番茄黃化曲葉病毒侵染危害海南番茄及其分子特征

湯亞飛　周洋　張麗　李正剛　佘小漫　于琳　藍(lán)國(guó)兵　鄧銘光　何自福

摘要：【目的】明確引起海南三亞、東方和陵水番茄黃化曲葉病的病毒分子特征，為防控該病害提供科學(xué)依據(jù)。【方法】以2019年2月從海南三亞、東方和陵水采集的15份疑似番茄黃化曲葉病樣本為材料，采用菜豆金色花葉病毒屬病毒的通用簡(jiǎn)并引物AV494/CoPR對(duì)15份樣本進(jìn)行PCR檢測(cè)，并對(duì)PCR檢測(cè)為陽(yáng)性的樣本進(jìn)行滾環(huán)擴(kuò)增（RCA）及基因克隆，獲得侵染海南三亞、陵水和東方番茄的病毒基因組全序列，進(jìn)而在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)BLASTh程序進(jìn)行相似性比對(duì)，利用SDT 1.2的MUSCLE alignment進(jìn)行序列相似性比較分析，采用MEGA 6.0的鄰接法（Neighbor-joining，NJ）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)，明確所獲得病毒分離物與已報(bào)道分離物的親緣關(guān)系。【結(jié)果】獲得侵染海南三亞、陵水和東方番茄的3個(gè)番茄黃化曲葉病毒（Tomato yellow leaf curl virus，TYLCV）分離物基因組全序列，其大小均為2781 nt，編碼6個(gè)開(kāi)放閱讀框（ORF），其中病毒鏈上AV1和AV2基因，互補(bǔ)鏈上AC1、AC2、AC3和AC4基因。相似性比對(duì)分析結(jié)果表明，TYLCV海南分離物與墨西哥和美國(guó)分離物的相似性在99.0%以上，與來(lái)自我國(guó)不同?。ㄊ校┑?4個(gè)TYLCV分離物的相似性在98.0%以上。系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化分析顯示，海南三亞、陵水和東方3個(gè)分離物與墨西哥、美國(guó)及我國(guó)北京和江蘇分離物聚集在一個(gè)小分支，進(jìn)一步與來(lái)自我國(guó)其他12個(gè)省（市）、韓國(guó)、哥斯達(dá)黎加和澳大利亞的分離物形成一個(gè)分支?！窘Y(jié)論】侵染海南番茄的TYLCV可能來(lái)自我國(guó)大陸的番茄等種苗和煙粉虱帶毒傳入，也有可能來(lái)自墨西哥和美國(guó)等其他國(guó)家。

關(guān)鍵詞： 番茄黃化曲葉病毒;分子鑒定;序列分析;海南

中圖分類號(hào)： S432.41? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：2095-1191（2020）08-1970-07

Tomato yellow leaf curl virus infecting tomato in Hainan

and its molecular characteristics

TANG Ya-fei1，2， ZHOU Yang3， ZHANG Li1， LI Zheng-gang1， SHE Xiao-man1，2，

YU Lin1， LAN Guo-bing1， DENG Ming-guang1， HE Zi-fu1，2*

（1Plant Protection Research Institute， Guangdong Academy of Agricultural Sciences， Guangzhou? 510640， China;? 2Guangdong Provincial Key Laboratory of High Technology for Plant Protection， Guangzhou? 510640， China;

3Agricultural Service Center of Dongfang， Dongfang， Hainan? 572600， China）

Abstract：【Objective】This study was to identify the molecular characterization of Tomato yellow leaf curl virus（TYLCV） that caused tomato yellow leaf curl disease in Sanya， Dongfang and Lingshui of Hainan， in order to provide scientific basis for prevention and control of the disease in the area. 【Method】In February， 2019，15 suspected diseased tomato samples were collected from Sanya， Dongfang and Lingshui of Hainan. The 15 samples were detected by PCR using the universal degenerate primers AV494/CoPR for Begomoviruses. The PCR positive samples were amplified by rolling circle amplification（RCA） and cloned to obtain whole genome sequences of virus isolated from tomato in Sanya， Lingshui and Dongfang. These obtained sequences identity was compared and analyzed using BLAST on GenBank database. Pairwise nucleotide sequence identities were determined using SDT 1.2 with MUSCLE alignment. Phylogenetic? analysis was conducted using MEGA 6.0 with neighbor joining method to clarify the genetic relationship between isolates of obtained virus and the reported isolates. 【Result】Three whole genome sequences of TYLCV isolated from tomato in Sanya， Lingshui and Dongfang of Hainan were 2781 nucleotides （nt） long and encoded six open reading frames（ORFs）. The AV1 and AV2 were located on the virion sense DNA strand， whereas， the AC1， AC2， AC3， AC4 genes were located on the complementary sense strand. The results of identity comparison showed that TYLCV isolated from Hainan shared over 99.0% nt identities with Mexico isolate and USA isolate， and over 98.0% nt identities with the 14 isolates from different provinces or municipalities of China. The result of phylogenetic analysis showed that Sanya， Lingshui and Dongfang isolates clustered with isolates of TYLCV from Mexico， USA， Beijing and Jiangsu of China to form a unique clade， further clustered with all isolates from other 12 provinces or municipalities of China， South Korea， Costa Rica， Australia to form a clade. 【Conclusion】TYLCV infecting tomato in Hainan should come from other areas of China， or Mexico， the United States and other countries by transmitting through seedling and whitefly.

Key words： Tomato yellow leaf curl virus; molecular identification; sequence analysis; Hainan

Foundation item： National Key Research and Development Program of China（2018YFD0201209）;Guangdong Basic and Applied Basic Research Foundation（2019A1515012150）;Guangzhou Science and Technology Project（201904010173）;Guangdong Modern Agricultural Common Key Technology Research and Develpment Innovation Team Building Project（2019KJ134）

0 引言

【研究意義】番茄（Solanum lycopersicum）是海南冬種北運(yùn)蔬菜作物之一，年種植面積約6667 ha，主要分布在陵水、東方、昌江和定安等市（縣），是當(dāng)?shù)剞r(nóng)民增收致富的重要經(jīng)濟(jì)作物。番茄黃化曲葉病是全球番茄生產(chǎn)上一種毀滅性病害，已在熱帶亞熱帶地區(qū)造成嚴(yán)重?fù)p失（Hanssen et al.，2010）。2008年，海南省?？谑邪l(fā)生番茄黃化曲葉?。╖hang et al.，2010），近年來(lái)在海南多個(gè)番茄產(chǎn)區(qū)暴發(fā)流行，已造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。因此，對(duì)引起海南番茄黃化曲葉病的病毒種類進(jìn)行鑒定，明確其分子特征，可為該病毒病監(jiān)測(cè)與防控提供依據(jù)，同時(shí)對(duì)促進(jìn)海南番茄產(chǎn)業(yè)持續(xù)健康發(fā)展具有重要的指導(dǎo)意義。【前人研究進(jìn)展】番茄黃化曲葉病是由煙粉虱傳播的雙生病毒侵染引起（朱曉林等，2019），但世界各地發(fā)生的番茄黃化曲葉病的病原病毒并不相同，國(guó)際上已報(bào)道可引起番茄黃化曲葉病的病毒有80多種（Brown et al.，2015），我國(guó)至少有16種（熊艷等，2011;Yang et al.，2011;Ding et al.，2016），其中番茄黃化曲葉病毒（Tomato yellow leaf curl virus，TYLCV）分布最廣。TYLCV最早在以色列番茄中被發(fā)現(xiàn)，目前已擴(kuò)散到中東、地中海沿岸、非洲、美洲、澳洲和亞洲等多個(gè)國(guó)家和地區(qū)（Moriones and Navas-Castillo，2000），是引起全球番茄黃化曲葉病的主要病原病毒之一。2006年，該病毒傳入我國(guó)上海（Wu et al.，2006），之后在浙江、江蘇、山東等20個(gè)?。▍^(qū)）發(fā)生（姜靜等，2018;湯亞飛等，2019），造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，已成為引起我國(guó)長(zhǎng)江流域及其以北番茄產(chǎn)區(qū)黃化曲葉病的優(yōu)勢(shì)病毒種類。自從番茄黃化曲葉病在海南省發(fā)生以來(lái)，有研究者對(duì)引起海南番茄黃化曲葉病的病毒進(jìn)行鑒定。Zhang等（2010）從2008年采集于海南海口的番茄病樣中鑒定出海南番茄曲葉病毒（Tomato leaf curl Hainan virus，ToLCHnV）;林韶東（2013）從海南三亞崖城鎮(zhèn)和樂(lè)東黃流鎮(zhèn)番茄上檢測(cè)到ToLCHnV和中國(guó)勝紅薊黃脈病毒（Ageratum yellow vein China virus，AYVCNV）;班一云（2017）從海南番茄病樣上檢測(cè)到中國(guó)番茄黃化曲葉病毒（Tomato yellow leaf curl China virus，TYLCCNV）。目前尚未見(jiàn)在海南番茄上檢測(cè)到TYLCV的相關(guān)報(bào)道。【本研究切入點(diǎn)】2019年2月，本研究團(tuán)隊(duì)在海南省三亞市、東方市和陵水縣番茄產(chǎn)區(qū)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，田間番茄病株表現(xiàn)出嚴(yán)重的黃化、曲葉癥狀，調(diào)查田塊的發(fā)病率達(dá)100%。種植者反映近幾年番茄黃化曲葉病在海南省發(fā)生非常嚴(yán)重，給種植戶帶來(lái)慘重的經(jīng)濟(jì)損失，但具體是何種病毒種類引起該病害大暴發(fā)尚不明確?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】采用菜豆金色花葉病毒屬病毒的通用簡(jiǎn)并引物AV494/CoPR（Wyatt and Brown，1996;何自福等，2004）對(duì)海南省三亞市、東方市和陵水縣番茄產(chǎn)區(qū)的疑似番茄黃化曲葉病樣本進(jìn)行PCR檢測(cè)，并對(duì)PCR檢測(cè)為陽(yáng)性的病樣進(jìn)行滾環(huán)擴(kuò)增（Rolling circle amplification，RCA），再進(jìn)一步通過(guò)分子克隆和序列分析，明確引起海南番茄黃化曲葉病的病毒分子特征，為防控該病害提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

1. 1. 1 樣品采集 于2019年2月從海南三亞、陵水和東方番茄產(chǎn)區(qū)采集田間表現(xiàn)典型黃化曲葉癥狀（圖1）的番茄病樣葉片15份，樣本按采樣地點(diǎn)做好標(biāo)記，帶回實(shí)驗(yàn)室用于檢測(cè);以人工注射接種TYLCV侵染性克隆引起發(fā)病的番茄植株葉片為陽(yáng)性對(duì)照（CK+），室內(nèi)未接種的健康番茄植株葉片為陰性對(duì)照（CK-）。

1. 1. 2 主要試劑和儀器設(shè)備 Premix TaqTM（Ex TaqTM Version 2.0 plus dye）和DNA片段純化試劑盒購(gòu)自寶生物工程（大連）有限公司;DNA滾環(huán)擴(kuò)增試劑盒（IllustraTM TempliPhiTM kit）購(gòu)自GE Healthcare公司;pGEM-T EASY和pGEM-3Z/5Z載體購(gòu)自美國(guó)Promega公司;T4-DNA連接酶和BamH I等快速限制性內(nèi)切酶等購(gòu)自美國(guó)NEB公司;瓊脂糖凝膠回收試劑盒（GeneJET Gel Extraction Kit）購(gòu)自美國(guó)Thermo賽默飛公司;植物基因組DNA提取試劑盒（EasyPure Plant Genomic DNA Kit）購(gòu)自北京全式金生物技術(shù)有限公司;大腸桿菌（Escherichia coli）DH5α感受態(tài)細(xì)胞購(gòu)自北京全式金生物技術(shù)有限公司;氨芐青霉素、X-gal、蔗糖、瓊脂糖和胰蛋白胨均購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司;綠如藍(lán)核酸染料DNAGREEN購(gòu)自北京天恩澤基因科技有限公司;其他常規(guī)分析純?cè)噭┵?gòu)自廣州市芊薈化玻儀器有限公司。T100TM Thermal cycler PCR儀和Universal HoodⅡ凝膠成像系統(tǒng)均購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司;電泳儀購(gòu)自美國(guó)E-C Apparatus Corporation公司。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 植物樣品總DNA提取 分別取番茄病株、陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照葉片各100 mg，按照植物DNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)上的步驟進(jìn)行總DNA抽提，DNA沉淀溶解于50 μL ddH2O中，于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 2. 2 PCR檢測(cè) 利用檢測(cè)菜豆金色花葉病毒屬病毒的通用引物AV494/CoPR（Wyatt and Brown，1996;何自福等，2004）對(duì)采集的15份疑似番茄病樣進(jìn)行PCR檢測(cè)。反應(yīng)體系30.0 μL：植物總DNA 1.0 μL（約20 ng），Ex TaqTM Premix 15.0 μL，上、下游引物（10 μmol/L）各1.0 μL，滅菌水12.0 μL。反應(yīng)程序：94 ℃預(yù)變性4 min;94 ℃ 45 s，52 ℃ 45 s，72 ℃45 s，進(jìn)行35個(gè)循環(huán);72 ℃延伸 10 min。PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)。

1. 2. 3 基因組全序列擴(kuò)增 挑選PCR檢測(cè)為陽(yáng)性的代表病樣，按照illustraTM TempliPhiTM Kit說(shuō)明書(shū)進(jìn)行RCA擴(kuò)增：將待測(cè)樣品總DNA 1.0 μL（約20 ng）與5.0 μL樣品緩沖液混勻，95 ℃變性3 min;置于冰上冷卻;加入5.0 μL反應(yīng)緩沖液和0.2 μL DNA聚合酶，30 ℃恒溫下反應(yīng)18～20 h;反應(yīng)結(jié)束后在65 ℃下加熱10 min使酶失活，終止反應(yīng)。RCA擴(kuò)增產(chǎn)物分別用BamH I進(jìn)行酶切。反應(yīng)體系10.0 μL：RCA產(chǎn)物2.0 μL，BamH I內(nèi)切酶1.0 μL，10×內(nèi)切酶快速反應(yīng)緩沖液1.0 μL，滅菌水6.0 μL。在37 ℃恒溫條件下酶切0.5～2.0 h，最后進(jìn)行電泳分析。

1. 2. 4 基因克隆與序列分析 將RCA產(chǎn)物酶切出大小約2.7或1.3 kb的目的條帶進(jìn)行回收純化，并連接到用相同內(nèi)切酶處理后的線性化pGEM-3Z載體上，轉(zhuǎn)化至大腸桿DH5α感受態(tài)細(xì)胞，從每個(gè)平板隨機(jī)挑取3個(gè)陽(yáng)性單菌落送至生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行測(cè)序。對(duì)測(cè)序獲得的基因序列利用DNAStar的SeqMan進(jìn)行拼接，然后在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中BLASTn程序進(jìn)行相似性比對(duì)，利用SDT 1.2的MUSCLE alignment對(duì)序列相似性作進(jìn)一步比較分析（Muhire et al.，2014），采用MEGA 6.0的鄰接法（Neighbor-joining，NJ）（Tamurak et al.，2013）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)，Bootstrapping值設(shè)置為1000。

2 結(jié)果與分析

2. 1 PCR檢測(cè)結(jié)果

利用檢測(cè)菜豆金色花葉病毒屬病毒的通用引物AV494/CoPR對(duì)采集的15份疑似番茄黃化曲葉病病樣進(jìn)行PCR檢測(cè)，結(jié)果從15份疑似病樣的總DNA中均擴(kuò)增到1條與目的片斷大?。?70 bp）一致的特異性條帶，陰性對(duì)照中未擴(kuò)增出任何片段（圖2）。表明海南番茄病樣中存在菜豆金色花葉病毒屬病毒。

2. 2 病毒基因組結(jié)構(gòu)特征及序列分析結(jié)果

2. 2. 1 病毒基因組結(jié)構(gòu)特征 從海南三亞、陵水和東方各選取1個(gè)PCR檢測(cè)為陽(yáng)性的病樣進(jìn)行RCA擴(kuò)增，進(jìn)一步對(duì)其產(chǎn)物進(jìn)行酶切，3個(gè)RCA產(chǎn)物均能被BamH I內(nèi)切酶切出1條大小約2.7 kb的單一條帶，將該條帶回收、克隆及測(cè)序，結(jié)果表明，來(lái)自海南三亞（SY）、陵水（LS）和東方（DF）的3個(gè)分離物全基因組大小均為2781 nt （GenBank登錄號(hào)分別為MK908813、MK908814和MK908815），且基因組結(jié)構(gòu)特征完全一致，均為單鏈閉合環(huán)狀，含6個(gè)開(kāi)放閱讀框（ORF），包括位于病毒鏈上編碼外殼蛋白的AV1基因（308～1084 nt）和編碼與病毒移動(dòng)相關(guān)蛋白的AV2基因（148～498 nt），以及位于互補(bǔ)鏈編碼復(fù)制酶蛋白的AC1基因（1542～2615 nt）、編碼轉(zhuǎn)錄激活蛋白的AC2基因（1226～1633 nt）、編碼復(fù)制增強(qiáng)蛋白的AC3基因（1081～1485 nt）和編碼復(fù)制或轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的AC4基因（2171～2464 nt）。在AV2基因與AC1基因之間存在1個(gè)大小為313 nt的基因間隔區(qū)，該區(qū)域含有與該類病毒復(fù)制起始有關(guān)的保守序列TAATATTAC（位于2775～2782 nt）（Hanley-Bowdoin et al.，1999）。

2. 2. 2 相似性分析 經(jīng)序列比對(duì)，發(fā)現(xiàn)侵染海南番茄的SY、LS和DF 3個(gè)分離物兩兩間序列相似性為98.9%、99.0%和99.2%，BLAST結(jié)果顯示，與侵染海南番茄的病毒全基因組序列有較高相似性的序列均為T(mén)YLCV分離物。進(jìn)一步采用SDT 1.2的MUSCLE alignment進(jìn)行相似性比較分析發(fā)現(xiàn)（表1），海南分離物與墨西哥、美國(guó)、韓國(guó)、哥斯達(dá)黎加、澳大利亞、埃及6國(guó)以及我國(guó)14個(gè)不同省（市）的20個(gè)TYLCV分離物相似性在98.0%以上，其中與墨西哥和美國(guó)分離物的相似性在99.0%以上;與荷蘭、古巴、約旦、格林納達(dá)和波多黎各5國(guó)分離物的相似性在97.3%～98.3%;與科威特、伊朗、日本、法國(guó)、西班牙和伊朗6國(guó)分離物的相似性為91.7%～95.1%;與阿曼分離物的相似性最低，均低于91.0%，分別為90.3%、90.7%和90.2%。

2. 2. 3 親緣關(guān)系分析 為明確TYLCV海南分離物與已報(bào)道的其他分離物之間的親緣關(guān)系，將TYLCV海南分離物與上述33個(gè)分離物進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析，以海南番茄曲葉病毒（FN434083）為外組。結(jié)果（圖3）顯示，海南SY、LS和DF 3個(gè)分離物與墨西哥、美國(guó)及我國(guó)北京和江蘇分離物的親緣關(guān)系最近，聚集在一個(gè)小分支，進(jìn)一步與來(lái)自我國(guó)其他12個(gè)省（市）、韓國(guó)、哥斯達(dá)黎加和澳大利亞的分離物形成一個(gè)分支，而與伊朗和阿曼分離物的親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。

3 討論

本研究首次從海南三亞、陵水和東方番茄黃化曲葉病病樣中檢測(cè)到TYLCV，并明確其大小為2781 nt，基因序列與來(lái)自墨西哥、美國(guó)及我國(guó)等17個(gè)國(guó)家32個(gè)TYLCV分離物的相似性均在91.0%以上，其中與我國(guó)其他不同?。ㄊ校┑?4個(gè)TYLCV分離物的相似性在98.0%以上，由此可知，入侵我國(guó)的TYLCV在基因序列上種群遺傳穩(wěn)定，目前尚未發(fā)現(xiàn)較大變異。

系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)顯示TYLCV海南分離物與墨西哥、美國(guó)及我國(guó)北京和江蘇分離物聚集在一個(gè)小分支，進(jìn)一步與我國(guó)其他地區(qū)，韓國(guó)、哥斯達(dá)黎加、澳大利亞的分離物形成一個(gè)大分支。該結(jié)果表示TYLCV海南分離物與韓國(guó)、哥斯達(dá)黎加、澳大利亞、墨西哥、美國(guó)及我國(guó)其他地區(qū)分離物的親緣關(guān)系近，其中與墨西哥、美國(guó)及我國(guó)北京和江蘇分離物的親緣關(guān)系最近，但與伊朗及阿曼分離物的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。進(jìn)一步推測(cè)出侵染海南番茄的TYLCV分離物可能是通過(guò)從北京和江蘇等地調(diào)運(yùn)的番茄種苗及煙粉虱帶毒進(jìn)入海南，也有可能通過(guò)從墨西哥和美國(guó)等其他國(guó)家進(jìn)口的番茄、苗木及煙粉虱帶毒等途徑傳入。

自從番茄黃化曲葉病在我國(guó)發(fā)生以來(lái)，各地的學(xué)者對(duì)該病害開(kāi)展了相關(guān)研究，明確引起我國(guó)番茄黃化曲葉病的病毒種類復(fù)雜，且各省番茄黃化曲葉病的病毒種類存在很大差異。目前報(bào)道的病毒至少有16種（熊艷等，2011;Yang et al.，2011;Ding et al.，2016），其中TYLCV分布最廣，是引起華東、華北和西北等廣大番茄產(chǎn)區(qū)番茄黃化曲葉病的病原病毒。華南地區(qū)（廣東、廣西和海南）常年溫暖多濕，煙粉虱全年可以繁殖，導(dǎo)致番茄黃化曲葉病發(fā)生非常嚴(yán)重，病毒種類也很復(fù)雜，目前報(bào)道的危害廣東番茄的煙粉虱傳病毒有4種，分別為廣東番茄曲葉病毒（Tomato leaf curl Guangdong virus，ToLCGdV）（何自福等，2005b）、廣東番茄黃化曲葉病毒（Tomato yellow leaf curl Guangdong virus，TYLCGdV）（何自福等，2005a）、臺(tái)灣番茄曲葉病毒（Tomato leaf curl Taiwan virus，ToLCTWV）（何自福等，2007）和TYLCV（湯亞飛等，2019）;危害廣西番茄的煙粉虱傳病毒有5種，分別為廣西番茄曲葉病毒（Tomato leaf curl Guangxi virus，ToLCGxV）、中國(guó)番茄曲葉病毒（Tomato leaf curl China virus，ToLCCNV）、AYVCNV、中國(guó)番木瓜曲葉病毒（Papaya leaf curl China virus，PaLCuCNV）和TYLCCNV（劉玉樂(lè)等，1998;Xu et al.，2007;Li et al.，2017）;危害海南番茄的煙粉虱傳病毒有3種，分別為T(mén)oLCHnV、AYVCNV和TYLCCNV（Zhang et al.，2010;林韶東，2013;班一云，2017）。由此可見(jiàn)，TYLCV雖然是引起華東、華北和西北等廣大番茄產(chǎn)區(qū)番茄黃化曲葉病的病原病毒，但在華南地區(qū)僅廣東省有分布，廣西和海南尚未發(fā)現(xiàn)TYLCV危害番茄的報(bào)道。本研究首次在海南番茄上檢測(cè)到TYLCV，可見(jiàn)該病毒在我國(guó)的危害范圍還在進(jìn)一步擴(kuò)大，已嚴(yán)重制約我國(guó)番茄產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

TYLCV主要靠煙粉虱帶毒和帶毒種苗調(diào)運(yùn)等途徑進(jìn)行傳播擴(kuò)散，因此對(duì)未發(fā)生的區(qū)域應(yīng)嚴(yán)格把好種苗關(guān)，確保種植無(wú)毒種苗，從源頭控制該病毒的危害。此外，生產(chǎn)上盡可能選擇抗病品種，嚴(yán)控?zé)煼凼l(fā)生，加強(qiáng)田間管理，可有效控制番茄黃化曲葉病的發(fā)生與流行。

4 結(jié)論

侵染海南番茄的TYLCV可能來(lái)自我國(guó)大陸的番茄等種苗和煙粉虱帶毒傳入，也有可能來(lái)自墨西哥和美國(guó)等其他國(guó)家。本研究首次在海南番茄上檢測(cè)到TYLCV，并明確其分子特征，為開(kāi)展TYLCV在我國(guó)的擴(kuò)散、種群遺傳特征分析、病毒變異與進(jìn)化等研究提供了素材，更為海南省番茄黃化曲葉病的防控提供科學(xué)依據(jù)。

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（責(zé)任編輯 麻小燕）

收稿日期：2019-12-16

基金項(xiàng)目：國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2018YFD0201209）;廣東省基礎(chǔ)與應(yīng)用基礎(chǔ)研究基金項(xiàng)目（2019A1515012150）;廣州市科技計(jì)劃項(xiàng)目（201904010173）;廣東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)共性關(guān)鍵技術(shù)研發(fā)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)項(xiàng)目（2019KJ134）

作者簡(jiǎn)介：*為通訊作者，何自福（1966-），研究員，主要從事植物病理研究工作，E-mail：hezf@gdppri.com。湯亞飛（1980-），主要從事蔬菜病毒研究工作，E-mail：yf.tang1314@163.com