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    冷凝集試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)呼吸道肺炎支原體IgM抗體檢測(cè)的評(píng)價(jià)

    2015-03-11 11:32季艷艷楊正貴
    中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生 2015年4期
    關(guān)鍵詞:酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

    季艷艷+楊正貴

    [摘要] 目的 評(píng)價(jià)冷凝集試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)診斷呼吸道肺炎支原體IgM抗體感染的臨床價(jià)值。 方法 收集我院呼吸內(nèi)科2012年12月~2013年10月共計(jì)100份診斷為呼吸道肺炎支原體感染患者的痰液標(biāo)本。比較①酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)與冷凝集試驗(yàn)的真陽(yáng)性、假陽(yáng)性、真陰性及假陰性。②酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)與冷凝集試驗(yàn)敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性擬然比和陰性擬然比。 結(jié)果 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的真陽(yáng)性、假陽(yáng)性、真陰性及假陰性分別為95%、3%、97%、5%,冷凝集試驗(yàn)的真陽(yáng)性、假陽(yáng)性、真陰性及假陰性分別為43%、39%、61%、57%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和冷凝集試驗(yàn)敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性擬然比和陰性擬然比分別為95%、97%、96%、96.9%、95.1%、31.7%、0.05%及43%、61%、52%、52.4%、51.7%、1.1%、0.93%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論 本研究認(rèn)為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)呼吸道肺炎支原體IgM抗體敏感性、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性擬然比均明顯高于冷凝集試驗(yàn)。

    [關(guān)鍵詞] 冷凝集試驗(yàn);酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn);呼吸道肺炎支原體;IgM抗體

    [中圖分類(lèi)號(hào)] R446.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701(2015)04-0107-03

    [Abstract] Objective To evaluate the clinical value of cold agglutination test and enzyme-linked immunosorbent assay in the diagnosis of respiratory tract mycoplasma pneumoniae IgM antibody infection. Methods A total of 100 sputum samples of the patients diagnosed with respiratory tract mycoplasma pneumoniae infection in the respiratory medicine department of our hospital were collected. ①The true positive,false positive,true negative and false negative rates of cold agglutination test and enzyme-linked immunosorbent assay were compared. ②The sensitivity, specificity, accuracy, positive predictive value, negative predictive value, positive likelihood ratio and negative likelihood ratio of cold agglutination test and enzyme-linked immunosorbent assay were compared. Results The true positive,false positive,true negative and false negative rates of enzyme-linked immunosorbent assay were 95%, 3%, 97% and 5% respectively and those of the cold agglutination test were 43%, 39%, 61% and 57% respectively, with statistically significant differences (P<0.05). The sensitivity, specificity, accuracy, positive predictive value, negative predictive value, positive likelihood ratio and negative likelihood ratio of enzyme-linked immunosorbent assay and cold agglutination test were 95%, 97%, 96%, 96.9%, 95.1%, 31.7%, 0.05% and 43%, 61%, 52%, 52.4%, 51.7%, 1.1%, 0.93%, respectively, with statistically significant differences(P<0.05). Conclusion This study suggests that enzyme-linked immunosorbent assay has obviously higher sensitivity, specificity, accuracy, positive predictive value, negative predictive value and positive likelihood ratio to respiratory tract mycoplasma pneumoniae IgM antibody than cold agglutination test.

    [Key words] Cold agglutination test; Enzyme-linked immunosorbent assay; Respiratory tract mycoplasma pneumoniae; IgM antibody

    支原體是一類(lèi)介于細(xì)菌與病毒之間、無(wú)細(xì)胞壁的微生物,易受環(huán)境變化而破壞,有研究統(tǒng)計(jì)[1]在確診的肺炎病例中,由肺炎支原體引起的肺炎占15%~20%,支原體通過(guò)飛沫傳入呼吸道,粘附上皮細(xì)胞表面神經(jīng)氨酸受體上,但支原體還可通過(guò)血行感染全身任何器官組織。支原體好發(fā)于晚秋,但無(wú)明顯的季節(jié)性[2]。人群對(duì)支原體普遍易感,學(xué)齡兒童由于呼吸系統(tǒng)發(fā)育不全,非常容易感染支原體,但近幾年疾病譜變化,成人感染支原體的比例逐步增高,因此,快速檢測(cè)支原體對(duì)臨床診斷有重要意義[3]。目前支原體感染的常用實(shí)驗(yàn)室檢查手段為冷凝集試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、PCR技術(shù)。但是由于PCR技術(shù)設(shè)備昂貴,且需要專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人才,因此PCR法在臨床中使用較少,均可呈陽(yáng)性反應(yīng),對(duì)治療無(wú)指導(dǎo)意義。因此本研究的目的為評(píng)價(jià)冷凝集試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)診斷呼吸道肺炎支原體IgM抗體感染的臨床價(jià)值。

    1 資料與方法

    1.1 病例選擇

    收集我院呼吸內(nèi)科2012年12月~2013年10月共計(jì)100份診斷為呼吸道肺炎支原體感染患者的痰液標(biāo)本,肺炎支原體感染患者中男57例和女43例,年齡17~67歲,平均(39.8±25.7)歲。所有研究對(duì)象均簽定知情同意書(shū)、保密知情書(shū),研究通過(guò)醫(yī)院倫理道德委員會(huì)的批準(zhǔn)、核實(shí)。

    1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

    ①就診時(shí)臨床資料、治療經(jīng)過(guò)完整。②呼吸道支原體感染的診斷符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸內(nèi)科學(xué)分會(huì)關(guān)于呼吸道支原體感染的診斷與鑒別診斷[4]。③每個(gè)研究對(duì)象能配合護(hù)理人員,自愿參與本次研究。

    1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)

    ①入院時(shí)生命體征不平穩(wěn)的患者。②入院有嚴(yán)重肝腎功能不全、惡性腫瘤、自身免疫性疾病者,藥物有過(guò)敏、惡性心律失常者。

    1.4 冷凝集試驗(yàn)

    在室溫下,配人紅細(xì)胞懸液(患者自身紅細(xì)胞與5倍生理鹽水進(jìn)行配比),然后取試管10支,各加生理鹽水0.1 mL,血清0.1 mL加第1管,混勻后吸出0.1 mL至第2管,按上述的配比方法一直加至第9管,第10管作對(duì)照;每管加入人紅細(xì)胞懸液0.1 mL,在4℃的冰箱中放置1 h,陽(yáng)性為出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集,若加入37℃水浴后凝集消失則判定真陽(yáng)性。當(dāng)?shù)味却笥?∶32有參考意義。

    1.5 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

    采用福建三明博峰生物科技有限公司提供的肺炎支原體IgM抗體試劑盒,操作及結(jié)果判斷按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

    1.6觀察指標(biāo)

    真陽(yáng)性、假陽(yáng)性、真陰性及假陰性敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性擬然比和陰性擬然比。

    1.7 評(píng)價(jià)指標(biāo)

    比較①酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)與冷凝集試驗(yàn)的真陽(yáng)性、假陽(yáng)性、真陰性及假陰性。②酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)與冷凝集試驗(yàn)敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性擬然比和陰性擬然比。

    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    將資料錄入SPSS18.0軟件。所有計(jì)量資料符合正態(tài)分布,采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)描述,兩組均數(shù)的比較使用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)描述,用χ2檢驗(yàn)法。三組間比較采用ANOVA單因素方差分析,方差齊者用LSD法檢驗(yàn),方差不齊者用Games-Howenll法。多因素分析:將單因素分析中P<0.05的變量納入Logistic回歸分析,計(jì)算優(yōu)勢(shì)比及95%可信區(qū)間。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    3 討論

    肺炎支原體(M.Pneumonia)是人類(lèi)支原體肺炎的病原體。支原體肺炎的病理改變以間質(zhì)性肺炎為主,有時(shí)并發(fā)支氣管肺炎,稱(chēng)為原發(fā)性非典型性肺炎。主要經(jīng)飛沫傳染,潛伏期2~3周,發(fā)病率以青少年最高。臨床癥狀較輕,甚至根本無(wú)癥狀,若有也只是頭痛、咽痛、發(fā)熱、咳嗽等一般的呼吸道癥狀,但也有個(gè)別死亡報(bào)道。一年四季均可發(fā)生,但多在秋冬時(shí)節(jié)。肺炎支原體也是誘發(fā)哮喘的重要病原體,可引起肺外器官病變,如腦炎、血液病、關(guān)節(jié)炎或多器官功能衰竭。支原體肺炎的病理變化主要為急性氣管-支氣管炎和間質(zhì)性肺炎,支氣管黏膜有中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),肺泡內(nèi)可含少量滲出液,肺泡壁和間隔中有中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)[5-8]。肺炎支原體的致病首先通過(guò)其頂端結(jié)構(gòu)粘附在宿主細(xì)胞表面,并伸出微管插入胞內(nèi)吸取營(yíng)養(yǎng)、損傷細(xì)胞膜,繼而釋放出核酸酶、過(guò)氧化氫等代謝產(chǎn)生引起細(xì)胞的溶解、上皮細(xì)胞的腫脹與壞死。誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生的抗體也可能參與了上述病理?yè)p傷。肺炎支原體感染后癥狀較輕,發(fā)病初期有乏力、咽痛、肌肉酸痛、惡心等,熱度不一,2~3 d后出現(xiàn)明顯的呼吸道癥狀,發(fā)熱可持續(xù)2~3周,可有肺膿腫、支氣管擴(kuò)張、閉塞性細(xì)支氣管炎,可聞及干性或濕性啰音。支原體肺炎可并發(fā)各種肺外并發(fā)癥,如自身免疫性溶血性貧血、腦脊膜炎、心包炎、結(jié)節(jié)性紅斑等皮膚黏膜損害。X線上肺部可表現(xiàn)斑點(diǎn)片狀模糊影,可侵犯至多葉,伴肺門(mén)淋巴結(jié)腫大。MP感染呈散在發(fā)病,一年四季均可發(fā)病。研究指出肺炎支原體感染臨床癥狀不明顯,隱性感染較多,癥狀不典型,僅靠臨床癥狀難以診斷[9]。因此,診斷須依據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢查。

    本研究發(fā)現(xiàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的真陽(yáng)性、假陽(yáng)性、真陰性及假陰性分別為95%、3%、97%、5%,冷凝集試驗(yàn)的真陽(yáng)性、假陽(yáng)性、真陰性及假陰性分別為43%、39%、61%、57%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性擬然比和陰性擬然比分別為95%、97%、96%、96.9%、95.1%、31.7%、0.05%;冷凝集試驗(yàn)敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性擬然比和陰性擬然比分別為43%、61%、52%、52.4%、51.7%、1.1%、0.93%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。即本次研究認(rèn)為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)呼吸道肺炎支原體IgM抗體敏感性、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性擬然比均明顯高于冷凝集試驗(yàn)。

    首先,我們考慮冷凝集試驗(yàn)雖然方法簡(jiǎn)單,但其敏感性和特異性差。研究發(fā)現(xiàn)[10-13]它是一種非特異性血清學(xué)反應(yīng),腺病毒感染、流感、肝硬化、自身免疫性溶血性貧血、螺旋體病均可產(chǎn)生假陽(yáng)性。所以冷凝集試驗(yàn)檢測(cè)抗體確診較困難[14]。而酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)應(yīng)用吸附于載體表面的抗原,與相應(yīng)抗體結(jié)合后形成免疫復(fù)合物,與酶標(biāo)記的第二抗體結(jié)合后形成免疫反應(yīng),借助酶對(duì)底物發(fā)生降解作用后顯現(xiàn)的顏色反應(yīng)進(jìn)行判斷。在本研究中表現(xiàn)很高的特異性和敏感性。有學(xué)者對(duì)肺炎支原體感染患者進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn)在發(fā)病后4~7周依靠此方法即可檢出肺炎支原體感染。而且有學(xué)者還指出該抗體還可作為亞急性感染的補(bǔ)充診斷,陽(yáng)性率與病情呈正比。但是我們要注意到肺炎支原體感染早期(1~3 d)患者體內(nèi)還未產(chǎn)生足夠被檢測(cè)出的抗體,所以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)不能做到早期診斷。

    [參考文獻(xiàn)]

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    (收稿日期:2014-11-13)

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