信號(hào)肽
- 信號(hào)肽優(yōu)化提高葡萄糖氧化酶在畢赤酵母中的表達(dá)量
是釀酒酵母α 信號(hào)肽（α mature factor）[17]。分泌信號(hào)由2 部分組成，一部分是19 個(gè)氨基酸的N-末端信號(hào)序列，指導(dǎo)易位進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（endoplasmic reticulum，ER）；另一部分是66 個(gè)氨基酸的蛋白區(qū)，介導(dǎo)受體依賴性包裝進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)衍生的COP Ⅱ轉(zhuǎn)運(yùn)囊泡[18-19]，重組蛋白通過(guò)ER 腔中的Kex 2 蛋白酶去除α 因子信號(hào)序列。α 因子信號(hào)肽在畢赤酵母中能有效分泌多種異源蛋白質(zhì)，但不同蛋白的表達(dá)水平差異較大，因此，人們
- 信號(hào)肽篩選和核糖體結(jié)合位點(diǎn)優(yōu)化的組合策略提高角蛋白酶在枯草芽孢桿菌中的胞外表達(dá)
問(wèn)題之一。通過(guò)信號(hào)肽篩選增強(qiáng)分泌能力是提升異源蛋白胞外表達(dá)量的常用策略。WATANABE等[10]通過(guò)對(duì)谷氨酸棒桿菌CorynebacteriumglutamicumR全基因組系統(tǒng)篩選，得到405條信號(hào)肽序列，其中11條信號(hào)肽能夠表達(dá)嗜熱脂肪地?zé)嵫挎邨U菌Geobacillusstearothermophilus來(lái)源的α-淀粉酶，表達(dá)量相比常見(jiàn)的棒狀細(xì)菌分泌蛋白PS2增加了50～150倍不等；GUO等[11]在解淀粉芽孢桿Bacillusamylolique
食品與發(fā)酵工業(yè) 2023年4期2023-03-07
- 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌非特異性核酸酶培養(yǎng)條件優(yōu)化
想宿主[7]。信號(hào)肽(signal peptide,SP)作為一種重要的蛋白分泌調(diào)控元件，是一段存在于前體蛋白N-端的短肽鏈，其功能在于引導(dǎo)和調(diào)節(jié)前體蛋白的折疊，在蛋白轉(zhuǎn)移和分泌過(guò)程中發(fā)揮極其重要的作用[8]。B.subtilis缺乏外膜結(jié)構(gòu)，分泌蛋白會(huì)轉(zhuǎn)運(yùn)到胞外培養(yǎng)基中，保證分泌蛋白的正確定位和轉(zhuǎn)移則由信號(hào)肽來(lái)完成[9]。鑒于Nucyep在E.coli表達(dá)系統(tǒng)中重組表達(dá)后提取復(fù)雜的問(wèn)題，本研究擬采用B.subtilis表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行Nucyep的分泌表達(dá)，
生物學(xué)雜志 2022年6期2022-12-18
- 杜邦嗜熱菌脂肪酶在黑曲霉中的異源表達(dá)
察TDL2自帶信號(hào)肽和pCAMBIA0380質(zhì)粒信號(hào)肽對(duì)脂肪酶TDL2表達(dá)的影響，為其應(yīng)用奠定基礎(chǔ).1 材料與方法1.1 材料1.1.1 菌種和質(zhì)粒 以A.nigerCICC 2213作為黑曲霉表達(dá)宿主菌，購(gòu)自中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，E.coliDH5α用于質(zhì)粒的構(gòu)建，攜帶一個(gè)輔助 Ti 質(zhì)粒的根瘤農(nóng)桿菌AgrobacteriumtumefaciensAGL-1用于介導(dǎo)黑曲霉轉(zhuǎn)化；黑曲霉表達(dá)實(shí)驗(yàn)所用質(zhì)粒為pCAMBIA0380[8],含有黑曲霉的β
- 信號(hào)肽篩選優(yōu)化提高耐熱α-環(huán)糊精酶在枯草芽胞桿菌中的表達(dá)
分泌表達(dá)依賴于信號(hào)肽的引導(dǎo)，主要有兩個(gè)途徑：Sec途徑和Tat途徑。對(duì)于同一種外源蛋白質(zhì)，不同信號(hào)肽的引導(dǎo)分泌效率相差較大，兩者之間存在適配性[12]?？莶菅堪麠U菌信號(hào)肽由N端正電荷區(qū)（1～5個(gè)帶正電氨基酸）、H段疏水區(qū)（7～15疏水性氨基酸）及C端信號(hào)肽酶識(shí)別區(qū)（3～7個(gè)親水性氨基酸）組成。研究表明信號(hào)肽N端正電荷數(shù)、H端疏水性會(huì)影響目的蛋白在枯草芽胞桿菌中的分泌途徑（Sec、Tat途徑），從而影響目的蛋白的分泌效率。因此針對(duì)特定的蛋白質(zhì)需要選擇合適的信
福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2022年3期2022-05-24
- 樹(shù)生黃單胞桿菌脂蛋白生物信息學(xué)分析
用.具有脂蛋白信號(hào)肽的蛋白作為分泌蛋白中的一類(lèi)，參與錨定蛋白的正確定位、修飾和轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程，從而對(duì)維持細(xì)胞膜的穩(wěn)定性、細(xì)胞分裂、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和營(yíng)養(yǎng)獲取等生理功能具有非常重要的作用[6].原核生物脂蛋白最早在大腸桿菌(Escherichiacoli)中被發(fā)現(xiàn)[7].研究發(fā)現(xiàn)，脂蛋白前體在胞質(zhì)中合成，可以通過(guò)Sec分泌途徑以未折疊形式穿過(guò)胞質(zhì)膜，也可通過(guò)雙精氨酸轉(zhuǎn)位TAT途徑或SecA突變體以折疊形式穿過(guò)胞質(zhì)膜[8].前人對(duì)黃單胞菌中脂蛋白的研究主要集中在相關(guān)蛋白的表
- 中華絨螯蟹微孢子蟲(chóng)全基因組分泌蛋白的預(yù)測(cè)分析
對(duì)蛋白序列進(jìn)行信號(hào)肽預(yù)測(cè)，篩去其中N端無(wú)信號(hào)肽的蛋白質(zhì)[11-12]；MitoProt程序預(yù)測(cè)線粒體蛋白[15]；TargetP程序?qū)Ψ蔷€粒體蛋白進(jìn)行亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)，篩選定位于胞外的分泌型蛋白[16]；Kohgpi程序去除可能具有GPI錨定修飾的蛋白質(zhì)[17]，得到中華絨螯蟹微孢子蟲(chóng)的分泌蛋白集合。1.3 分泌蛋白序列特征的分析根據(jù)分泌蛋白的信號(hào)肽預(yù)測(cè)結(jié)果，統(tǒng)計(jì)信號(hào)肽以及完整分泌蛋白序列的長(zhǎng)度及氨基酸組成，提取信號(hào)肽剪切位點(diǎn)前后各3個(gè)氨基酸殘基，通過(guò)Web
水產(chǎn)科學(xué) 2022年2期2022-03-20
- 基于信號(hào)肽的β-葡萄糖苷酶的分泌表達(dá)
宿主細(xì)胞，使用信號(hào)肽OprI、OsmY、PelB、OmpA將納豆芽孢桿菌的β-葡萄糖苷酶基因bglH錨定到大腸桿菌BL21（DE3）外膜和周質(zhì)上。然后使用啟動(dòng)子T7、Trc、LacUV5誘導(dǎo)表達(dá)Ⅱ型分泌途徑的SecB伴侶蛋白，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)全細(xì)胞催化糖苷型底物水解。本研究通過(guò)表征不同細(xì)胞定位的β-葡萄糖苷酶活性，發(fā)現(xiàn)信號(hào)肽PelB分泌效果明顯高于其他信號(hào)肽，LacUV5啟動(dòng)子與SecB伴侶蛋白組合表達(dá)bglH的重組菌株全細(xì)胞催化酶活性最高。此外，添加甘氨酸至質(zhì)量
江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2022年1期2022-03-16
- 蛋白質(zhì)分選的共翻譯轉(zhuǎn)運(yùn)途徑*
成一小段后，在信號(hào)肽的指導(dǎo)下邊合成邊轉(zhuǎn)運(yùn)到粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，經(jīng)過(guò)加工最終分選到溶酶體、液泡等細(xì)胞結(jié)構(gòu)，有的分泌至胞外。人教版普通高中生物學(xué)必修1（2019 版）進(jìn)一步明確了分泌蛋白的起始合成是在游離的核糖體上，通過(guò)共翻譯轉(zhuǎn)運(yùn)途徑分泌到細(xì)胞外，糾正了舊教材中的“最初是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的核糖體中由氨基酸合成肽鏈”。本文將詳細(xì)闡述該途徑。1 共翻譯轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的探究史20世紀(jì)60年代，喬治·帕拉德（George Palade）發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)中的游離核糖體產(chǎn)生非分泌蛋白，而附著在內(nèi)質(zhì)
生物學(xué)通報(bào) 2021年1期2021-11-01
- 基于信號(hào)肽策略提高外源蛋白在枯草芽孢桿菌中的表達(dá)
源蛋白N末端的信號(hào)肽來(lái)完成，它可以正確的將外源蛋白導(dǎo)向分泌裝置，在蛋白分泌過(guò)程中起著不可替代的作用［2，4］。目前，只有少數(shù)外源蛋白在枯草芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)中實(shí)現(xiàn)了高效表達(dá)，但還有大多數(shù)外源蛋白的分泌和表達(dá)效果不理想。其中枯草芽孢桿菌信號(hào)肽的氨基酸組成、類(lèi)型和分泌途徑均會(huì)對(duì)外源蛋白分泌的效率產(chǎn)生影響，合適的信號(hào)肽是保證外源蛋白在枯草芽孢桿菌高效表達(dá)的關(guān)鍵因素之一?；?span id="j5i0abt0b" class="hl">信號(hào)肽的策略提高外源蛋白的分泌量是切實(shí)可行的，并且往往會(huì)取得意想不到的效果［5-6］。雖然科
生物技術(shù)通報(bào) 2021年6期2021-08-11
- 對(duì)Deinococcus actinosclerus RM菌株分泌蛋白的預(yù)測(cè)
編碼序列的N端信號(hào)肽預(yù)測(cè)分析、篩選，通過(guò)在線程序：SignalP-4.1完成；蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)分析通過(guò)網(wǎng)站：http：//www.cbs.dtu.dk/services/TargetP-1.1/index.php完成.蛋白質(zhì)的跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)分析通過(guò)網(wǎng)站：http：//www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/完成.2 結(jié)果與分析2.1 RM菌株的基因組測(cè)序結(jié)果通過(guò)SPAdes對(duì)二代測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行拼裝后，獲得RM菌株測(cè)序全長(zhǎng)為4 013
韶關(guān)學(xué)院學(xué)報(bào) 2021年6期2021-07-23
- 基于全基因組序列的黃單胞菌分泌蛋白質(zhì)預(yù)測(cè)及其特征分析
菌;全基因組;信號(hào)肽;生物信息學(xué)中圖分類(lèi)號(hào)： S435.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 1000-4440（2021）01-0053-07Prediction and characteristic analysis of Xanthomonas campestris secretory protein based on whole genome sequenceQIN Yue1， ZHU You-peng1， HAN Chang-zhi1，2（1.Col
江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2021年1期2021-03-25
- 枯草芽孢桿菌信號(hào)肽依賴分泌表達(dá)系統(tǒng)研究進(jìn)展
枯草芽孢桿菌信號(hào)肽依賴分泌胞外蛋白途徑在外源基因的克隆表達(dá)過(guò)程中，重組蛋白一般以3種形式表達(dá)，包括細(xì)胞外的分泌表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)的可溶性表達(dá)和在細(xì)胞內(nèi)形成不溶性的胞涵體。枯草芽孢桿菌為格蘭氏陽(yáng)性菌，只有一層細(xì)胞膜，蛋白可直接分泌至胞外而不形成胞涵體，其表達(dá)產(chǎn)物多數(shù)具有天然構(gòu)象和生物活性，產(chǎn)物較易純化，極大地方便了外源蛋白的下游加工和酶活測(cè)定，經(jīng)枯草芽孢桿菌分泌的很多外源蛋白質(zhì)已經(jīng)應(yīng)用于益生菌、酶制劑等工業(yè)生產(chǎn)領(lǐng)域[10]，占有很大的市場(chǎng)份額。根據(jù)SubtiLi
隴東學(xué)院學(xué)報(bào) 2021年2期2021-03-11
- 可可毛色二孢全基因組分泌蛋白的預(yù)測(cè)及分析
因組序列，利用信號(hào)肽預(yù)測(cè)軟件SignalP v5.0、跨膜結(jié)構(gòu)分析軟件TMHMM v2.0、細(xì)胞器定位分析軟件ProtComp v9.0、GPI錨定預(yù)測(cè)軟件big-PI Fungal Predictor和亞細(xì)胞器定位分析軟件TargetP v2.0生物信息學(xué)軟件對(duì)該菌中的典型分泌蛋白進(jìn)行篩選。對(duì)分泌蛋白N端信號(hào)肽的長(zhǎng)度、氨基酸使用頻率及其切割位點(diǎn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。依據(jù)蛋白序列的同源性，應(yīng)用BLASTP程序?qū)Ψ置诮M蛋白進(jìn)行功能注釋分析，預(yù)測(cè)其生物學(xué)功能。采用蔗糖
中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué) 2020年24期2021-01-04
- 白假絲酵母菌(Candida albicans)WO-1分泌蛋白質(zhì)組的生物信息學(xué)分析
的N端是否存在信號(hào)肽和酶切位點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)分析;TMHMM server v 2.0軟件(http:∥www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/)和 Phobius軟件(http:∥phobius.sbc.su.se/)預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)序列跨膜區(qū)的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)和數(shù)量;TargetP 1.1軟件(http:∥www.cbs.dtu.dk/services/TargetP/)預(yù)測(cè)靶標(biāo)肽段在亞細(xì)胞器的定位,確定是否為穿膜信號(hào)肽;Big-PI Fungal P
- 蝦肝腸胞蟲(chóng)全基因組分泌蛋白的預(yù)測(cè)分析*
LS)，蛋白質(zhì)信號(hào)肽預(yù)測(cè)軟件SignalP-4.0(Petersen et al, 2011)，蛋白質(zhì)GPI 錨定位點(diǎn)預(yù)測(cè)軟件Kohgpi-1.5(Fankhauser et al, 2005)，蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)軟件TargetP-1.1(Emanuelsson et al, 2000)和WoLF PSORT(Horton et al,2007)，真核生物分泌蛋白預(yù)測(cè)程序 EuSecPred2.0(https://silkpathdb.swu.edu.
漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展 2020年6期2020-11-03
- 信號(hào)肽序列對(duì)A型流感病毒H1N1 HA蛋白表達(dá)的影響
胞質(zhì)中合成的，信號(hào)肽(signal peptide, SP)是位于新合成蛋白質(zhì)N端的一段的序列[3]，可以指導(dǎo)蛋白質(zhì)在胞質(zhì)的正確轉(zhuǎn)移。在信號(hào)肽的引導(dǎo)下，新生蛋白質(zhì)向內(nèi)質(zhì)網(wǎng)轉(zhuǎn)移，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)進(jìn)入合適的位置后，信號(hào)肽序列被切除[4]。然后蛋白質(zhì)被接著加工轉(zhuǎn)移，最終到達(dá)合適的場(chǎng)所發(fā)揮功能。HA是一個(gè)跨膜蛋白，在其N(xiāo)端含有信號(hào)肽序列[5-6]。本研究在含F(xiàn)lag標(biāo)簽真核載體N端和C端分別引入H1N1分離株(A/Puerto Rico/8/34)的 HA 序列，構(gòu)建帶有
畜牧與獸醫(yī) 2020年8期2020-08-12
- 不同信號(hào)肽對(duì)人鼠嵌合CMV-IgM分泌表達(dá)的影響
白質(zhì)前體N端的信號(hào)肽與信號(hào)肽識(shí)別因子結(jié)合，在信號(hào)肽識(shí)別因子的幫助下進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)進(jìn)行下一步的修飾，合適的信號(hào)肽有助于重組蛋白表達(dá)量的提高[7-10]。本研究在已報(bào)道的基礎(chǔ)上[11-14]，通過(guò)RLM-RACE技術(shù)釣取雜交瘤細(xì)胞基因序列，與人源Fc段進(jìn)行拼接，構(gòu)建人鼠嵌合CMV-IgM表達(dá)載體，并通過(guò)PCR方法將5種不同的分泌型信號(hào)肽 (SigA–SigE) 代替 CMV-IgM 自身信號(hào)肽(SigF)，利用CHO作為宿主細(xì)胞進(jìn)行體外表達(dá)。對(duì)純化后的 CMV-I
生物工程學(xué)報(bào) 2020年6期2020-07-31
- 16種微生物蛋白酶的生物信息學(xué)分析
、腸桿菌屬具有信號(hào)肽，其余蛋白酶氨基酸序列不具有信號(hào)肽的特點(diǎn)。可以推測(cè)出蛋白酶為非分泌性蛋白;只有綠膿桿菌和豬鏈球菌有跨膜結(jié)構(gòu)，剩下其余幾種微生物均沒(méi)有跨膜結(jié)構(gòu)。具有2個(gè)蛋白功能域，分別為Peptidase S8 familyi、Fn3_5like domain。關(guān)鍵詞：微生物;蛋白酶;序列分析;生物信息學(xué);理化性質(zhì);蛋白結(jié)構(gòu);信號(hào)肽中圖分類(lèi)號(hào)： S188+.3文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2020）04-0065-08收稿日期：2018-
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2020年4期2020-04-16
- 遺傳算法背景下人工信號(hào)肽優(yōu)化設(shè)計(jì)探討
洋摘要：為提高信號(hào)肽以及識(shí)別信號(hào)肽拼接精度，在結(jié)構(gòu)融合度特征的基礎(chǔ)上，構(gòu)建氨基酸綜合替代矩陣和馬爾科夫轉(zhuǎn)移矩陣，對(duì)不分泌/極低分泌的信號(hào)肽序列進(jìn)行人工調(diào)整和優(yōu)化設(shè)計(jì)。結(jié)果表明：通過(guò)尋找信號(hào)肽中不同位置氨基酸的偏向性選取趨勢(shì)，能夠確定影響蛋白質(zhì)分泌水平的關(guān)鍵氨基酸，提高了外源蛋白質(zhì)高分泌表達(dá)信號(hào)肽拼接準(zhǔn)確度。關(guān)鍵詞：信號(hào)肽;馬爾科夫轉(zhuǎn)移矩陣;特征向量;人工優(yōu)化序列;遺傳算法0 引言隨著科研水平的提高，發(fā)現(xiàn)信號(hào)肽對(duì)于蛋白質(zhì)的定位有著非常重要的作用，使得信號(hào)肽的
荊楚理工學(xué)院學(xué)報(bào) 2020年6期2020-04-06
- 大腸桿菌分泌表達(dá)裂解性多糖單加氧酶發(fā)酵條件的優(yōu)化
。因此，不同的信號(hào)肽被廣泛用于將外源蛋白輸出到大腸桿菌胞質(zhì)空間或者直接分泌到胞外培養(yǎng)基中[26, 28]。如來(lái)源于蘇云金芽孢桿菌的BtLPMO10A利用載體自身信號(hào)肽實(shí)現(xiàn)了在大腸桿菌胞內(nèi)的可溶性表達(dá)[29]；來(lái)源于粘質(zhì)沙雷氏菌的CBP21(LPMO10)通過(guò)不同的信號(hào)肽嘗試，最終實(shí)現(xiàn)了在大腸桿菌的胞外表達(dá)[30]。但是目前利用大腸桿菌分泌表達(dá)真菌來(lái)源LPMO的相關(guān)研究較少。實(shí)現(xiàn)重組蛋白在大腸桿菌中的胞外表達(dá)，可以簡(jiǎn)化下游處理工藝，因此酶的胞外表達(dá)可以降低工
食品與發(fā)酵工業(yè) 2020年5期2020-03-28
- Pyrococcus yayanosii L-天冬酰胺酶在枯草芽孢桿菌中分泌途徑的鑒定及其分泌能力的提高
蛋白質(zhì)是否依賴信號(hào)肽，可以分為信號(hào)肽依賴的分泌途徑和不依賴于信號(hào)肽的分泌途徑。枯草芽孢桿菌中依賴信號(hào)肽分泌的途徑又分為以下4種[7]：Sec分泌途徑（General secretion pathway），原核微生物中主要的蛋白質(zhì)分泌途徑，該類(lèi)信號(hào)肽的最典型特征是C端氨基酸序列為Ala-X-Ala（X代表任何氨基酸），由Ⅰ型信號(hào)肽酶切割；Tat分泌途徑（Twin-arginine translocation pathway），其特征在于N端含有雙精氨酸（RR
食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào) 2020年11期2020-03-22
- 畢赤酵母引導(dǎo)外源蛋白分泌的信號(hào)肽研究進(jìn)展
-factor信號(hào)肽1.1 α-factor信號(hào)肽結(jié)構(gòu)和功能當(dāng)前畢赤酵母系統(tǒng)中應(yīng)用最廣也最為成功的信號(hào)肽是釀酒酵母的α-factor信號(hào)肽，因而它的結(jié)構(gòu)和功能也得到了較為詳細(xì)的研究。α-factor信號(hào)肽是酵母α細(xì)胞分泌的交配信息素（mating factor 1，MF1）N端一段α交配因子前導(dǎo)肽，其編碼基因位于釀酒酵母的染色體XV1上[10]。α-factor信號(hào)肽由86個(gè)氨基酸殘基組成，實(shí)則包含前肽（Pre-sequence）和前導(dǎo)區(qū)（Pro-regi
生物技術(shù)通訊 2020年6期2020-03-10
- 一株高效降解羽毛廢棄物菌株的篩選及表達(dá)條件優(yōu)化
礎(chǔ)上，通過(guò)篩選信號(hào)肽來(lái)提高角蛋白酶基因在枯草芽孢桿菌中的表達(dá)，旨為探索信號(hào)肽與靶蛋白表達(dá)效率之間的關(guān)系研究奠定基礎(chǔ)，同時(shí)有助于實(shí)現(xiàn)重組角蛋白酶的工業(yè)化生產(chǎn)。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 土樣 來(lái)自新疆、河南、內(nèi)蒙古、河北、山東地區(qū)的羊圈或豬圈的土壤。羽毛：來(lái)自寧夏好水川養(yǎng)殖有限公司。菌株與質(zhì)粒：B.subtilisWB600和質(zhì)粒pWB980均由本實(shí)驗(yàn)室保存。試劑與培養(yǎng)基：DNA限制性內(nèi)切酶、DNA聚合酶、DNA連接酶，購(gòu)自TaKaRa公司；質(zhì)粒提
生物技術(shù)通報(bào) 2019年9期2019-09-18
- 構(gòu)建表達(dá)Flag-GPI的重組乙型肝炎病毒載體
C端各含有一個(gè)信號(hào)肽，N端信號(hào)肽的作用是將蛋白質(zhì)帶到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(endoplasmic reticulum，ER)內(nèi)腔進(jìn)行加工；C端信號(hào)肽又被稱為GPI添加信號(hào)肽，其作用是用來(lái)替換預(yù)先在ER內(nèi)合成的GPI，使GPI通過(guò)特定的化學(xué)鍵連接在蛋白質(zhì)的C端[22-24]?；贖BV載體5c3c和GPI的特性，本研究設(shè)想在5c3c載體中插入外源基因，該基因編碼帶有N端分泌信號(hào)肽和C端GPI添加信號(hào)肽的Flag標(biāo)簽，通過(guò)構(gòu)建表達(dá)Flag-GPI的重組HBV，使Flag標(biāo)簽
微生物與感染 2019年4期2019-08-30
- 刺齒報(bào)春苣苔肌醇半乳糖苷合成酶基因的鑒定及序列分析
基因序列分析;信號(hào)肽中圖分類(lèi)號(hào)： S184文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2019）08-0056-04肌醇半乳糖苷合成酶（galactinol synthase，簡(jiǎn)稱GolS）是糖基轉(zhuǎn)移酶家族的一個(gè)亞家族，能催化半乳糖和肌醇反應(yīng)合成肌醇半乳糖苷，為棉子糖系列寡糖的合成提供半乳糖基。棉子糖系列寡糖（raffinose family oligosaccharides，簡(jiǎn)稱RFOs）主要包括棉子糖、水蘇糖、毛蕊草糖等，是高等植物中重要的可溶性小分
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年8期2019-08-20
- DrwH類(lèi)信號(hào)肽序列對(duì)其抗氧化功能的影響
個(gè)氨基酸組成的信號(hào)肽序列，完整野生型dWHy1蛋白在大腸桿菌中異源表達(dá)，其存活率高于只含有空載體的對(duì)照菌株；而缺失信號(hào)肽的截短蛋白dWHy1ΔSP能顯著增強(qiáng)宿主細(xì)胞耐受冷凍脅迫的能力［10］。本研究前期對(duì)來(lái)源于耐輻射異常球菌的DrwH核心結(jié)構(gòu)域蛋白Dr-WHy在大腸桿菌中的抗逆功能進(jìn)行初步研究，其在大腸桿菌中表達(dá)能夠增強(qiáng)宿主的氧化脅迫抗性。此外，氧化脅迫（H2O2）條件下，Dr-WHy蛋白對(duì)蘋(píng)果酸脫氫酶（MDH）和乳酸脫氫酶（LDH）的酶活性有保護(hù)作用［5
生物技術(shù)通報(bào) 2019年5期2019-06-04
- 嗜熱內(nèi)切葡聚糖酶(E1)植物亞細(xì)胞定位表達(dá)載體的構(gòu)建及驗(yàn)證
不同亞細(xì)胞定位信號(hào)肽的ImpactVectors載體連接，構(gòu)建成E1-IV1.1～E1-IV1.5系列載體，其中載體編號(hào)1.1表示不含有信號(hào)肽，1.2表示通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分泌的胞外信號(hào)肽，1.3表示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留信號(hào)肽，1.4表示葉綠體信號(hào)肽，1.5表示線粒體信號(hào)肽。利用PCR技術(shù)將上述載體中信號(hào)肽-E1基因序列擴(kuò)增。根據(jù)載體序列設(shè)計(jì)的PCR擴(kuò)增引物分別為：正向擴(kuò)增引物(1.1S)5′-GTCCATTCCTCCTAAGTATCTAGAA-3′，反向擴(kuò)增引物(1.1A
江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2018年6期2019-01-04
- 極端嗜熱酸性α-淀粉酶PFA在枯草芽孢桿菌中的高效分泌表達(dá)
于枯草芽孢桿菌信號(hào)肽的引導(dǎo)，并且信號(hào)肽與外源蛋白質(zhì)之間存在適配性[15]。因此針對(duì)特定的蛋白質(zhì)需要選擇合適的信號(hào)肽來(lái)實(shí)現(xiàn)有效的分泌表達(dá)。來(lái)源于極端嗜熱古生菌（Pyrococcus furiosus）的極端嗜熱酸性α-淀粉酶PFA是目前已知的熱穩(wěn)定性最好的α-淀粉酶。PFA的最適反應(yīng)溫度高達(dá)100 ℃，最適反應(yīng)pH值為5.0，在未補(bǔ)加Ca2＋的條件下于98 ℃的半衰期長(zhǎng)達(dá)13 h，并且其熱穩(wěn)定性和高溫活性均不依賴于Ca2＋[16-17]。鑒于PFA的優(yōu)良酶學(xué)
食品科學(xué) 2018年18期2018-10-08
- 基于外泌蛋白質(zhì)組的釀酒酵母信號(hào)肽元件的分析及鑒定
的前體通常含有信號(hào)肽，翻譯后首先被定向地轉(zhuǎn)運(yùn)到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)；另一類(lèi)不含有信號(hào)肽的胞質(zhì)蛋白如糖代謝酶、伴侶蛋白和翻譯起始因子等也可以經(jīng)過(guò)非經(jīng)典的 ER-Golgi 非依賴分泌途徑分泌到胞外，其外泌的分子機(jī)制還沒(méi)有闡明[3]。許多外泌蛋白和胞內(nèi)膜蛋白在合成時(shí)都依賴于其 N-端的信號(hào)肽功能元件，細(xì)胞內(nèi)膜定位的蛋白盡管也經(jīng)過(guò)ER-Golgi 途徑轉(zhuǎn)運(yùn)，但是其信號(hào)肽的下游和分子內(nèi)部存在穿膜肽或 C-膜定位信號(hào)（如核定位信號(hào)肽）控制蛋白的亞細(xì)胞轉(zhuǎn)位[4]。分泌型的信號(hào)肽含有
中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù) 2018年4期2018-08-15
- 煙草β—1，3—葡聚糖酶的生物學(xué)分析
酶的理化特性、信號(hào)肽和跨膜結(jié)構(gòu)的組成成分。[結(jié)果]NtBGl-2的分子量最大（40 390.76 Dk），NtBGl-3的分子量最?。?7 722.64 Dk）；NtBGl-1和NtBGl-2的等電點(diǎn)小于7.0，而NtBGl-3的等電點(diǎn)大于7.0；NtBGl-1和NtBGl-2屬于不穩(wěn)定蛋白，NtBGl-3屬于穩(wěn)定性蛋白，且耐熱性大于NtBGl-1和NtBGl-2；NtBGl-1和NtBGl-2的優(yōu)勢(shì)氨基酸為甘氨酸和絲氨酸，NtBGl-3的為天冬酰氨和丙氨
安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2018年17期2018-05-14
- 信號(hào)肽對(duì)溶血素在大腸桿菌中跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的影響
核糖體上進(jìn)行。信號(hào)肽（Signal peptide）是蛋白質(zhì)的一個(gè)片段，能夠引導(dǎo)核糖體并定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，并將不斷合成的肽鏈穿過(guò)通道，隨后信號(hào)肽被切割下來(lái)，完整的蛋白被釋放進(jìn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔后被轉(zhuǎn)運(yùn)到胞外[1]。研究發(fā)現(xiàn)，一般情況下，新生蛋白通常在位于其N(xiāo)端信號(hào)肽的指引下到達(dá)細(xì)胞特定區(qū)域，并由其介導(dǎo)完成跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)[2]。豬鏈球菌屬于鏈球菌屬，現(xiàn)在公認(rèn)的血清型有33個(gè)， 其 中2型（Streptococcus suis type 2，SS2）最為常見(jiàn)，也最重要[3]。大
中國(guó)動(dòng)物檢疫 2018年3期2018-03-09
- 整體優(yōu)化的信號(hào)肽和人溶菌酶基因在畢赤酵母的高效表達(dá)
外源蛋白可通過(guò)信號(hào)肽引導(dǎo)分泌至胞外等諸多優(yōu)點(diǎn)，是表達(dá)真核細(xì)胞來(lái)源蛋白質(zhì)的理想系統(tǒng)之一。在將外源基因轉(zhuǎn)入畢赤酵母前，研究者會(huì)根據(jù)畢赤酵母密碼子偏愛(ài)性對(duì)外源基因序列進(jìn)行優(yōu)化設(shè)計(jì)。劉真英等[20]對(duì)柞蠶溶菌酶基因進(jìn)行密碼子優(yōu)化后，其在畢赤酵母中表達(dá)量可達(dá)2.4 g/L，且純化后的柞蠶溶菌酶比酶活力達(dá)到23 970 U/mg。Zhou等[18]對(duì)人源溶菌酶基因進(jìn)行優(yōu)化，并轉(zhuǎn)入畢赤酵母(P.pastorisSMD1168)進(jìn)行表達(dá)，發(fā)酵上清液中人源溶菌酶蛋白濃度為3
江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2018年1期2018-03-07
- 全基因組預(yù)測(cè)褐環(huán)乳牛肝菌的分泌蛋白
基酸大小分布、信號(hào)肽長(zhǎng)度、信號(hào)肽切割位點(diǎn)等進(jìn)行分析，明確該菌分泌蛋白的氨基酸長(zhǎng)度集中于51～450 aa，信號(hào)肽長(zhǎng)度以17～21 aa的序列最為集中，其信號(hào)肽切割位點(diǎn)均屬于A-X-A類(lèi)型。通過(guò)上述生物信息學(xué)分析方法有效地實(shí)現(xiàn)了褐環(huán)乳牛肝菌分泌蛋白的預(yù)測(cè)，分泌蛋白的信號(hào)肽切割位點(diǎn)類(lèi)型與其他已經(jīng)報(bào)道的致病疫霉、粗糙脈孢霉、禾谷炭疽菌等分泌蛋白信號(hào)肽切割位點(diǎn)一致。研究結(jié)果為進(jìn)一步解析分泌蛋白在該菌為宿主植物提供營(yíng)養(yǎng)過(guò)程中發(fā)揮的作用機(jī)制提供重要的理論支持。關(guān)鍵詞：
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年23期2018-01-29
- 信號(hào)肽對(duì)木聚糖酶在馬克斯克魯維酵母中分泌表達(dá)的影響
200438)信號(hào)肽對(duì)木聚糖酶在馬克斯克魯維酵母中分泌表達(dá)的影響吳 玥1，周峻崗1,2，呂 紅1,2(1. 復(fù)旦大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院 遺傳工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200438；2. 上海工業(yè)菌株工程技術(shù)研究中心，上海200438)馬克斯克魯維酵母(Kluyveromycesmarxianus)是一種新型的非常規(guī)酵母，具有生長(zhǎng)快、分泌能力強(qiáng)、安全性高等優(yōu)勢(shì)．在酵母表達(dá)系統(tǒng)中，分泌信號(hào)肽不僅介導(dǎo)了外源蛋白沿著正確途徑分泌到胞外，也在蛋白質(zhì)翻譯后加工等方面發(fā)揮了
復(fù)旦學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版） 2017年4期2017-12-14
- 動(dòng)物雙歧桿菌AD011表面脂蛋白的全基因組預(yù)測(cè)和功能分析
中表面脂蛋白和信號(hào)肽進(jìn)行預(yù)測(cè)，同時(shí)采用COG 功能數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)預(yù)測(cè)的脂蛋白進(jìn)行功能注釋和聚類(lèi)分析。[結(jié)果]對(duì)動(dòng)物雙歧桿菌AD011基因組1 518個(gè)蛋白的表面脂蛋白預(yù)測(cè)，結(jié)果表明，19個(gè)蛋白具有脂蛋白信號(hào)肽。功能分析顯示，該菌株19個(gè)脂蛋白中有3個(gè)蛋白沒(méi)有功能注釋，16個(gè)蛋白有功能注釋，其中10個(gè)蛋白參與氨基酸代謝與轉(zhuǎn)運(yùn)、3個(gè)蛋白參與碳水化合物代謝與轉(zhuǎn)運(yùn)，3個(gè)蛋白參與無(wú)機(jī)鹽離子代謝與轉(zhuǎn)運(yùn)。[結(jié)論]動(dòng)物雙歧桿菌AD011表面脂蛋白參與的功能主要與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)和
安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年11期2017-05-30
- 青春雙歧桿菌ATCC15703 I型Sec途徑分泌蛋白的預(yù)測(cè)和功能分析
pase I）信號(hào)肽酶識(shí)別的I型Sec途徑分泌蛋白，分泌蛋白的信號(hào)肽長(zhǎng)度最大的有54個(gè)氨基酸，最小的有11個(gè)氨基酸。I 型Sec途徑分泌蛋白的功能分析結(jié)果顯示，分泌蛋白主要參與碳水化合物代謝與轉(zhuǎn)運(yùn)，氨基酸代謝與轉(zhuǎn)運(yùn)，復(fù)制、重組和修復(fù)，以及無(wú)機(jī)離子代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)。[結(jié)論]青春雙歧桿菌I型Sec途徑分泌蛋白的預(yù)測(cè)和功能分析為了解該菌胞外蛋白的分泌機(jī)制提供了數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞青春雙歧桿菌；基因組；分泌蛋白；Sec分泌途徑；信號(hào)肽中圖分類(lèi)號(hào)R151.3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編
安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年12期2017-05-30
- 談信號(hào)肽及蛋白質(zhì)分選轉(zhuǎn)運(yùn)
轉(zhuǎn)運(yùn)的過(guò)程中，信號(hào)肽起著十分重要的作用。本文就信號(hào)肽的結(jié)構(gòu)和功能，蛋白質(zhì)分選轉(zhuǎn)運(yùn)類(lèi)型與途徑等方面進(jìn)行詳細(xì)分析，闡述了信號(hào)肽對(duì)蛋白質(zhì)的定位重要作用，探究信號(hào)肽的研究在生物蛋白質(zhì)、醫(yī)療、制藥等方面的應(yīng)用情況，以及對(duì)信號(hào)肽研究的未來(lái)展望。【關(guān)鍵詞】 信號(hào)肽 蛋白質(zhì) 分選轉(zhuǎn)運(yùn) 實(shí)際應(yīng)用1 信號(hào)肽與蛋白質(zhì)分選轉(zhuǎn)運(yùn)1.1 信號(hào)肽的結(jié)構(gòu)與功能信號(hào)肽引導(dǎo)并定位蛋白質(zhì)新生肽鏈，類(lèi)似于一段具有特定的“條形碼”，位于蛋白質(zhì)的N端氨基酸序列，一般由20左右個(gè)氨基酸殘基組成，包括疏
今日健康 2016年7期2017-04-12
- 運(yùn)用計(jì)算機(jī)軟件預(yù)測(cè)木質(zhì)部寄生屬信號(hào)肽
測(cè)木質(zhì)部寄生屬信號(hào)肽張志超1，黃 勇2，徐可成1，宋 紅1，楊俊譽(yù)1，張 彧1，黃 瓊1，3，*(1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué) 教育部生物多樣性與病蟲(chóng)害控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650201； 2.云南省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所，云南 昆明 650034； 3.云南生物資源保護(hù)與利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650201)利用已經(jīng)公布的木質(zhì)部寄生屬(Xylellafastidiosa)2 766個(gè)基因組數(shù)據(jù)信息，運(yùn)用在線計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)軟件，分析了木質(zhì)部寄生屬(Xylellafa
浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2017年3期2017-04-08
- 全基因組預(yù)測(cè)枯草芽孢桿菌BEST195的分泌蛋白
的氨基酸分布、信號(hào)肽長(zhǎng)度大小、信號(hào)肽切割位點(diǎn)等性質(zhì)進(jìn)行分析。結(jié)果表明：枯草芽孢桿菌含有分泌蛋白102個(gè)，其氨基酸長(zhǎng)度、信號(hào)肽長(zhǎng)度與植物病原菌不同；信號(hào)肽切割位點(diǎn)屬于A-X-A類(lèi)型，與其他已經(jīng)報(bào)道的植物病原真菌、細(xì)菌以及卵菌中分泌蛋白信號(hào)肽切割位點(diǎn)一致。通過(guò)上述生物信息學(xué)分析方法有效地實(shí)現(xiàn)了枯草芽孢桿菌BEST195分泌蛋白的預(yù)測(cè)，分泌蛋白的信號(hào)肽切割位點(diǎn)具有物種保守型特點(diǎn)。枯草芽孢桿菌；分泌蛋白；信號(hào)肽；預(yù)測(cè)枯草芽孢桿菌BEST195 (Bacilluss
西南林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 2016年6期2016-12-15
- 煙草野火病菌Pseudomonas syringae pv. tabaci yuexi-1信號(hào)肽預(yù)測(cè)及分析
yuexi-1信號(hào)肽預(yù)測(cè)及分析王鐵霖，李晶，楊玉文，趙廷昌中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，植物病蟲(chóng)害生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193利用SignalP 4.0、 LipoP 1.0 及TMHMM v2.0對(duì)煙草野火病菌Pseudomonas syringaepv.tabaciyuexi-1菌株基因組中信號(hào)肽的數(shù)量、長(zhǎng)度和氨基酸組成進(jìn)行了預(yù)測(cè)及分類(lèi)。結(jié)果確定其中432個(gè)ORFs (Open reading frame) 所編碼的N 端有信號(hào)肽序列，占全
中國(guó)煙草學(xué)報(bào) 2016年1期2016-11-16
- 土壤宏基因組中芽孢桿菌信號(hào)肽的克隆及分析
因組中芽孢桿菌信號(hào)肽的克隆及分析唐國(guó)鑫1，2，陳寧1*（1.天津科技大學(xué)生物工程學(xué)院，天津300457；2.中國(guó)科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所，天津300308）從土壤宏基因組中篩選獲得在芽孢桿菌中高效分泌重組蛋白的信號(hào)肽。通過(guò)數(shù)據(jù)分析，將預(yù)測(cè)到的信號(hào)肽DNA片段與蛋白酶基因融合，在枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）WB800和地衣芽孢桿菌（Bacillus licheniformis）DL6中表達(dá)，進(jìn)行胞外蛋白酶酶活測(cè)定。篩選得到25個(gè)可能
中國(guó)釀造 2016年6期2016-10-14
- 分散泛菌蔗糖異構(gòu)酶在大腸桿菌中的表達(dá)及發(fā)酵優(yōu)化
量，研究了不同信號(hào)肽及發(fā)酵條件對(duì)蔗糖異構(gòu)酶在大腸桿菌中重組表達(dá)的影響。將攜帶天然信號(hào)肽的蔗糖異構(gòu)酶基因優(yōu)化后，轉(zhuǎn)入大腸桿菌Escherichia coli BL21 （DE3） 構(gòu)建重組表達(dá)菌株——ORI菌株，搖瓶發(fā)酵總酶活和胞外酶活分別為85 U/mL、65 U/mL。從天然信號(hào)肽開(kāi)始第22位氨基酸作為成熟蛋白的起始，連接PelB或OmpA信號(hào)肽構(gòu)建P22和O22菌株，其中P22菌株發(fā)酵總酶活提高至138 U/mL，是ORI菌株總酶活的1.6倍；而O22
生物工程學(xué)報(bào) 2016年8期2016-09-13
- 真核細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的定位
外的精準(zhǔn)定位與信號(hào)肽和囊泡密切相關(guān)。1.1 “信號(hào)肽”假說(shuō) 20世紀(jì)70年代初，洛克菲勒大學(xué)布洛貝爾(Gūnter Blobel)博士提出 “信號(hào)肽假說(shuō)”,以解釋蛋白質(zhì)如何從核糖體合成后到達(dá)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，并在隨后的20多年的工作中證實(shí)了假說(shuō)的正確性和普遍性。什么是信號(hào)肽？一般認(rèn)為是新合成多肽鏈中用于指導(dǎo)蛋白質(zhì)跨膜轉(zhuǎn)移的N-末端氨基酸序列。信號(hào)肽通常由16～36個(gè)氨基酸組成，一般位于N端(有時(shí)不一定在N端)，對(duì)蛋白質(zhì)的靶向轉(zhuǎn)運(yùn)有決定作用。信號(hào)肽假說(shuō)的內(nèi)容包括：①蛋
生物學(xué)教學(xué) 2016年7期2016-08-20
- 煙草合子時(shí)期特異表達(dá)基因的克隆與分析
含有1段疏水性信號(hào)肽，但在其他物種中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)同類(lèi)蛋白。NtZE583-綠色熒光蛋白（NtZE583-GFP）融合蛋白亞細(xì)胞定位顯示，該蛋白可能存在于液泡中。利用染色體步移技術(shù)獲得該基因5′端上游3 866 bp的側(cè)翼序列（啟動(dòng)子和5′UTR），經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，具有較強(qiáng)的啟動(dòng)子活性。研究結(jié)果為進(jìn)一步研究該基因在煙草早期胚胎發(fā)生中的功能奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：煙草；合子；液泡；基因克?。?span id="j5i0abt0b" class="hl">信號(hào)肽中圖分類(lèi)號(hào)： S572.01；Q785文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年5期2016-07-23
- 中溫α-淀粉酶基因在枯草芽孢桿菌中的高效表達(dá)及其發(fā)酵條件優(yōu)化
研究了啟動(dòng)子和信號(hào)肽對(duì)外源蛋白表達(dá)分泌的影響。分別選取了4種啟動(dòng)子以及8種信號(hào)肽來(lái)進(jìn)行篩選，結(jié)果表明，啟動(dòng)子PAprE的強(qiáng)度最高，信號(hào)肽SPnprE的分泌效率最好。針對(duì)重組菌株1A751Q31進(jìn)行系統(tǒng)的發(fā)酵優(yōu)化，在72 h發(fā)酵液中α-淀粉酶酶活達(dá)到380 U/mL。在7.5 L發(fā)酵罐中進(jìn)行放大實(shí)驗(yàn)，發(fā)酵液中α-淀粉酶酶活最高達(dá)到853 U/mL。以上研究表明，α-淀粉酶適合在枯草芽孢桿菌中進(jìn)行表達(dá)，同時(shí)表明枯草芽孢桿菌是良好的異源蛋白表達(dá)系統(tǒng)。關(guān)鍵詞枯草芽
食品與發(fā)酵工業(yè) 2016年4期2016-05-24
- 信號(hào)肽對(duì)Bacillus subtilis表達(dá)環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的影響
14122）?信號(hào)肽對(duì)Bacillus subtilis表達(dá)環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的影響毛婷1，2，李江華*1，2，劉龍1，2，堵國(guó)成1，2，陳堅(jiān)1，2 （1．江南大學(xué)，工業(yè)生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇無(wú)錫214122；2.江南大學(xué)生物工程學(xué)院，江蘇無(wú)錫214122）摘要：將來(lái)源于作者所在實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建保存E.coli pET-20b（+）/CGT△E-CBMAmy的CGT△ECBMAmy基因插入6種含有不同信號(hào)肽（estA、bpr、vpr、yncM、yvgO
食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào) 2016年2期2016-05-23
- 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的蛋白質(zhì)合成功能
(氨基末端)的信號(hào)肽，指導(dǎo)蛋白質(zhì)由核糖體轉(zhuǎn)至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上合成，并因此獲得1999年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。2.1 信號(hào)肽 在成熟mRNA5′端起始密碼(AUG)之后，有一組編碼特殊氨基酸序列的密碼子，稱為信號(hào)密碼，由信號(hào)密碼翻譯出的肽鏈，叫做信號(hào)肽。信號(hào)肽為高度疏水氨基酸組成的肽鏈，一般由13～26個(gè)氨基酸組成，是新生肽鏈上的一段特殊的氨基酸序列，可引導(dǎo)蛋白跨膜或分泌到胞外。信號(hào)肽的位置大多位于新生肽的N-端，少數(shù)位于多肽鏈的中部。信號(hào)肽一般可分為：親水區(qū)、疏水
生物學(xué)教學(xué) 2016年2期2016-04-10
- 希金斯刺盤(pán)孢全基因組候選效應(yīng)分子的預(yù)測(cè)
孢；效應(yīng)分子；信號(hào)肽；十字花科植物炭疽病；生物信息學(xué)中圖分類(lèi)號(hào) S436.34 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 AAbstract Colletotrichum higginsianum Sacc. is one of the important phytopathogenic fungi worldwide， and often causes severe anthracnose disease on a wide range of cruciferous plants，
熱帶作物學(xué)報(bào) 2015年6期2015-05-30
- 樹(shù)鼩全基因組分泌蛋白的預(yù)測(cè)分析
蛋白質(zhì)序列進(jìn)行信號(hào)肽預(yù)測(cè)，最后利用TargetP、PSORT和WoLF PSORT對(duì)具有信號(hào)肽的蛋白質(zhì)進(jìn)行亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)，篩選定位于細(xì)胞膜外的蛋白質(zhì)。以上所有程序的運(yùn)行及結(jié)果的處理通過(guò)EuSecPred 2.0在線流程完成[8]。篩選得到的分泌蛋白合集包括含有信號(hào)肽的經(jīng)典型分泌(classical secreted protein，CSP)以及無(wú)信號(hào)肽的非經(jīng)典型分泌蛋白(non-classical secreted protein，NCSP)兩種[17]。
中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志 2014年4期2014-08-14
- 褐色喜熱裂孢菌Thermobifida fusca產(chǎn)麥芽糖α-淀粉酶基因的克隆表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)研究
引物分別擴(kuò)增含信號(hào)肽和去除信號(hào)肽的T.fuscaα-淀粉酶基因。為便于基因與載體的連接，在上下游分別加入Nco I和Eco R I的酶切位點(diǎn)（帶下劃線），同時(shí)為方便后期的過(guò)鎳柱純化目的蛋白，設(shè)計(jì)引物時(shí)在表達(dá)的目的蛋白基因前端加上6個(gè)組氨酸尾巴序列，并委托鼎安生物公司合成。其中，引物Sense1和Antisense擴(kuò)增的是含信號(hào)肽的T.fuscaα-淀粉酶基因，而引物Sense2和Antisense擴(kuò)增的是去除信號(hào)肽的T.fuscaα-淀粉酶基因。1.2.2
食品工業(yè)科技 2013年24期2013-02-21
- 信號(hào)肽與分泌通路在畢赤酵母表達(dá)異源蛋白中的作用機(jī)制
）研究認(rèn)為，除信號(hào)肽外，分泌通路在外源蛋白高效分泌過(guò)程中起關(guān)鍵作用，因此成為突破蛋白質(zhì)分泌瓶頸的焦點(diǎn)。本文就畢赤酵母信號(hào)肽關(guān)聯(lián)的分泌機(jī)制、結(jié)構(gòu)特征和蛋白分泌通路改造等方面的研究進(jìn)展作一綜述。1 信號(hào)肽牽引的外源蛋白分泌通路假說(shuō)Gunter Blobel于20世紀(jì)70年代提出信號(hào)肽假說(shuō)，認(rèn)為蛋白質(zhì)合成在核糖體上進(jìn)行，信號(hào)肽作為蛋白質(zhì)的一個(gè)片段引導(dǎo)核糖體定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通道上，并牽引合成的多肽穿過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通道，隨后信號(hào)肽被肽酶切除，蛋白質(zhì)被釋放到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔，由轉(zhuǎn)運(yùn)小泡
中國(guó)飼料 2013年1期2013-01-25
- 禽類(lèi)MHCⅡ類(lèi)分子β鏈信號(hào)肽保守性分析
CⅡ類(lèi)分子β鏈信號(hào)肽保守性分析宗文明1,葉 紅2（1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)，安徽 合肥 230036；2.安徽省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院，安徽 合肥 230061）Ⅱ類(lèi)主要組織相容性復(fù)合物（major histocompatibility complex，MHC）的β鏈顯示極為豐富的多態(tài)性.為了分析禽類(lèi)MHCⅡ類(lèi)分子β鏈信號(hào)肽是否呈現(xiàn)出多態(tài)性的分子生物學(xué)特征，利用NCBI網(wǎng)站查找到原雞等五種禽類(lèi)編碼MHCⅡ類(lèi)分子β鏈的mRNA，再用DNAStar軟件轉(zhuǎn)譯成氨基酸序列，然后用
- 信號(hào)肽編碼序列庫(kù)的構(gòu)建及耐熱乳糖酶的分泌
214122）信號(hào)肽編碼序列庫(kù)的構(gòu)建及耐熱乳糖酶的分泌夏 雨 弓紫豐 成玉梁 趙 瑩 孫 震（江南大學(xué)食品學(xué)院，江蘇 無(wú)錫 214122）為了實(shí)現(xiàn)來(lái)源于嗜熱脂肪芽孢桿菌的β－半乳糖苷酶在枯草芽孢桿菌中的分泌表達(dá)，建立一種較簡(jiǎn)便的方法篩選能夠分泌該酶的信號(hào)肽，即針對(duì)11種信號(hào)肽構(gòu)建信號(hào)肽編碼序列庫(kù)，采用隨機(jī)篩選方法得到合適的信號(hào)肽，構(gòu)建相應(yīng)的分泌表達(dá)載體和重組表達(dá)菌株。結(jié)果表明，通過(guò)信號(hào)肽隨機(jī)篩選方法獲得的枯草芽孢桿菌中性蛋白酶NprE信號(hào)肽能夠有效引導(dǎo)該酶
食品與機(jī)械 2011年6期2011-12-28
- 細(xì)菌一種“新的分泌機(jī)制”初探
到達(dá)周質(zhì)時(shí)會(huì)被信號(hào)肽酶剪切掉［2］。I型是 Sec非依賴途徑。與II型和IV型分泌途徑相比較，I型和III型分泌不依賴于Sec系統(tǒng)，所以不需要分泌蛋白的氨基端加工。I型和III型途徑的蛋白質(zhì)分泌是一個(gè)連續(xù)的過(guò)程，不存在明顯的周質(zhì)中間體［3－4］。重組蛋白在大腸桿菌胞周質(zhì)中分泌表達(dá)應(yīng)屬于II型分泌機(jī)制［2］，在重組蛋白的氨基端通常融合一段信號(hào)肽基因，當(dāng)翻譯完成后，這條信號(hào)肽就會(huì)被大腸桿菌胞質(zhì)中的信號(hào)肽酶切除，這是一條傳統(tǒng)的分子生物學(xué)基本原理。但是，本文在構(gòu)建
中國(guó)獸藥雜志 2011年3期2011-05-29
- 斑馬魚(yú)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGFs)信號(hào)肽的預(yù)測(cè)分析
都具有一個(gè)N端信號(hào)肽,屬于典型的分泌型生長(zhǎng)因子,可被細(xì)胞分泌到胞外,以自分泌或者旁分泌形式發(fā)揮調(diào)控作用[4]。因此,研究FGF成員的信號(hào)肽結(jié)構(gòu)對(duì)于研究其在生物體內(nèi)的分泌途徑,可以揭示它在胚胎發(fā)育、組織形成與修復(fù)、炎癥、血栓形成、腫瘤發(fā)生等生理及病理過(guò)程中的作用途徑。本文利用分析準(zhǔn)確率較高的Signal P3.0[5]、TMHMM 2.0、Big.PI-Predictor和 Target P1.01四種軟件對(duì)斑馬魚(yú)FGF中分泌型蛋白的信號(hào)肽進(jìn)行預(yù)測(cè),并對(duì)其信
中國(guó)獸醫(yī)雜志 2010年6期2010-11-22
- 一種表征蛋白質(zhì)可分泌性的結(jié)構(gòu)融合度特征
22選擇適宜的信號(hào)肽是實(shí)現(xiàn)外源蛋白高效分泌表達(dá)的一個(gè)重要因素。本研究利用生物信息學(xué)方法分析信號(hào)肽與外源蛋白之間的相容程度，將其定義為結(jié)構(gòu)融合度，并從數(shù)學(xué)角度分析拼接信號(hào)肽與目的蛋白鄰近殘基之間的相互作用，提出了信號(hào)肽拼接區(qū)域與目標(biāo)蛋白之間的數(shù)學(xué)模型，利用該模型進(jìn)行結(jié)構(gòu)融合度特征提取，以此來(lái)表征外源蛋白質(zhì)的可分泌性。模擬結(jié)果顯示結(jié)構(gòu)融合度特征能有效區(qū)分枯草芽胞桿菌宿主的可分泌和不可分泌蛋白。研究結(jié)果有助于信號(hào)肽的選擇，對(duì)目的蛋白分泌表達(dá)的優(yōu)化具有一定的指導(dǎo)意
生物工程學(xué)報(bào) 2010年5期2010-10-11
- 歐文氏桿菌CXJZ95-198甘露聚糖酶基因N端缺失表達(dá)
比說(shuō)明缺失了的信號(hào)肽序列對(duì)酶活或者酶的分泌能力有負(fù)面影響，pF2和pF3透明圈大小無(wú)明顯差異說(shuō)明N端信號(hào)肽后10個(gè)AA對(duì)該酶的活性無(wú)影響，可刪除。pF4和pF3比較說(shuō)明pF4多刪除的10個(gè)AA對(duì)該酶的活性有非常重要的影響。2.4 重組子表達(dá)產(chǎn)物的SDS-PAGE分析分別挑取pF1-pF4四種菌的陽(yáng)性克隆子的單菌落，在5 mL含有終濃度為50 μg/mL卡那霉素的LB培養(yǎng)基中37℃，180 r/min震蕩培養(yǎng)6 h，再將活化菌按2%的比例接種100 mL含有
湖南農(nóng)業(yè)科學(xué) 2010年11期2010-07-09