大黃真?zhèn)舞b定與質(zhì)量控制方法研究進(jìn)展

陳敏 王靜 林祥杰 姚金劍 張波 王曉

摘 要 目的：為大黃的臨床用藥安全、真?zhèn)舞b別提供參考。方法：以“大黃”“唐古特大黃”“掌葉大黃”“藥用大黃”“大黃屬”“酸模屬”“鑒定”“質(zhì)量控制”“質(zhì)量評(píng)價(jià)”“安全性評(píng)價(jià)”“Rhei Radix et Rhizoma” “Rheum tanguticum Maxim. ex Balf.”“Rheum palmatum L.”“Rheum officinale Baill.”“Rheum”“Rumex”“Rhubarb”“Identification”“Quality control” “Quality evaluation”“Safety evaluation”等為關(guān)鍵詞，在中國知網(wǎng)、萬方數(shù)據(jù)、維普網(wǎng)、ScienceDirect、PubMed、Web of Science等數(shù)據(jù)庫中單獨(dú)或組合查詢1999年1月-2019年1月發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)大黃的真?zhèn)舞b定、質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)方法作一綜述。結(jié)果與結(jié)論：共檢索到相關(guān)文獻(xiàn)4 223篇，其中有效文獻(xiàn)57篇。大黃真?zhèn)舞b定方法主要有性狀鑒別、顯微鑒別、薄層色譜鑒別、分子鑒別等方法，性狀、顯微、薄層色譜鑒別方法均具有簡便、快速、不依賴儀器設(shè)備、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，其不足之處在于性狀鑒別和顯微鑒別結(jié)果客觀性偏弱，薄層色譜鑒別對(duì)摻偽樣品的鑒別能力較弱;分子鑒別雖技術(shù)水平高、準(zhǔn)確性及客觀性強(qiáng)、適用性廣，但如何降低其檢測(cè)成本、簡化操作是亟須解決的問題;質(zhì)量控制方法主要有光譜測(cè)定技術(shù)、色譜及色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)、毛細(xì)管電泳技術(shù)、一測(cè)多評(píng)技術(shù)、指紋圖譜技術(shù)、免疫檢測(cè)技術(shù)等，色譜法、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、毛細(xì)管電泳技術(shù)、一測(cè)多評(píng)技術(shù)、免疫檢測(cè)法等均是以1種或少數(shù)幾種中藥有效成分為出發(fā)點(diǎn)而建立的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，方法準(zhǔn)確可靠、科學(xué)性強(qiáng)，但較光譜法和指紋圖譜法等以成分群或藥材整體來評(píng)價(jià)藥材質(zhì)量的方法則略顯片面;安全性評(píng)價(jià)主要包括電感耦合技術(shù)測(cè)定重金屬含量，以氣相色譜法測(cè)定農(nóng)藥殘留。

關(guān)鍵詞 大黃;鑒定;質(zhì)量控制;質(zhì)量評(píng)價(jià);安全性評(píng)價(jià)

大黃（Rhei Radix et Rhizoma）為蓼科植物掌葉大黃（Rheum palmatum L.）、唐古特大黃（R. tanguticum Maxim. ex Balf.）或藥用大黃（R. officinale Baill.）的干燥根和根莖，是我國傳統(tǒng)四大中藥之一。大黃具有瀉下、抗菌、抗炎、降脂、保肝、利膽、利尿、抗凝血、抗氧化、抗腫瘤、預(yù)防慢性腎衰竭、治療肥胖性疾病等多種藥理作用，臨床應(yīng)用十分廣泛[1]。

大黃具有重要的藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，市場流通量大，且屬于出口較多的大宗藥材之一。但由于大黃為多基源植物，且與同屬和酸模屬多種植物在性狀及顯微特征上較為相似，致使當(dāng)前市場上大黃的品種混亂且有部分偽品出現(xiàn)。此外，大黃多為人工栽培，栽培環(huán)境差異、生長年限不同、原植物品種不同等多種因素亦導(dǎo)致其質(zhì)量參差不齊[2]。大黃主要含有蒽醌類、蒽酮類、鞣質(zhì)類、二苯乙烯類、苯丁酮類、有機(jī)酸類及多糖類等多種化學(xué)成分[3]，其中我國藥典以蒽醌類成分總量作為大黃質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)，而日本藥典及韓國藥典則以番瀉苷A作為質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)性成分[4-6]。大黃國際間的質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)不一致，給大黃藥材的國際貿(mào)易帶來較多不便。為此，本研究以“大黃”“唐古特大黃”“掌葉大黃”“藥用大黃”“大黃屬”“酸模屬”“鑒定”“質(zhì)量控制”“質(zhì)量評(píng)價(jià)”“安全性評(píng)價(jià)”“Rhei Radix et Rhizoma”“Rheum tanguticum Maxim. ex Balf.”“Rheum palmatum L.”“Rheum officinale Baill.”“Rheum”“Rumex”“Rhubarb” “Identification”“Quality control” “Quality evaluation”“Safety evaluation”等為關(guān)鍵詞，在中國知網(wǎng)、萬方數(shù)據(jù)、維普網(wǎng)、ScienceDirect、PubMed、Web of Science等數(shù)據(jù)庫中單獨(dú)或組合查詢1999年1月-2019年1月發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)。結(jié)果，共檢索到相關(guān)文獻(xiàn)4 223篇，其中有效文獻(xiàn)57篇?，F(xiàn)對(duì)大黃的真?zhèn)舞b定、質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)方法作一綜述，旨在為大黃的臨床用藥安全、真?zhèn)舞b別提供參考。

1 真?zhèn)舞b定

大黃為多來源藥用植物，包括掌葉大黃、藥用大黃和唐古特大黃。除此三者之外，蓼科大黃屬及酸模屬多種植物與大黃相似，在個(gè)別地區(qū)存在被誤用的情況，其中包括蓼科植物如河套大黃（R. hotaoense C. Y. Cheng et Kao）、華北大黃（R. franzenbachii Munt.）、藏邊大黃（R. emodii Wall.）和疏枝大黃（R. spiciforme Royle）以及酸模屬植物如尼泊爾酸模（Rumex nepalensis S.）、羊蹄（R. japonicas Houtt.）、巴天酸模（R. patientis L.）、齒果酸模（R. dentatus L.）、長刺酸模（R. maritimus L.）、鈍葉酸模（R. obtusifolius L.）等，以上10種植物的干燥根及根莖均為偽品大黃[7-8]。對(duì)于大黃及其偽品可通過性狀鑒別、顯微鑒別、薄層色譜（TLC）鑒別及分子鑒別等手段進(jìn)行鑒定。

1.1 性狀鑒別

性狀鑒別是對(duì)藥材的多種外在特征進(jìn)行直接觀察，以區(qū)分藥材真?zhèn)蝺?yōu)劣。3種正品大黃和10種常見偽品大黃在性狀上的區(qū)別[9-11]見表1。由表1可見，大黃與偽品大黃在表面顏色、有無星點(diǎn)及氣味強(qiáng)弱等方面均具有一定差異：正品大黃表面呈黃棕色至紅棕色，斷面呈淡紅棕色或黃棕色，根莖髓部有星點(diǎn)、具清香氣味;而偽品大黃表面顏色較深，多為黃灰色、棕灰色或棕褐色，斷面無星點(diǎn)，香氣微弱。性狀鑒別具有簡便易行、鑒別快速的特點(diǎn)，但準(zhǔn)確率及客觀性不佳;再者因栽培地區(qū)氣候、水文、地形等自然環(huán)境因素、原植物種類及栽培技術(shù)的不同，大黃的性狀也存在一定差異，給性狀鑒別增加了一定難度[12]。

1.2 顯微鑒別

顯微鑒別是采用顯微鏡觀察中藥材內(nèi)部組織構(gòu)造、細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)含物的形態(tài)特征來鑒定中藥材的方法，相對(duì)簡便、快速。大量學(xué)者采用顯微鑒別的方法對(duì)正品大黃和偽品大黃進(jìn)行了鑒別[7-12]，本研究就上述10種常見的偽品大黃和3種正品大黃的顯微特征進(jìn)行了總結(jié)與對(duì)比，詳見表2。

此外，丁寧等[13]將草酸鈣簇晶棱角（晶瓣外緣角）的角度值作為中藥顯微鑒定的新參數(shù)進(jìn)行研究，其采用顯微觀察和拍攝技術(shù)獲取中藥大黃的草酸鈣簇晶圖像，并測(cè)量其簇晶棱角的角度值，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，大黃的草酸鈣簇晶棱角的平均角度值為63.04，與其他藥材的簇晶角度有顯著性差異（P<0.05），可作為大黃顯微鑒定新的參考依據(jù)。

1.3 TLC鑒別

TLC是進(jìn)行中藥鑒定的一種常用方法和重要技術(shù)，準(zhǔn)確性和專屬性較強(qiáng)。2015年版《中國藥典》（一部）收錄了以土大黃苷為鑒別指標(biāo)的TLC鑒別方法，展開劑為石油醚（30～60 ℃）-甲酸乙酯-甲酸（15 ∶ 5 ∶ 1，V/V/V）的上層溶液[3]。為獲得更好的檢測(cè)效果，尚磊[14]以土大黃苷為檢測(cè)指標(biāo)，對(duì)提取溶劑、提取方法、薄層展開劑進(jìn)行了優(yōu)化，最終確定提取溶劑為甲醇，以超聲波提取作為供試品溶液制備方法、以苯-甲酸乙酯-甲酸-甲醇（30 ∶ 10 ∶ 0.1 ∶ 15，V/V/V/V）為展開劑，用于河套大黃和華北大黃2種偽品與正品大黃飲片的區(qū)分，效果較好;該研究還對(duì)10批市售大黃飲片進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其中50%有土大黃苷成分，說明市售藥材偽品較多。

1.4 分子鑒定

隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展，分子標(biāo)記技術(shù)已成為中藥學(xué)研究的一項(xiàng)新的技術(shù)手段。DNA分子標(biāo)記技術(shù)是目前中藥分子鑒定的主要形式，為中藥四大鑒定（基源鑒定、性狀鑒別、顯微鑒別和理化鑒別）方法的重要補(bǔ)充。

費(fèi)凌云[15]采用ITS2堿基序列對(duì)中藥大黃及其易混偽品（土大黃、虎杖）原植物進(jìn)行鑒定，通過對(duì)3種藥材rDNA中ITS2堿基序列的擴(kuò)增及分析，成功區(qū)分了大黃與土大黃、虎杖。費(fèi)燁等[16]采用matK基因序列分析技術(shù)對(duì)高山大黃進(jìn)行了分子鑒定研究，結(jié)果表明高山大黃（R. nobile Hook. f. et Thoms）matK基因序列的特異性位點(diǎn)與掌葉組和波葉組大黃存在顯著差異。張曉芹等[17]通過對(duì)大黃正品基源及常用混淆品藥材matK基因序列的差異分析，總結(jié)了大黃正品基源與混淆品的基因型對(duì)應(yīng)規(guī)律，成功鑒別了混淆品與正品的基源，實(shí)現(xiàn)了對(duì)大黃藥材基源品種的鑒定。姬可平等[18]對(duì)大黃種子DNA中rRNA基因內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)進(jìn)行了擴(kuò)增和測(cè)序，其應(yīng)用rRNA基因間隔區(qū)堿基序列分析成功實(shí)現(xiàn)了對(duì)大黃的鑒定。

2 質(zhì)量控制

2015年版《中國藥典》（一部）采用高效液相色譜（HPLC）法，以5種蒽醌類成分的總量（不得少于1.5%）及游離蒽醌的總量（不得少于0.20%）作為含量測(cè)定指標(biāo)用于中藥大黃的質(zhì)量控制[3]。日本藥典與韓國藥典亦采用HPLC法，區(qū)別在于以“番瀉苷A含量不得低于0.25%”作為大黃質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。除HPLC法之外，光譜測(cè)定技術(shù)[如紫外分光光度法、熒光光譜法、近紅外光譜（NIR）法]、色譜及色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（如HPLC-MS）、毛細(xì)管電泳技術(shù)（CE）、一測(cè)多評(píng)技術(shù)（QAMS）、指紋圖譜技術(shù)、免疫檢測(cè)技術(shù)等也被廣泛應(yīng)用于大黃的質(zhì)量控制。

2.1 紫外分光光度法

在中藥成分的含量測(cè)定研究中，光譜法具有專屬性強(qiáng)、靈敏、準(zhǔn)確、快速等優(yōu)勢(shì)。比色法是大黃中總蒽醌、鞣質(zhì)和多糖含量測(cè)定的常用方法之一。魏江存等[19]以大黃素為對(duì)照品，1%醋酸鎂甲醇溶液為顯色劑，用紫外分光光度法對(duì)生大黃和醋大黃中總蒽醌的含量進(jìn)行了測(cè)定，揭示了大黃炮制前后總蒽醌的含量變化。郭東艷等[20]采用紫外分光光度法測(cè)定了大黃炮制前后（即生藥與炭藥）的鞣質(zhì)含量，以磷鉬鎢為顯色劑，干酪素為鞣質(zhì)吸附劑，沒食子酸為對(duì)照品，在760 nm波長處測(cè)定其吸光度，計(jì)算鞣質(zhì)含量。結(jié)果表明，與生藥相比，炮制后鞣質(zhì)含量均有不同程度的降低，該法適用于大黃及其炮制品中鞣質(zhì)含量的測(cè)定。對(duì)于大黃中多糖含量的測(cè)定，何杏等[21]采用水提醇沉法提取大黃多糖，以葡萄糖為對(duì)照品，提取物以硫酸-苯酚顯色后用紫外分光光度計(jì)測(cè)定吸光度，可實(shí)現(xiàn)對(duì)大黃中多糖的快速、準(zhǔn)確定量分析。

2.2 熒光光譜法

大黃中的蒽醌類、鞣質(zhì)類、蘆薈苷類等物質(zhì)多具有熒光特性，可采用熒光分光光度法對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定。于建玉等[22]分別測(cè)定了大黃酸和大黃素的熒光光譜，結(jié)果表明熒光光譜可準(zhǔn)確、清晰地對(duì)大黃成分進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果可作為藥材評(píng)價(jià)的參考。李申麗[23]研究了大黃酚、大黃素甲醚的熒光光譜，建立了直接用溶液熒光法測(cè)定大黃中蘆薈大黃素的分析方法，更為快速、便捷。

2.3 NIR法

NIR技術(shù)是近年來新興的一種綠色分析技術(shù)，具有高效、簡便、無損、環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)。耿炤等[24]通過聲光可調(diào)濾光器-NIR儀對(duì)大黃乙醇提取液比重（密度）及大黃素含量進(jìn)行在線分析，并采用偏最小二乘法分別建立了NIR與含量、比重（密度）的校正模型。結(jié)果，其建立的大黃乙醇提取液NIR校正模型，完成1次比重和含量的測(cè)定只需2 min，大大縮短了測(cè)定時(shí)間。于曉輝等[25]采用NIR和徑向基函數(shù)神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)對(duì)大黃樣品中4類有效成分（蒽醌及其單糖苷類、水溶性蒽苷類、芪苷類、鞣質(zhì)）的含量進(jìn)行了定量預(yù)測(cè)，結(jié)果表明該法作為中藥材復(fù)雜體系中化學(xué)組分定量測(cè)定的方法，可同時(shí)對(duì)多種組分進(jìn)行檢測(cè)。范積平等[26]通過HPLC法測(cè)定了3個(gè)不同產(chǎn)地大黃中大黃素、大黃酸、大黃酚、蘆薈大黃素的含量，用41個(gè)樣品建立了NIR法校正方程，并預(yù)測(cè)了大黃樣品中各上述活性成分的含量，結(jié)果其建立的大黃蒽醌類化合物含量測(cè)定方法可實(shí)現(xiàn)對(duì)大黃指標(biāo)性成分含量的定量分析，且簡便、快速。

2.4 HPLC法

HPLC法具有靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度和自動(dòng)化程序高、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)，是近年來大黃分析研究中應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)方法。劉遠(yuǎn)平等[27]采用HPLC法對(duì)四川、陜西、云南三地產(chǎn)藥用大黃中大黃素、大黃酸、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚等5種游離蒽醌類成分的含量進(jìn)行測(cè)定，以評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地藥用大黃的質(zhì)量。結(jié)果，四川產(chǎn)藥用大黃的大黃酸、大黃酚和蘆薈大黃素的含量比云南與陜西的高，云南產(chǎn)的蘆薈大黃素與大黃素的含量較高，該法可為大黃藥材在實(shí)際生產(chǎn)和臨床應(yīng)用中的選擇提供參考。

程小麗等[28]采用Agilent Zorbax SB-C18色譜柱，以0.05%磷酸-水-乙腈為流動(dòng)相梯度洗脫、柱溫40 ℃、檢測(cè)波長280 nm、檢測(cè)時(shí)間100 min為色譜條件，建立了反相高效液相色譜-二級(jí)管陣列檢測(cè)器（RP-HPLC-DAD）法以同時(shí)測(cè)定大黃中9種有效成分含量的方法，其中包括5種游離蒽醌類成分、番瀉苷A和B、沒食子酸及兒茶素等。該方法重復(fù)性好、結(jié)果準(zhǔn)確，為以蒽醌類成分和番瀉苷A為指標(biāo)的大黃質(zhì)量評(píng)價(jià)方法提供了新的手段。

2.5 液-質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）法

LC-MS是一種以液相色譜作為分離系統(tǒng)、質(zhì)譜作為檢測(cè)系統(tǒng)的分析技術(shù)，具有高靈敏度、高選擇性、高穩(wěn)定性及高通量的特點(diǎn)，特別適合于中藥復(fù)雜成分及其代謝物的定性定量分析。蔣海強(qiáng)等[29]采用HPLC-MS技術(shù)對(duì)大黃的主要化學(xué)成分進(jìn)行了分離鑒定與結(jié)構(gòu)解析，結(jié)果共鑒別出25種化學(xué)成分，主要是鞣質(zhì)類、蒽醌及其苷類化合物，表明HPLC-MS法可作為中藥大黃化學(xué)成分的鑒定方法。王晴等[30]采用超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（UPLC-Q-TOF/MSE）結(jié)合診斷離子過濾法對(duì)掌葉大黃中的酚類成分進(jìn)行了快速分析鑒定，結(jié)果共鑒定出63個(gè)成分，其中包括36個(gè)簡單酚酸類化合物、8個(gè)類黃酮類化合物和19個(gè)鞣質(zhì)類化合物，其中6個(gè)為潛在的新化合物，進(jìn)一步完善了大黃的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)信息。

2.6 CE法

CE法擁有電泳和色譜技術(shù)的雙重優(yōu)點(diǎn)，且具有分離快速、效率高、進(jìn)樣體積小、靈敏性高、成本低等特點(diǎn)。曾雪等[31]采用CE法分離測(cè)定了大黃提取物中大黃素、大黃酚和大黃酸的含量，通過加入β-環(huán)糊精和調(diào)節(jié)緩沖溶液pH實(shí)現(xiàn)了更高的分離效率，且分析速度更快。鄭文捷等[32]通過對(duì)待測(cè)組分電泳遷移行為的研究以及對(duì)待測(cè)物質(zhì)分離影響因素如酸度、緩沖液濃度、聚丙烯酰胺濃度等的考察，首次建立了一種同時(shí)分離測(cè)定大黃藥材及青海野生大黃茶中3種主要活性蒽醌成分大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸含量的膠束毛細(xì)管電泳方法，該法簡單、快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，對(duì)于中藥大黃及其沖劑中有效成分的分析和質(zhì)量控制具有重要的實(shí)用價(jià)值。劉訓(xùn)紅等[33]采用膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜（MEKC）-DAD分離并同時(shí)測(cè)定了不同產(chǎn)地10批大黃及其炮制品中大黃素、大黃酚、大黃酸、蘆薈大黃素及大黃素甲醚的含量，該方法簡單、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于大黃飲片內(nèi)在質(zhì)量的評(píng)價(jià)和控制。

2.7 指紋圖譜研究

中藥的化學(xué)成分多樣，單一或少數(shù)幾個(gè)指標(biāo)性成分的檢測(cè)往往難以反映中藥的整體質(zhì)量和療效。中藥指紋圖譜具有系統(tǒng)性、重現(xiàn)性和特征性等特點(diǎn)，能夠較全面反映中藥品質(zhì)，現(xiàn)已成為國際公認(rèn)的中藥鑒定和質(zhì)量控制的有效手段[34]。常見的指紋圖譜方法為色譜指紋圖譜，如HPLC指紋圖譜、UPLC指紋圖譜、MEKC指紋圖譜、微乳電動(dòng)毛細(xì)管色譜（MEEKC）指紋圖譜。色譜法可使各成分的色譜峰得到有效分離，可較為全面地檢測(cè)其多種成分在中藥材中分布的全貌，且操作簡單易行、結(jié)果準(zhǔn)確，是目前報(bào)道的大黃指紋圖譜的主要研究方法[35-42]。光譜指紋圖譜包括紅外光譜（IR）[43]和NIR[44-45]指紋圖譜。其中，IR具有操作簡便、快速無損及樣品制備簡單等優(yōu)點(diǎn)，目前已廣泛用于中藥的定性鑒別和定量研究。電化學(xué)法如洛索夫-扎鮑京斯基化學(xué)振蕩技術(shù)可用于大黃電化學(xué)指紋圖譜，方法簡便、可靠、快速、直觀，可對(duì)不同來源大黃進(jìn)行定性分析[46-47]。隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步以及研究的深入，各種技術(shù)的產(chǎn)生和應(yīng)用為大黃指紋圖譜的研究方法拓寬了道路，各指紋圖譜的特點(diǎn)及應(yīng)用舉例詳見表3。

2.8 QAMS法

HPLC定量檢測(cè)蒽醌類成分的分析方法多采用外標(biāo)法進(jìn)行分析，近年來QAMS法作為適用于中藥多成分、多功效作用評(píng)價(jià)的新模式和新方法，已經(jīng)越來越多地被應(yīng)用于中藥質(zhì)量控制研究中，成為其定量評(píng)價(jià)的重要手段[48]。QAMS是利用中藥有效成分之間的內(nèi)在函數(shù)和比例關(guān)系，通過測(cè)定一個(gè)成分（對(duì)照品易得到）而實(shí)現(xiàn)多個(gè)成分（對(duì)照品難以得到或供應(yīng)）的同步測(cè)定的多指標(biāo)質(zhì)量評(píng)價(jià)模式。QAMS是在外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法及校正因子法等分析方法的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，適用于對(duì)照品不穩(wěn)定或?qū)φ掌烦杀靖摺⒅苽潆y度大的中藥材多成分質(zhì)量控制，具有簡單、快捷、操作成本低的優(yōu)點(diǎn)[48]。譚玉柱等[49]采用基于QAMS的HPLC法對(duì)大黃地上部位提取物中的大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素和大黃素甲醚的含量進(jìn)行測(cè)定，建立了大黃素與大黃酚、蘆薈大黃素和大黃素甲醚的相對(duì)校正因子（RCF），通過測(cè)定大黃素的含量，再以RCF計(jì)算大黃酚、蘆薈大黃素和大黃素甲醚的含量，并與外標(biāo)法進(jìn)行比較。結(jié)果，兩種方法所得4種成分的含量無顯著性差異（P>0.05），表明QAMS可用于大黃地上部位提取物的質(zhì)量控制。

李樹翠等[50]采用QAMS法對(duì)大黃及其提取物和制劑中5種蒽醌類成分的含量進(jìn)行同步測(cè)定，分別以蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚為內(nèi)參物，計(jì)算大黃及其制劑中其余4種成分的含量，比較5個(gè)內(nèi)參物的適用性。最終確定以大黃素作為內(nèi)參物，建立其與另外4種成分的RCF;通過測(cè)定大黃素的含量，計(jì)算其余4種成分的含量，并與外標(biāo)法測(cè)定結(jié)果比較，并利用相對(duì)誤差來評(píng)價(jià)QAMS方法的準(zhǔn)確度。結(jié)果，兩種測(cè)定結(jié)果之間無顯著性差異（P>0.05），表明QAMS可用于大黃及其制劑中蒽醌類成分的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

2.9 免疫檢測(cè)技術(shù)

近年來，免疫檢測(cè)技術(shù)作為一種快速檢測(cè)中藥材的有效手段逐漸被應(yīng)用于中藥領(lǐng)域研究。免疫檢測(cè)技術(shù)是一種利用抗原與抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)與其他顯色反應(yīng)相結(jié)合的定性定量檢測(cè)技術(shù)，具有簡便快捷、靈敏性高、特異性強(qiáng)、檢測(cè)快速、儀器依賴性低、高通量等優(yōu)點(diǎn)[51]。張波等[52]建立了大黃藥材中大黃酸的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法，該法通過采用碳二亞胺法活化大黃酸，將其分別與牛血清白蛋白及雞卵清白蛋白偶聯(lián)制備免疫抗原及包被抗原，用免疫原免疫Bal b/c雌性小鼠制備抗血清，再利用包被抗原和抗血清建立的ELISA檢測(cè)方法。該法靈敏度（IC50）達(dá)185.82 μg/L，檢測(cè)范圍（IC20～I(xiàn)C80）為21.99～1 569.99 μg/L。Zhang Y等[53]以大黃酸與牛血清白蛋白的偶聯(lián)物為免疫抗原，通過免疫母雞后，從雞蛋中分離抗體，利用量子點(diǎn)標(biāo)記抗體后，制備了檢測(cè)大黃酸的免疫層析試紙，并利用試紙條讀取器建立了定量檢測(cè)大黃酸的檢測(cè)方法，該方法檢測(cè)限為98.2 ng/mL，檢測(cè)范圍為80～5 000 ng/mL，為大黃藥材中大黃酸的快速檢測(cè)提供了有效手段。

3 安全性評(píng)價(jià)

藥材質(zhì)量低劣是影響中藥現(xiàn)代化的“瓶頸”，而國際市場對(duì)無污染、綠色藥材的需求，需要研究者從中藥材的規(guī)范化種植入手，嚴(yán)格把控藥材的加工運(yùn)輸過程，以最大程度降低外源性有害物質(zhì)污染的概率。為了保證中藥的用藥安全，除了需要注意藥材真?zhèn)魏陀行С煞趾康葐栴}外，對(duì)于外源性有害物質(zhì)的檢測(cè)與控制，如重金屬超標(biāo)、農(nóng)藥殘留也是國際上十分關(guān)注的問題。

3.1 重金屬檢測(cè)

中藥材的重金屬含量控制也是保障中藥質(zhì)量的重要途徑。目前，對(duì)大黃中重金屬檢測(cè)的方法主要有電感耦合等離子體質(zhì)譜法、原子熒光光譜法或原子吸收光譜法。王珺等[54]采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法對(duì)20批松潘地產(chǎn)大黃藥材中的鉛、鎘、汞、銅、砷等5種重金屬元素含量進(jìn)行測(cè)定，以評(píng)價(jià)該地區(qū)大黃藥材的安全性。結(jié)果，20批大黃樣品中，5種重金屬元素含量均低于國家限量標(biāo)準(zhǔn)。周萍等[55]采用原子熒光光譜法測(cè)定甘肅不同產(chǎn)地大黃中鉛、鎘、砷、汞等4種重金屬的含量。結(jié)果，不同產(chǎn)地大黃中重金屬元素的含量有一定差異，但其含量均未超出國家限量標(biāo)準(zhǔn)。

3.2 農(nóng)藥殘留檢測(cè)

由于中藥資源的復(fù)雜化，一些藥材因不規(guī)范種植或土壤被污染而可能導(dǎo)致其農(nóng)藥殘留超限，因此有必要制定合理的大黃藥材中農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)限量，以對(duì)大黃藥材中農(nóng)藥殘留量進(jìn)行控制。龐作正等[56]采用頂空氣相色譜法測(cè)定大黃中代森錳鋅農(nóng)藥殘留量，結(jié)果4批不同產(chǎn)地的大黃殘留量均不超過藥品中農(nóng)藥最大殘留量的國家標(biāo)準(zhǔn)，且檢測(cè)方法簡便、快速、靈敏度高。歐陽曉玫等[57]采用氣相色譜法測(cè)定包括大黃在內(nèi)的甘肅五大宗藥材中的農(nóng)藥殘留量，結(jié)果五大宗藥材中有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量均符合規(guī)定。

4 結(jié)語

大黃為常用大宗藥材之一，保障大黃的貨真質(zhì)優(yōu)對(duì)大黃的臨床應(yīng)用及其國際貿(mào)易具有十分重要的意義。通過本綜述可知：性狀鑒別、顯微鑒別、TLC鑒別及分子鑒別可有效實(shí)現(xiàn)正品大黃及其偽品的真?zhèn)舞b別，性狀、顯微、TLC鑒別方法均具有簡便、快速、不依賴儀器設(shè)備、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，其不足之處在于性狀鑒別和顯微鑒別結(jié)果客觀性偏弱，TLC鑒別對(duì)摻偽樣品的鑒別能力較弱;分子鑒別雖技術(shù)水平高、準(zhǔn)確性及客觀性強(qiáng)、適用性廣，但如何降低其檢測(cè)成本、簡化操作是亟須解決的問題。性狀鑒別、顯微鑒別、TLC鑒別更適用于中藥材交易的現(xiàn)場鑒別，而分子鑒別則更多應(yīng)用于大黃及其混偽品的植物基源鑒定。

光譜法、色譜法、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、CE法、指紋圖譜法、QAMS法、免疫檢測(cè)法等方法可以實(shí)現(xiàn)對(duì)大黃的質(zhì)量控制與品質(zhì)優(yōu)劣評(píng)價(jià);色譜法、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、CE法、QAMS法、免疫檢測(cè)法等均是以1種或少數(shù)幾種中藥有效成分為出發(fā)點(diǎn)而建立的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，方法準(zhǔn)確可靠、科學(xué)性強(qiáng)，但較光譜法和指紋圖譜法等以成分群或藥材整體來評(píng)價(jià)藥材質(zhì)量的方法則略顯片面。此外，電感耦合法及氣相色譜法可以分別用于大黃重金屬及農(nóng)藥殘留的安全性評(píng)價(jià)。

綜上，大黃真?zhèn)蝺?yōu)劣鑒別及質(zhì)量評(píng)價(jià)方法眾多，對(duì)大黃的質(zhì)量保障提供了有力支撐。但對(duì)于大黃國際標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一的問題，筆者認(rèn)為，以蒽醌類成分總量以及番瀉苷A含量兩類成分共同為指標(biāo)性成分用于大黃質(zhì)量控制更為全面，且現(xiàn)有報(bào)道的HPLC法可以實(shí)現(xiàn)對(duì)上述兩種成分的同時(shí)測(cè)定。另外，隨著國家大力發(fā)展中醫(yī)藥事業(yè)，中藥的國民認(rèn)可度正不斷提升，中藥的消費(fèi)量及使用率不斷提高，因此，建立適用于普通大眾的簡便易懂的中藥鑒定與評(píng)價(jià)方法以及便于中藥貿(mào)易交流的中藥現(xiàn)場鑒定技術(shù)均具有重要的實(shí)用價(jià)值，亦是今后大黃鑒定與評(píng)價(jià)方法的研究方向。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 孫漢青，李錦萍，劉力寬，等.大黃化學(xué)成分與藥理作用研究進(jìn)展[J].青海草業(yè)，2018，27（1）：47-51.

[ 2 ] 師霞，郭玫，余曉輝，等.產(chǎn)地對(duì)大黃藥材質(zhì)量的影響[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2004，15（7）：401-402.

[ 3 ] 傅興圣，陳菲，劉訓(xùn)紅，等.大黃化學(xué)成分與藥理作用研究新進(jìn)展[J].中國新藥雜志，2011，20（16）：1534-1538.

[ 4 ] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部[S].2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：23.

[ 5 ] Ministry of Food and Drug Safety. Korean Pharmacopoeia：part Ⅱ[S].10th ed. Seoul：Korea Institute of Health， 2012：1358.

[ 6 ] Pharmaceutical and Food Safety Bureau. Japanese Pharmacopoeia[S].16th ed. Tokyo：Ministry of Health，Labour and Welfare，2011：1723.

[ 7 ] 鄧玉環(huán).土大黃基源鑒定及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D].太原：山西省中醫(yī)藥研究院，2016.

[ 8 ] 羅嫚.大黃與土大黃的藥學(xué)鑒定[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2011，30（24）：46.

[ 9 ] 任偉光，王琦，黃林芳.大黃類藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)進(jìn)展[J].中南藥學(xué)，2014，12（4）：354-359.

[10] 鄧玉環(huán)，郭丁丁，倪艷，等. 5種酸模屬藥用植物的形態(tài)組織學(xué)研究[J].中國藥房，2016，27（31）：4367-4369.

[11] 高慧新，田慧.酸模屬植物研究概況[J].壯瑤藥研究，2018（1）：25-31.

[12] 何雪梅.大黃與偽品大黃的鑒定方法探究[J].中國社區(qū)醫(yī)師，2018，34（13）：17-18.

[13] 丁寧，周漢華，邵曉霜，等.草酸鈣簇晶棱角角度用于中藥鑒定的研究[J].中國民族民間醫(yī)藥，2018，27（17）：35-41.

[14] 尚磊.薄層色譜法鑒別大黃飲片真?zhèn)蝃J].食品與藥品，2014，16（3）：201-203.

[15] 費(fèi)凌云.大黃與易混偽品土大黃、虎杖原植物的ITS2序列鑒定[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2015，15（5）：132、242.

[16] 費(fèi)燁，付深振，吳浩忠，等.高山大黃的顯微及分子鑒定研究[J].世界中醫(yī)藥，2015，10（2）：261-264.

[17] 張曉芹，劉春生，閆興麗，等.多基源藥材大黃葉綠體matK基因序列分析及鑒定研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2013，48（11）：1722-1728.

[18] 姬可平，李嘯紅，李應(yīng)東，等.應(yīng)用rRNA基因間隔區(qū)堿基測(cè)序?qū)χ兴帲ù簏S）進(jìn)行鑒定[J].世界科學(xué)技術(shù)，2002，4（4）：44-47.

[19] 魏江存，陳勇，謝臻，等.紫外可見分光光度法測(cè)定生大黃和醋大黃的總蒽醌含量[J].井岡山大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2017，38（6）：88-92.

[20] 郭東艷，師延瓊，王幸，等.大黃不同炮制品中鞣質(zhì)含量的測(cè)定[J].現(xiàn)代中醫(yī)藥，2012，32（4）：76-78.

[21] 何杏，江培，王金宏.大黃中多糖的含量測(cè)定[J].黑龍江醫(yī)藥，2013，26（2）：169-171.

[22] 于建玉，于建娟，丁厚偉.中藥大黃及其有效成分的熒光光譜分析[J].中國處方藥，2014，12（11）：115-116.

[23] 李申麗.中藥大黃三維熒光圖譜解析及活性成分測(cè)定方法研究[D].石家莊：河北師范大學(xué)，2009.

[24] 耿炤，胡浩武，李勝華，等.近紅外光譜在中藥大黃乙醇提取液快速分析中的應(yīng)用研究[J].應(yīng)用化工，2011，40（5）：900-902.

[25] 于曉輝，張卓勇，馬群，等.徑向基函數(shù)神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)和近紅外光譜用于大黃中有效成分的定量預(yù)測(cè)[J].光譜學(xué)與光譜分析，2007，27（3）：481-485.

[26] 范積平，張貞良，張柳瑛，等.近紅外光譜法測(cè)定藥用大黃中4種蒽醌類成分[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，26（10）：1194-1195.

[27] 劉遠(yuǎn)平，陳粟.不同產(chǎn)地藥用大黃中5種游離蒽醌的含量測(cè)定[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2016，12（15）：42-44.

[28] 程小麗，魏勝利，劉春生，等. RP-HPLC-DAD同時(shí)測(cè)定大黃中9種有效成分的含量[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（18）：99-103.

[29] 蔣海強(qiáng)，容蓉，呂青濤.大黃化學(xué)成分的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用鑒別[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2011，22（7）：1705-1706.

[30] 王晴，盧志威，劉月紅，等. UPLC-Q-TOF/MSE結(jié)合診斷離子過濾方法快速分析大黃中酚類成分[J].中國中藥雜志，2017，42（10）：1922-1931.

[31] 曾雪，楊元娟，陳竹，等.毛細(xì)管區(qū)帶電泳測(cè)定大黃提取物中有效成分的含量[J].重慶醫(yī)學(xué)，2018，47（2）：220-222.

[32] 鄭文捷，陳興國，賈偉.高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定中藥大黃及青海野生大黃茶中活性蒽醌類成分的含量[J].中國中藥雜志，2004，29（9）：870-873.

[33] 劉訓(xùn)紅，李俊松，張?jiān)聥?，? MEKC-DAD同時(shí)測(cè)定大黃及其炮制品中5種蒽醌的含量[J].藥物分析雜志，2010，30（5）：814-818.

[34] 徐妍，楊華蕊，楊永壽，等.中藥指紋圖譜研究現(xiàn)狀及展望[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2018，18（76）：91-94.

[35] 袁曉，高俊飛，曹建，等.大黃藥材蒽醌成分的HPLC指紋圖譜研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2012，24（1）：36-40.

[36] 任虹，傅超美，何瑤，等.大黃煮散顆粒與大黃飲片的HPLC指紋圖譜對(duì)比研究[J].中藥與臨床，2017，8（1）：18-22.

[37] 王寧芳.青海不同產(chǎn)區(qū)大黃的HPLC指紋圖譜的對(duì)比研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（12）：3477-3478、3482.

[38] 趙倩，陳育鵬，崔旭盛，等.掌葉大黃UPLC多指標(biāo)成分測(cè)定及指紋圖譜研究[J].藥物分析雜志，2018，38（10）：1697-1710.

[39] 杜清濤，溫金蓮，嚴(yán)優(yōu)芍，等.不同品種不同產(chǎn)地大黃UPLC指紋圖譜研究[J].中藥材，2013，36（5）：725-731.

[40] 李會(huì)芳，王伽伯，金城，等.基于UPLC指紋圖譜的市售大黃不同飲片品質(zhì)研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2012，23（9）：2314-2316.

[41] 劉訓(xùn)紅，李俊松，張?jiān)聥?，?大黃飲片MEKC-DAD指紋圖譜的研究[J].中國中藥雜志，2009，34（23）：3034-3038.

[42] 李楠，潘紅，丁紹東，等.微乳電動(dòng)毛細(xì)管色譜在掌葉大黃指紋圖譜上的應(yīng)用[J].分析試驗(yàn)室，2008，27（9）：69-72.

[43] 郭興蕾，徐海星，許沛虎，等.不同產(chǎn)地大黃紅外指紋圖譜及相似度分析[J].中國藥師，2018，21（7）：1174-1176.

[44] 馬丹，顧志榮，甘玉偉，等.唐古特大黃及其不同炮制品的近紅外光譜分析[J].中藥材，2015，38（9）：1842-1845.

[45] 范積平，張柳瑛，張貞良，等.不同產(chǎn)地大黃藥材的近紅外漫反射光譜法鑒別[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志，2005，23（3）：148-150.

[46] 陳振華，程旺興，方成武，等.大黃的非線性化學(xué)指紋圖譜研究[J].分子科學(xué)學(xué)報(bào)，2013，29（3）：190-197.

[47] 張秀莉，佟德成，李守君，等.中藥大黃電化學(xué)指紋圖譜研究[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2010，33（2）：21-22.

[48] 朱晶晶，王智民，高慧敏，等.一測(cè)多評(píng)法在中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2016，22（16）：220-228.

[49] 譚玉柱，童婷婷，趙高瓊，等.基于一測(cè)多評(píng)法對(duì)大黃地上部位提取物的質(zhì)量控制研究[J].中草藥，2013，44（9）：1190-1194.

[50] 李樹翠，馮儉，張秋燕，等.采用“一測(cè)多評(píng)”法測(cè)定大黃及其制劑中大黃蒽醌類成分的含量[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014，20（10）：66-71.

[51] ZHANG B， NAN T， ZHAN Z， et al. Development of a monoclonal antibody-based enzyme-linked immunosorbent assay for luteoloside detection in Flos Lonicerae Japonicae[J]. Anal Bio Chem，2016，408（22）：6053-6061.

[52] 張波，袁媛，黃璐琦，等.大黃酸人工抗原合成及免疫原性鑒定[J].中國中藥雜志，2015，40（8）：1463-1467.

[53] ZHANG Y， KONG H， LIU X， et al. Quantum dot-based lateral-flow immunoassay for rapid detection of rhein using specific egg yolk antibodies[J]. Artif Cell Nanomed Bio，2018，46（8）：1685-1693.

[54] 王珺，金琰琰，方成武，等.電感耦合等離子體質(zhì)譜法測(cè)定松潘地產(chǎn)大黃藥材中重金屬元素[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，31（2）：61-64.

[55] 周萍，周濃，楊穎，等.甘肅不同產(chǎn)地大黃中重金屬的含量測(cè)定[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2011，28（3）：234-236.

[56] 龐作正，孫暉，薛健，等.頂空氣相色譜法測(cè)定大黃中代森錳鋅農(nóng)藥殘留[J].中華中醫(yī)藥雜志，2012，27（5）：1283- 1285.

[57] 歐陽曉玫，何英梅，賀軍權(quán)，等.甘肅五大宗藥材農(nóng)殘及重金屬檢測(cè)[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2005，33（5）：26-28.

（收稿日期：2019-05-14 修回日期：2019-08-13）

（編輯：孫 冰）