• 
    

    
    

      99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

      長(zhǎng)鏈非編碼RNA在脂多糖刺激的大鼠腸巨噬細(xì)胞中的差異表達(dá)

      2017-03-23 23:07:28劉路路鄒松錢小寶陳吉祥瞿建國(guó)崔磊張建新黨勝春
      中國(guó)普通外科雜志 2017年4期
      關(guān)鍵詞:共表達(dá)屏障功能障礙

      劉路路,鄒松,錢小寶,陳吉祥,瞿建國(guó),崔磊,張建新,黨勝春

      (江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院 普通外科,江蘇 鎮(zhèn)江 212001)

      腸黏膜屏障具有促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物吸收和防止細(xì)菌入侵的功能[1]。重癥急性胰腺炎、炎性腸病和感染性腹瀉綜合征等許多疾病可導(dǎo)致腸屏障功能障礙[2-4]。巨噬細(xì)胞通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞因子分泌等作用方式調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)及免疫應(yīng)答,在腸道免疫屏障中起重要作用[5]。

      lncRNA轉(zhuǎn)錄物缺少顯著的開放閱讀框(open reading frame,ORF),由長(zhǎng)度超過(guò)200個(gè)核苷酸分子組成,以前被認(rèn)為是轉(zhuǎn)錄“噪音”[6-7]。隨著lncRNA基因芯片、高通量測(cè)序技術(shù)和生物信息學(xué)的發(fā)展,越來(lái)越多的lncRNA被發(fā)現(xiàn),在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中引起相當(dāng)大的關(guān)注[8-9]。它們具有許多生物學(xué)功能,包括基因組印記,染色體劑量補(bǔ)償,X染色體沉默,染色體修飾,核內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)和轉(zhuǎn)錄激活[10]。最近研究[11-13]表明lncRNA參與調(diào)控許多生物過(guò)程和人類疾病,包括造血、癌癥、肌肉生物學(xué)和免疫學(xué)等。最近研究[14-15]表明lncRNA可以調(diào)控炎癥反應(yīng),其中最重要的效應(yīng)細(xì)胞是巨噬細(xì)胞。然而,關(guān)于它們?cè)谀c巨噬細(xì)胞和腸屏障功能障礙中的潛在作用有待深入研究。在這項(xiàng)研究中,主要目的是研究LPS誘導(dǎo)培養(yǎng)大鼠腸巨噬細(xì)胞炎癥模型中l(wèi)ncRNA的表達(dá)譜,為后期研究提供方向。

      1 材料與方法

      1.1 材料

      SD大鼠200~250 g(揚(yáng)州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。RPMI 1640培養(yǎng)基、FBS、青霉素和鏈霉素購(gòu)自Hyclone公司。等滲細(xì)胞分離溶液(Percoll溶液)、膠原酶IV購(gòu)自Worthington公司。一抗為CD14兔源多克隆抗體,按1:300稀釋;二抗為FITC偶聯(lián)山羊抗兔IgG(H+L),稀釋比例為1:50(碧云天生物技術(shù)公司)。Agilent 2100生物分析儀(美國(guó)安捷倫科技公司)。TRIzol試劑、引物/探針、DEPC H2O、SuperScript III Reverse Transcriptase、SYBR Green I、oligo dT/Random primer、Platinum Taq DNA Polymerase、100mM dNTPs購(gòu)自Invitrogen公司,miRNAeasy Mini Kit(QIAGEN公司)。Rnase Inhibitor購(gòu)自Fermentas公司。上海其名生物技術(shù)公司進(jìn)行選擇芯片,設(shè)計(jì)探針,分析數(shù)據(jù)等工作。

      1.2 方法

      1.2.1 分離培養(yǎng)及鑒定腸巨噬細(xì)胞 分離培養(yǎng)及鑒定腸巨噬細(xì)胞同本課題組前期研究方法[16]。用RPMI 1640 培養(yǎng)基(10%FBS,青霉素 100 μg/mL;鏈霉素100 U/mL)將細(xì)胞濃度調(diào)到5×l05/L接種于96孔板和6孔板中,每孔分別為200 μL和2 mL,置于37 ℃、體積分?jǐn)?shù)5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將其接種于24孔板,讓其貼壁。待生長(zhǎng)狀態(tài)良好后,PBS清洗,甲醇固定后,分別加1 mL PBS-T、PBS-B 液并分別于 4 ℃下處理細(xì)胞 10 min,37 ℃處理細(xì)胞30 min。加一抗,4 ℃下孵育過(guò)夜。次日移除一抗PBS清洗5 min,加二抗37 ℃下孵育,1 h后用PBS洗滌3次,每次5 min。封片,用熒光顯微鏡觀察并拍照,呈綠色熒光則陽(yáng)性。

      1.2.2 提取腸巨噬細(xì)胞總RNA 對(duì)照組不給藥,實(shí)驗(yàn)組 LPS給藥濃度為 1 mg/L,培養(yǎng) 6h后使用TRIzol試劑提取總RNA。用含RNA的水相和miRNAeasy Mini試劑盒進(jìn)行總RNA純化。通過(guò)使用分光光度計(jì) 2000(Thermo Scientific)測(cè)量 260 nm和280 nm處的吸光度的比率來(lái)評(píng)估RNA的純度。在瓊脂糖凝膠上觀察測(cè)量RNA完整性。

      1.2.3 基因芯片分析及構(gòu)建共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)圖在 Genminix Informatic Ltd(中國(guó)上海) 進(jìn)行微陣列實(shí)驗(yàn),選擇 Affymetrix Gene Chip Mouse Transcriptome Array 1.0分析兩組差異表達(dá)的lncRNA。芯片檢測(cè)的大體步驟:樣本RNA抽提及質(zhì)量檢測(cè)、cDNA合成、正義鏈cDNA片段化、生物素標(biāo)記、芯片雜交、洗脫、掃描、檢測(cè)信號(hào)值過(guò)濾去除低于背景的弱信號(hào)值。構(gòu)建共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)圖,計(jì)算基因間Pearson相關(guān)系數(shù),根據(jù)其大小篩選有共表達(dá)關(guān)系的基因構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)圖。

      1.2.4 RT-qPCR 大鼠腸巨噬細(xì)胞總RNA提取后轉(zhuǎn)錄為cDNA。先根據(jù)lncRNA-mRNA-Network分析結(jié)果,挑選差異>0.5的lncRNA。經(jīng)過(guò)此步篩選,剩下32個(gè)lncRNA。然后結(jié)合差異lncRNA分析結(jié)果,挑選差異程度比較大的lncRNA。篩選的閾值為差異倍數(shù)為2倍及以上,經(jīng)過(guò)此步篩選,剩下了7個(gè)lncRNA,再?gòu)闹须S機(jī)挑選1個(gè)上調(diào)及1個(gè)下調(diào)的lncRNA加以驗(yàn)證,為以后的研究做準(zhǔn)備,其逆轉(zhuǎn)錄引物序列如下:NONMMUT024673上游引物 5'-TGT TGG GAT GTC AGC TCT GC-3',下游引物 5'-TGG GCT GTG ACG GAC TAA AC-3';NONMMUT047081上游引物 5'-TCA ATT CCA GGA CTC TGG ATG C-3',下游引物 5'-GGA TGG GTC TTC TAA TTG CAC C-3'。用 SYBR 染料法,以MUS-actin為參照。使用熒光定量PCR儀(CFX96TM Real-Time Systerm,Bio Rad),用2-ΔΔCt方法分析目的基因表達(dá)水平。

      1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

      芯片差異lncRNA統(tǒng)計(jì)分析采用RVM修正后的t檢驗(yàn)(two-samplet-test with random variance model),使用工具為BRB-array Tools(V4.3.2)。聚類分析使用的是層次聚類,工具為Cluster 3.0和TreeViewer;RT-qPCR用的是配對(duì)樣本t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      2 結(jié) 果

      2.1 腸巨噬細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定

      用顯微鏡觀察大鼠的腸巨噬細(xì)胞可見細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,活力約80%~85%,綠色熒光是CD14陽(yáng)性細(xì)胞,即為大鼠腸巨噬細(xì)胞(圖1)。

      圖1 腸巨噬細(xì)胞的鑒定(×100) A:光鏡觀察;B: CD14熒光染色Figure 1 Identi fication of intestinal macrophages A: Microscopic view; B: fl uorescence staining for CD14

      2.2 基因芯片分析lncRNA表達(dá)譜

      應(yīng)用基因芯片分析LPS誘導(dǎo)的大鼠腸巨噬細(xì)胞組和未處理組之間lncRNA表達(dá)譜。LPS刺激的腸巨噬細(xì)胞組和對(duì)照組之間差異表達(dá)的lncRNA總共有357個(gè),其中245個(gè)上調(diào),112個(gè)下調(diào)(變化倍數(shù)>1.5)(表1)。通過(guò)分層聚類的方法分析了兩組差異表達(dá)的lncRNA(圖2),可見LPS處理和未處理的腸巨噬細(xì)胞間存在差異表達(dá)的lncRNA。

      2.3 構(gòu)建lncRNA-mRNA共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)

      lncRNA-mRNA共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析探討哪些lncRNA在大鼠腸巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中的作用。結(jié)果表明,lncRNA NONMMUT047081,NONMMUT024673在網(wǎng)絡(luò)中可能起重要作用(圖3)。GO分析和通路分析顯示這些編碼基因參與多種生物過(guò)程,包括炎癥反應(yīng),免疫應(yīng)答和細(xì)胞凋亡。根據(jù)這些結(jié)果,篩選的lncRNA NONMMUT024673、NONMMUT047081可以進(jìn)一步分析,以闡明在腸巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中的作用,以及在腸屏障功能失調(diào)中的作用機(jī)制。

      表1 前20個(gè)差異表達(dá)的lncRNATable 1 Top 20 differentially expressed lncRANs

      圖2 分層聚類分析差異表達(dá)的lncRNAFigure 2 Hierarchical clustering analysis of the differentially expressed lncRNAs

      圖3 lncRNA-mRNA共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)圖Figure 3 lncRNA-mRNA co-expression network plot

      2.4 RT-qPCR驗(yàn)證

      為驗(yàn)證芯片結(jié)果的準(zhǔn)確性,采用RT-qPCR技術(shù)對(duì)篩選的兩個(gè)差異表達(dá)lncRNA NONMMUT024673、NONMMUT047081進(jìn)行驗(yàn)證,PCR結(jié)果與芯片結(jié)果一致(圖4)。

      圖4 RT-qPCR驗(yàn)證基因芯片數(shù)據(jù)Figure 4 Veri fication of microarray data by RT-qPCR

      3 討 論

      腸黏膜屏障是保護(hù)人體的重要效應(yīng)器,多種因素如炎癥介質(zhì)、細(xì)菌毒素、缺血再灌注損傷等可引起腸屏障功能障礙[17]。腸黏膜中的巨噬細(xì)胞占人體組織中絕大部分巨噬細(xì)胞,并在腸道免疫屏障中起重要作用,它可促進(jìn)TNF-α、IL-6等炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生,參與級(jí)聯(lián)的形成,導(dǎo)致細(xì)胞功能障礙,從而引起腸屏障功能障礙[18]。LPS誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞中TREM-1的表達(dá),從而激活各種炎癥細(xì)胞因子例如TNF-α及IL-6等,誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞脫顆粒和單核-巨噬細(xì)胞吞噬,這些現(xiàn)象導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的擴(kuò)增[19]。已有研究[20]表明巨噬細(xì)胞吞噬氯膦酸二鈉脂質(zhì)體通過(guò)抑制Akt和MAPK(ERK1/2)來(lái)減少炎癥因子釋放。目前已有許多研究腸巨噬細(xì)胞來(lái)阻斷炎癥的過(guò)度激活,以保護(hù)腸黏膜屏障。

      盡管lncRNA在一些領(lǐng)域取得了快速進(jìn)展,但在炎癥反應(yīng)中的作用才嶄露頭角。最近,Carpenter等[21]證實(shí)小鼠lincRNA-Cox2與多種異質(zhì)核核糖核蛋白(hnRNPs)相互作用以調(diào)控免疫應(yīng)答基因的激活和抑制。Cui等[22]發(fā)現(xiàn)與IL-7受體α亞基(IL7R)基因的3'非翻譯區(qū)(3'UTR)重疊的lnc-IL7R有助于炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)。Chen等[23-24]揭示在潰瘍性結(jié)腸炎中,lncRNA具有調(diào)節(jié)腸屏障功能的作用。此外lncRNA也具有調(diào)控巨噬細(xì)胞的作用,Ma等[25]研究表明linc-Tnfaip3RNA作為NF-κB的調(diào)控因子,可調(diào)控小鼠巨噬細(xì)胞的炎癥基因轉(zhuǎn)錄。

      本研究檢測(cè)LPS誘導(dǎo)大鼠腸巨噬細(xì)胞的炎癥模型中差異表達(dá)的lncRNA,結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,LPS處理的大鼠腸巨噬細(xì)胞中差異表達(dá)的lncRNA共有357個(gè),其中245個(gè)上調(diào),112個(gè)下調(diào)(變化倍數(shù)>1.5)。lncRNA NONMMUT024673、NONMMUT047081在LPS刺激的腸巨噬細(xì)胞中差異表達(dá)顯著。許多研究[26-27]表明lncRNA可以通過(guò)調(diào)節(jié)鄰近編碼基因的轉(zhuǎn)錄來(lái)起作用。筆者推測(cè)lncRNA NONMMUT024673及NONMMUT047081通過(guò)調(diào)節(jié)鄰近的編碼基因來(lái)調(diào)控炎癥反應(yīng)。因此需要運(yùn)用生物信息學(xué)手段尋找表達(dá)差異lncRNA的靶基因,并用分子生物學(xué)技術(shù)加以驗(yàn)證。總之,本研究發(fā)現(xiàn)lncRNA在LPS刺激的大鼠腸巨噬細(xì)胞中差異表達(dá)譜,可能涉及調(diào)控腸屏障功能障礙時(shí)腸巨噬細(xì)胞引起的炎癥反應(yīng),是腸屏障功能障礙潛在的靶點(diǎn)。

      總之,本研究表明LPS處理的大鼠腸巨噬細(xì)胞改變了lncRNA在腸巨噬細(xì)胞中的表達(dá)譜。盡管需要更多的研究來(lái)證明這些lncRNA的確切調(diào)控機(jī)制,但我們鑒定的基因組數(shù)據(jù)可以增加在腸屏障功能障礙時(shí),腸巨噬細(xì)胞中l(wèi)ncRNA調(diào)控炎癥反應(yīng)的了解,為進(jìn)一步研究做準(zhǔn)備。

      [1] Shen L, Su L, Turner JR. Mechanisms and functional implications of intestinal barrier defects[J]. Dig Dis, 2009, 27(4):443–449. doi:10.1159/000233282.

      [2] Xu GF, Guo M, Tian ZQ, et al. Increased of serum high-mobility group box chromosomal protein 1 correlated with intestinal mucosal barrier injury in patients with severe acute pancreatitis[J]. World J Emerg Surg, 2014, 9:61. doi: 10.1186/1749–7922–9–61.

      [3] Lee SH. Intestinal permeability regulation by tight junction:implication on inflammatory bowel diseases[J]. Intest Res, 2015,13(1):11–18. doi: 10.5217/ir.2015.13.1.11.

      [4] 鄒忠東, 馬留學(xué), 姚和祥, 等. 聯(lián)合應(yīng)用烏藥、大黃對(duì)重癥胰腺炎腸屏障功能的保護(hù)作用[J].中國(guó)普通外科雜志, 2010, 19(3):315–317.Zou ZD, Ma LX, Yao HX, et al. Protective effect of Wu-yao and Dahuang herbs on gut barrier function in severe acute pancreatitis[J].Chinese Journal of General Surgery, 2010, 19(3):315–317.

      [5] Zareie M1, McKay DM, Kovarik GG, et al. Monocyte/macrophages evoke epithelial dysfunction: indirect role of tumor necrosis factoralpha[J]. Am J Physiol, 1998, 275(4 Pt 1):C932–939.

      [6] 馬驤, 歐陽(yáng)堯明, 景在平, 等. IncRNA在血管疾病中的作用機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)普通外科雜志, 2016, 25(12):1792–1795.doi:10.3978/j.issn.1005–6947.2016.12.020.Ma X, Ouyang YM, Jing ZP, et al. Research progress in action mechanisms of lncRNAs in vascular diseases[J]. Chinese Journal of General Surgery, 2016, 25(12):1792–1795. doi:10.3978/j.issn.1005–6947.2016.12.020.

      [7] Ma L, Bajic VB, Zhang Z. On the classi fication of long non-coding RNAs[J]. RNA Biol, 2013, 10(6):925–933. doi: 10.4161/rna.24604.

      [8] Derrien T, Johnson R, Bussotti G, et al. The GENCODE v7 catalog of human long noncoding RNAs: analysis of their gene structure,evolution, and expression[J]. Genome Res, 2012, 22(9):1775–1789.doi: 10.1101/gr.132159.111.

      [9] Ponting CP, Oliver PL, Reik W. Evolution and functions of long noncoding RNAs[J]. Cell, 2009, 136(4):629–641. doi: 10.1016/j.cell.2009.02.006.

      [10] Wilusz JE, Sunwoo H, Spector DL. Long noncoding RNAs:functional surprises from the RNA world[J]. Genes Dev, 2009,23(13):1494–1504. doi: 10.1101/gad.1800909.

      [11] Sun, M, Kraus WL. From discovery to function: the expanding roles of long noncoding RNAs in physiology and disease[J]. Endocr Rev, 2015, 36(1):25–64. doi: 10.1210/er.2014–1034.

      [12] Satpathy AT, Chang HY. Long noncoding RNA in hematopoiesis and immunity[J]. Immunity, 2015, 42(5):792–804. doi: 10.1016/j.immuni.2015.05.004.

      [13] Kung JT, Colognori D, Lee JT. Long noncoding RNAs: past,present, and future[J]. Genetics, 2013, 193(3):651–669. doi:10.1534/genetics.112.146704.

      [14] Carpenter S, Fitzgerald KA. Transcription of in fl ammatory genes:long noncoding RNA and beyond[J]. J Interferon Cytokine Res,2015, 35(2):79–88. doi: 10.1089/jir.2014.0120.

      [15] Marques-Rocha JL, Samblas M, Milagro FI, et al. Noncoding RNAs, cytokines, and in fl ammation-related diseases[J]. FASEB J,2015, 29(9): 3595–3611. doi: 10.1096/fj.14–260323.

      [16] 胡蓉, 吳朝陽(yáng), 黨勝春, 等. 髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1對(duì)大鼠腸巨噬細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響[J]. 江蘇大學(xué)學(xué)報(bào): 醫(yī)學(xué)版, 2015, 25(5):378–381. doi:10.13312/j.issn.1671–7783.y140278.Hu R, Wu CY, Dang SC, et al. Effect of triggering receptor expressed on myeloid cells-1 expression on the oxidative stress of intestinal macrophages in rats[J]. Journal of Jiangsu University: Medicine Edition, 2015, 25(5):378–381. doi:10.13312/j.issn.1671–7783.y140278.

      [17] Zhang XP, Zhang J, Song QL, et al. Mechanism of acute pancreatitis complicated with injury of intestinal mucosa barrier[J]. J Zhejiang Univ Sci B, 2007, 8(12):888–895. doi: 10.1631/jzus.2007.B0888.

      [18] Leveau P, Wang X, Sun Z, et al. Severity of pancreatitis-associated gut barrier dysfunction is reduced following treatment with the PAF inhibitor lexipafant[J]. Biochem Pharmacol, 2005, 69(9):1325–1331. doi: 10.1016/j.bcp.2005.01.023.

      [19] Bouchon A, Facchetti F, Weigand MA, et al. TREM-1 amplifies in fl ammation and is a crucial mediator of septic shock[J]. Nature,2001, 410(6832):1103–1107. doi: 10.1038/35074114.

      [20] 李濤, 劉源, 李冉, 等. 氯膦酸二鈉脂質(zhì)體對(duì)大鼠重癥急性胰腺炎肺損傷的影響及與Akt、MAPK(ERK1/2)通路的關(guān)系[J]. 中國(guó)普通外科雜志, 2016, 25(3):350–356. doi:10.3978/j.issn. 1005–6947.2016.03.008.Li T, Liu Y, Li R, et al. Alleviative effect of liposomal clodronate against lung injury in rats with severe acute pancreatitis and its relations with Akt and MAPK (ERK1/2) pathways[J]. Chinese Journal of General Surgery, 2016, 25(3):350–356. doi:10.3978/j.issn.1005–6947.2016.03.008.

      [21] Carpenter S, Aiello D, Atianand MK, et al. A long noncoding RNA mediates both activation and repression of immune response genes[J]. Science, 2013, 341(6147):789–792. doi: 10.1126/science.1240925.

      [22] Cui H, Xie N, Tan Z, et al. The human long noncoding RNA lnc-IL7R regulates the in fl ammatory response[J]. Eur J Immunol, 2014,44(7):2085–2095. doi: 10.1002/eji.201344126

      [23] Chen SW, Wang PY, Liu YC, et al. Effect of Long Noncoding RNA H19 Overexpression on Intestinal Barrier Function and Its Potential Role in the Pathogenesis of Ulcerative Colitis[J]. In fl amm Bowel Dis, 2016, 22(11):2582–2592.

      [24] Chen T, Xue H, Lin R, et al. MiR-34c and PlncRNA1 mediated the function of intestinal epithelial barrier by regulating tight junction proteins in in fl ammatory bowel disease[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2017, 486(1):6–13. doi: 10.1016/j.bbrc.2017.01.115.

      [25] Ma S, Ming Z, Gong AY, et al. A long noncoding RNA, lincRNATnfaip3, acts as a coregulator of NF-κB to modulate in fl ammatory gene transcription in mouse macrophages[J].FASEB J, 2017,31(3):1215–1225.

      [26] Zhao F, Qu Y, Liu J, et al. Microarray pro filing and co-expression network analysis of LncRNAs and mRNAs in neonatal rats following hypoxic-ischemic brain damage[J]. Sci Rep, 2015,5:13850. doi: 10.1038/srep13850.

      [27] Dong R, Du J, Wang L, et al. Comparison of long noncoding RNA and mRNA expression pro files in mesenchymal stem cells derived from human periodontal ligament and bone marrow[J]. Biomed Res Int, 2014, 2014:317853. doi:10.1155/2014/317853.

      猜你喜歡
      共表達(dá)屏障功能障礙
      咬緊百日攻堅(jiān) 筑牢安全屏障
      屏障修護(hù)TOP10
      侵襲性垂體腺瘤中l(wèi)ncRNA-mRNA的共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)
      一道屏障
      勃起功能障礙四大誤區(qū)
      維護(hù)網(wǎng)絡(luò)安全 筑牢網(wǎng)絡(luò)強(qiáng)省屏障
      膀胱癌相關(guān)lncRNA及其共表達(dá)mRNA的初步篩選與功能預(yù)測(cè)
      中國(guó)流行株HIV-1gag-gp120與IL-2/IL-6共表達(dá)核酸疫苗質(zhì)粒的構(gòu)建和實(shí)驗(yàn)免疫研究
      高血壓與老年人認(rèn)知功能障礙的相關(guān)性
      術(shù)后認(rèn)知功能障礙診斷方法的研究進(jìn)展
      兴国县| 山阳县| 庐江县| 东乡族自治县| 丹棱县| 新和县| 尚义县| 胶南市| 灵武市| 大兴区| 杭锦旗| 滨海县| 瑞金市| 宜丰县| 象州县| 紫金县| 康保县| 玛纳斯县| 盐津县| 随州市| 周至县| 英山县| 英德市| 和顺县| 易门县| 北碚区| 巴彦县| 泾川县| 吉首市| 廉江市| 长垣县| 休宁县| 乌鲁木齐市| 渭南市| 三门县| 泽州县| 老河口市| 郓城县| 凤城市| 柳州市| 富源县|