月桂醇硫酸鈉對金黃色葡萄球菌的抗菌作用研究

王升　衷馳　何正飛　吳顯杰　郭麗娟

【摘 要】通過配制等差梯度的月桂醇硫酸鈉溶液分別作用于相同形態(tài)大小的金黃色葡萄球菌培養(yǎng)基并設(shè)立空白對照，觀察其它培養(yǎng)基菌落形態(tài)數(shù)量與空白對照培養(yǎng)基菌落形態(tài)數(shù)量的差別，結(jié)果顯示，隨著月桂醇硫酸鈉溶液濃度的遞增，菌落抑菌圈直徑越大。初步證明月桂醇硫酸鈉具有一定的抗菌作用，且只能阻止細菌的生長繁殖，并不能直接殺滅細菌。高濃度的月桂醇硫酸鈉溶液對金黃色葡萄球菌的排斥效果更強。

【關(guān)鍵詞】月桂醇硫酸鈉 金黃色葡萄球菌 抑菌圈

一、前 言

陰離子表面活性劑月桂醇硫酸鈉（SDS）有親水親油結(jié)構(gòu)并且能降低表面張力和表面能，還能對溶液進行乳化、潤濕、成膜等。SDS現(xiàn)在已經(jīng)廣泛地應(yīng)用于生物工程、臨床醫(yī)學(xué)診斷和治療、納米材料等高新技術(shù)領(lǐng)域。隨著溫度的升高，月桂醇聚氧乙烯醚硫酸鈉的臨界膠束濃度逐漸增大，電導(dǎo)率升高。隨著對SDS結(jié)構(gòu)與性能的認識和研究，近來發(fā)現(xiàn)月桂醇硫酸鈉可以顯著增強治療良性前列腺增生的藥物—度他雄胺的熒光強度，從而簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確檢測人體血清及度他雄胺軟膠囊中度他雄胺含量。SDS能夠提高黃酮類藥物槲皮素的溶出度，從而提高它的生物利用度。SDS能夠淋洗修復(fù)土壤中以萘為代表的多環(huán)芳烴污染物。月桂醇硫酸鈉可作為表面去污活性成分，與抗菌液混合制備一種新型的洗手液。近年來發(fā)現(xiàn)利用低濃度SDS涂抹小鼠皮膚可建立銀屑病動物模型。

金黃色葡萄球菌（SA）是一種臨床常見革蘭氏陽性致病菌，能引起蜂窩織炎、偽膜性腸炎、氣管炎、傷口化膿及敗血癥、膿毒血癥等全身性感染。但由于抗生素的濫用，相繼出現(xiàn)了耐青霉素、耐甲氧西林、耐萬古霉素的SA。因此抗金黃色葡萄球菌感染仍然是一個具有挑戰(zhàn)性的工程，尤其是金黃色葡萄球菌的耐藥性問題，還需要進一步的研究。本實驗設(shè)置等差梯度溶液組以及空白對照組探究不同濃度月桂醇硫酸鈉溶液對金黃色葡萄球菌作用后結(jié)果的對比與分析，闡述月桂醇硫酸鈉是否具有抗菌活性。

二、實驗部分

1.儀器與試劑

金黃色葡萄球菌凍干粉標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC25923）、菌株復(fù)溶液A（南京便診生物科技有限公司）培皿型號：6cm*10（深圳市好質(zhì)全實驗室耗材有限公司）月桂醇硫酸鈉凝膠 SLES 2EO （山東優(yōu)索化工科技有限公司）高壓蒸氣鍋、恒溫水浴箱、100ml容量瓶、量筒、托盤天平、游標(biāo)卡尺

2.溶液制備

配制等差梯度濃度的月桂醇硫酸鈉溶液，物質(zhì)的量濃度分別為0.125、0.250、0.375、0.500mol/L。托盤天平分別稱量3.6g、7.2g、10.8g、14.4g月桂醇硫酸酯鈉晶體，并分別溶于100ml水，制得物質(zhì)的量濃度分別為0.125、0.250、0.375、0.500mol/L的月桂醇硫酸鈉溶液。

3.培養(yǎng)基制備

制備Baird-Parker培養(yǎng)基。取30%卵黃鹽水50ml與除菌過濾的1%亞銻酸鉀10ml混合，保存于冰箱內(nèi)。加入胰蛋白胨10g，牛肉膏5g、酵母膏1g、丙酮酸鈉10g，甘氨酸12g，氯化鋰5g，瓊脂20g、蒸餾水950ml，加熱煮沸至完全溶解。冷卻至25℃，校正pH。分裝每瓶95ml，121℃高壓滅菌15min。每瓶加入預(yù)熱至50℃的卵黃亞銻酸鉀增菌劑5ml，搖勻后傾注平板。

制備7.5%氯化鈉肉湯培養(yǎng)基。加入蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化鈉75g，蒸餾水1000ml加熱溶解，調(diào)節(jié)pH至7.4，分裝每瓶225 ml，121℃高壓滅菌15min。

4.細菌接種培養(yǎng)

挑選金黃色葡萄球菌菌種接種于7.5%氯化鈉肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，置于37℃恒溫浴箱培養(yǎng)6-8h。將上述培養(yǎng)物，分別劃線接種到Baird-Parker培養(yǎng)基，于36℃±1℃培養(yǎng)18-24h。

5.細菌形態(tài)觀察

在溫度37℃，pH 7.4的干燥環(huán)境下，培養(yǎng)基金黃色葡萄球菌菌落厚、有光澤、圓形凸起，菌落平均直徑0.5-1.0㎜。

6.藥敏實驗

制作藥敏片、抗菌藥紙片 取新華1號定性濾紙，用打孔機打成6毫米直徑的圓形小紙片。取圓紙片50片放入清潔干燥的青霉素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包扎。經(jīng)15磅15-20分鐘高壓消毒后，放在37℃溫箱或烘箱中數(shù)天，使完全干燥。在上述含有50片紙片的青霉素瓶內(nèi)加入藥液0.25毫升，并翻動紙片，使各紙片充分浸透藥液，翻動紙片時不能將紙片搗爛。同時在瓶口上記錄藥物名稱，放37℃溫箱內(nèi)過夜，干燥后即密蓋。

用滅菌接種環(huán)取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點涂菌，以每點開始劃線涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布于平皿。將鑷子于酒精燈火焰滅菌后略停，取藥敏片貼到平皿培養(yǎng)基表面。

7.抑菌圈直徑測量

將平皿培養(yǎng)基置于37℃溫箱中培養(yǎng)24小時后，觀察效果。在涂有細菌的瓊脂平板上，抗菌藥物在瓊脂內(nèi)向四周擴散，其濃度呈梯度遞減，因此在紙片周圍一定距離內(nèi)的細菌生長受到抑制。過夜培養(yǎng)后形成一個抑菌圈，抑菌圈越大，說明該菌對此藥敏感性越大，反之越小，若無抑菌圈，則說明該菌對此藥具有耐藥性。藥物瓊脂周圍的一段區(qū)域不生長細菌，且呈圓形，以瓊脂中點為圓心，圓心至圓形邊緣（菌落區(qū)與無菌落區(qū)交界處）的距離為抑菌圈直徑，抑菌圈內(nèi)無細菌生長。

抑菌圈直徑（㎜）與敏感度定量關(guān)系20以上極敏、15—20高敏、10—14中敏、10以下低敏、0不敏

三、結(jié)果與討論

實驗中培養(yǎng)基抑菌圈直徑數(shù)據(jù)列于表1

從表1中得出，隨著月桂醇硫酸鈉溶液濃度等梯度增加，1-4號培養(yǎng)基菌落數(shù)量愈來愈少，且均少于5號培養(yǎng)基。證明月桂醇硫酸鈉具有一定的抗菌作用，且高濃度的月桂醇硫酸鈉的抑菌效果更加明顯。此外，抑菌圈直徑也隨濃度增加呈現(xiàn)增大的趨勢。

月桂醇硫酸鈉不同于抗生素和磺胺藥物，抗生素有兩種抗菌機制，一是通過與細菌細胞壁成分結(jié)合形成復(fù)合物，從而阻斷細胞壁的合成，導(dǎo)致細菌死亡.二是通過抑制細菌肽鏈、蛋白質(zhì)生物合成，抑制其生長和繁殖?；前匪幬锸峭ㄟ^抑制二氫葉酸轉(zhuǎn)換為四氫葉酸，從而干擾一碳單位的傳遞，影響核酸的合成，導(dǎo)致細菌不能生長繁殖。而月桂醇硫酸鈉可能只是對細菌造成排斥，影響其生長繁殖，并不能直接殺滅細菌。

四、結(jié)論

本實驗通過設(shè)置等差梯度的溶液初步證明月桂醇硫酸鈉具有一定的抗菌作用，且只能阻止金黃色葡萄球菌的生長繁殖，并不能直接殺滅細菌。高濃度的月桂醇硫酸鈉溶液對金黃色葡萄球菌的排斥效果更強。但是月桂醇硫酸鈉對金黃色葡萄球菌具體作用機制及細菌對藥物是否具有耐藥性均尚不清楚，需要開展進一步的研究。

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