幾種小分子c-Met抑制劑類抗腫瘤藥物概述

★ 肖飛 彭紅 金鑫 張婷（江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 南昌 330004）

c-Met或稱HGFR，是一種由c-Met原癌基因（主要存在于干細(xì)胞、祖細(xì)胞）編碼的蛋白產(chǎn)物，它是一類具有高度親和性的受體酪氨酸激酶，是肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子跨膜受體，具有酪氨酸激酶活性屬于RON亞族［1］。c-Met是由α鏈和β鏈相連而形成的異二聚體［2］，主要表達(dá)于上皮細(xì)胞，也可見(jiàn)于內(nèi)皮細(xì)胞、肝細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞及造血細(xì)胞，在胚胎發(fā)育和創(chuàng)傷愈合中發(fā)揮著重要作用。肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）是由間質(zhì)細(xì)胞分泌的c-Met受體唯一配體。c-Met受體在細(xì)胞的代謝、分化以及調(diào)亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中起著重要作用，其與配體結(jié)合，可激活下游5條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路［3］，如RAS/RAF、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活子（STAT）、Notch以及Beta-catenin，促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂、形態(tài)發(fā)生等生物學(xué)反應(yīng)，從而參與胚胎發(fā)育、組織損傷修復(fù)、肝再生以及腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。c-Met信號(hào)通道和癌細(xì)胞耐藥性相關(guān)［4］，使得多靶點(diǎn)激酶抑制劑的開(kāi)發(fā)獲得理論支撐。

c-Met表達(dá)激活是通過(guò)增加factor-1α（HIF-1α）缺氧誘導(dǎo)所致缺氧和導(dǎo)致缺氧腫瘤的侵襲。HIF-1α減少c-Met的表達(dá)可以由VEGF抑制劑造成血管修剪而觸發(fā)，對(duì)遷徙、侵入性腫瘤細(xì)胞和通過(guò)轉(zhuǎn)移傾向性擴(kuò)散具有選擇性［5］。c-Met激酶能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的遷移，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲能力并引發(fā)腫瘤新生血管的形成，以c-Met為靶標(biāo)可相對(duì)容易地實(shí)現(xiàn)對(duì)多條通路的同時(shí)干擾。因而，c-Met是抗腫瘤轉(zhuǎn)移治療的一個(gè)極有希望的靶點(diǎn)，正成為抗腫瘤藥物研究的熱點(diǎn)之一。

1 小分子c-Met抑制劑類藥物抗腫瘤作用機(jī)制：c-Met信號(hào)通路

c-Met與肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子細(xì)胞外域特異性結(jié)合誘導(dǎo)c-Met發(fā)生聚合從而進(jìn)一步誘導(dǎo)結(jié)合域的Tyr1234/1235位點(diǎn)發(fā)生磷酸化反應(yīng)，刺激末端結(jié)合域Tyr1349/1356磷酸化以收集細(xì)胞間質(zhì)因子。募集到的細(xì)胞因子如PLC、GAB1等吸引SHP2/CRKL等對(duì)接分子，最終達(dá)到激活JAK/STAT等調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、遷移、存活和凋亡等信號(hào)通路［6］，調(diào)節(jié)過(guò)程見(jiàn)下圖1［7］。在人體正常生理?xiàng)l件下，人體細(xì)胞表面會(huì)通過(guò)泛素介導(dǎo)、胞內(nèi)清除等機(jī)制調(diào)節(jié)，使得人體發(fā)揮正常生理功能達(dá)到避免過(guò)度表達(dá)的目的［8］。現(xiàn)代臨床表明，c-Met激酶的異?；罨０殡S著惡性腫瘤的發(fā)生，引起的后果不僅是腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移及惡化，還與抗腫瘤藥物治療的耐藥性息息相關(guān)。

圖1 c-Met信號(hào)通路的作用機(jī)制

2 各種小分子c-Met抑制劑類抗腫瘤藥物

小分子c-Met抑制劑類藥物通過(guò)作用于c-Met受體達(dá)到抑制c-Met結(jié)合域磷酸化，從而阻止酪氨酸激酶活化達(dá)到抑制下游信號(hào)傳導(dǎo)產(chǎn)生抗腫瘤作用。伴隨著小分子c-Met抑制劑作用機(jī)制的不斷探究，隨之產(chǎn)生的抑制劑類藥物較傳統(tǒng)抗腫瘤藥物具有的毒副作用性低，療效功能更加確切等優(yōu)點(diǎn)，支撐著小分子c-Met抑制劑類抗腫瘤藥物的不斷發(fā)展。

2.1 Crizotinib Crizotinib（PF-02341066） 是 一種由輝瑞公司研發(fā)作用于c-Met和ALK雙靶點(diǎn)的c-Met抑制劑類抗腫瘤藥物。Christensen J G等［9］進(jìn)行體外試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)Crizotinib作用mIMCD3小鼠以及MDCK犬上皮細(xì)胞，其效用對(duì)c-Met磷酸化的作用結(jié)果極為相似，IC50分別為5nM和20nM。Zou H Y等［10］進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Crizotinib對(duì)U87MG惡性膠質(zhì)瘤或PC-3前列腺癌移植瘤模型進(jìn)行50mg/（kg·d）的劑量給藥其結(jié)果為腫瘤組織生長(zhǎng)幾乎完全被抑制。目前該藥于2016年3月11日獲得FDA批準(zhǔn)應(yīng)用于ROS-1突變型非小細(xì)胞肺癌，并成為首個(gè)應(yīng)用于該適應(yīng)癥的孤兒藥。

2.2 Altiratinib Altiratinib（DCC-2701）是一新型作用于c-MET、TIE-2及VEGFR多靶點(diǎn)的c-Met抑制劑類抗腫瘤藥物，Kwon Y等［11］進(jìn)行體內(nèi)外試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)Altiratinib完全抑制HGF結(jié)合域磷酸化，結(jié)果顯著抑制惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞。在多個(gè)異種移植瘤小鼠模型中應(yīng)用Altiratinib，結(jié)果腫瘤體積顯著下降。Altiratinib通過(guò)多靶點(diǎn)信號(hào)通路作用能顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)，侵襲性血管再生和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤。Altiratinib作為新型小分子c-Met抑制劑能夠起到延長(zhǎng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者的生存期從而改善患者生存質(zhì)量，提高患者后續(xù)生存能力。

2.3 AMG-337 AMG-337是一種具有高度選擇性的ATP競(jìng)爭(zhēng)性c-Met激酶抑制劑類抗腫瘤藥物，其 IC50＜5nM。Hughes P E 等［12］研究發(fā)現(xiàn)，AMG-337在與400多個(gè)Met激酶競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合試驗(yàn)中表現(xiàn)出高度選擇性，在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)AMG-337對(duì)Met激酶結(jié)合域的磷酸化抑制達(dá)到IC50＜10nM。展現(xiàn)出其高效的特性。在c-Met介導(dǎo)相關(guān)的腫瘤模型中，AMG-337的抗腫瘤機(jī)制在口服給藥方式下進(jìn)行的放大胃癌異種移植模型其藥效學(xué)調(diào)控機(jī)制表現(xiàn)為一致，展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景，該小分子化合物值得繼續(xù)研究以期取得良好的臨床治療效果。

2.4 BSM-794833 BMS-794833是作用于Met/VEGFR2激酶的高效ATP競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑類抗腫瘤藥物，IC50值為1.7/15nM。Fargnoli J等［13］的研究表明，BMS-794833表達(dá)出對(duì)各種c-Met介導(dǎo)的磷酸化及細(xì)胞遷移的下游通路的抑制作用。而且在多重腫瘤模型的相關(guān)抑制試驗(yàn)顯示出在有效的劑量水平下，BMS-794833展現(xiàn)出低毒性特征，這為該抑制劑的后續(xù)臨床開(kāi)發(fā)展現(xiàn)出良好的前景。

2.5 Glesatinib hydrochloride Glesatinib hydrochloride是一類作用于c-Met和Axl激酶受體的小分子抑制劑類抗腫瘤藥物，據(jù)John Nemunaitis等［14］的研究可知該化合物口服生物利用率高，在II期試驗(yàn)中NSCLC患者服用Glesatinib可以明顯影響腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，包括胃食管癌癥以及其他實(shí)體瘤，并且與c-Met受體結(jié)合后能有機(jī)的抑制抗藥性的產(chǎn)生，針對(duì)這一特性Mirati公司相信Glesatinib與表皮生長(zhǎng)因子受體抑制劑結(jié)合能夠治療產(chǎn)生抗藥性的病人。

2.6 INCB28060 INCB28060是一種口服新型的ATP競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑類抗腫瘤藥物。INCB28060具有高效價(jià)，耐受性好等優(yōu)點(diǎn)［15］，對(duì)c-Met激酶受體的選擇性比其它大部分人源激酶高出10000多倍，INCB28060通過(guò)抑制c-Met磷酸化達(dá)到抑制c-Met介導(dǎo)的信號(hào)通路的信號(hào)傳導(dǎo)。從而抑制c-Met介導(dǎo)相關(guān)的腫瘤細(xì)胞增殖和存活。口服劑量下INCB28060在小鼠腫瘤模型的效果顯著，通過(guò)激活c-Met調(diào)節(jié)的表皮生長(zhǎng)因子EGFR受體實(shí)現(xiàn)完整腫瘤抑制作用，并且耐受良好。

2.7 LY2801653 LY2801653是一種II型口服相容性ATP競(jìng)爭(zhēng)性慢抑制劑類抗腫瘤藥物，Ki=2nM，IC50為35.2±6.9nM。藥效的停留時(shí)間為0.00132min，t1/2=525min。LY2801653體外試驗(yàn)顯示該抑制劑對(duì)Met信號(hào)介導(dǎo)的通路作用體現(xiàn)在相傳導(dǎo)的細(xì)胞散射和細(xì)胞增殖［16］。對(duì)比未表達(dá)過(guò)c-Met信號(hào)的細(xì)胞系來(lái)說(shuō)，Met基因擴(kuò)增導(dǎo)致MKN45，Hs746T和H1993等信號(hào)過(guò)表達(dá)的細(xì)胞系，LY2801653具有更加有效的抗腫瘤細(xì)胞增殖作用。LY2801653能夠?qū)?3種突變型Met具有活性作用［17］。MKNK1/2，MST1R，F(xiàn)LT3，AXL，MERTK， TEK，ROS1，DDR1/2 等 酪氨酸激酶受體仍然會(huì)受到LY2801653的作用。在肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子刺激下的H460細(xì)胞中，LY2801653通過(guò)抑制Met自動(dòng)磷酸化，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、遷移、存活和凋亡等信號(hào)通路的調(diào)控最終實(shí)現(xiàn)抗腫瘤細(xì)胞增殖的目的。

2.8 MK-2461 MK-2461是一種作用于c-Met（M1250T/Y1230C/Y1230H/N1100/Y1230C），F(xiàn)LT1，F(xiàn)LT3，F(xiàn)GFR等靶點(diǎn)的多靶點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑類抗腫瘤藥物［18］。IC50為 0.4～2.5nM，對(duì) Ron及Flt1作用效果稍弱；相比較于FGFR1，F(xiàn)GFR2，F(xiàn)GFR3，PDGFRβ，KDR，F(xiàn)lt3，F(xiàn)lt4，TrkA 和TrkB等受體，作用于c-Met系列靶點(diǎn)的選擇性能高，且高 8～30倍［19］。MK-2461能有效抑制 FGFR1，F(xiàn)GFR2，F(xiàn)GFR3，KDR，TrkA，TrkB和 Flt4，IC50分別為65nM，39nM，50nM，44nM，46nM，61nM和78nM。與野生型c-Met，比較，MK-2461對(duì)原癌基因有更強(qiáng)的抑制作用。MK-2461與磷酸化c-Met結(jié)合更強(qiáng)。MK-2461能夠有效的抑制由ATP誘導(dǎo)的c-Met自磷酸化而產(chǎn)生在羧基端結(jié)合域。與此相反［20］MK-2461在 Kato III細(xì)胞和H1703細(xì)胞中抑制FGFR2（Y653/Y654）以及對(duì)PDGFR-α（Y849）的激活環(huán)磷酸活化，IC50均＜0.3μM。MK-2461在4MBr-5細(xì)胞中抑制肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的絲裂原和在HPAF II細(xì)胞中肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的遷移，IC50=404nM，以及由肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的MDCK細(xì)胞分支管型的形成。此外，MK-2461還能有效抑制由Tpr-Met或Tpr-Met（y362c）突變的32D細(xì)胞中IL-3非依賴性增殖，IC50=100nM。MK-2461能明顯對(duì)廣譜腫瘤細(xì)胞系增殖產(chǎn)生抑制，特別是針對(duì)高表達(dá)的MET和FGFR2的癌細(xì)胞，口服MK-2461劑量為10mg/kg、50mg/kg、100mg/kg，每日兩次或200mg/kg/d。口服處理可有效抑制GTL-16移植小鼠模型中腫瘤生長(zhǎng)，抑制率分別為62%，77%，75%，和90%。區(qū)別于其他ATP競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，被激活的c-Met激酶受體能夠與MK-2461優(yōu)先結(jié)合，這一優(yōu)勢(shì)是目前已知的小分子酪氨酸激酶抑制劑所沒(méi)有的。

2.9 MK-8033 MK-8033是作用于c-Met/Ron雙靶點(diǎn)的ATP競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑類抗腫瘤藥物，對(duì)野生型c-Met激酶受體的IC50=1nM，對(duì)c-Met家族系列的N1100Y的IC50=2.0nM。與未磷酸化的對(duì)應(yīng)物（Kd=10.4nM）相比，MK-8033比磷酸化的c-Met激酶結(jié)合域（Kd=3.2nM）能更緊密地結(jié)合3倍。值得注意的是［21］，除了其他c-Met激活突變體N1100Y和M1250T外，MK-8033還能有效抑制三種致癌c-Met激活環(huán)突變體：Y1230C，Y1230H和Y1235D的激酶活性（在50μMATP下IC50范圍為0.6nM～1nM）。MK-8033對(duì)GTL-16的增殖能產(chǎn)生明顯抑制，IC50為582±30nM。相比之下，不含有基礎(chǔ)c-Met激活的HCT116細(xì)胞系不被MK-8033抑 制（IC50＞10000nM）。MK-8033對(duì) 高 c-Met表達(dá)的EBC-1和H1993細(xì)胞放射敏感，但不表達(dá)低c-Met表達(dá)的細(xì)胞系A(chǔ)549和H460。然而將A549和H460細(xì)胞在照射30min后增加c-Met蛋白的表達(dá)。隨后通過(guò)使用MK-8033進(jìn)行第二次輻射劑量，靶向這種上調(diào)的c-Met降低了A549和H460細(xì)胞的克隆生存，MK-8033降低了A549細(xì)胞中輻射誘導(dǎo)的磷酸化（活化）c-Met的水平［22］。MK-8033口服給藥于GTL-16腫瘤異種移植小鼠。給藥1h后將小鼠安樂(lè)死，并在腫瘤組織測(cè)試p-Met（Y1349），并在血漿中測(cè)試MK-8033濃度。在100mg/kg時(shí)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)p-Met（Y1349）基本上完全的抑制。從血漿MK-8033水平和Met pY1349之間的關(guān)系推導(dǎo)出體內(nèi)IC50=1.3μM。

2.10 AZD-6094 AZD-6094是一種口服生物有效的c-Met受體酪氨酸激酶抑制劑類藥物，其IC50為5nM，具有潛在的抗腫瘤活性［23］。AZD-6094在小鼠中表現(xiàn)出有利的藥代動(dòng)力學(xué)特性，在無(wú)胸腺裸鼠的神經(jīng)膠質(zhì)瘤異種移植模型中具有良好的抗腫瘤活性［24］。AZD-6094以ATP競(jìng)爭(zhēng)性方式選擇性的結(jié)合并抑制c-Met的活化，通過(guò)破壞c-Met信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)c-Met基因過(guò)表達(dá)介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制［25-26］。c-Met基因編碼的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶，并在腫瘤細(xì)胞增殖，存活，侵襲和轉(zhuǎn)移以及腫瘤血管發(fā)生中起重要作用，這種蛋白質(zhì)在多種癌癥中過(guò)表達(dá)或突變。

2.11 其他c-Met小分子抑制劑類抗腫瘤藥物 ARQ-197是第一個(gè)非ATP競(jìng)爭(zhēng)性的c-Met抑制劑類藥物，在無(wú)細(xì)胞試驗(yàn)中Ki=0.355μM，ARQ-197在體外阻止HGF/c-Met誘導(dǎo)的細(xì)胞反應(yīng)［27］。ARQ-197還能抑制A549，DBTRG和NCI-H441細(xì)胞的增殖，IC50分別為 0.38μM、0.45μM、0.29μM。ARQ-197阻斷c-Met自磷酸化以及對(duì)下游c-Met信號(hào)傳導(dǎo)途徑的阻斷ARQ-197并且通過(guò)延伸，抑制c-Met活性，從而導(dǎo)致下游c-Met效應(yīng)子的抑制［28］；PHA665752是一種有效的、選擇性的ATP競(jìng)爭(zhēng)性小分子c-Met抑制劑類抗腫瘤藥物，IC50為9nM，主要用于治療胃癌和肺癌［29］。

3 小結(jié)

c-Met參與介導(dǎo)多種生理與病理過(guò)程，c-Met的過(guò)表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移以及耐藥性密切相關(guān)。c-Met目前作為一個(gè)潛在的腫瘤治療靶點(diǎn)，其抑制劑類藥物的研究現(xiàn)已成抗腫瘤藥物研究發(fā)展的熱點(diǎn)領(lǐng)域。而小分子c-Met抑制劑類抗腫瘤藥物以其作用機(jī)制清晰，合成簡(jiǎn)便易于修飾等優(yōu)點(diǎn)成為是最具潛力的抗腫瘤藥物。隨著HGF/c-Met信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑及以及腫瘤作用發(fā)生機(jī)制研究的不斷深入，相信將會(huì)有更多的小分子c-Met抑制劑類藥物被開(kāi)發(fā)出來(lái)，成為對(duì)抗腫瘤的有效藥物，為癌癥患者對(duì)抗病魔注入強(qiáng)大的信心。