膜片鉗
- 皮層局部環(huán)路結(jié)構(gòu)與功能研究綜述
跨突觸標(biāo)記或者膜片鉗技術(shù)可以記錄到介觀水平的神經(jīng)元形態(tài)以及連接,但介觀難以發(fā)現(xiàn)微觀水平上存在的連接細(xì)節(jié),如無法記錄到突觸后連接精細(xì)的亞水平結(jié)構(gòu).并且介觀水平的分辨率受到光學(xué)成像的限制,對突觸連接的判斷存在一定程度的干擾.所以,微觀連接組學(xué)(Micro-connectomics)應(yīng)運而生,分辨率在納米級,主要利用電鏡技術(shù)來獲取納米分辨率下的神經(jīng)元,在局部環(huán)路研究上具有非常大的優(yōu)勢.大腦的連接不僅是腦區(qū)之間的信號傳遞,在腦認(rèn)知研究中最關(guān)鍵的是皮層密集連接,以及
昆明理工大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版) 2023年2期2023-05-08
- 膜片鉗技術(shù)在醫(yī)學(xué)本科生實驗課程中的教學(xué)實踐探索
400038膜片鉗技術(shù)采用尖端開口在1～5 μm 的硅酸鹽玻璃電極與細(xì)胞膜緊密接觸，形成G 歐姆級別（10～100 GΩ）的緊密封接，從而實現(xiàn)高信噪比的記錄[1]。該技術(shù)于1976 年由德國兩位科學(xué)家Neher 和Sakmann 發(fā)明，其出現(xiàn)革命性地推動了在單細(xì)胞水平對可興奮細(xì)胞（神經(jīng)元和心肌細(xì)胞等）放電活動及其離子通道基礎(chǔ)的研究，為理解神經(jīng)系統(tǒng)電活動打開了微觀世界的入口[2]。自發(fā)明以來，該技術(shù)一直是生理學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)等基礎(chǔ)學(xué)科在細(xì)胞、離子通道功能研究
中國醫(yī)藥導(dǎo)報 2022年28期2022-11-25
- hERG1a突變H70R對hERG1a單源四聚體和hERG1a/hERG1b二源四聚體通道功能的影響
ch 700B膜片鉗放大器(Axon公司,美國)，Digidata 1322數(shù)模轉(zhuǎn)換器(Axon公司,美國)。Sutter p-97微電極拉制儀(Sutter公司,美國)，MF-830微電極拋光儀(Narishige公司,日本)。1.2 突變誘導(dǎo)，載體表達(dá)應(yīng)用定點突變誘導(dǎo)試劑盒，對攜帶有野生型KCNH2 cDNA的pcDNA3.1進行c. 209 A>G突變誘導(dǎo)。突變誘導(dǎo)后進行DNA測序證實c. 209 A>G突變存在。采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)，應(yīng)用人胚腎(hu
首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 2022年5期2022-10-25
- 全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)在遺傳性長QT 綜合征和不明原因猝死中的研究進展
為重要。全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)（Patch clamp techniques）作為先進的細(xì)胞電生理技術(shù)，在研究離子通道疾病中的應(yīng)用日益廣泛，尤其是對于LQTS 相關(guān)基因突變致病性的評估、SUD 的預(yù)防和死亡原因鑒定等方面具有重要意義。本文對全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)在LQTS 和SUD 中的應(yīng)用進行綜述。1 長QT 綜合征的研究現(xiàn)狀長QT 綜合征是一組以體表心電圖QT 間期延長為主要特征、易引發(fā)尖端扭轉(zhuǎn)型室性心動過速等心律失常、嚴(yán)重者可導(dǎo)致猝死的心臟離子通道疾病。研究表明
昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 2022年6期2022-07-04
- ANO1穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞模型的構(gòu)建及生理特性
德國BMG)，膜片鉗(德國HEKA)，倒置熒光顯微鏡(日本Nikon)，流式細(xì)胞儀(美國BD)。1.3 方法1.3.1 細(xì)胞模型的構(gòu)建1.3.1.1 最適抗生素濃度的選擇 將狀態(tài)較好FRT鋪到96孔板中，16 h后細(xì)胞密度達(dá)到70%～90%，分別加入濃度為1 000、800、600、400、200 μg/L和100 μg/L的Zeocin，2周后細(xì)胞全部死亡的濃度即為Zeocin抗生素篩選的最適濃度。G418應(yīng)用相同的方法選擇最適濃度。1.3.1.2 構(gòu)建
中國獸醫(yī)雜志 2021年9期2022-01-17
- 為什么我們能感受溫度和觸覺
則進入黃瓜內(nèi)。膜片鉗我們的細(xì)胞為什么能把鈉離子擋在外面呢？無數(shù)科學(xué)家為此撓破頭皮，一直到20世紀(jì)70年代，德國科學(xué)家伯特·薩克曼發(fā)明了一種新的裝置：膜片鉗。膜片鉗的使用方式與顯微鏡有點像。使用顯微鏡時，我們首先要從研究目標(biāo)上切下一小塊，制成標(biāo)本，然后將標(biāo)本放到顯微鏡下，依靠顯微鏡的放大能力進行觀察。膜片鉗可以看作一把很小的鉗子，科學(xué)家用它揪住細(xì)胞的一角，而后放大這一角的電流，觀察其中的規(guī)律。結(jié)果呢？科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞膜上有許多“小門”，它們十分挑剔，有的只對
科學(xué)大眾 2021年23期2021-12-28
- 利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄大鼠腦片NMDA電流的研究*
030001)膜片鉗技術(shù)在1976年由德國科學(xué)家Nether和Sakmann 發(fā)明，他們首次在青蛙肌細(xì)胞上用雙電極鉗制膜電位的同時記錄到乙酰膽堿激活的單通道離子電流[1]。這種技術(shù)通過記錄細(xì)胞膜上單個或幾個離子通道開放或關(guān)閉引起的電流變化來研究細(xì)胞生理功能，已被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)領(lǐng)域，尤其是神經(jīng)科學(xué)的許多方面。如記錄在腦內(nèi)功能活動時神經(jīng)元興奮性的變化，神經(jīng)信號的產(chǎn)生和傳導(dǎo)，神經(jīng)環(huán)路中突觸的傳遞過程等研究中[2-6]。全細(xì)胞記錄模式下可以獲得細(xì)胞膜上所有離子
中國應(yīng)用生理學(xué)雜志 2021年5期2021-12-10
- 家福捕鳥蛛毒素-22鈉通道活性與基本性質(zhì)分析
P-HPLC和膜片鉗活性測定，從其粗毒中分離鑒定到1個對TTX-R鈉電流具有明顯抑制作的毒素分子（JFTX-22），并進行了JFTX-22的基本理化性質(zhì)分析、空間結(jié)構(gòu)預(yù)測和同源序列比對.1 材料與方法1.1 材料1.1.1 實驗動物：家福捕鳥蛛采自廣西寧明縣桐棉鎮(zhèn)和愛店鎮(zhèn)的山區(qū)，SD大鼠購自湘雅醫(yī)學(xué)院動物養(yǎng)殖中心.1.1.2 試劑：Sigma公司的葡萄糖、D-glucose、NaOH、KCl、冰乙酸、氯化銫、MgCl2、EGTA、三氟乙酸、胰蛋白酶抑制劑、
懷化學(xué)院學(xué)報 2021年5期2021-12-01
- 電生理膜片鉗相關(guān)設(shè)備使用規(guī)范
小敏【關(guān)鍵詞】膜片鉗系統(tǒng);微電極拉制儀;儀器設(shè)備;使用規(guī)范一、膜片鉗技術(shù)的工作原理膜片鉗技術(shù)是用于了解離子通道行為的通用型電生理工具，首先用微玻管電極（膜片電極或膜片吸管）接觸細(xì)胞膜，然后以千兆歐姆以上的阻抗使電極尖端與細(xì)胞膜封接，通過吸破或者電破的方式使與電極尖開口處相接的細(xì)胞膜的小區(qū)域與其周圍區(qū)域在電學(xué)上分隔，然后細(xì)胞膜破裂，進而對此區(qū)域上的離子通道的離子電流進行監(jiān)測記錄的方法。該方法廣泛應(yīng)用于神經(jīng)細(xì)胞，肌纖維細(xì)胞，心肌細(xì)胞及高表達(dá)單一通道的卵母細(xì)胞。
消費電子 2021年9期2021-11-05
- 利用膜片鉗技術(shù)標(biāo)記腦片神經(jīng)元的方法*
1)在進行腦片膜片鉗實驗時，經(jīng)常需要甄別實驗中選取的是哪一類細(xì)胞。通常是根據(jù)目標(biāo)區(qū)域中細(xì)胞的鏡下形態(tài)、細(xì)胞的靜息電位及一些電生理學(xué)特性來進行初步的鑒別和區(qū)分。本實驗室采用了一種通過全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)對腦片上目標(biāo)神經(jīng)元實施熒光標(biāo)記的方法。該方法在記錄離子通道電流后經(jīng)過處理就可以更直觀呈現(xiàn)觀察神經(jīng)元胞體和部分突起的形態(tài)，為實驗提供形態(tài)學(xué)的證據(jù)。實驗中用到的兩種染色生物制劑分別為NeurobiotinTMTracer和Streptavidin-Texas Red。
中國應(yīng)用生理學(xué)雜志 2021年4期2021-10-22
- TRPA1 抑制劑的高通量篩選及新型骨架的發(fā)現(xiàn)
篩選系統(tǒng)和手動膜片鉗檢測技術(shù)，靶向TRPA1 通道，對自建的已上市藥物樣品庫進行抑制活性篩選，發(fā)現(xiàn)多種不同特性的三環(huán)類分子具有明顯的TRPA1 抑制活性，且結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)一定的規(guī)律性。在已報道的TRPA1 抑制劑中，還沒有三環(huán)類骨架，本研究將為TRPA1 抑制劑的藥物研發(fā)提供新的骨架結(jié)構(gòu)。1 材料與方法1.1 試劑AITC 購自Sigma；HC030031 由Biobond 制藥公司合成；酮替芬和苯噻啶蘋果酸酯購自九鼎化學(xué)；米安色林和米氮平購自畢得醫(yī)藥；奧氮平購
科學(xué)技術(shù)創(chuàng)新 2021年19期2021-07-16
- 不同中藥對NaV1.7離子通道的抑制率比較
膜，使用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，研究這些藥物分別對NaV1.7離子通道抑制作用。結(jié)果? 抑制率的比較的結(jié)果：三七的抑制率最高，臨床有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論 對于臨床骨科常用藥物止痛效果有一定的指導(dǎo)意義。關(guān)鍵詞：疼痛? 膜片鉗? 離子通道? 中藥鎮(zhèn)痛中圖分類號：R73??????????? 文獻標(biāo)識碼：A? ???????????? 文章編號：1672-3791（2021）01（a）-0250-03Comparison of Inhibition Rates of Di
科技資訊 2021年1期2021-03-24
- 走自制實驗設(shè)備之路 凸顯學(xué)科專業(yè)特色
等［2］創(chuàng)建的膜片鉗技術(shù)就是以細(xì)胞膜電流為研究對象的電生理學(xué)技術(shù)，該技術(shù)于1991 年獲得諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理學(xué)獎，凸顯該技術(shù)在生命科學(xué)研究中的重要性，廣泛應(yīng)用于神經(jīng)科學(xué)、心血管科學(xué)、藥理學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、病理生理學(xué)等領(lǐng)域研究。我院較早將生物物理學(xué)作為重點發(fā)展的學(xué)科方向，2007 年獲批國家重點學(xué)科，2008 年建成“國家理科基礎(chǔ)科學(xué)研究和教學(xué)人才培養(yǎng)基地”，具有較完善的生物物理學(xué)科研平臺和較強的學(xué)科團隊。為推動這方面人才的培養(yǎng)，在第6 學(xué)期為生物科學(xué)專業(yè)學(xué)生開
實驗室研究與探索 2021年2期2021-01-26
- 左歸降糖解郁方對DD大鼠海馬NVU神經(jīng)元mEPSC的影響
型;采用全細(xì)胞膜片鉗記錄NVU體外共培養(yǎng)體系神經(jīng)元mEPSC，比較各組NVU培養(yǎng)體系神經(jīng)元mEPSC頻率和電流幅度。結(jié)果 經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定，NVU培養(yǎng)體系中細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整。與正常組和空白血清組相比，模型組大鼠海馬NVU培養(yǎng)體系神經(jīng)元mEPSC的頻率和幅度均顯著上升（P0.05）。結(jié)論 左歸降糖解郁方可降低DD大鼠海馬NVU體外培養(yǎng)體系神經(jīng)元mEPSC的頻率和幅度，對海馬NVU培養(yǎng)體系的具有調(diào)控作用?！碴P(guān)鍵詞〕 糖尿病;抑郁癥;左歸降糖解郁方;微小興奮性突出
湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報 2020年7期2020-08-12
- 氫氣影響大鼠神經(jīng)興奮傳導(dǎo)的研究
沒有相關(guān)研究。膜片鉗技術(shù)利用玻璃微電極與細(xì)胞膜進行封接，對細(xì)胞膜表面的離子通道的離子電流和電導(dǎo)等參數(shù)進行記錄和分析，在神經(jīng)系統(tǒng)功能研究和藥物研究等生理功能研究中已經(jīng)有了廣泛的應(yīng)用[13]。動作電位是神經(jīng)或者心肌細(xì)胞等可興奮細(xì)胞受到刺激信號時在靜息條件下的基礎(chǔ)上產(chǎn)生的可擴布的電位變化過程，動作電位過程中包含著鈉、鉀、鈣和氯離子等的轉(zhuǎn)運和相應(yīng)的離子通道的開閉，并且在不同的可興奮細(xì)胞具有特征性的動作電位[14-16]。因此，研究神經(jīng)細(xì)胞動作電位的變化是研究神經(jīng)功
生物技術(shù)進展 2020年4期2020-07-30
- 神經(jīng)科學(xué)的突破性方法:膜片鉗技術(shù)
編譯 李升偉膜片鉗技術(shù)最初是為了記錄離子通過細(xì)胞膜通道蛋白的電流而發(fā)展起來的，現(xiàn)在它已經(jīng)成為神經(jīng)科學(xué)工具箱中真正的中堅力量。大腦中的信息被認(rèn)為是由數(shù)千個神經(jīng)元細(xì)胞產(chǎn)生的復(fù)雜電脈沖模式編碼而成的。每個脈沖，即動作電位，是由流經(jīng)神經(jīng)元膜的帶電離子電流調(diào)節(jié)的。但是，這些離子是如何穿過神經(jīng)元的絕緣膜的，多年來一直是個謎。1976年，埃爾溫·內(nèi)爾（Erwin Neher）和伯特·沙克曼（Bert Sakmann）開發(fā)了膜片鉗技術(shù)，該技術(shù)明確表明電流是由膜中許多通道蛋
世界科學(xué) 2020年2期2020-02-27
- 犬左室三層細(xì)胞的分離和電生理記錄*
芳 宋衛(wèi)峰隨著膜片鉗技術(shù)的逐漸推廣和心肌細(xì)胞電異質(zhì)性等研究領(lǐng)域的發(fā)展，心肌細(xì)胞已成為各類心血管疾病結(jié)構(gòu)重構(gòu)和電重構(gòu)機制研究的重要部分。尤其是對犬等大型動物的心肌細(xì)胞的電生理特性的研究越來越多，也越來越精細(xì)。目前分離的犬心房肌細(xì)胞即刻存活率為80%～90%，復(fù)鈣至1.0 mmol/L KB液中靜置72 h存活約70%左右[1-2]；分離犬心室肌細(xì)胞即刻存活率為60%～80%[3-4]，復(fù)鈣后存活40%～60%。成功分離出高活性和高產(chǎn)量的犬心室肌三層心肌細(xì)胞并
中國心臟起搏與心電生理雜志 2019年4期2019-08-31
- 碘普羅胺對心室肌細(xì)胞離子通道的影響
：EPC-10膜片鉗放大器(HEKA，Germany)；微電極玻璃毛細(xì)管(微探極，武漢，中國)；水平拉制儀(Sutter P-97，USA)；拋光儀(Narishige Scientific Instrument Lab.，Japan)。1.2 大鼠心室肌細(xì)胞的分離 Wistar大鼠腹腔注射普通肝素（5000U/kg），20min后腹腔注射1%戊巴比妥（1ml/kg），待麻醉完成后迅速開胸切取心臟，并置于4℃無鈣臺式液中，沖洗后轉(zhuǎn)入4℃無鈣臺式液培養(yǎng)皿中，
承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報 2019年4期2019-07-09
- 黃芪湯對腎臟集合管細(xì)胞ENaC活性的影響作用研究
溶酶刺激后，以膜片鉗測定其膜電流變化。結(jié)果：纖溶酶刺激后，空白對照組的膜電流顯著增強（P0.05）。該兩組的膜電流增幅間無顯著差異（P>0.05），但均顯著低于空白對照組（P關(guān)鍵詞 黃芪湯 上皮鈉離子通道 膜片鉗中圖分類號：R289.5； R256.51 文獻標(biāo)志碼：A 文章編號：1006-1533（2019）03-0034-04Study on the effect of Huangqi decoction on ENaC activity in ren
上海醫(yī)藥 2019年3期2019-03-10
- 離子通道電流虛擬仿真實驗在生理教學(xué)中的應(yīng)用
通常依靠昂貴的膜片鉗-離子通道測量平臺才能實現(xiàn),而我校教學(xué)實驗室不具備進行該實驗的設(shè)備條件。為此,采用計算機仿真技術(shù)模擬實驗操作環(huán)境,研制了離子通道電流虛擬仿真實驗教學(xué)設(shè)備,在無膜片鉗-離子通道測量平臺設(shè)備的情況下開設(shè)了生理學(xué)測量離子單通道電流的教學(xué)實驗,建立新型實驗教學(xué)模式[2]。1 離子通道電流虛擬仿真儀器特點離子通道電流虛擬仿真實驗儀器主要應(yīng)用于生物電生理實驗教學(xué),可用于心臟、肝臟、神經(jīng)、肌肉等多臟器的實驗項目[3-9],對學(xué)生掌握抽象的離子通道蛋白
實驗技術(shù)與管理 2018年3期2018-03-30
- 探討多離子通道阻斷的抗心律失常中藥研究
最近幾年研究的膜片鉗技術(shù)給心律失?；颊邘砀Ｒ?，同時這也是細(xì)胞生物學(xué)的一場革命。將膜片鉗技術(shù)與中藥的研究結(jié)合在一起，可以有效的幫助研究出抗心律失常的中藥，且將其研究成果已經(jīng)成功通過臨床實驗。1 利用膜片鉗技術(shù)來深入研究中藥多離子通道作用膜片鉗技術(shù)的問世，就有無數(shù)的專家學(xué)者都投身其中進行研究，對多離通道阻斷的中藥主要包括單體、單味以及一些復(fù)方的中藥等。接下來對一些學(xué)者的深入研究膜片鉗現(xiàn)狀進行介紹。作者張婉在2008年研究了苦參堿來阻斷心肌細(xì)胞通道[1]，并將
中西醫(yī)結(jié)合心血管病雜志(電子版) 2018年24期2018-01-16
- 急性分離的脊髓腹角神經(jīng)元膜片鉗記錄技術(shù)
脊髓腹角神經(jīng)元膜片鉗記錄技術(shù)高凌云， 張環(huán)環(huán)， 查盈盈， 鄭 超， 汪萌芽(皖南醫(yī)學(xué)院 細(xì)胞電生理研究室，安徽 蕪湖 241002)目的：建立急性分離的脊髓腹角神經(jīng)元膜片鉗記錄技術(shù)以深入研究脊髓腹角神經(jīng)元上受體的作用。方法選用6～11 d的新生SD大鼠，麻醉后分離出含腰骶膨大的脊髓，制備切片，給予酶消化，切除背角，將腹角吹打分離出單細(xì)胞，進行膜片鉗記錄。結(jié)果①分離的腹角神經(jīng)元形態(tài)良好，胞體呈紡錘形、三角形和多邊形伴多條細(xì)長突起；②7個神經(jīng)元記錄到自發(fā)動作電
皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報 2017年6期2017-12-27
- 膜片鉗技術(shù)在慢性痛大鼠背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元電生理學(xué)特性改變中的應(yīng)用*
4）·論 著·膜片鉗技術(shù)在慢性痛大鼠背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元電生理學(xué)特性改變中的應(yīng)用*蔡 捷1方 東2李 松1邢國剛1△（1北京大學(xué)神經(jīng)科學(xué)研究所/基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院神經(jīng)生物學(xué)系，北京100191；2河南大學(xué)藥學(xué)院，開封 475004）目的：以骨癌痛大鼠為例，探討全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)在慢性痛研究中的應(yīng)用。方法：急性分離背根神經(jīng)節(jié)（dorsal root ganglion, DRG）神經(jīng)元，利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)分別記錄對照組和骨癌痛組大鼠小直徑DRG神經(jīng)元的動作電位及TRPV1
中國疼痛醫(yī)學(xué)雜志 2017年1期2017-11-20
- 奎尼丁對HEK293細(xì)胞hERG電流和hERG蛋白的影響
3細(xì)胞,全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄電流和Western blot技術(shù)觀察hERG通道蛋白表達(dá)的影響。實驗分組:①HEK293細(xì)胞轉(zhuǎn)染進質(zhì)粒48 h時加入不同濃度(0，1，3，10 μmol/L)的奎尼丁,并進行膜片鉗實驗觀察奎尼丁的瞬時作用。②HEK293細(xì)胞轉(zhuǎn)染進質(zhì)粒24 h時往培養(yǎng)基加入不同濃度(1，3，10 μmol/L)的奎尼丁,繼續(xù)培養(yǎng)24 h洗脫奎尼丁后立即進行膜片鉗及Western blot實驗觀察奎尼丁的慢性作用。 結(jié)果 ①1 μmol/L、3
山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 2017年4期2017-08-07
- GABAA受體激動劑對AD模型配體門控氯通道的作用
細(xì)胞模型；通過膜片鉗(Patch clamp)技術(shù)在大鼠海馬神經(jīng)元上記錄配體門控氯通道瞬時外向電流，采用非特異性氯通道阻斷劑(NFA)和無GABA的細(xì)胞外液確定該電流成份為瞬時外向氯電流；通過膜片鉗技術(shù)觀察GABAA受體激動劑蠅蕈醇對于在大鼠海馬神經(jīng)元上記錄瞬時外向電流的作用；向AD細(xì)胞模型中加入GABAA受體激動劑，采用MTT觀察各組細(xì)胞活力。結(jié)果 加入GABAA受體激動劑蠅蕈醇后GABA激活氯電流強度增加；加入濃度為1 mmol/L蠅蕈醇的AD模型細(xì)胞
中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志 2017年4期2017-05-10
- 全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測化學(xué)損傷致癇大鼠海馬腦片電生理特性
礎(chǔ)研究·全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測化學(xué)損傷致癇大鼠海馬腦片電生理特性徐祖才 張 駿 黃 浩 王 靜1徐忠祥 彭 燕 陳 婭 徐 平(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，貴州 遵義 563003)目的 應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測化學(xué)損傷致癇大鼠海馬腦片神經(jīng)元基本電生理特性。方法 將成年SD大鼠建立氯化鋰-匹羅卡品模型后，急性分離獲得海馬腦片，應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗電流鉗技術(shù)實時觀察化學(xué)損傷致癇大鼠海馬腦片CA1區(qū)錐體神經(jīng)元膜電位及其單位時間內(nèi)動作電位頻率的變化情況；通過全細(xì)胞膜片
中國老年學(xué)雜志 2016年21期2016-12-06
- 大蒜素對H9c2細(xì)胞鈉電流的作用
， 采用全細(xì)胞膜片鉗記錄鈉電流。觀察Gar對鈉電流和門控機制的影響。結(jié)果 Gar對INa的抑制效應(yīng)呈電壓依賴性。-30 mV時， 200 μmol/L Gar可使INa由（-98.4±5.6）pA/pF降低為（-66.5±5.3）pA/pF （P0.05）。結(jié)論 大蒜素可能通過減少鈉通道激活， 降低鈉電流?！娟P(guān)鍵詞】 大蒜素；H9c2細(xì)胞；鈉電流；膜片鉗DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.27.192【Abstract】
中國實用醫(yī)藥 2016年27期2016-11-30
- 綠色熒光蛋白基因與hERG基因G604S突變共表達(dá)功能研究
內(nèi)的表達(dá)定位；膜片鉗實驗記錄hERG電流。 結(jié)果 在轉(zhuǎn)染pcDNA3-WT-hERG或pEGFP-WT-hERG的細(xì)胞中，hERG蛋白表達(dá)于胞質(zhì)與胞膜；在轉(zhuǎn)染pcDNA3-G604S-hERG或pEGFP-G604S-hERG的細(xì)胞中，hERG蛋白僅在胞質(zhì)表達(dá)。HEK293細(xì)胞轉(zhuǎn)染pcDNA3-WT-hERG后，hERG電流的最大尾電流密度為(75.4±2.2)pA/pF，明顯高于轉(zhuǎn)染pEGFP-WT-hERG的最大尾電流密度[(15.1±0.7)pA/p
山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 2016年9期2016-10-29
- 鈣激活氯通道密度調(diào)節(jié)Anoctam in 1電流作用的研究
6 h獲得。膜片鉗方法檢測鈣離子激活的Ano1的全細(xì)胞電流。激活電流曲線以指數(shù)曲線擬合。結(jié)果Ano1質(zhì)粒表達(dá)6 h的電流密度顯著低于表達(dá)24 h的電流密度（P＜0.05）。在低CaCCs密度時，Ano1的激活電流曲線最適于用單指數(shù)擬合，τslow為（292.71±38.11）ms。在高CaCCs密度時，Ano1的激活電流曲線最適于用兩指數(shù)擬合，τfast為（47.78±4.58）ms；τslow為（385.74± 71.44）ms。高CaCCs密度下的A
中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 2016年4期2016-10-11
- M3受體激動劑對急性缺血性心肌的保護作用*
血環(huán)境，全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄L-型鈣電流(ICa-L)變化；激光掃描共聚焦技術(shù)觀測細(xì)胞內(nèi)鈣變化，探討膽堿對細(xì)胞內(nèi)鈣及鈣庫的影響。結(jié)果在膜片鉗實驗結(jié)果顯示，與正常組比較， 缺血組ICa-L電流密度明顯增高，應(yīng)用膽堿后ICa-L下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P[關(guān)鍵詞]心肌缺血；膽堿；L-型鈣電流；膜片鉗；激光掃描共聚焦心臟是人體的重要器官，維持全身血液的供應(yīng)，心肌缺血及梗死都存在局部供血和代謝障礙，缺血時的細(xì)胞外體內(nèi)微環(huán)境改變主要是酸性代謝產(chǎn)物排出困難，從而造成堆
重慶醫(yī)學(xué) 2016年17期2016-07-15
- 蛇床子素對大鼠心室肌細(xì)胞鈉通道的影響
離和處理。應(yīng)用膜片鉗技術(shù)，觀察給予不同濃度蛇床子素(Ost)后鈉離子通道電流特征的變化。結(jié)果Ost(>100 μmol/L)能明顯抑制鈉電流，其作用呈濃度依賴性(500 μmol/L幾乎完全阻斷)和時間依賴性(10 min左右抑制力達(dá)到最強)。100 μmol/L和300 μmol/L Ost使鈉電流I-V曲線明顯上移，峰值鈉電流(-29.8±4.21) pA/pF分別降為(-20.1±3.7) pA/pF和 (-17.7±5.7 ) pA/pF (P關(guān)鍵
實用臨床醫(yī)藥雜志 2016年7期2016-05-13
- 膜片鉗技術(shù)簡述
610041)膜片鉗技術(shù)簡述管一世(成都體育學(xué)院 四川 成都 610041)80年代初發(fā)展起來的膜片鉗技術(shù)(patchclamptechnique)為了解生物膜離子單通道的門控動力學(xué)特征及通透性、選擇性膜信息提供了最直接的手段。該技術(shù)的興起與應(yīng)用，使人們不僅對生物體的電現(xiàn)象和其他生命現(xiàn)象更進一步的了解，而且對于疾病和藥物作用的認(rèn)識也不斷的更新，同時還形成了許多病因?qū)W與藥理學(xué)方面的新觀點。膜片鉗;細(xì)胞;膜電位;膜片構(gòu)型;通道一、 膜片鉗技術(shù)的基本原理用一個尖
福建質(zhì)量管理 2016年13期2016-04-17
- 全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)在神經(jīng)元鈣通道藥理研究中的應(yīng)用
01)?全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)在神經(jīng)元鈣通道藥理研究中的應(yīng)用林智穎,張靜,黃天文,陳曉春(福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院，福建省老年醫(yī)學(xué)研究所，福建省神經(jīng)生物學(xué)研究中心，福建 福州350001)全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)是研究離子通道和藥物對離子通道影響的最重要的技術(shù)之一，但是由于其對實驗技術(shù)要求高，對實驗標(biāo)本制備和實驗環(huán)境、實驗用溶液等條件均有嚴(yán)格要求等原因致使其在實際運用中較為困難。本文報告了運用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)進行神經(jīng)元鈣通道藥理研究的一些經(jīng)驗。1 材料與方法1.1材料1
中國藥理學(xué)通報 2016年9期2016-01-31
- 丙泊酚對大鼠S1區(qū)錐體神經(jīng)元電壓門控鈉離子通道及動作電位的影響
片，采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)測定電流及電壓。加入不同濃度（10、30、100、300 μmol/L）丙泊酚，記錄各組神經(jīng)元鈉電流（INa），繪制電流電壓（IV）曲線、穩(wěn)態(tài)激活曲線、穩(wěn)態(tài)失活曲線及去失活曲線并計算相關(guān)參數(shù)。向神經(jīng)元施加幅度50 pA、刺激時程30 ms的去極化刺激電流，記錄各組神經(jīng)元動作電位。結(jié)果：丙泊酚呈濃度依賴性抑制大鼠S1區(qū)神經(jīng)元電壓門控性INa，加快鈉通道的失活過程，使穩(wěn)態(tài)失活曲線向超極化方向移動，延緩鈉通道失活后的恢復(fù)，但并不影響鈉通道
溫州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 2015年12期2015-10-13
- 大鼠心室肌細(xì)胞膜片鉗技術(shù)研究生實驗設(shè)計
大鼠心室肌細(xì)胞膜片鉗技術(shù)研究生實驗設(shè)計范 茁, 吳振強 (華南理工大學(xué) 生物科學(xué)與工程學(xué)院,廣東 廣州 510006)面向生物學(xué)科碩士研究生開設(shè)細(xì)胞電生理實驗可彌補高校細(xì)胞電生理實驗教學(xué)領(lǐng)域的空缺，使學(xué)生更好掌握細(xì)胞電生理理論知識。論文詳細(xì)闡述了依托于膜片鉗實驗技術(shù)、以大鼠心室肌細(xì)胞動作電位為主要研究對象的細(xì)胞電生理實驗課程的具體實驗內(nèi)容，相關(guān)的實驗方法和實驗結(jié)果。記錄大鼠心室肌細(xì)胞的動作電位、三種主要成分(Na+、K+和Ca2+)離子電流的分離可以使學(xué)生
實驗室研究與探索 2015年2期2015-02-27
- 激活視網(wǎng)膜水平細(xì)胞NMDA受體抑制內(nèi)向整流鉀通道活動
膜水平細(xì)胞進行膜片鉗全細(xì)胞記錄，在給藥激活NMDA受體前后，分別記錄內(nèi)向整流鉀通道的電流大?。涣硗庠跓o鈣及螯合胞內(nèi)鈣條件下，觀察NMDA受體對內(nèi)向整流鉀通道的作用。結(jié)果 激活NMDA受體后，內(nèi)向整流鉀通道電流減小，灌流洗脫后電流恢復(fù)；在無鈣和螯合胞內(nèi)鈣的條件下，激活NMDA受體不能改變內(nèi)向整流鉀通道活動。結(jié)論 激活視網(wǎng)膜水平細(xì)胞NMDA受體可以通過胞內(nèi)鈣信號抑制內(nèi)向整流鉀通道電流。關(guān)鍵詞：視網(wǎng)膜；內(nèi)向整流鉀通道；鈣，胞內(nèi)鈣庫；NMDA受體；膜片鉗網(wǎng)絡(luò)出版時
中國藥理學(xué)通報 2015年10期2015-02-26
- 楊梅黃酮對炎性痛大鼠的外周鎮(zhèn)痛作用
；背根神經(jīng)節(jié)；膜片鉗網(wǎng)絡(luò)出版時間：2015－7－22 10：42 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／34．1086．R．20150727．0901．019．html疼痛是身體和內(nèi)臟受到損害的警報信號，是許多疾病的共同癥狀，不僅給病人帶來痛苦，而且嚴(yán)重的疼痛可以產(chǎn)生疼痛性休克，威脅病人生命。因此，開發(fā)高效、低毒的鎮(zhèn)痛藥一直受到國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界的關(guān)注。楊梅黃酮（myricetin）是從常綠灌木楊梅的葉子中提取的黃酮類化合
中國藥理學(xué)通報 2015年8期2015-02-26
- 血管內(nèi)皮TRPP2/TRPV4通道復(fù)合體參與調(diào)節(jié)鹽敏感性高血壓大鼠血管內(nèi)皮功能*
利用血管開放式膜片鉗，觀察高鹽飲食是否影響MAECs上TRPP2/TRPV4活性;利用分子生物學(xué)和膜片鉗體外觀察高鹽和醛固酮對該復(fù)合體的影響。結(jié)果: TRPP2/TRPV4在MAECs上天然定位，并介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞NO產(chǎn)生;在SS鼠中，高鹽導(dǎo)致該通道活性和表達(dá)降低;體外實驗證明高鹽和醛固酮均抑制TRPP2/TRPV4活性。結(jié)論:在鹽敏感高血壓發(fā)展過程中，MAECs上TRPP2/TRPV4通道活性和表達(dá)下降，其機制可能是由高鹽和醛固酮協(xié)同介導(dǎo)。國家自然科學(xué)基金資
中國病理生理雜志 2015年10期2015-01-26
- 穿孔膜片鉗記錄腸系膜動脈平滑肌細(xì)胞大電導(dǎo)鈣激活鉀通道方法初探
們用常規(guī)全細(xì)胞膜片鉗記錄BKCa和由其開放所介導(dǎo)產(chǎn)生的自發(fā)性瞬時外向電流（spontaneous transient outward currents，STOCs）時，發(fā)現(xiàn)隨著時間的推移，BKCa宏觀電流的幅度越來越小且STOCs 很難記錄到，或在很短時間內(nèi)STOCs就完全自行消失，這可能是電極液和細(xì)胞內(nèi)液相互滲透，造成胞質(zhì)內(nèi)容物被稀釋，特別是維持離子通道功能和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的物質(zhì)被吸到電極內(nèi)，改變了細(xì)胞內(nèi)鈣緩沖能力［1-2］。這極大地局限了我們對細(xì)胞內(nèi)局部自發(fā)
西南軍醫(yī) 2014年3期2014-11-26
- 研究生細(xì)胞電生理實驗課設(shè)計與實踐
由于其所依托的膜片鉗實驗系統(tǒng)價格相對昂貴，操作精細(xì)、復(fù)雜，主要服務(wù)于科研領(lǐng)域，一直是高校生物學(xué)科實驗教學(xué)領(lǐng)域的空缺。本文將根據(jù)華南理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院現(xiàn)有的教學(xué)和科研條件，闡述利用膜片鉗技術(shù)為生物學(xué)科研究生開設(shè)細(xì)胞電生理學(xué)實驗課程的必要性和可行性，并對課程的內(nèi)容、設(shè)置及考核方式進行詳細(xì)的探討。1 為生物學(xué)科研究生開設(shè)細(xì)胞電生理學(xué)實驗課程的必要性細(xì)胞電生理是組織及機體電生理現(xiàn)象的基礎(chǔ)，因為難以檢測使之變得更抽象、更難理解。任何一個學(xué)科，尤其是生物學(xué)科，
實驗技術(shù)與管理 2014年12期2014-04-10
- 小鼠胰腺腺泡細(xì)胞鈣振蕩的激光共聚焦成像研究方法*
要是利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，記錄在細(xì)胞外液中加入興奮劑（如ACh）后胞漿Ca2＋濃度變化所激活的Cl-通道電流，通過Cl-通道電流間接反映 PACCOs的情況［4］。直接法：利用鈣熒光指示劑與胞內(nèi)Ca2＋結(jié)合后在相應(yīng)波長的激發(fā)光作用下可發(fā)出特定波長的熒光的特點，通過熒光顯微鏡、激光共聚焦掃描顯微鏡（laser scanning confocalmicroscope，LSCM）或雙光子顯微鏡等儀器檢測興奮劑作用后引起的鈣熒光變化，直接研究 PACCOs［1，3
中國應(yīng)用生理學(xué)雜志 2014年4期2014-01-23
- Amphotericin B在全細(xì)胞穿孔膜片鉗技術(shù)中的應(yīng)用研究*
，付崇羅常規(guī)的膜片鉗技術(shù)采用負(fù)壓抽吸或電擊破膜形成全細(xì)胞模式。在此過程中，電極內(nèi)液和細(xì)胞內(nèi)液之間的擴散交換常使一些受胞內(nèi)物質(zhì)調(diào)控的通道電流出現(xiàn)時間依賴性的衰減。1988年Horn等［1］對傳統(tǒng)全細(xì)胞記錄進行了改進，建立了穿孔膜片鉗技術(shù)（perforated-patch clamp）：即利用某些抗生素具有在生物膜上形成通透性孔道的性質(zhì)，將這類抗生素充灌在電極液中，在高阻封接形成之后自發(fā)性形成的全細(xì)胞模式。海德氏突觸（calyx）位于哺乳動物聽覺腦干斜方體中核
中國應(yīng)用生理學(xué)雜志 2014年1期2014-01-22
- 大鼠海馬神經(jīng)元癲癇樣放電模型的構(gòu)建
h，應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄海馬神經(jīng)元的放電情況。結(jié)果在培養(yǎng)第12天時，神經(jīng)元突起間彼此接觸形成神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。在“無鎂細(xì)胞外液”處理3 h后神經(jīng)元產(chǎn)生穩(wěn)定的放電，恢復(fù)正常細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h，神經(jīng)元仍可檢測到自發(fā)的“癲癇樣放電”。結(jié)論體外培養(yǎng)第12天海馬神經(jīng)元，在“無鎂細(xì)胞外液”處理后可形成穩(wěn)定的自發(fā)性癲癇樣放電，為今后在細(xì)胞分子水平研究癲癇發(fā)病機制提供了一種理想模型。海馬;神經(jīng)元;膜片鉗;癲癇樣放電;動作電位;原代培養(yǎng)藥物難治性癲癇是神經(jīng)科常見病之一，其發(fā)
河北醫(yī)藥 2014年14期2014-01-19
- 探索應(yīng)用于膜片鉗研究的腦片制備方法
13)有關(guān)腦片膜片鉗技術(shù)最早可追溯至1985年，美國的Gray和Johnston采用酶解撕裂法對豚鼠海馬腦片GABA受體通道進行了研究。而將膜片鉗技術(shù)成熟地應(yīng)用于離體腦片神經(jīng)元則是1989年，德國馬普研究所Edwards、Sakmann和日本京都大學(xué)Takahashi首次將微分干涉相差技術(shù)應(yīng)用到膜片鉗技術(shù)領(lǐng)域，并對大鼠(海馬，視皮層，嗅球，小腦，額葉皮層和脊髓等)、小鼠(海馬)、貓(視皮層)神經(jīng)元離子通道特點進行了廣泛研究。近年來隨著膜片鉗技術(shù)的日益成熟，
吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報 2013年5期2013-10-10
- 大鼠心室肌細(xì)胞單通道鈣電流的記錄及其電生理學(xué)特性分析
域的研究熱點。膜片鉗技術(shù)是研究離子通道的主要技術(shù)，共有4種基本記錄模式。由于L-型鈣通道電導(dǎo)小，大多實驗室都采用全細(xì)胞記錄模式研究整個細(xì)胞中L-型鈣通道的作用，但是單通道記錄模式可以使我們了解到L-型鈣通道的門控機制、通道性質(zhì)與結(jié)構(gòu)關(guān)系、細(xì)胞內(nèi)通道信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)過程等，其中細(xì)胞貼附式記錄模式可用于檢測離子通道的特性，內(nèi)膜外記錄模式可以便于更換細(xì)胞內(nèi)液，適于研究離子通道的細(xì)胞內(nèi)成分的效應(yīng)［6］。所以確立穩(wěn)定的心室肌細(xì)胞的膜片鉗單通道的記錄模式尤為重要。本研究在以
中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 2013年3期2013-09-07
- 大鼠心室肌細(xì)胞的分離及其單通道鈣電流的記錄
室肌細(xì)胞，應(yīng)用膜片鉗制技術(shù)單通道模式記錄大鼠心室肌細(xì)胞的鈣電流，并進行膜片鉗電生理學(xué)研究.心室肌細(xì)胞；膜片鉗；單通道；鈣電流記錄細(xì)胞的電活動是生命活動的基礎(chǔ)，而這些電活動則是通過細(xì)胞膜離子通道而實現(xiàn)的[1]，離子通道的基本功能是通過維持離子的跨膜運動，產(chǎn)生生物電現(xiàn)象而完成的.因此研究膜離子通道的通透機制及各種離子通透性的變化對闡明細(xì)胞生物電現(xiàn)象和其他生命現(xiàn)象的機制具有重要的理論意義和應(yīng)用價值[2].德國生理學(xué)家Neher和Sakmann（1976）[3]首
赤峰學(xué)院學(xué)報·自然科學(xué)版 2013年12期2013-07-13
- 肺癌干細(xì)胞中存在容積激活氯通道*
上機檢測。2 膜片鉗記錄電流采用全細(xì)胞膜片鉗記錄方法，應(yīng)用膜片鉗放大器(HEKA，EPC－9，German)和 PULSE軟件(HEKA，Lambrecht，German)在電壓鉗制狀態(tài)下記錄CSCs上的容積激活氯電流。吸取細(xì)胞液少許，加入1 mL細(xì)胞池內(nèi)，該細(xì)胞不易貼壁，故待細(xì)胞沉底行封接后，再以細(xì)胞外液灌流。玻璃電極(外徑1．2 mm)經(jīng)微電極拉制儀分二步拉制而成，充灌電極內(nèi)液進入細(xì)胞外液后阻抗為2．0～3．0 MΩ。電極接觸細(xì)胞前補償液接電位，輕施負(fù)
中國病理生理雜志 2012年5期2012-11-13
- 膜片鉗技術(shù)在高血壓研究中的應(yīng)用1）
楊 沙，王 舒膜片鉗技術(shù)（patch－clamp technique）是1976年由Nehetr和Sakroann在電壓鉗的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的一種記錄細(xì)胞膜離子通道電生理活動的技術(shù)。通過微電機與細(xì)胞膜之間形成緊密接觸，采用電壓鉗或電流鉗技術(shù)對生物膜上離子通道的電活動進行記錄。膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用將細(xì)胞水平和分子水平的生理學(xué)研究聯(lián)系在一起，已成為現(xiàn)代細(xì)胞電生理研究的常規(guī)方法，使人們對于疾病和藥物作用的認(rèn)識不斷更新。膜片鉗技術(shù)用于心血管領(lǐng)域的研究也越來越多。本文擬對
中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志 2012年1期2012-08-15
- 慢性缺氧時足細(xì)胞上調(diào)β4-亞基而抑制BKCa通道的活性
清楚。本文通過膜片鉗技術(shù)檢測到足細(xì)胞暴露于2%的O224 h后，可以引起明顯的BKCa通道電流的降低。分子生物學(xué)實驗表明，慢性缺氧提高了BKCa通道β4-亞基mRNA和蛋白的表達(dá)，但是未提高與孔道形成有關(guān)的α-亞基或β3-亞基mRNA和蛋白的表達(dá)。同時，慢性缺氧使通道激活移向去極化方向，并降低其激活動力學(xué)，產(chǎn)生類似于β4-亞基的特性。本文結(jié)果表明BKCa通道通過上調(diào)β4-亞基的表達(dá)量，參與足細(xì)胞對慢性缺氧的應(yīng)答反應(yīng)。這些發(fā)現(xiàn)為研究足細(xì)胞對缺氧的細(xì)胞學(xué)反應(yīng)機
天津醫(yī)藥 2012年8期2012-08-15
- 新生大鼠海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)及膜片鉗全細(xì)胞記錄＊
速發(fā)展，特別是膜片鉗技術(shù)在神經(jīng)學(xué)科的應(yīng)用以來，對原代培養(yǎng)的神經(jīng)元狀態(tài)要求越來越高，本實驗在參照文獻［1－4］的培養(yǎng)方法基礎(chǔ)上稍作改進，培養(yǎng)出細(xì)胞膜上各離子通道功能良好的且適應(yīng)于膜片鉗全細(xì)胞記錄的海馬神經(jīng)元，現(xiàn)報道如下。1 材料與方法1.1材料1.1.1動物與主要實驗儀器 1d內(nèi)新生Wistar大鼠購自重慶醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心；SW－CJ－2FD型超凈工作臺購自蘇凈集團安泰公司，細(xì)胞培養(yǎng)箱購自美國Thenno Fonna，細(xì)胞培養(yǎng)板購自美國Costar，TE
重慶醫(yī)學(xué) 2012年31期2012-06-29
- 豚鼠心肌細(xì)胞中Kir2.1對內(nèi)向整流鉀電流組成的貢獻
1.3 儀器 膜片鉗放大器Axon 200B為美國Axon公司產(chǎn)品;電極拉制器和三位操縱器均為Sutter公司產(chǎn)品;倒置顯微鏡TE2000-S為Nikon公司產(chǎn)品。1.4 方法 豚鼠心肌細(xì)胞的急性分離:將豚鼠麻醉后快速開胸取出心臟，至于冰無鈣臺式液中進行主動脈插管，連于Langendorff灌流裝置上，進行恒壓恒溫逆行灌流。灌流液溫度37℃，流速7 ml/min，用前用100%O2飽和。先用無鈣臺氏液灌流5 min，沖洗心臟中殘留的血液，然后灌以含12 m
河北醫(yī)藥 2011年13期2011-07-16
- 穿孔膜片鉗方法記錄L型鈣通道及脫氫紫堇堿對其影響的研究
)在采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)對L型鈣通道電流記錄時，L型鈣通道電流會發(fā)生隨時間的經(jīng)過而逐漸減小的“rundown”現(xiàn)象，對觀察藥物對L型鈣通道效應(yīng)造成很大影響。而穿孔的膜片鉗方法的使用減少了“rundown”現(xiàn)象的發(fā)生。此文比較了全細(xì)胞膜片鉗和穿孔膜片鉗方法記錄L型鈣通道電流隨時間經(jīng)過的變化差異，并觀察了脫氫紫堇堿(dehydrocorydaline，DHC)對L型鈣通道的影響。1 材料與方法1.1心室肌細(xì)胞的分離采用急性酶分法獲得單個心室肌細(xì)胞［1］。1.2
中國藥理學(xué)通報 2011年8期2011-05-31
- Ouabain對髓袢升支粗段管周膜50pS鉀通道活性的影響
實驗利用單通道膜片鉗技術(shù)，觀察鈉－鉀泵抑制劑ouabain對髓袢升支粗段管周膜50pS鉀通道活動的影響，探討50pS鉀通道是否在功能上與鈉－鉀泵偶聯(lián)。1 材料與方法1.1 腎小管的分離 SD大鼠，體質(zhì)量70～120 g，♀♂不拘。由徐州醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。大鼠經(jīng)10%的水合氯醛(400 mg·kg－1)腹腔麻醉后，立即打開腹腔取出腎臟，去除包膜，從腎臟的中間部分用刀片切出厚約0.5～1 mm的冠狀切片，浸入濃度為1 g·L－1膠原酶溶液，放進37℃恒溫
中國藥理學(xué)通報 2011年1期2011-02-10
- 急性分離大鼠皮層神經(jīng)元的方法與體會
動的主要方法是膜片鉗技術(shù)，而獲得活力好的神經(jīng)元便成為應(yīng)用膜片鉗技術(shù)的重要先決條件。許多離子通道研究是需要單個分散的神經(jīng)元，人工培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞易受培養(yǎng)環(huán)境的影響，自身特性改變較大，而急性分離的細(xì)胞卻能相對保持完好的生理特性[1-3]。筆者結(jié)合文獻并加以改進，摸索出一種簡便易行的適用于全細(xì)胞膜片鉗研究的大鼠頂葉皮層神經(jīng)元急性分離方法，現(xiàn)報道如下：1 材料與方法1.1 實驗動物Wistar大鼠，10～16 d，雌雄不限，由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬二院動物研究中心提供。
中國醫(yī)藥導(dǎo)報 2011年18期2011-01-30
- ＊ 基于小波包分解的細(xì)胞膜離子電流重構(gòu)
)級離子電流,膜片鉗技術(shù)可以記錄到離子電流信號.在膜片鉗測量系統(tǒng)中,通常采用閾值檢測方法消除噪聲,由于該方法不僅需要人為設(shè)定閾值,并且在信噪比較低(SNR＜5.0)時,電流恢復(fù)誤差不能滿足膜片鉗測量系統(tǒng)的精度要求.基于隱馬爾可夫模型(HMM)的離子單通道電流恢復(fù)是在強噪聲背景下,從膜片鉗記錄中得到理想化通道電流的一種有效方法[1].然而,HMM算法中的狀態(tài)重估公式只有在確知通道狀態(tài)數(shù)目的條件下才能應(yīng)用,在強背景噪聲下,這一先驗知識往往很難獲得,并且 HMM
山西大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版） 2011年1期2011-01-11
- ATP對髓袢升支粗段管周膜50pS鉀通道的調(diào)節(jié)
實驗利用單通道膜片鉗技術(shù)，觀察ATP對髓袢升支粗段管周膜50 pS鉀通道活動的影響，進一步闡明髓袢升支粗段對NaCl的重吸收機制，為開發(fā)新的高效、安全利尿藥提供理論依據(jù)。1 材料與方法1.1 腎小管的分離 健康SD(Sprague-Dawley)大鼠，體質(zhì)量70～100 g，♀♂不限。由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)第二臨床學(xué)院實驗動物中心提供。大鼠在頸關(guān)節(jié)脫位后，立即打開腹腔取出腎臟，去除包膜，從腎臟的中間部分用刀片切出厚0.5～1 mm的冠狀切片，浸入濃度為1 g·L
中國藥理學(xué)通報 2010年10期2010-06-09
- 豚鼠心室肌細(xì)胞的分離及其基本電生理特性的觀察
代［1］，隨著膜片鉗制技術(shù)的發(fā)展及其在心肌細(xì)胞上的應(yīng)用，特別是以鈣離子內(nèi)流為主的慢內(nèi)向電流的發(fā)現(xiàn)，帶動了心肌電生理學(xué)的進一步深入發(fā)展。心肌細(xì)胞動作電位的研究是心肌電生理學(xué)研究必要的第一步。1964年Trautwein第一次用雙電極電壓鉗制技術(shù)在犬的Purkinje纖維上記錄出了心肌細(xì)胞的離子流，Hamill等［2］改進了Neher和Sakmann的膜片鉗技術(shù)［3］，使其能夠適用于心肌細(xì)胞電流的記錄，20世紀(jì)80年代研究者發(fā)現(xiàn)并闡明了心肌細(xì)胞各種主要離子流的
中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 2010年4期2010-05-25
- 三種實用而簡單的急性酶分離動脈平滑肌細(xì)胞的方法＊
研究,常應(yīng)用到膜片鉗技術(shù)、共聚焦顯微技術(shù)、胞內(nèi)物質(zhì)的測定、流式細(xì)胞儀技術(shù)等研究領(lǐng)域。這些研究對單個細(xì)胞的要求都非常高,需要細(xì)胞獲取率高、活性好、膜光滑、膜的折光性好。而影響急性酶分離法的關(guān)鍵因素在于控制酶的濃度、消化時間、消化溫度等。那怎么樣才能獲取單個的高質(zhì)量的動脈平滑肌細(xì)胞呢?現(xiàn)就筆者從事多年的動脈平滑肌細(xì)胞的研究工作的經(jīng)驗,以單個人體腸系膜動脈平滑肌細(xì)胞應(yīng)用于膜片鉗技術(shù)中為例,介紹幾種實用的急性酶分離動脈平滑肌細(xì)胞的方法,以供大家參考。1 材料與方法
四川生理科學(xué)雜志 2010年4期2010-05-07
- 慢性房顫患者心肌瞬時外向鉀通道電流密度變化
耳。采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)研究心房肌瞬時外向鉀通道電流密度的變化。結(jié)果 慢性心房顫動患者心房肌瞬時外向鉀通道電流密度降低，在測試電位-20 mV以上各電位水平時均有顯著性差異(n=16，P【關(guān)鍵詞】瞬時外向鉀通道；膜片鉗；人體心房肌細(xì)胞；心房顫動心房顫動是一種常見的慢性心律失常，60歲以上人群中的發(fā)病率為2%~4%，隨著人口的老齡化，心房顫動變得更加常見[1]。心房有效不應(yīng)期的縮短[2-4]和折返環(huán)的存在[5-7]在心房顫動中起重要作用。瞬時外向鉀通道電流(
中國實用醫(yī)藥 2009年3期2009-02-19