芩雙顆粒中甘草酸銨含量測(cè)定方法研究

李　鎖，蘇　明，王光函，鄒桂欣，尤獻(xiàn)民（.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧　沈陽　00；.大連大學(xué)，遼寧　大連　6000；.遼寧省中醫(yī)研究院，遼寧　沈陽　004）

芩雙顆粒中甘草酸銨含量測(cè)定方法研究

李鎖1，蘇明2，王光函3，鄒桂欣3，尤獻(xiàn)民3
（1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧沈陽110032；2.大連大學(xué)，遼寧大連116000；3.遼寧省中醫(yī)研究院，遼寧沈陽110034）

摘要：目的：建立芩雙顆粒中甘草酸銨含量的測(cè)定方法.方法：采用ZORBAX SB-Aq色譜柱(4.6 mm×250mm，5μm)，流動(dòng)相為乙腈（B）-0.1%磷酸水溶液（A）梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為237nm，流速為1.0mL?min-1，柱溫為30℃.結(jié)果：甘草酸銨在0.240～1.440μg(r=0.9996)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好.精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性的RSD均小于2%，甘草酸銨的平均加樣回收率分別為95.10%.結(jié)論：所采用方法可靠、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于該制劑的含量測(cè)定及質(zhì)量控制.

關(guān)鍵詞：芩雙顆粒；甘草酸銨；含量測(cè)定

芩雙顆粒是中藥復(fù)方制劑，是由黃芩、甘草、金銀花等9種中藥組成，具有清熱宣肺、止咳化痰、佐以平喘之功效，主要用于治療肺熱壅肺型咳嗽、喘證.甘草為方中主藥，來源于豆科（Leguminosae甘草屬（Glycyrrhizin）植物烏拉爾甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch.）、脹果甘草（Glycyrrhiza inflate Bat.）或光果甘草（Glycyrrhiza glabra L.）的干燥根及根莖，具有補(bǔ)脾益氣、祛痰止咳、清熱解毒、緩急止痛、調(diào)和諸藥之功效[1].甘草的主要化學(xué)成分包括甘草酸、甘草次酸、甘草黃酮、甘草甜素（亦甘草酸銨）、甘草多糖等等[2-3].現(xiàn)代研究表明，甘草的活性成分甘草酸銨對(duì)許多疾病有預(yù)防和治療作用[4]，如具有腎上腺皮質(zhì)激素樣作用而無其副作用，抗炎抗變態(tài)明顯，并有抗病毒、抗?jié)?、免疫調(diào)節(jié)、保護(hù)膜結(jié)構(gòu)和解痙作用[5].本文采用了HPLC法測(cè)定了芩雙顆粒中甘草酸銨的含量，從而建立該制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn).采用的該方法能準(zhǔn)確測(cè)定甘草酸銨的含量，可作為作為中藥復(fù)方制劑芩雙顆粒的質(zhì)量控制.

1　儀器和試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀（Chemstation色譜工作站，美國(guó)Agilent公司)，SK250LH超聲波發(fā)生器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)，芩雙顆粒（遼寧省中醫(yī)研究院自制），甘草酸銨對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110731-201013），乙腈、磷酸均為色譜純，乙酸乙酯（沈陽禹王化波儀器有限公司），水為娃哈哈純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)公司），其余試劑為分析純，所購藥材經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)李峰教授鑒定.

2　方法與結(jié)果

2.1溶液的制備

2.1.1對(duì)照品溶液的制備

精密稱取甘草酸銨對(duì)照品0.9911g，置50mL容量瓶中，加乙醇制成每1mL含0.811mg的溶液，作為對(duì)照品溶液. 2.1.2供試品溶液的制備

取樣品約1g（2份)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密量取70%乙醇25mL，稱重，超聲處理30min，放冷，稱重，70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液即得.

2.1.3陰性對(duì)照溶液

按芩雙顆粒處方比例稱取除甘草的其余藥味各一份，按芩雙顆粒顆粒的生產(chǎn)工藝分別制成甘草空白樣品，按照上述供試品溶液的配制方法制成陰性樣品溶液.

2.2色譜條件

采用ZORBAX SB-Aq色譜柱（4.6×250mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈（B）-0.1%磷酸水溶液（A）梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為237nm，流速為1.0mL?min-1，柱溫為30℃.

表1梯度洗脫時(shí)間

2.3方法學(xué)考察

2.3.1專屬性考察

分別精密吸取供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各10μL，在“2.2”項(xiàng)下色譜條件下測(cè)定.結(jié)果表明：陰性對(duì)照溶液在甘草酸銨對(duì)照品相應(yīng)的保留時(shí)間處無干擾，該方法專屬性良好.色譜圖見圖1.（甘草酸銨保留時(shí)間為29.860min）

圖1 A為對(duì)照品溶液、B為芩雙顆粒供試液、C為陰性供試液

2.3.2線性關(guān)系考察

分別精密吸取2.0、4.0、6.0、8.0、10、15及20μL，分別注入高效液相色譜儀，測(cè)定；以甘草酸銨峰面積（y）為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量（x）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程y=568.4x-6.260（r=0.9996），結(jié)果表明，甘草酸銨在0.240～1.44μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好.

2.3.3精密度試驗(yàn)

取芩雙顆粒（批號(hào)1），研細(xì)，精密稱取4g，按“2.1.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積.計(jì)算，甘草酸銨面積的RSD為1.83%（n=6)，表明精密度良好.

2.3.4重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批芩雙顆粒，研細(xì)，精密稱取4g，平行6份，按“2.1.2”項(xiàng)下制備供試品溶液并進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算樣品中甘草酸銨含量分別為0.9217mg?g-1，RSD為1.69%.

2.3.5穩(wěn)定性試驗(yàn)

取上述同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、12h進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算，甘草酸銨RSD為1.9%.結(jié)果表明供試品溶液在12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定.

2.3.6加樣回收率試驗(yàn)

精密稱定已知含量芩雙顆粒顆粒細(xì)粉約2g，平行9份，精密加入對(duì)照品溶液各1mL，按“2.1.2”項(xiàng)下制備供試液，按“2.2”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率.結(jié)果見表2.

結(jié)果表明芩雙顆粒中甘草酸銨平均回收率為95.10%，

RSD為2.39%，說明此方法的準(zhǔn)確性良好.

表2加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4樣品測(cè)定

取不同芩雙顆粒細(xì)粉約4g，精密稱定，平行3份，按“2.1.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，在“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果見表3.

表3甘草酸銨含量測(cè)定結(jié)果（n=3，mg?g-1）

3　討論

3.1流動(dòng)相的選擇

參考《中華人民共和國(guó)藥典：一部》（2010年版）甘草含量測(cè)定項(xiàng)下的流動(dòng)相為乙腈-0.05%磷酸溶液，本實(shí)驗(yàn)通過調(diào)整流動(dòng)相比例，選用乙腈-0.1%磷酸水為流動(dòng)相，結(jié)果表明甘草酸銨色譜峰與相鄰雜質(zhì)峰分離較好，保留時(shí)間適宜，故選用乙腈-0.1%磷酸水作為流動(dòng)相.

3.2提取方法的選擇

研究過程中比較了回流提取和超聲提取方法，結(jié)果表明兩種方法結(jié)果差別不大，超聲提取法操作更為簡(jiǎn)便，因此確定使用超聲法提取，同時(shí)對(duì)提取時(shí)間進(jìn)行選擇，超聲30min可將甘草酸銨充分提取，確定提取時(shí)間為30min.

3.3測(cè)定結(jié)果分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，采用HPLC法檢測(cè)檢測(cè)甘草酸銨含量，回收率、重現(xiàn)性及穩(wěn)定性良好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于芩雙顆粒的質(zhì)量控制和分析.

參考文獻(xiàn)：

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基金項(xiàng)目：國(guó)家科技重大專項(xiàng)（2010ZX09401-304）

中圖分類號(hào)：R927.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-260X（2015）09-0039-02