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    注射用甲鈷胺含量測(cè)定方法分析

    2017-03-04 21:01杜長(zhǎng)英
    科學(xué)與財(cái)富 2016年32期
    關(guān)鍵詞:紫外分光光度法穩(wěn)定性

    杜長(zhǎng)英

    摘 要:目的:探究如何能夠更加準(zhǔn)確的對(duì)注射用的甲鈷胺含量進(jìn)行測(cè)定。方法:采用高效液相色譜法以及紫外分光光度法兩種方法對(duì)注射用的甲鈷胺含量進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果:通過(guò)兩種方法能夠達(dá)到預(yù)期的效果,都取得了成功。結(jié)論:對(duì)于高效液相色譜法以及紫外分光光度法兩種方法而言,雖然都能對(duì)注射用甲鈷胺的含量進(jìn)行測(cè)量,但是選擇前者能夠更加的準(zhǔn)確性的得出結(jié)論,效果要明顯由于后者,在今后的檢測(cè)過(guò)程中,可以進(jìn)一步的對(duì)這一檢測(cè)方法加以推廣,以實(shí)現(xiàn)對(duì)注射用的甲鈷胺更加精準(zhǔn)的測(cè)量。

    關(guān)鍵詞:注射用甲鈷胺;液相色譜法;紫外分光光度法;穩(wěn)定性

    從性狀上來(lái)看,甲鈷胺是一種結(jié)晶性的粉末,主要顏色是暗紅色,沒(méi)有明顯的氣味,具有極強(qiáng)的吸濕性,在光照下可以很容易的進(jìn)行分解,將其置于水中或者乙醇中,具有輕微的溶解現(xiàn)象,而將其置于丙酮或者是氯仿以及乙醚中,并沒(méi)有出現(xiàn)溶解的現(xiàn)象,在當(dāng)前注射用的甲鈷胺中,主要采用的規(guī)格是0.5mg,這一規(guī)格可以確保主藥滿足含量均勻度方面的要求,符合規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn),在當(dāng)前生產(chǎn)的過(guò)程中需要進(jìn)一步提高主藥均勻性的意識(shí),對(duì)均勻度采用合理的含量檢測(cè)方法進(jìn)行檢驗(yàn),這樣才能滿足藥物的需求。本文以此為出發(fā)點(diǎn),采用兩種不同的方法對(duì)注射甲鈷胺的含量進(jìn)行檢測(cè),希望能夠?qū)窈蟮暮繖z測(cè)工作帶來(lái)一定的幫助。在實(shí)驗(yàn)中需要注意的問(wèn)題是,因?yàn)榧租挵芬?jiàn)光容易分解,所以需要在避光的環(huán)境下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

    1 儀器及材料

    1.1 儀器。在采用高效液相色譜檢測(cè)法中,主要應(yīng)用的儀器設(shè)備是高效液相色譜儀,主要型號(hào)為SPD-10Avp型,能夠?qū)ψ贤饩€進(jìn)行檢測(cè)的可見(jiàn)-紫外檢測(cè)器,由日本島津制造所生產(chǎn),同樣由日本島津制造所生產(chǎn)的可見(jiàn)紫外分光光度計(jì)是紫外分光光度法實(shí)驗(yàn)中需要的主要設(shè)備,色譜柱的規(guī)格為C18柱,200mm×4.6mm,生產(chǎn)廠家為迪馬公司。

    1.2 材料。在實(shí)驗(yàn)中主要應(yīng)用的對(duì)照品材料是由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供的甲鈷胺對(duì)照品,由邯鄲四友生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)的乙腈,還有注射用的甲鈷胺,主要是在制劑室生產(chǎn)獲得的。

    2 實(shí)驗(yàn)方法

    本實(shí)驗(yàn)主要采用的方法是高效液相色譜法對(duì)注射用甲鈷胺的含量進(jìn)行測(cè)定,具體的實(shí)驗(yàn)操作步驟如下。首先是要對(duì)檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定,在檢測(cè)的過(guò)程中應(yīng)該注意避光操作,因?yàn)榧租挵酚龉鈺?huì)出現(xiàn)分解的現(xiàn)象,從材料中取出適當(dāng)?shù)募租挵吩?,以及注射用的甲鈷胺適量,還有滿足實(shí)驗(yàn)要求的適當(dāng)輔料,在其中加入甲醇,得到溶液。每1mL中含有20μg的溶液,將高效液相色譜儀的波長(zhǎng)調(diào)整到190mm至400mm的范圍內(nèi),采用紫外線的方式進(jìn)行掃描,能夠得到最大吸收的范圍,甲鈷胺原料在266mm時(shí)獲得最大的吸收,樣品在341mm時(shí)得到最大吸收,輔料在343mm時(shí)獲得最大吸收,因此能夠確定本樣品在266mm時(shí)是最為合適的檢測(cè)波長(zhǎng)。

    本實(shí)驗(yàn)中主要的色譜條件如下,選取十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑,流動(dòng)相為乙腈以及每升0.05mol的磷酸二氫鉀,采用每升1mol的磷酸調(diào)制而成,其酸堿值為3.3,保證主峰的保留時(shí)間適當(dāng),具備較好的峰形。緊接著對(duì)含量進(jìn)行測(cè)定,主要的檢測(cè)方法是先避光取出適量的本品,加入流動(dòng)相,制成供試品溶液,其中每毫升的供試品溶液中含有0.5mg的甲鈷胺溶液,另外取適當(dāng)?shù)募租挵穼?duì)照品,在進(jìn)行精密的稱量以后,按照相同的方法進(jìn)行測(cè)定,按照外標(biāo)法對(duì)峰面積進(jìn)行計(jì)算,能夠得出相應(yīng)的結(jié)果,根據(jù)高效液相含量的測(cè)定方法對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè),能夠獲得如下的檢測(cè)結(jié)果。見(jiàn)表1。

    緊接著采用紫外分光光度法對(duì)注射甲鈷胺的含量進(jìn)行檢測(cè)。在檢測(cè)波長(zhǎng)的確定過(guò)程中,同樣是采用上述相同的方法,緊接著線性關(guān)系進(jìn)行測(cè)試,測(cè)試的過(guò)程中選擇避光操作的方式,先對(duì)甲鈷胺對(duì)照品進(jìn)行精密的稱量,在100mL的容量瓶中加入21.38mg的對(duì)照品,然后在其中加入甲醇進(jìn)行溶解以及稀釋,將其搖晃均勻以后達(dá)到指定的刻度位置上,再精密的稱取溶液5mL,將其放置在50mL的量瓶中,在其中加入甲醇溶液進(jìn)行溶解并且稀釋到指定的刻度位置上,均勻的進(jìn)行搖晃,分別取出1.0、3.0、5.0/7.0以及10.0mL的溶液放置在5個(gè)相同的10mL的量瓶中,使用流動(dòng)相對(duì)其進(jìn)行稀釋,達(dá)到指定的刻度位置上以后,均勻的搖晃,根據(jù)參照含量的要求進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)紫外分光光度法規(guī)定的檢測(cè)要求,能夠獲得檢測(cè)樣品,具體的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。

    3 討論

    從制劑室反饋的信息,制劑室按100%投料。這樣,高效液相色譜法的檢測(cè)結(jié)果更接近與實(shí)際投料量,且通過(guò)上述試驗(yàn)可以看出,紫外分光光度法的穩(wěn)定性,重復(fù)性的RSD均接近于2%。不如高效液相法好。另外紫外分光光度法的取樣量較少,檢測(cè)濃度低,容易受干擾,也是造成檢測(cè)不夠準(zhǔn)確的重要原因。因此,注射用甲鈷胺的含量測(cè)定方法還是用高效液相色譜法較好。

    甲鈷胺是一種內(nèi)源性的輔酶B12,參與一碳單位循環(huán),在由同型半胱氨酸合成蛋氨酸的轉(zhuǎn)甲基反應(yīng)過(guò)程中起重要作用。體外研究表明,甲鈷胺可促進(jìn)培養(yǎng)的大鼠組織中卵磷脂的合成和神經(jīng)元髓鞘形成,適用于周圍神經(jīng)病變。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,本品比氰鈷胺易于進(jìn)入神經(jīng)元細(xì)胞器,參與腦細(xì)胞和脊髓神經(jīng)元胸腺嘧啶核苷的合成,促進(jìn)葉酸的利用和核酸代謝,且促進(jìn)核酸和蛋白質(zhì)合成作用較氰鈷胺強(qiáng);能促進(jìn)軸突運(yùn)輸功能和軸突再生,使鏈脲霉素誘導(dǎo)的糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)軸突骨架蛋白的運(yùn)輸正常化;對(duì)藥物引起的神經(jīng)退變,如阿霉素、丙烯酰胺、長(zhǎng)春新堿引起的小鼠軸突退變及自發(fā)高血壓大鼠神經(jīng)疾病,具有抑制作用;能使延遲的神經(jīng)突觸傳遞和神經(jīng)遞質(zhì)減少恢復(fù)正常,通過(guò)提高神經(jīng)纖維興奮性,恢復(fù)終極板電位誘導(dǎo),使飼以膽堿缺乏飼料大鼠的腦內(nèi)乙酰膽堿恢復(fù)到正常水平。

    甲鈷胺注射液,適應(yīng)癥為用于周圍神經(jīng)病。因缺乏維生素B12引起的巨紅細(xì)胞性貧血的治療。甲鈷胺易轉(zhuǎn)移至神經(jīng)細(xì)胞的細(xì)胞器,從而促進(jìn)核酸和蛋白質(zhì)的合成。甲鈷胺較氰鈷胺更易轉(zhuǎn)移入大白鼠的神經(jīng)細(xì)胞的細(xì)胞器。在小鼠的腦細(xì)胞和脊髓神經(jīng)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中,參與由脫氧尿嘧啶核苷合成胸腺嘧啶核苷的過(guò)程,促進(jìn)葉酸的利用和核酸的代謝。而且,甲鈷胺比鈷酰胺更能促進(jìn)大鼠的核酸和蛋白質(zhì)的合成。促進(jìn)軸索內(nèi)輸送和軸索的再生。在由給與鏈脲菌素引起糖尿病大白鼠模型的坐骨神經(jīng)細(xì)胞,可使軸索結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的輸送正常化。對(duì)由阿霉素、丙烯酰胺、長(zhǎng)春新堿引起的藥物性神經(jīng)障礙(大白鼠、兔)以及軸索變形小白鼠模型,自然發(fā)病糖尿病大白鼠的神經(jīng)障礙在神經(jīng)病理學(xué)、電生理學(xué)上可抑制變性神經(jīng)的出現(xiàn)。此外還能促進(jìn)正紅血母細(xì)胞的成熟、分裂、改善貧血血像。缺乏維生素B12可能導(dǎo)致巨紅細(xì)胞性貧血,本藥促進(jìn)在骨髓中核酸的合成及正紅血母細(xì)胞的成熟、分裂、增加紅細(xì)胞的產(chǎn)生。本藥可迅速恢復(fù)因B12缺乏而降低的大白鼠紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白、血細(xì)胞比容值。

    參考文獻(xiàn)

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    [2]謝麗華,陳喬,陳曉艷.HPLC測(cè)定甲鈷胺中的有關(guān)物質(zhì)[J].河北化工,2011(03).

    [3]李盈,于治國(guó),劉欣榮,張萌,王婷.甲鈷胺軟膠囊的人體生物等效性[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2011(03).

    [4]常明,李晶,武玉潔,張文雙.甲鈷胺注射液含量的方法學(xué)研究[J].石家莊學(xué)院學(xué)報(bào),2007(06).

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