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    TP—ELISA法檢測梅毒特異性抗體灰區(qū)內(nèi)結(jié)果分析

    2016-07-26 13:41:43李亦君陳雪蔣瑞心
    中國實用醫(yī)藥 2016年16期
    關(guān)鍵詞:酶聯(lián)免疫吸附試驗灰區(qū)

    李亦君 陳雪 蔣瑞心

    【摘要】 目的 分析酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測梅毒螺旋體(TP)特異性抗體時, 檢測數(shù)據(jù)在灰區(qū)范圍內(nèi)的結(jié)果。方法 15181份血清標(biāo)本經(jīng)ELISA 法篩查梅毒特異性抗體, 以臨界值(cutoff)±20%為灰區(qū)即吸光度/臨界值(s/co)在0.8~1.2區(qū)間內(nèi), 0.8~1.0為低值灰區(qū), 1.0~1.2為高值灰區(qū), 初篩吸光度(OD)值在灰區(qū)的標(biāo)本應(yīng)用TP明膠顆粒凝集試驗(TPPA)法進(jìn)行確認(rèn)。結(jié)果 15181份標(biāo)本中有96份標(biāo)本數(shù)值落在灰區(qū)內(nèi), 96份中低值灰區(qū) 59份, 高值灰區(qū) 37份 。15181份標(biāo)本最終確認(rèn)為陽性 233份, 陽性率為1.53%(233/15181), 其中灰區(qū)內(nèi)標(biāo)本確認(rèn)陽性 25份, 占灰區(qū)標(biāo)本的 26.04%(25/96), 占總陽性標(biāo)本的 10.73%(25/233);71份確認(rèn)陰性, 占灰區(qū)標(biāo)本的 73.96%(71/96)?;覅^(qū)內(nèi)標(biāo)本進(jìn)行 TPPA復(fù)檢 25份陽性中, 低值灰區(qū) 8份, 占灰區(qū)陽性數(shù)的 32.00%(8/25), 高值灰區(qū) 17份, 占灰區(qū)陽性數(shù)的68.00%(17/25)。低值灰區(qū) TPPA稀釋度為 1∶80、1∶160、1∶320、1∶640、1∶1280時標(biāo)本數(shù)分別為3、2、1、0、2份, 高值灰區(qū)標(biāo)本數(shù)分別為6、4、3、2、2份。結(jié)論 ELISA法檢測TP抗體, OD值處于灰區(qū)的, 不能單純以高于cutoff值判定陽性, 低于cutoff值作為判定陰性的標(biāo)準(zhǔn), 應(yīng)該進(jìn)行TPPA復(fù)檢。

    【關(guān)鍵詞】 梅毒螺旋體;特異性抗體;酶聯(lián)免疫吸附試驗;灰區(qū)

    DOI:10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.16.005

    【Abstract】 Objective To analysis detection data in gray zone of treponema pallidum (TP) specific antibody by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). Methods ELISA was applied to detect TP specific antibody in 15181 serum samples, and cutoff±20% as gray zone. In absorbance/cutoff (s/co) as 0.8~1.2, low value gray zone was 0.8~1.0 and high value gray zone was 1.0~1.2. Treponema pallidum particle assay (TPPA) was applied to confirm samples with gray zone optical delnsityin preliminary screening. Results There were totally 96 samples with value in gray zone among 15181 samples. Among the 96 cases, 59 cases were in low value gray zone and 37 cases in high value gray zone. There were 233 confirmed positive cases among 15181 cases, with positive rate as 1.53% (233/15181), including 25 confirmed positive cases in gray zone, accounting for 26.04% (25/96) in gray zone and 10.73% (25/233) in all positive cases, and 71 confirmed negative cases, accounting for 73.96% (71/96) in gray zone. Reexamination by TPPA showed 25 positive cases in gray zone, with 8 cases in low value gray zone, accounting for 32.00% (8/25) in gray zone, and 17 cases in high value gray zone, accounting for 68.00% (17/25) in gray zone. Under TPPA dilution as 1∶80, 1∶160, 1∶320, 1∶640, 1∶1280, sample counts were respectively 3, 2, 1, 0, 2 in low value gray zone and 6, 4, 3, 2, 2 in high value gray zone. Conclusion In ELISA detection of TP antibody, positive and negative can not be singly determined by gray zone OD value and cutoff value, thus TPPA is necessary in reexamination.

    【Key words】 Treponema pallidum; Specific antibody; Enzyme linked immunosorbent assay; Gray zone

    梅毒是一類慢性接觸性傳染性疾病[1], 人感染后可以導(dǎo)致全身多組織、器官的損傷和病變, 其病原微生物是TP。近年來, 梅毒在我國的發(fā)病呈上升趨勢[2, 3]。目前, 用人工培養(yǎng)TP尚未成功[4], 所以臨床主要根據(jù)血清學(xué)檢測、既往病史、各種臨床表現(xiàn)進(jìn)行梅毒的診斷。在檢測過程中, 因為ELISA法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、適用于大批量檢測的優(yōu)點, 是目前實驗室檢測梅毒特異性抗體最常用的方法。但同時因為方法學(xué)限制, ELISA檢測受很多因素影響, 所以結(jié)果的判讀需要謹(jǐn)慎, 尤其是灰區(qū)內(nèi)結(jié)果判讀, 可以借助其確認(rèn)試驗——TPPA進(jìn)行輔助判定。作者對本院ELISA法檢測梅毒特異性抗體的OD值落在灰區(qū)內(nèi)的標(biāo)本進(jìn)行了TPPA法復(fù)檢, 現(xiàn)報告如下。

    1 資料與方法

    1. 1 一般資料 血清標(biāo)本來自本院2015年1~12月門診及住院患者中進(jìn)行TP特異性抗體篩查的標(biāo)本15181份。以(cutoff值±20%)范圍設(shè)定為灰區(qū), 其中96份(96例患者)落入該范圍, 男57例, 平均年齡48.7歲, 女39例, 平均年齡39.3歲。

    1. 2 儀器與試劑 ELISA采用北京萬泰公司的TP試劑盒;TPPA采用日本富士瑞必歐株式會社試劑盒。儀器采用伯樂公司EVOLIS全自動酶標(biāo)儀。

    1. 3 檢測方法 TP-ELISA采用兩步法, 結(jié)果判定根據(jù)s/co值, 數(shù)值<0.8為陰性, 數(shù)值>1.2為陽性, 數(shù)值在0.8~1.2灰區(qū)范圍內(nèi)為不確定。陽性標(biāo)本需按梅毒的逆向檢測流程繼續(xù)檢測[5]?;覅^(qū)內(nèi)標(biāo)本:s/co數(shù)值在0.8~1.0為低值灰區(qū);1.0~1.2為高值灰區(qū), 用TPPA復(fù)檢確認(rèn)。根據(jù)說明書, TPPA以1∶80為判斷標(biāo)準(zhǔn)。所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書要求。

    2 結(jié)果

    2. 1 灰區(qū)標(biāo)本比例 檢測15181份標(biāo)本中有96份標(biāo)本數(shù)值落在灰區(qū)內(nèi), 占檢測總數(shù)0.63%。96份中低值灰區(qū)59份, 占灰區(qū)總數(shù)61.46%, 高值灰區(qū)37份, 占灰區(qū)總數(shù)38.54%。見表1。

    2. 2 陽性標(biāo)本 陽性標(biāo)本比例:15181份標(biāo)本最終確認(rèn)為陽性233份, 陽性率為1.53%(233/15181), 其中灰區(qū)內(nèi)標(biāo)本確認(rèn)陽性25份, 占灰區(qū)標(biāo)本的26.04%(25/96), 占總陽性標(biāo)本的10.73%(25/233);71份確認(rèn)陰性, 占灰區(qū)標(biāo)本的73.96%(71/96)。低、高值灰區(qū)內(nèi)陽性比例:灰區(qū)內(nèi)標(biāo)本進(jìn)行TPPA復(fù)檢25份陽性中, 低值灰區(qū)8份, 占灰區(qū)陽性數(shù)的32.00%(8/25), 高值灰區(qū)17份, 占灰區(qū)陽性數(shù)的68.00% (17/25)。見表2。

    2. 3 TPPA復(fù)檢情況 低值灰區(qū)TPPA稀釋度為1∶80、1∶160、1∶320、1∶640、1∶1280時標(biāo)本數(shù)分別為3、2、1、0、2份, 高值灰區(qū)標(biāo)本數(shù)分別為6、4、3、2、2份。見表3。

    3 討論

    ELISA法檢測TP特異性抗體多采用兩步法, 原理為雙抗原夾心。由于該方法具有良好的標(biāo)準(zhǔn)化和自動化, 且成本低, 所以為目前基層醫(yī)院檢測梅毒抗體的首選方法[6]。作者檢測應(yīng)用的是北京萬泰公司的TP試劑盒, 其微孔條包被的是重組TP特異性抗原。但是ELISA法檢測過程中容易受外界因素影響, 同時包被的基因只是部分片段, 并不是針對TP全段, 所以會存在一定假陽性、假陰性的情況。為了避免此類情況, 作者采取如下措施:①ELISA法檢測中, 標(biāo)本的s/co值是研究對象。檢測梅毒特異性抗體時, 對于s/co高值部分假陽性的排查, 可以應(yīng)用目前推薦的逆向檢測流程, 借助TPPA以及非特異性抗體檢測來彌補(bǔ), 在之前的研究中也有過分析[5]。②對于假陰性情況。ELISA法若單純以cutoff為分界線判定陰陽性過于片面, 所以本實驗根據(jù)梅毒抗體檢測的“灰區(qū)”情況進(jìn)行了相應(yīng)研究。“灰區(qū)”指處于cutoff值周圍一定范圍, 通常將其上下20%檢測值視為“灰區(qū)”[7]。在本次實驗中根據(jù)cutoff值又把灰區(qū)細(xì)分為高、低兩區(qū)。對經(jīng)ELISA檢測在灰區(qū)內(nèi)的標(biāo)本進(jìn)行TPPA確認(rèn)實驗, 結(jié)果發(fā)現(xiàn)在低值灰區(qū)和高值灰區(qū)內(nèi)的標(biāo)本都出現(xiàn)了TPPA復(fù)檢陽性的情況。

    結(jié)合國內(nèi)外多項研究, ELISA商品化試劑只包被幾個重組蛋白抗原[8-10], 雖然敏感性和特異性日趨完善, 但是與TPPA 試劑是以TPNichols株全病原體作為抗原[11]仍有一定差距, 這時應(yīng)用ELISA法檢測時, 單純以cutoff值做分水嶺來判定陰陽性就有可能出現(xiàn)漏檢, 尤其是對于早期梅毒的患者。

    另外研究中還發(fā)現(xiàn), 即使在低值灰區(qū)中檢出的TPPA陽性者也有達(dá)到1∶1280的高稀釋比例。所以在灰區(qū)內(nèi)ELISA 檢測數(shù)值與TPPA法檢測稀釋度并不一定完全符合正相關(guān)的關(guān)系, 這也與包被物質(zhì)不同有關(guān)。

    本次灰區(qū)內(nèi)檢出的陽性標(biāo)本占到了總陽性標(biāo)本數(shù)的10.73%, 說明通過設(shè)立“灰區(qū)”, 并進(jìn)行TPPA確認(rèn)試驗, 在一定程度上避免了漏檢。

    梅毒容易帶來一定的社會問題, 在檢測中應(yīng)該根據(jù)實際工作情況和臨床需要盡可能選擇多方法聯(lián)合檢測, 最大限度減少漏檢和誤診。本次研究針對漏檢的情況, 從灰區(qū)下手進(jìn)行確認(rèn)試驗, 但是在低于灰區(qū)的部分是否還存在一定比例的假陰性情況, 由于TPPA 操作方法不適于大批量標(biāo)本, 所以沒有進(jìn)一步研究。今后將擴(kuò)大研究范疇, 為梅毒檢測探索出更為準(zhǔn)確、合理的流程盡最大努力。

    參考文獻(xiàn)

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    [收稿日期:2016-02-26]

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