TNF—α在強(qiáng)直性脊柱炎患者血清中的表達(dá)水平及臨床意義探討

彭琪彥

摘要：目的 通過(guò)檢測(cè)強(qiáng)直性脊柱炎（AS）患者血清中TNF-α的表達(dá)水平，探討其在AS發(fā)病中的臨床意義。方法 分別測(cè)定AS活動(dòng)期患者、AS非活動(dòng)期患者及健康人血清TNF-α、CRP、ESR水平。結(jié)果 AS活動(dòng)期患者、AS非活動(dòng)期患者血清TNF-α水平均顯著高于健康人，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；AS活動(dòng)期患者血清TNF-α水平顯著高于AS非活動(dòng)期患者，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且TNF-α的表達(dá)與CRP呈正相關(guān)，與ESR無(wú)明顯相關(guān)性。結(jié)論 TNF-α是與AS發(fā)病相關(guān)的細(xì)胞因子，可作為AS的實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo)以及AS活動(dòng)期臨床療效的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：強(qiáng)直性脊柱炎；TNF-α ；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

The Expression of TNF-α in Patients Serum with Ankylosing Spondylitis and Clinical Significance

PENG Qi-yan

（Department of Clinical Laboratory，Wuhan University of Science and Technology Hospital， Wuhan 430070，Hubei，China）

Abstract：Objective To discuss the clinical significance of TNF-α by detecting the expression of TNF-α in patients with ankylosing spondylitis. Methods The levels of serum TNF-α， CRP， ESR were determined respectively in the AS active patients， the AS inactive patients and the healthy people. Results The contents of TNF-α in the AS active patients and the AS inactive patients were obviously higher compared with healthy people with statistical significanc（P<0.01）；TNF-α in the AS active patients were obviously higher than the AS inactive patients with statistical significanc（P<0.05）；the expression of TNF-αand CRP were positively correlated， but no obvious correlated with ESR. Conclusion The TNF-αis a cytokine associated with the occurrence of the AS， and it can be used as the laboratory diagnosis indicators， as well as the monitoring indicator of clinical curative effect in AS activity.

Key words：Ankylosing spondylitis；TNF-α；Enzyme-linked immunosorbent assay

強(qiáng)直性脊柱炎（ankylosing spondylitis， AS）是一種慢性進(jìn)行性炎性疾病，主要累及中軸關(guān)節(jié)[1]，其主要癥狀表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作的腰痛、腰骶部僵硬、脊柱強(qiáng)直或畸形，該病起病隱匿且病程較長(zhǎng)，容易誤診[2]。其具體發(fā)病機(jī)制目前仍未明確，可能與遺傳、環(huán)境及免疫因素等有關(guān)，且臨床上尚缺乏特異性治療，僅依靠日常鍛煉和一些藥物緩解急性發(fā)作[3]。因此，探討AS發(fā)病機(jī)制、早期診斷和及時(shí)治療成為研究熱點(diǎn)。腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）是體內(nèi)炎癥反應(yīng)和一系列病理生理過(guò)程的重要遞質(zhì)，有學(xué)者認(rèn)為，TNF-α是AS中介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的重要細(xì)胞因子[4]，因此，本研究通過(guò)檢測(cè)AS患者血清TNF-α水平，探討其在AS病程中的臨床意義，旨在為AS的發(fā)病機(jī)制和治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料 選取2015年3月～2016年6月在我院就診的門(mén)診及住院AS患者共62例，其中AS活動(dòng)期患者32例，包括男22例，女10例，年齡20～49歲；AS非活動(dòng)期患者30例，包括男21例，女9例，年齡21～54歲；62例AS患者中，HLA-B27陽(yáng)性者59例，HLA-B27陰性者3例；另選取同期健康體檢者40例作為正常對(duì)照，其中男28例，女12例，年齡20～55歲。三組受試對(duì)象性別構(gòu)成及年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，本研究經(jīng)患者知情同意，該試驗(yàn)方案已經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)1984年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)修訂的紐約診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，確診為AS。病情活動(dòng)判斷標(biāo)準(zhǔn)為強(qiáng)直性脊柱炎疾病活動(dòng)指數(shù)（Bath Ankylosing Spondylitis Disease Activity Index， BASDAI），BASDAI≥4為活動(dòng)期，BASDAI<4為非活動(dòng)期[6]。

1.3排除標(biāo)準(zhǔn) 排除妊娠或哺乳期女性、自身免疫性疾病、嚴(yán)重肝、腎、心血管疾病、惡性腫瘤、血液系統(tǒng)疾病、骶髂關(guān)節(jié)結(jié)核、致密性骨炎等。

1.4樣本采集與處理 采樣前所有對(duì)象均未進(jìn)行生物治療、關(guān)節(jié)內(nèi)治療及糖皮質(zhì)激素治療。三組對(duì)象均于清晨空腹抽取靜脈血各4 ml于兩支無(wú)添加劑真空采血管以及血沉管中，分別用于TNF-α、C反應(yīng)蛋白（CRP）、紅細(xì)胞沉降率（ESR）檢測(cè)，待血液自行凝固，3000 rpm離心10 min，分離血清，于-70℃低溫冰箱保存待測(cè)，ESR無(wú)需離心，混勻后直接檢測(cè)。

1.5儀器與試劑 使用美國(guó)R&D公司TNF-α檢測(cè)試劑盒（ELISA法），具體操作過(guò)程嚴(yán)格遵循實(shí)際說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。反應(yīng)終止后，在Rayto RT-6100酶標(biāo)分析儀上分別于450 nm和570 nm處測(cè)OD值，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中TNF-α含量。CRP采用免疫比濁法，在日立7180全自動(dòng)生化分析儀上檢測(cè)；ESR在賽科希德S-100血沉儀上采用魏氏法檢測(cè)。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 收集所有檢測(cè)數(shù)據(jù)，計(jì)量數(shù)據(jù)以用x±s表示，采用SPSS13.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Pearson直線相關(guān)分析，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1三組研究對(duì)象檢驗(yàn)結(jié)果比較分析 與健康組比較，AS活動(dòng)期與AS非活動(dòng)期患者的TNF-α、CRP、ESR明顯升高，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與AS非活動(dòng)期組比較，AS活動(dòng)期患者的TNF-α、CRP、ESR明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.2血清中TNF-α的表達(dá)與CRP、ESR的相關(guān)性分析 AS活動(dòng)期患者、AS非活動(dòng)期患者血清中TNF-α含量與CRP（r=0.624，0.612，P<0.05）呈正相關(guān)，而與ESR（r=0.125，0.128，P>0.05）無(wú)相關(guān)性。

3討論

強(qiáng)直性脊柱炎是復(fù)雜的多基因遺傳病，多種輔助性T淋巴細(xì)胞及細(xì)胞因子參與其發(fā)病[7]，現(xiàn)已明確的診斷指標(biāo)是人類(lèi)白細(xì)胞抗原B27（HLA-B27），調(diào)查顯示，HLA-B27陽(yáng)性者患AS的幾率是HLA-B27陰性者的200-300倍[8]，但在少數(shù)AS患者HLA-B27仍呈陰性，因此對(duì)于AS發(fā)病機(jī)制的探討，依然是廣大學(xué)者的研究熱點(diǎn)。

細(xì)胞因子是一類(lèi)由免疫細(xì)胞和非免疫細(xì)胞合成和分泌的低分子量可溶性蛋白，具有免疫調(diào)節(jié)功能。有研究表明，不同自身免疫性疾病患者體內(nèi)，細(xì)胞因子表達(dá)異常，各種細(xì)胞因子在疾病中互相聯(lián)系，共同作用，形成十分復(fù)雜的細(xì)胞因子調(diào)節(jié)網(wǎng)[9]， TNF-α是由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞所產(chǎn)生的一種小分子多肽，通過(guò)結(jié)合其相應(yīng)受體發(fā)揮生物學(xué)作用。適量TNF-α可以調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫、殺傷靶細(xì)胞、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，對(duì)機(jī)體起保護(hù)作用，而過(guò)量表達(dá)則會(huì)對(duì)機(jī)體造成損傷。研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α也是一種重要的炎癥因子，當(dāng)機(jī)體受到感染、損傷等刺激后，體內(nèi)的TNF-α能激活中性粒細(xì)胞，改變血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性，調(diào)節(jié)其他組織代謝活性[10]。TNF-α也可以作用于纖維母細(xì)胞和骨細(xì)胞，與關(guān)節(jié)僵硬有關(guān)[11]，而AS正是以慢性炎癥和異常骨化為病理特點(diǎn)的一類(lèi)自身免疫性疾病。

本研究通過(guò)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，檢測(cè)不同病程AS患者血清TNF-α的含量，并與常見(jiàn)的指標(biāo)CRP、ESR做一個(gè)相關(guān)性分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與健康組相比，AS患者的TNF-α、CRP、ESR均有增高，且AS活動(dòng)期患者高于AS非活動(dòng)期患者，說(shuō)明TNF-α參與了AS活動(dòng)期的炎癥反應(yīng)；AS患者TNF-α的表達(dá)與CRP呈正相關(guān)，而與ESR無(wú)相關(guān)性。而且，62例AS患者中，有3例HLA-B27陰性患者，但其TNF-α有不同程度的增高。由此可以推測(cè)TNF-α在AS發(fā)病中扮演著重要作用，而且有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，TNF-α轉(zhuǎn)基因鼠可產(chǎn)生自發(fā)性關(guān)節(jié)炎，而抗TNF-α單克隆抗體可以抑制其發(fā)病[9]。

綜上所述，AS患者血清TNF-α升高，表明TNF-α可能參與了AS發(fā)病過(guò)程，且通過(guò)TNF-α水平可以對(duì)AS病程活動(dòng)度進(jìn)行評(píng)價(jià)，但TNF-α具體作用機(jī)制尚待進(jìn)一步研究，本研究擬通過(guò)檢測(cè)AS患者血TNF-α的含量，為揭示其在AS發(fā)病機(jī)制中的作用提供新思路，也為以細(xì)胞因子靶向治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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編輯/申磊