97超碰精品成人国产| 欧美日韩视频精品一区| 日韩亚洲欧美综合| 三级国产精品欧美在线观看| 国产美女午夜福利| 日本与韩国留学比较| 香蕉精品网在线| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 久久久国产一区二区| av视频免费观看在线观看| 搡老乐熟女国产| 国产精品人妻久久久久久| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 久久久久国产精品人妻一区二区| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产亚洲欧美精品永久| 成人二区视频| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 美女福利国产在线 | 午夜福利在线在线| 亚洲国产色片| 国产av精品麻豆| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产精品国产av在线观看| 亚洲内射少妇av| 国产 一区 欧美 日韩| 久久精品国产自在天天线| 久久99热6这里只有精品| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 春色校园在线视频观看| 三级经典国产精品| 久久99热这里只频精品6学生| 国产午夜精品一二区理论片| 国产成人免费观看mmmm| 国产深夜福利视频在线观看| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 日产精品乱码卡一卡2卡三| 91精品国产九色| 色婷婷av一区二区三区视频| 秋霞伦理黄片| 国产高清国产精品国产三级 | 日本午夜av视频| 国产精品一区www在线观看| 国产伦在线观看视频一区| 我的女老师完整版在线观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 久久青草综合色| 亚洲最大成人中文| 美女中出高潮动态图| 少妇的逼好多水| 久久久精品免费免费高清| 超碰av人人做人人爽久久| 网址你懂的国产日韩在线| 国产精品久久久久成人av| 在线观看av片永久免费下载| 特大巨黑吊av在线直播| 最近最新中文字幕免费大全7| 久久婷婷青草| 成人漫画全彩无遮挡| 性高湖久久久久久久久免费观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲精品,欧美精品| 欧美成人午夜免费资源| 啦啦啦在线观看免费高清www| 在线播放无遮挡| 男男h啪啪无遮挡| 精品熟女少妇av免费看| 51国产日韩欧美| 久久99蜜桃精品久久| 亚洲图色成人| 国产精品免费大片| 国产探花极品一区二区| 日韩欧美精品免费久久| 国产永久视频网站| 婷婷色av中文字幕| 亚洲国产精品专区欧美| 久热这里只有精品99| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 在线天堂最新版资源| 国产中年淑女户外野战色| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲第一av免费看| 一级毛片久久久久久久久女| 熟女电影av网| 少妇熟女欧美另类| 亚洲怡红院男人天堂| 国产欧美日韩精品一区二区| 久久6这里有精品| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产美女午夜福利| 久久精品国产自在天天线| 亚洲第一av免费看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 最近的中文字幕免费完整| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 夜夜爽夜夜爽视频| 日本av手机在线免费观看| 国产熟女欧美一区二区| 人妻系列 视频| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产精品人妻久久久久久| 亚洲高清免费不卡视频| 久久久亚洲精品成人影院| 久久久久久久国产电影| 一边亲一边摸免费视频| 国产在线视频一区二区| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲av中文av极速乱| 老熟女久久久| 日韩三级伦理在线观看| 中文字幕久久专区| 亚洲国产欧美人成| 看十八女毛片水多多多| 国产精品嫩草影院av在线观看| 日本黄大片高清| a 毛片基地| 日本色播在线视频| 欧美97在线视频| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚洲av不卡在线观看| 国产亚洲欧美精品永久| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 我要看黄色一级片免费的| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产 一区 欧美 日韩| 国产精品女同一区二区软件| 久久人妻熟女aⅴ| 婷婷色av中文字幕| 国产男人的电影天堂91| 久久久久国产网址| 国产片特级美女逼逼视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 久久婷婷青草| 毛片一级片免费看久久久久| 22中文网久久字幕| 成年av动漫网址| av一本久久久久| 大陆偷拍与自拍| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 青青草视频在线视频观看| 欧美三级亚洲精品| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲国产欧美在线一区| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲天堂av无毛| 免费少妇av软件| 久久6这里有精品| 日韩人妻高清精品专区| 又爽又黄a免费视频| 深爱激情五月婷婷| 亚洲av日韩在线播放| 午夜精品国产一区二区电影| 丰满乱子伦码专区| 插逼视频在线观看| 久热久热在线精品观看| 麻豆国产97在线/欧美| 五月开心婷婷网| 午夜激情福利司机影院| av免费在线看不卡| 亚洲性久久影院| 久久久久网色| 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲精品一二三| 日韩免费高清中文字幕av| 一区在线观看完整版| av专区在线播放| 成人无遮挡网站| 深夜a级毛片| av专区在线播放| 一级毛片我不卡| 欧美日韩视频精品一区| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 黄片无遮挡物在线观看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产精品国产三级专区第一集| 国产成人a区在线观看| 国产免费视频播放在线视频| 国产极品天堂在线| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲精品,欧美精品| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产精品无大码| 日韩欧美一区视频在线观看 | 国产成人精品一,二区| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 成人美女网站在线观看视频| 毛片一级片免费看久久久久| 国产精品成人在线| 国产欧美日韩精品一区二区| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 五月伊人婷婷丁香| 蜜桃在线观看..| 久久久久网色| 久久久久久伊人网av| 成人高潮视频无遮挡免费网站|