九牛膽提取物的抗氧化活性研究

楊政敏+劉儀偉+韓忠耀

【摘 要】 目的：研究九牛膽提取物的體外抗氧化活性。方法：采用紫外分光光度法，以VC為對照品，測定九牛膽不同溶劑提取物對DPPH、羥基自由基和ABTS自由基的清除能力。結(jié)果：九牛膽不同溶劑提取物對三種自由基均具有一定清除作用，九牛膽甲醇提取物對DPPH和羥基自由基的抑制較強(qiáng)，其IC50為別0.61 g/L和0.41g/L。結(jié)論：九牛膽甲醇提取物是一種較好的天然抗氧化劑。

【關(guān)鍵詞】 九牛膽；抗氧化活性；紫外分光光度法

【中圖分類號】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2016）12-0035-02

Abstract：Objective The aim of this study is to investigate the antioxidant activity in vitro of different extract from the Tinospora sagittata（oliv.） Gagnep.. Methods UV spectrophotometric method was used to the scavenging capacities of different extract from the Tinospora sagittata（oliv.） Gagnep. on DPPH， ·OH and ABTS+· were assayed in contrast with VC. Results The experimental results indicated that methanol extract has effect of scavenging on DPPH and ·OH， the IC50 were 0.61g/L and 0.41g/L respectively. Conclusion Methanol extract is a good natural antioxidant.

Keywords：Tinospora sagittata（oliv.） Gagnep.； antioxidant activity； extract

自由基醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的深入研究，使人們越來越關(guān)注各種自由基對人體的損傷，從自然界中尋找對自由基具有較強(qiáng)清除能力的天然植物具有重要意義[1]。九牛膽為防己科植物青牛膽Tinospora sagittata（Oliv.） Gagnep.或金果欖T. capillipes Gagnep.的干燥塊根[2]，具有清熱解毒、利咽止痛之功效，臨床應(yīng)用治療咽喉腫痛、癰疽疔毒、泄瀉、痢疾、脘腹熱痛等，具有重要的經(jīng)濟(jì)價值 [3-4]。研究采用甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、水為溶劑，對九牛膽進(jìn)行提取，對提取物的體外抗氧化活性進(jìn)行研究，對開發(fā)利用九牛膽豐富的藥物資源提供參考數(shù)據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 ABL-224型電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）；DFD-700型電子恒溫水浴鍋、DZ-2BCⅡ型真空干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；759型紫外可見分光光度計（上海儀電分析儀器有限責(zé)任公司）。

1.2 材料 九牛膽購買于貴陽中藥市場；對氨基苯磺酸、2，2-聯(lián)氮基雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二銨鹽（ABTS）、1，1-二苯基苦基苯肼（DPPH）均購于上海晶純生化科技股份有限公司；乙醇、硫酸亞鐵、水楊酸、高硫酸鉀、雙氧水（30%）、鹽酸、L-抗壞血酸（VC）均為分析純。

2 方法

2.1 九牛膽提取物的制備 稱取10.0g干燥的九牛膽粉末，按固液比1∶10的比例加入100ml蒸餾水，60恒溫水浴回流3h后，過濾。濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸餾，回收溶劑，殘留物低溫真空干燥，得九牛膽水提取物。同法制備甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿提取物。提取物4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 DPPH自由基清除率的測定[5]分別移取濃度為（0.15、0.3、0.6、1.2、2.4 g/L）的樣品溶液和物質(zhì)的量濃度為2×10-4mol/L的DPPH溶液。分別移取2ml不同濃度的樣品溶液與2ml的DPPH溶液于具塞試管中，混勻，在30℃下恒溫30min，在525nm處測定其吸光度，同時以VC為對照品。其清除率的計算公式：清除率=[1-（Ai-Aj）/Ac]×100%。其中，Ai為樣品與DPPH混合溶液的吸光度，Aj為樣品溶液的吸光度，Ac為DPPH溶液的吸光度。

2.3 羥基自由基清除率的測定[6]分別移取1ml不同濃度（0.15、0.3、0.6、1.2、2.4g/L）的樣品溶液于10ml具塞試管中，向各試管中加入9mmol/L的硫酸亞鐵溶液1ml，9mmol/L的水楊酸-乙醇溶液1mL，用蒸餾水定容至5ml，然后分別加入1ml 6mmol/L的H2O2溶液，啟動反應(yīng)，置于37℃溫度下反應(yīng)10min，在510nm下測定其吸光度，以VC為對照品。其清除率的計算公式：清除率=[1-（Ai-Aj）/Ac]×100%。其中，Ai為加入樣品溶液、硫酸亞鐵、水楊酸-乙醇、過氧化氫溶液的吸光度，Aj為不加過氧化氫溶液的吸光度，Ac為不加樣品溶液的吸光度。

2.4 ABTS自由基的清除試驗[7]將5ml 7mmol/L ABTS和88μl 140mmol/L過硫酸鉀溶液混合，在室溫、避光條件下靜置過夜，形成ABTS自由基儲備液，該儲備液在室溫、避光的條件下表現(xiàn)穩(wěn)定，使用前用無水乙醇稀釋成工作液，要求其在734nm波長下的吸光度為0.70±0.02。分別移取0.1ml不同濃度（0.15、0.3、0.6、1.2、2.4g/L）的樣品溶液于10ml具塞試管中，向各管中加入4.9ml稀釋后的ABTS溶液，混勻，30℃靜置反應(yīng)10min后在752nm下測定吸光度。以VC為對照品。其清除率的計算公式：清除率=（1-Ai/Ao）×100%。其中，Ai為樣品與ABTS混合溶液的吸光度，Ao為ABTS溶液的吸光度。

3 結(jié)果與分析

3.1 清除DPPH自由基的試驗結(jié)果 由圖1可知，九牛膽五種提取物對DPPH自由基均具有一定的清除的能力，只有甲醇提取物的清除能力最接近VC。在所試驗的濃度范圍內(nèi)，水和氯仿提取物清除DPPH自由基的作用未達(dá)到50%；甲醇、乙醇和乙酸乙酯對DPPH自由基的清除率達(dá)50%時，其濃度（IC50）分別為0.61g/L、0.65g/L和1.63g/L。五種提取物對DPPH自由基的清除的能力順序為：甲醇提取物>乙醇提取物>乙酸乙酯提取物>氯仿提取物>水提取物。

3.2 清除羥基自由基的試驗結(jié)果 由圖2可知，九牛膽五種提取物對羥基自由基均具有一定的清除的能力。其清除的能力順序為：甲醇提取物>乙酸乙酯提取物>氯仿提取物>乙醇提取物>水提取物。在所試驗的濃度范圍內(nèi)，乙酸乙酯、甲醇和氯仿提取物清除羥基自由基的作用均可達(dá)到50%，其IC50分別為0.41g/L、0.43g/L和1.82g/L。

3.3 清除ABTS自由基的試驗結(jié)果 由圖3可知，九牛膽五種提取物對ABTS自由基均具有一定的清除的能力，但在所試驗的濃度范圍內(nèi)，清除能力都較弱，未有一種提取物能達(dá)到50%的清除能力。

4 討論

研究以甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、水等為溶劑分別對九牛膽進(jìn)行提取得到相應(yīng)的提取物，對其進(jìn)行體外抗氧化活性研究。實驗結(jié)果表明，九牛膽不同溶劑提取物對三種自由基均具有一定清除作用，其中九牛膽甲醇提取物對自由基的清除能力最強(qiáng)，成分預(yù)試表明其主要含生物堿類物質(zhì)，提示九牛膽甲醇提取物是一種較好的天然抗氧化劑。為進(jìn)一步開發(fā)九牛膽資源提供了一定的參考。

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（收稿日期：2016.4.20）