HPLC法測(cè)定沖和顆粒中橙皮苷的含量

★ 王靜 張若良（贛州市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心 江西 贛州 341000）

沖和顆粒由山楂、陳皮、法半夏等多味藥組成，是贛州市中醫(yī)院根據(jù)幾十年臨床使用歷史積累下的經(jīng)驗(yàn)方研發(fā)而成的制劑。具有消食、導(dǎo)滯、和胃的功效，用于積食停滯，脘腹脹滿，噯腐吞酸，不欲飲食，也適用于消化性潰瘍。陳皮中所含有的有效成分是橙皮苷［1］（Hesperidin）。橙皮苷是一種黃酮類化合物，廣泛存在于蕓香科柑橘屬植物中［2］，具有抑菌、抗炎、抗病毒等多種生物活性作用，是維生素類藥［3］，可用于臨床上心血管系統(tǒng)疾病的輔助治療。為了有效控制沖和顆粒的內(nèi)在質(zhì)量，本試驗(yàn)研究了該制劑中橙皮苷的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 Aglient1260高效液相色譜儀；紫外檢測(cè)器；Chemstation色譜工作站；電子分析天平。

1.2 試劑 橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110721-200616）；沖和顆粒（市售，批號(hào)：20151211，規(guī)格：9g）；乙腈為色譜純，水為一級(jí)水，甲酸為優(yōu)級(jí)純，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil Plus C18-A（250mm×4.6mm，5μm）；流 動(dòng) 相：乙 腈 -0.1%甲酸（20∶80）；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：283nm；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液 精密稱定橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品，加甲醇制成每1mL含橙皮苷20μg的溶液。

2.2.2 供試品溶液 精密稱定裝量差異項(xiàng)下的本品約4g，混勻，研細(xì)，置150mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）30min，取出，放冷，再稱定重量，加甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即為供試品溶液。

2.2.3 陽(yáng)性對(duì)照溶液 取生產(chǎn)用陳皮藥材，同供試品溶液制備方法制成陽(yáng)性對(duì)照溶液。

2.2.4 陰性對(duì)照溶液 按制劑制備工藝取不含陳皮的藥材制成陰性樣品。

2.3 專屬性試驗(yàn) 分別取橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品、供試品、陽(yáng)性和陰性對(duì)照品，在3.1色譜條件下測(cè)定。圖1為各溶液測(cè)得的色譜圖，表明橙皮苷峰的相似性在供試品中與標(biāo)準(zhǔn)品和陽(yáng)性對(duì)照品中一致。陰性對(duì)照在橙皮苷的峰位上未出現(xiàn)色譜峰，說(shuō)明供試品中其它成分對(duì)橙皮苷的測(cè)定無(wú)干擾。

圖1 HPLC色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品，分別制成每1mL含 5.01，10.02，20.04，40.08，400.8μg的對(duì)照品溶液，精密吸取上述溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以橙皮苷對(duì)照濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得線性回歸方程為：Y=18.072 X-0.97853，r=1.0000。結(jié)果表明橙皮苷在5.01～400.8μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液10μL，按照3.1色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得色譜峰積分面積RSD為0.79%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 分別精密稱取同一批號(hào)（批號(hào)20151211）的樣品5份，按供試品溶液制備方法制備，根據(jù)本實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定，結(jié)果樣品中橙皮苷的平均含量為2.87mg/袋，RSD為0.18%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液（批號(hào)20151211）10μL，按3.1色譜條件，分別于制備后0，2，4，6，8，10h測(cè)定，測(cè)得色譜峰面積的RSD為0.90%，結(jié)果表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗(yàn) 取供試品及標(biāo)準(zhǔn)品貯備液，分別按供試品取樣含量與標(biāo)準(zhǔn)品加入量比例1∶0.5、1∶1、1∶1.5，根據(jù)供試品溶液的制備方法制成溶液，測(cè)定峰面積。加樣回收率統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1，表明橙皮苷的平均回收率為98.2%，RSD為1.8%（n=9）。

表1 橙皮苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品測(cè)定 分別精密稱取10批待測(cè)樣品各4g，按供試品溶液制備方法制備。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液各10μL，根據(jù)本實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 十批樣品橙皮苷含量測(cè)定結(jié)果 mg/袋

3 討論

橙皮苷的含量測(cè)定方法已經(jīng)有較多文獻(xiàn)［4-5］，根據(jù)用HPLC分析測(cè)定相關(guān)藥片或制劑中橙皮苷含量的文獻(xiàn)［6-8］基礎(chǔ)上，本研究從柱溫、流速、水相酸濃度以及不同品牌色譜柱等多個(gè)方面考察了本實(shí)驗(yàn)方法的耐用性，確定最佳色譜條件為色譜柱Diamonsil Plus C18-A（4.6mm×250mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸（20∶80），流速1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)283nm，柱溫40℃，進(jìn)樣量10μL。本實(shí)驗(yàn)方法使橙皮苷色譜峰達(dá)到基線分離，靈敏度高，檢測(cè)范圍廣，精密度實(shí)驗(yàn)表明連續(xù)5次進(jìn)樣橙皮苷峰面積的RSD為0.79%，穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明本實(shí)驗(yàn)法在10h內(nèi)測(cè)得的橙皮苷含量準(zhǔn)確，為沖和顆粒中橙皮苷的含量測(cè)定建立了一種可靠的方法。