• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    表皮生長因子受體在不同民族三陰性乳腺癌患者中的表達差異分析

    2016-07-20 06:05:04蔣威華李涌濤張明帥王曉文張晨光伊麗娜歐江華
    中國全科醫(yī)學 2016年19期
    關鍵詞:乳腺腫瘤維吾爾族漢族

    蔣威華,李涌濤,張 杰,張明帥,王曉文,張晨光,伊麗娜,歐江華

    ?

    ·論著·

    表皮生長因子受體在不同民族三陰性乳腺癌患者中的表達差異分析

    蔣威華,李涌濤,張 杰,張明帥,王曉文,張晨光,伊麗娜,歐江華

    830011新疆烏魯木齊市,新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院乳腺外科二病區(qū)

    【摘要】目的探討不同民族三陰性乳腺癌(TNBC)患者表皮生長因子受體(EGFR)的表達情況,了解其與預后的關系。方法選取2008年5月—2010年5月新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院住院的TNBC患者184例,其中漢族130例、維吾爾族54例。采用PV-9000免疫組化法測定EGFR的表達情況,采用Spearman秩相關分析探討EGFR表達與淋巴結轉移情況及TNM分期的相關性,同時采用Kaplan-Meier法繪制5年無瘤生存曲線,組間比較采用Log-rank檢驗。結果漢族TNBC患者EGFR陽性表達率為40.8%(53/130),維吾爾族TNBC患者EGFR陽性表達率為57.4%(31/54),二者間差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.270,P=0.039)。漢族、維吾爾族TNBC患者EGFR陽性表達率與淋巴結轉移數(shù)均呈正相關(rs值分別為0.370、0.950,P<0.05)。漢族、維吾爾族TNBC患者EGFR陽性表達率與TNM分期均呈正相關(rs值分別為0.380、0.371,P<0.05)。通過5年的隨訪觀察,漢族TNBC患者復發(fā)轉移發(fā)生率為24.6%(32/130),而維吾爾族TNBC患者復發(fā)轉移發(fā)生率為29.6%(16/54);二者5年無瘤生存曲線間差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.564,P=0.453)。結論不利于腫瘤預后的EGFR在漢族TNBC患者中的陽性表達率低于維吾爾族TNBC患者,但二者5年無瘤生存期間無明顯差異,提示維吾爾族TNBC患者可能存在與漢族TNBC患者不同的預后影響因素,建議進一步探討影響漢族、維吾爾族TNBC患者預后的相關因素。

    【關鍵詞】乳腺腫瘤;受體,表皮生長因子;漢族;維吾爾族

    蔣威華,李涌濤,張杰,等.表皮生長因子受體在不同民族三陰性乳腺癌患者中的表達差異分析[J].中國全科醫(yī)學,2016,19(19):2297-2301.[www.chinagp.net]

    JIANG W H,LI Y T,ZHANG J,et al.Differences of the expression of epidermal growth factor receptor among patients with triple negative breast cancer of different ethnic groups[J].Chinese General Practice,2016,19(19):2297-2301.

    三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)是目前乳腺癌研究關注的焦點,與非TNBC相比,侵襲性強、遠處復發(fā)和死亡風險更高、生存期短,臨床預后差,在年輕患者和老年患者中有著相似的生存率[1-2]。表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)是原癌基因C-erbB1的表達產(chǎn)物,參與激活一系列復雜的細胞信號轉導途徑,在上皮、間質及神經(jīng)源性組織中都有表達,EGFR信號通路對細胞的生長、增殖和分化等生理過程發(fā)揮重要的作用[3],與TNBC細胞的生長活躍程度密切相關[4],隨著目前不同種族TNBC的差異問題日益受到重視,本研究通過檢測中國新疆地區(qū)漢族、維吾爾族女性TNBC患者EGFR的陽性表達情況,分析其是否存在差異,并探討其與預后間的關系,為不同民族TNBC患者的異種亞型分析提供數(shù)據(jù)[5],同時也為進一步了解影響TNBC患者的預后因素提供一定的依據(jù)。

    1對象與方法

    1.1研究對象在2008年5月—2010年5月新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院住院的乳腺癌患者1 003例中,選取雌激素受體(estrogen receptor,ER)、孕激素受體(progesterone receptor,PR)、人表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2,HER-2)表達均陰性即TNBC患者184例,均為女性。納入標準:(1)在本院首次治療,且可以手術;(2)漢族、維吾爾族;(3)經(jīng)本院免疫組化確認標記ER、PR及HER-2表達均陰性。排除標準:臨床病理資料不完整者。本研究通過醫(yī)院倫理委員會審批,患者均知情同意并簽署同意書。

    1.2方法

    1.2.1EGFR檢測方法采用PV-9000免疫組化法測定EGFR的表達:(1)組織經(jīng)10%甲醛溶液固定,石蠟包埋,蒸餾水沖洗,4 μm 連續(xù)切片,并以磷酸鹽緩沖液(PBS)浸泡5 min;(2)清除內(nèi)源性過氧化物酶活性〔以3%過氧化氫(H2O2)溶液室溫孵育5~10 min〕,PBS沖洗2 min×3次;(3)滴加EGFR一抗,37 ℃孵育1.5 h,PBS沖洗2 min×3次;(4)滴加聚合物輔助(polymer helper)試劑1,室溫孵育20 min,PBS沖洗2 min×3次;(5)滴加鼠抗過氧化物酶聚合物(polymer peroxidase-anti-mouse)IgG試劑2,室溫孵育20 min,PBS沖洗2 min×3次;(6)室溫下DAB試劑顯色約5 min;(7)自來水沖洗后復染、脫水透明、封固、記錄、拍照。

    1.2.2EGFR結果判讀(1)陰性表達為細胞質或細胞膜無明顯染色,分值0分;低度陽性(+)表達為視野中>10%的區(qū)域呈現(xiàn)棕色或棕褐色但細胞膜染色不連續(xù),分值1分;中度陽性(++)表達為>10%的區(qū)域呈棕色或棕褐色且細胞膜染色連續(xù),但形態(tài)不完整,分值2分;強陽性 (+++)表達為>10%區(qū)域呈棕色或棕褐色,同時細胞膜染色連續(xù)且形態(tài)完整,分值3分。而細胞輕度棕色或棕褐色染色計1分;中度棕色或棕褐色染色計2分;重度棕色或棕褐色染色計3分。(2)將分值相加,最后EGFR總分值≤2分為陰性,>3分為陽性(見圖1、2)。

    注:PV-9000免疫組化法,DAB顯色,×200;EGFR=表皮生長因子受體

    圖1EGFR陽性表達

    Figure 1Positive expression of EGFR

    注:PV-9000免疫組化法,DAB顯色,×200

    圖2EGFR陰性表達

    Figure 2Negative expression of EGFR

    1.2.3資料收集記錄所有患者的發(fā)病年齡、初潮年齡、初產(chǎn)年齡、絕經(jīng)情況、乳腺癌家族史及腋窩淋巴結轉移情況、腫瘤TNM分期等。

    1.2.4隨訪方式采用入院復查和電話等隨訪方式,將患者術后第1次化療開始定為隨訪起始時間,觀察所有患者治療后復發(fā)轉移情況;發(fā)生復發(fā)轉移為終止事件,隨訪時間為5年,隨訪截止日期為2015-05-30。

    1.3觀察指標包括EGFR陽性表達率、復發(fā)轉移發(fā)生率、5年無瘤生存期。

    1.4統(tǒng)計學方法采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析,計數(shù)資料采用χ2檢驗;EGFR表達與淋巴結轉移情況及TNM分期的相關性采用Spearman秩相關分析;采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線,組間比較采用Log-rank檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2結果

    2.1漢族與維吾爾族TNBC患者基本情況比較漢族與維吾爾族TNBC患者發(fā)病年齡、初潮年齡、初產(chǎn)年齡、絕經(jīng)情況、乳腺癌家族史間差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05,見表1),具有可比性。

    2.2漢族與維吾爾族TNBC患者EGFR表達情況比較漢族TNBC患者EGFR陽性表達率為40.8%(53/130),維吾爾族TNBC患者EGFR陽性表達率為57.4%(31/54),二者間差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.270,P=0.039)。

    2.3漢族、維吾爾族不同淋巴結轉移數(shù)TNBC患者EGFR表達情況比較漢族、維吾爾族不同淋巴結轉移數(shù)TNBC患者EGFR陽性表達率間差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05,見表2)。漢族、維吾爾族TNBC患者EGFR陽性表達率與淋巴結轉移數(shù)均呈正相關(rs值分別為0.370、0.950,P<0.05)。

    2.4漢族、維吾爾族不同TNM分期TNBC患者EGFR表達情況比較漢族、維吾爾族不同TNM分期TNBC患者EGFR陽性表達率間差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05,見表3)。漢族、維吾爾族TNBC患者EGFR陽性表達率與TNM分期均呈正相關(rs值分別為0.380、0.371,P<0.05)。

    2.5漢族與維吾爾族TNBC患者復發(fā)轉移情況比較通過5年的隨訪觀察,漢族TNBC患者復發(fā)轉移發(fā)生率為24.6%(32/130),而維吾爾族TNBC患者復發(fā)轉移發(fā)生率為29.6%(16/54);二者5年無瘤生存曲線間差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.564,P=0.453,見圖3)。

    3討論

    乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展與遺傳、生理及環(huán)境因素都有關。自2000年PEROU等[6]提出TNBC的概念以來,由于其預后差、進展快等特點,很快成為乳腺癌研究關注的焦點。TNBC分子生物學特征復雜,與非TNBC相比,有著不同的臨床病理特征及預后,鑒于目前關于TNBC的臨床報道多限于漢族普通人群,缺乏在不同民族當中的對照研究,且不同種族TNBC分子生物學特性并不相同,本研究對新疆不同民族TNBC患者中的EGFR表達差異做一統(tǒng)計分析,以期更進一步了解影響TNBC的發(fā)生發(fā)展因素。

    表1 漢族與維吾爾族TNBC患者一般情況比較〔n(%)〕

    注:TNBC=三陰性乳腺癌

    表2漢族、維吾爾族不同淋巴結轉移數(shù)TNBC患者EGFR表達情況比較〔n(%)〕

    Table 2Comparison of EGFR expression in Han and Uygur TNBC patients with different number of lymph node metastasis

    淋巴結轉移數(shù)(個)例數(shù)EGFR陽性表達χ2值P值漢族20.490<0.001 05012(24.0) 1~34918(36.7) ≥43123(74.2)ab維吾爾族8.4470.015 0207(35.0) 1~31710(58.8) ≥41714(82.4)a

    注:與0個淋巴結轉移數(shù)比較,aP<0.017;與1~3個淋巴結轉移數(shù)比較,bP<0.017;EGFR=表皮生長因子受體

    表3漢、維吾爾族不同TNM分期TNBC患者EGFR表達情況比較〔n(%)〕

    Table 3Comparison of EGFR expression of Han and Uygur TNBC patients at different TNM stages

    TNM分期例數(shù)EGFR陽性表達χ2值P值漢族27.710<0.001 Ⅰ期478(17.0) Ⅱ期5020(40.0)a Ⅲ期3325(75.8)ab維吾爾族7.4520.024 Ⅰ期134(30.8) Ⅱ期2212(54.5) Ⅲ期1915(78.9)a

    注:與I期比較,aP<0.017;與Ⅱ期比較,bP<0.017

    注:TNBC=三陰性乳腺癌

    圖3漢族與維吾爾族TNBC患者5年無瘤生存曲線比較

    Figure 3Comparison of 5-year disease-free survival curves between Han and Uygur TNBC patients

    3.1EGFR在漢族、維吾爾族TNBC患者中的表達情況EGFR是生長因子受體家族成員之一,EGFR信號通路對細胞的增殖、分化、生長有重要調節(jié)作用,作為原癌基因C-crb編碼的跨膜蛋白,其表達于正常上皮細胞。有研究發(fā)現(xiàn),在腫瘤的進展過程中,EGFR的異常表達和活化,與腫瘤血管生成、侵襲、轉移等一系列生物學行為密切相關[7]。也是與乳腺癌關系最為密切的一類生長因子受體,其受體與相應配體結合導致其酪氨酸磷酸化,進而激活一系列信號轉導通路,如表皮生長因子(EGF)通過激活絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號轉導通路,活化原癌基因c-fos 刺激細胞惡性增殖,引起TNBC細胞的激素非依賴性生長[3],針對其分子靶向治療的代表性藥物是吉非替尼(Gefitinib),主要作用于EGFR胞內(nèi)酪氨酸激酶,與ATP競爭并抑制其功能。有研究認為,TNBC患者中EGFR和p53高表達、磷酸酶與張力蛋白同源基因(PTEN)低表達,三者協(xié)同導致TNBC疾病的發(fā)生發(fā)展[8]。本研究中EGFR陽性表達率為45.7% (84/184);與國外報道的EGFR在TNBC患者中的陽性表達率為45%~70%的結論基本一致[9]。但本研究發(fā)現(xiàn),漢族TNBC患者EGFR陽性表達率明顯低于維吾爾族TNBC患者。分析原因,考慮新疆地區(qū)乳腺癌防治工作較為欠缺,部分偏遠山區(qū)農(nóng)牧患者自我保健及篩查意識落后,其就診時病期已偏晚,此類患者的病期情況(腫瘤組織學分級、腋窩淋巴結轉移及TNM分期)均有可能影響到EGFR在不同民族間的表達情況。

    3.2EGFR陽性表達率與漢族、維吾爾族TNBC患者淋巴結轉移數(shù)、TNM分期的相關性分析本研究發(fā)現(xiàn),漢族TNBC患者5年內(nèi)復發(fā)轉移發(fā)生率為24.8%,而維族TNBC患者復發(fā)轉移發(fā)生率為29.6%,二者5年無瘤生存曲線間無明顯差異。

    EGFR在TNBC患者中過度表達,與淋巴結轉移數(shù)、TNM分期有一定相關性,EGFR過度表達的患者,容易早期復發(fā)、轉移,通常預后較差[10]。本研究顯示,EGFR陽性表達率與漢族、維吾爾族TNBC患者淋巴結轉移數(shù)、TNM分期均呈正相關,EGFR陽性表達隨著淋巴結轉移數(shù)及TNM分期的增高而逐漸升高,說明EGFR在TNBC的進展過程中起到了一定作用。淋巴結轉移和TNM分期是臨床判斷預后的重要依據(jù),而兩者也是制定個體化綜合治療方案的重要參考依據(jù),EGFR與淋巴結轉移情況和TNM分期的相關性也進一步提示,應高度重視不同民族TNBC患者中EGFR高度表達差異,作為TNBC分子靶向治療的突破口及新靶點,其臨床意義重大,應針對不同民族患者中的TNBC生物學特征,采取不同的個體化治療策略,以期進一步改善患者的預后情況。

    綜上所述,本研究結果顯示,漢族與維吾爾族TNBC患者5年無瘤生存曲線間無差異,但EGFR陽性表達率間有差異;同時EGFR陽性表達率與淋巴結轉移數(shù)、TNM分期均呈正相關。有研究表明,EGFR作為判斷TNBC預后的獨立因素,當其在乳腺癌患者中高表達時,往往提示預后較差[11]。本研究發(fā)現(xiàn)EGFR在漢族TNBC患者中的陽性表達率低于維吾爾族TNBC患者,但二者的5年無瘤生存曲線間無差異,因此,本研究認為維吾爾族TNBC患者可能存在與漢族TNBC患者不同的預后影響因素,建議進一步研究影響漢族、維吾爾族TNBC預后的相關因素。由于本研究的樣本量較小,在后續(xù)的研究中將擴大樣本并加以完善,以期進一步探討新疆地區(qū)不同民族TNBC患者的EGFR表達情況。

    作者貢獻:蔣威華負責課題設計與實施、資料收集與整理,撰寫論文、成文并對文章負責;李涌濤、張杰、張明帥、王曉文、張晨光、伊麗娜進行課題實施、評估、資料收集;歐江華進行質量控制及審校。

    本文無利益沖突。

    參考文獻

    [1]MILLIKAN R C,NEWMAN B,TSE C K,et al.Epidemiology of basal-like breast cancer[J].Breast Cancer Res Treat,2008,109(1):123-139.DOI:10.1007/s10549-007-9632-6.

    [2]王志光,林麗珠.疏肝健脾益腎中藥聯(lián)合化療治療肝郁型轉移性三陰性乳腺癌患者療效及安全性研究[J].中國全科醫(yī)學,2015,18(6):620-624.DOI:10.3969/j.issn.1007-9572.2015.06.05.

    WANG Z G,LIN L Z.Clinical efficacy and safety of combined chemotherapy with traditional Chinese medicine for smoothing liver,invigorating spleen and tonifying kidney in the treatment of metastatic triple negative breast cancer with liver stagnation[J].Chinese General Practice,2015,18(6):620-624.DOI:10.3969/j.issn.1007-9572.2015.06.05.

    [3]CIARDIELLO F,TORTORA G.EGFR antagonists in cancer treatment[J].N Engl J Med,2008,358(11):1160-1174.DOI:10.1056/NEJMra0707704.

    [4]NORMANNO N,CAMPIGLIO M,MAIELLO M R,et al. Breast cancer cells with acquired resistance to the EGFR tyrosine kinase inhibitor gefitinib show persistent activation of MAPK signal[J].Breast Cancer Res Treat,2008,112(1):25-33.DOI:10.1007/s10549-007-9830-2.

    [5]KARN T,RDDY A,MULLER V,et al.Control of dataset bias in combined Affymetrix cohorts of triple negative breast cancer[J].Genom Data,2014,23(2):354-356.DOI:10.1016/j.gdata.2014.09.014.

    [6]PEROU C M,SORLIE T,EISEN M B,et al.Molecular portraits of human breast tumours[J].Nature,2000,406(6797):747-752.DOI:10.1038/35021093.

    [7]駱廣濤,王本忠.乳腺癌中EZH2與miRNA調控關系的研究進展[J].安徽醫(yī)學,2015,36(8):1034-1036.DOI:10.3969/j.issn.1000-0399.2015.08.040.

    [8]LI X,WANG Q,FU L,et al.Expression of PTEN,p53 and EGFR in the molecular subtypes of breast carcinoma and the correlation among them[J].Zhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban,2015,40(9):973-978.DOI:10.11817/j.issn.1672-7347.2015.09.005.

    [9]NIELSEN T O,HSU F D,JENSEN K,et al.Immunohistochemical and clinical characterization of the basal-like subtype of invasive breast carcinoma[J].Clin Cancer Res,2004,10 (16):5367-5374.DOI:10.1158/1078-0432.CCR-04-0220.

    [10]RAKHA E A,EI-SAYED M E,GREEN A R,et al.Prognostic markers in triple-negative breast cancer[J].Cancer,2007,109(1):25-32.DOI:10.1002/cncr.22381.

    [11]SOLIE T,TIBSHIRANI R,PARKER J,et al.Repeated observation of breast tumor subtypes in independent gene expression data sets[J].Proc Natl Acad,2003,100(14):8418-8423.DOI:10.1073/pnas.0932692100.

    (本文編輯:崔沙沙)

    Differences of the Expression of Epidermal Growth Factor Receptor Among Patients With Triple Negative Breast Cancer of Different Ethnic Groups

    JIANGWei-hua,LIYong-tao,ZHANGJie,etal.

    TheSecondWardofBreastSurgeryDepartment,theAffiliatedTumorHospitalofXinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China

    【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression of epidermal growth factor receptor (EGFR) in patients with triple negative breast cancer (TNBC) of different ethnic groups and its relation with prognosis.MethodsFrom May 2008 to May 2010,184 TNBC patients who were admitted into the Affiliated Tumor Hospital of Xinjiang Medical University were enrolled,including 130 Han patients and 54 Uygur patients.PV-9000 immunohistochemistry method was used to determine the expression of EGFR,and Spearman correlation analysis was performed to explore the correlation between EGFR expression and lymphatic metastasis as well as TNM staging.Kaplan-Meier method was employed to draw 5-year tumor-free survival curves,and intergroup comparison was performed by Log-rank test.ResultsThe positive expression rate of EGFR was 40.8%(53/130) for Han TNBC patients and 57.4%(31/54)for Uygur TNBC patients,and there was significant difference between them (χ2=4.270,P=0.039).There was positive correlation between the positive rate of EGFR and the number of lymph node metastasis (rs values were 0.370 and 0.950 respectively,P<0.05).There was positive correlation between the positive rate of EGFR and TNM staging (rs values were 0.380 and 0.371 respectively,P<0.05).By 5-year follow-up observation,the incidence of recurrence and metastasis of Han TNBC patients was 24.6%(32/130),and that of TNBC Uygur patients was 29.6%(16/54);the two groups were not significantly different in 5-year disease-free survival curve (χ2=0.564,P=0.453).ConclusionThe positive expression rate of EGFR which is unfavorable to the prognosis of tumor is lower among Han TNBC patients than Uygur TNBC patients,but they have no marked difference in the 5-year disease-free survival curve,which suggest that the influencing factors for the prognosis of Uygur TNBC patients may be different from those of Han TNBC patients.We suggest that the relevant influencing factors for the prognosis of Han and Uygur patients should be further investigated.

    【Key words】Breast neoplasms;Receptor,epidermal growth factor;Han nationality;Uygur nationality

    基金項目:國家自然科學基金資助項目(81260390)——中度風險易感基因CHEK2、PALB2、CDH1 篩查在多民族地區(qū)BRCA1/2 突變陰性遺傳性乳腺癌中的作用

    通信作者:歐江華,830011新疆烏魯木齊市,新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院乳腺外科二病區(qū);E-mail:oujianghua@hotmail.com

    【中圖分類號】R 737.9

    【文獻標識碼】A

    DOI:10.3969/j.issn.1007-9572.2016.19.015

    (收稿日期:2016-03-18;修回日期:2016-05-09)

    猜你喜歡
    乳腺腫瘤維吾爾族漢族
    國清榮
    當代作家(2023年6期)2023-07-20 18:33:08
    維吾爾族手藝人
    Study on Local Financial Supervision Right and Regulation Countermeasures
    復合麻醉在乳腺腫瘤術中的應用效果分析研究
    基于遺傳算法—BP神經(jīng)網(wǎng)絡的乳腺腫瘤輔助診斷模型
    軟件導刊(2016年11期)2016-12-22 21:53:59
    醫(yī)護一體化護理模式在乳腺腫瘤科的應用及效果
    改成漢族的滿族人
    超聲與磁共振成像對乳腺癌新輔助化療療效評價的對比分析
    國家視野中的河湟漢族
    Ad36感染對維吾爾族肥胖患者progranulin表達的調節(jié)作用
    色94色欧美一区二区| 亚洲黑人精品在线| 18禁国产床啪视频网站| 久久av网站| 捣出白浆h1v1| 热99久久久久精品小说推荐| 美女午夜性视频免费| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产日韩欧美视频二区| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 各种免费的搞黄视频| xxx大片免费视频| 99热国产这里只有精品6| 精品人妻1区二区| 久久精品久久精品一区二区三区| 人人澡人人妻人| www.熟女人妻精品国产| 青春草亚洲视频在线观看| 2018国产大陆天天弄谢| 在线av久久热| 亚洲av男天堂| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 午夜激情久久久久久久| 欧美少妇被猛烈插入视频| 欧美国产精品一级二级三级| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产男人的电影天堂91| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲熟女精品中文字幕| 一区二区三区精品91| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲欧美精品自产自拍| 黄频高清免费视频| 香蕉丝袜av| 黄频高清免费视频| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 色网站视频免费| 在线看a的网站| a级毛片在线看网站| 91国产中文字幕| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 最新的欧美精品一区二区| 青草久久国产| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 欧美日韩视频精品一区| 欧美日韩一级在线毛片| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 国产在线视频一区二区| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 久久久久久久久免费视频了| 久久综合国产亚洲精品| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲 欧美一区二区三区| 国产免费视频播放在线视频| 热re99久久国产66热| 91九色精品人成在线观看| 2021少妇久久久久久久久久久| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 97精品久久久久久久久久精品| 一级黄片播放器| 飞空精品影院首页| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 天堂俺去俺来也www色官网| 国产视频一区二区在线看| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲精品国产区一区二| 悠悠久久av| 久久人人97超碰香蕉20202| 日本91视频免费播放| 欧美97在线视频| 久久久精品免费免费高清| 啦啦啦 在线观看视频| 久久精品人人爽人人爽视色| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 久久国产精品大桥未久av| 欧美黄色片欧美黄色片| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 亚洲精品自拍成人| 国产精品国产三级专区第一集| 日本色播在线视频| 亚洲天堂av无毛| 国产成人免费观看mmmm| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 久久热在线av| 91精品伊人久久大香线蕉| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 精品亚洲成国产av| 久久狼人影院| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产精品.久久久| av有码第一页| 99精国产麻豆久久婷婷| 日韩一本色道免费dvd| 国产精品 国内视频| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 亚洲天堂av无毛| 爱豆传媒免费全集在线观看| 制服人妻中文乱码| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲国产欧美网| 下体分泌物呈黄色| 欧美日韩亚洲高清精品| 丁香六月天网| kizo精华| 大香蕉久久网| 精品免费久久久久久久清纯 | 精品国产乱码久久久久久小说| 爱豆传媒免费全集在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 午夜激情久久久久久久| 伦理电影免费视频| 亚洲,一卡二卡三卡| 亚洲一区中文字幕在线| 老司机在亚洲福利影院| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 美女午夜性视频免费| 久久久久精品人妻al黑| 精品免费久久久久久久清纯 | 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 多毛熟女@视频| 午夜91福利影院| 久久国产精品影院| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 久久久久国产精品人妻一区二区| 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲图色成人| 日韩欧美一区视频在线观看| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲av电影在线进入| 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲av成人精品一二三区| 久久这里只有精品19| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 超碰97精品在线观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | www.999成人在线观看| 妹子高潮喷水视频| 热re99久久精品国产66热6| 老熟女久久久| 蜜桃在线观看..| 人体艺术视频欧美日本| 成人亚洲欧美一区二区av| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产成人精品无人区| 成人黄色视频免费在线看| 首页视频小说图片口味搜索 | 久久久精品区二区三区| 欧美精品亚洲一区二区| 久久久精品区二区三区| 自线自在国产av| 亚洲三区欧美一区| 亚洲av综合色区一区| 9热在线视频观看99| 欧美 日韩 精品 国产| av欧美777| 亚洲成色77777| 免费人妻精品一区二区三区视频| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 欧美亚洲日本最大视频资源| 欧美精品高潮呻吟av久久| 久久久国产精品麻豆| 久久99精品国语久久久| av片东京热男人的天堂| 黄色怎么调成土黄色| 久久国产精品影院| h视频一区二区三区| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 高清av免费在线| 99九九在线精品视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 赤兔流量卡办理| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 免费在线观看黄色视频的| 国产人伦9x9x在线观看| 一本久久精品| 丝袜在线中文字幕| 宅男免费午夜| 日本a在线网址| 免费观看a级毛片全部| xxx大片免费视频| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 美国免费a级毛片| 999精品在线视频| 亚洲第一青青草原| 精品福利永久在线观看| 十分钟在线观看高清视频www| av天堂久久9| 9热在线视频观看99| 亚洲 国产 在线| 欧美黑人欧美精品刺激| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 性少妇av在线| 99国产精品99久久久久| 97人妻天天添夜夜摸| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产一区二区激情短视频 | 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲黑人精品在线| av片东京热男人的天堂| 国产免费一区二区三区四区乱码| av天堂在线播放| 亚洲七黄色美女视频| 中文字幕精品免费在线观看视频| 国产高清视频在线播放一区 | 国产精品 欧美亚洲| 国产精品免费视频内射| 久久久精品免费免费高清| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产97色在线日韩免费| 国产成人啪精品午夜网站| 国产精品一二三区在线看| 免费在线观看完整版高清| 日韩大码丰满熟妇| 一区在线观看完整版| 亚洲 欧美一区二区三区| 欧美成人午夜精品| 少妇被粗大的猛进出69影院| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲国产av新网站| 大片免费播放器 马上看| 99久久人妻综合| 国产精品av久久久久免费| 亚洲美女黄色视频免费看| 捣出白浆h1v1| 亚洲av欧美aⅴ国产| 爱豆传媒免费全集在线观看| 热re99久久国产66热| 婷婷成人精品国产| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲国产欧美一区二区综合| 成人三级做爰电影| 在现免费观看毛片| av在线老鸭窝| 午夜福利免费观看在线| av福利片在线| 日日夜夜操网爽| 18禁观看日本| 人妻一区二区av| 国产熟女午夜一区二区三区| 国精品久久久久久国模美| 最新在线观看一区二区三区 | 99国产精品一区二区蜜桃av | 日日爽夜夜爽网站| 亚洲精品国产av蜜桃| videosex国产| 后天国语完整版免费观看| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 国产熟女欧美一区二区| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 青青草视频在线视频观看| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲精品一二三| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 女人精品久久久久毛片| 亚洲成人手机| 18禁观看日本| 性高湖久久久久久久久免费观看| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲国产精品一区三区| 国产精品免费视频内射| 精品视频人人做人人爽| 99国产精品一区二区蜜桃av | 亚洲成国产人片在线观看| 9191精品国产免费久久| 乱人伦中国视频| 国产高清不卡午夜福利| 女人精品久久久久毛片| 欧美乱码精品一区二区三区| 丝瓜视频免费看黄片| 天天添夜夜摸| 国产成人欧美在线观看 | 日韩中文字幕欧美一区二区 | 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 男人爽女人下面视频在线观看| 午夜福利视频在线观看免费| 亚洲九九香蕉| 成人国语在线视频| 丝袜美足系列| 日本91视频免费播放| 亚洲中文av在线| 国产一区二区在线观看av| 91九色精品人成在线观看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产精品人妻久久久影院| 欧美人与性动交α欧美软件| av在线老鸭窝| 国产熟女欧美一区二区| 日本一区二区免费在线视频| 精品国产国语对白av| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 夫妻午夜视频| 黄色 视频免费看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 又大又黄又爽视频免费| 中文字幕高清在线视频| 国产日韩欧美亚洲二区| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲免费av在线视频| 欧美性长视频在线观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 又大又爽又粗| 久久青草综合色| videos熟女内射| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 777米奇影视久久| 欧美日韩精品网址| 成人午夜精彩视频在线观看| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲情色 制服丝袜| 欧美成人精品欧美一级黄| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 日韩制服骚丝袜av| 一本大道久久a久久精品| 国产精品久久久av美女十八| 国产成人精品久久二区二区91| 两个人看的免费小视频| 桃花免费在线播放| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 三上悠亚av全集在线观看| 老司机影院毛片| 亚洲免费av在线视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国产黄频视频在线观看| 国产福利在线免费观看视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲精品中文字幕在线视频| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲伊人久久精品综合| 满18在线观看网站| 两人在一起打扑克的视频| 国产精品一区二区在线不卡| 午夜精品国产一区二区电影| 波野结衣二区三区在线| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 在现免费观看毛片| 一区二区日韩欧美中文字幕| 后天国语完整版免费观看| 午夜日韩欧美国产| 免费少妇av软件| 免费高清在线观看视频在线观看| xxxhd国产人妻xxx| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 欧美激情高清一区二区三区| 男女高潮啪啪啪动态图| 欧美成人午夜精品| 啦啦啦 在线观看视频| 成年女人毛片免费观看观看9 | 日本午夜av视频| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲成人国产一区在线观看 | 好男人电影高清在线观看| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲国产欧美在线一区| 国产精品99久久99久久久不卡| 尾随美女入室| 精品久久蜜臀av无| 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲国产精品一区二区三区在线| av天堂久久9| 国产深夜福利视频在线观看| 丝袜美腿诱惑在线| 久久热在线av| 97在线人人人人妻| 日韩大码丰满熟妇| 久久精品国产综合久久久| 人妻 亚洲 视频| 观看av在线不卡| 国产精品久久久久久精品电影小说| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产精品久久久久成人av| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲成人国产一区在线观看 | 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产又爽黄色视频| 欧美性长视频在线观看| 亚洲 国产 在线| 亚洲国产精品999| 国产成人精品在线电影| 国产精品一国产av| 精品国产一区二区久久| 久久精品久久精品一区二区三区| 久久精品久久久久久久性| 国产不卡av网站在线观看| 丝袜美腿诱惑在线| 色综合欧美亚洲国产小说| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产真人三级小视频在线观看| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 女人精品久久久久毛片| 国产精品熟女久久久久浪| 成人三级做爰电影| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产一级毛片在线| 国产人伦9x9x在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 精品第一国产精品| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 在线观看人妻少妇| 男女下面插进去视频免费观看| 国产片内射在线| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久久精品免费免费高清| 国产成人精品无人区| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 秋霞在线观看毛片| 精品少妇黑人巨大在线播放| 美女主播在线视频| 一级毛片我不卡| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 婷婷色麻豆天堂久久| 高潮久久久久久久久久久不卡| 成年av动漫网址| 天天添夜夜摸| 亚洲综合色网址| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 久久av网站| 午夜老司机福利片| 9热在线视频观看99| 国产不卡av网站在线观看| bbb黄色大片| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 午夜免费男女啪啪视频观看| 超色免费av| 亚洲欧美一区二区三区久久| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 一级,二级,三级黄色视频| 免费在线观看日本一区| 丝袜喷水一区| 高清视频免费观看一区二区| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲伊人久久精品综合| av不卡在线播放| 赤兔流量卡办理| 免费在线观看黄色视频的| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久精品国产a三级三级三级| 啦啦啦 在线观看视频| 男女免费视频国产| av一本久久久久| 好男人电影高清在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av | 久久九九热精品免费| 国产成人免费无遮挡视频| 波多野结衣av一区二区av| 母亲3免费完整高清在线观看| 青青草视频在线视频观看| 国产高清视频在线播放一区 | 在线天堂中文资源库| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产片特级美女逼逼视频| kizo精华| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 美国免费a级毛片| 精品视频人人做人人爽| 又大又爽又粗| 男男h啪啪无遮挡| 精品一品国产午夜福利视频| 男人操女人黄网站| 欧美性长视频在线观看| 人妻一区二区av| 99热网站在线观看| 97精品久久久久久久久久精品| 男女床上黄色一级片免费看| 久9热在线精品视频| 精品久久久精品久久久| 在线观看免费视频网站a站| 黄色片一级片一级黄色片| 欧美国产精品va在线观看不卡| 精品人妻在线不人妻| 精品国产一区二区久久| 麻豆乱淫一区二区| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产视频首页在线观看| 亚洲伊人色综图| 一级片免费观看大全| 日本av手机在线免费观看| 涩涩av久久男人的天堂| 久久99精品国语久久久| 一区二区三区乱码不卡18| 国产欧美日韩一区二区三 | 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产国语露脸激情在线看| 一级a爱视频在线免费观看| 九草在线视频观看| 一级片'在线观看视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产精品av久久久久免费| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 青春草视频在线免费观看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 国产视频一区二区在线看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 男人操女人黄网站| 老司机深夜福利视频在线观看 | 久久毛片免费看一区二区三区| 最黄视频免费看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 一二三四在线观看免费中文在| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 欧美黄色淫秽网站| 性色av一级| 国产精品一二三区在线看| 成在线人永久免费视频| 人人澡人人妻人| tube8黄色片| 亚洲天堂av无毛| 免费日韩欧美在线观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产亚洲欧美精品永久| 好男人电影高清在线观看| 只有这里有精品99| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 一级,二级,三级黄色视频| av国产久精品久网站免费入址| 午夜免费观看性视频| 99久久精品国产亚洲精品| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 9191精品国产免费久久| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产成人欧美在线观看 | 老司机亚洲免费影院| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产高清国产精品国产三级| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产亚洲欧美在线一区二区| 成人影院久久| 丝袜喷水一区| 欧美日韩一级在线毛片| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 欧美日韩综合久久久久久| 天堂8中文在线网| 欧美黑人精品巨大| 国产97色在线日韩免费| 91字幕亚洲| 超色免费av| 九色亚洲精品在线播放| 久久中文字幕一级| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 久久久精品免费免费高清| 国产精品亚洲av一区麻豆| 飞空精品影院首页| 又大又爽又粗| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 满18在线观看网站| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲第一青青草原| 国产激情久久老熟女| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产精品一国产av| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 香蕉丝袜av| 在线观看免费高清a一片| 午夜福利,免费看| 2018国产大陆天天弄谢| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲av成人精品一二三区| 妹子高潮喷水视频| 国产成人精品久久二区二区91| 美女福利国产在线| 91精品三级在线观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲国产av新网站| 丝袜在线中文字幕| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 欧美日韩av久久| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 男男h啪啪无遮挡| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 久久ye,这里只有精品| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产精品三级大全| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 日韩制服骚丝袜av| 韩国精品一区二区三区| 欧美精品一区二区免费开放| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 欧美xxⅹ黑人| 美国免费a级毛片| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 亚洲精品日韩在线中文字幕| a级毛片黄视频| 在线看a的网站| 老司机亚洲免费影院| 亚洲欧美精品自产自拍| 无限看片的www在线观看| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产成人精品久久二区二区免费| 久久精品人人爽人人爽视色| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲第一青青草原| 久久影院123| 国产伦理片在线播放av一区|