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    ELISA法和GIGA法測(cè)定乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物的比較研究

    2017-05-12 09:13何英愛(ài)姚葉林
    中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥 2017年9期
    關(guān)鍵詞:乙型肝炎病毒

    何英愛(ài)++++++姚葉林

    [摘要]目的 探討金標(biāo)快速檢測(cè)板法(GIGA法)檢測(cè)乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物五項(xiàng)的結(jié)果準(zhǔn)確性。方法 選取2016年3月1~31日于我院產(chǎn)科門(mén)診進(jìn)行“母嬰篩查”的患者357例,其待測(cè)血清標(biāo)本同時(shí)采用ELISA(酶聯(lián)免疫吸附法)和GIGA進(jìn)行檢測(cè),對(duì)兩種方法檢測(cè)結(jié)果的一致性進(jìn)行方法學(xué)分析。結(jié)果 357例血清標(biāo)本中,286例GIGA法與ELISA法5項(xiàng)結(jié)果完全相符,總符合率達(dá)80.11%,71例結(jié)果不完全一致。采用ELISA法檢測(cè),HBsAg陽(yáng)性結(jié)果的標(biāo)本36例中,GIGA法有1例患者沒(méi)有檢出。結(jié)論 乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物的結(jié)果GIGA法比ELISA法準(zhǔn)確性稍低,但GIGA法操作簡(jiǎn)便、快速,易于觀察結(jié)果,且GIGA法中HBsAg檢測(cè)結(jié)果與ELISA法基本一致,適用于急診手術(shù)前以及獻(xiàn)血前的快速篩查。

    [關(guān)鍵詞]乙型肝炎病毒;血清標(biāo)志物;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn);金標(biāo)快速檢測(cè)板

    [中圖分類號(hào)] R446.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721(2017)03(c)-0135-04

    [Abstract]Objective To explore the GIGA method detect hepatitis B virus serum accuracy of the results of the five makers.Methods 357 patients joined the "maternal and infant screening" in the Obstetrics Clinic of our hospital from March 1st,2016 to March 31,2016 were selected,the serum specimen was tested by ELISA method and GIGA method at the same time,the consistency of test results of the two methods were analyzed.Results In 357 cases of serum specimens,286 cases of GIGA method were completely accorded with ELISA method five items,the total consistent rate was 80.11%.But 71 samples were not completely consistent.36 cases of HBsAg positive results of specimens with ELISA method,one patient was not been detected with GIGA method.Conclusion The accuracy of five serum marker of hepatitis B virus GIGA method is slightly lower than ELISA method ,but GIGA method is simple,fast and easy observation,and GIGA method of HBsAg detection results are basically identical with ELISA method,it is suitable for rapid screening before emergency surgery and blood donation.

    [Key words]HBV;Serum markers;ELISA;GIGA

    我國(guó)是乙型肝炎病毒感染率較高的國(guó)家之一,眾多學(xué)者[1-6]報(bào)道我國(guó)人口HBsAg陽(yáng)性率為9.8%~15.28%。目前,臨床多利用HBsAg、HBsAb以及HBeAg等乙肝五項(xiàng)對(duì)乙型肝炎作出臨床診斷,這幾種免疫學(xué)標(biāo)志物的檢測(cè)方法有多種,常用的有酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)(CLIA)和金標(biāo)快速檢測(cè)板法(GIGA)[7]。ELISA用于乙肝五項(xiàng)的測(cè)定,其靈敏度相對(duì)偏高,且有較高的特異性,已被廣泛應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)。GIGA方法操作比較簡(jiǎn)便,耗時(shí)短,無(wú)需利用其他儀器。對(duì)于急診或者是人群篩查,尤為適用[8]。因此,本研究對(duì)在我院進(jìn)行篩查的357例血清標(biāo)本使用ELISA法及GIGA法同時(shí)進(jìn)行檢測(cè),比較分析兩種方法的檢測(cè)結(jié)果,探討臨床標(biāo)本使用GIGA法檢測(cè)乙肝五項(xiàng)的可靠性,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1資料與方法

    1.1一般資料

    選取2016年3月1~31日于我院產(chǎn)科門(mén)診行“母嬰篩查”的患者357例,研究方案經(jīng)過(guò)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn),患者知情同意并簽署了知情同意書(shū)。

    1.2試劑與儀器

    1.2.1試劑 ELISA法試劑盒,均由中山生物工程有限公司提供,對(duì)乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物五項(xiàng)進(jìn)行檢測(cè);質(zhì)控品,源自廣東省臨床檢驗(yàn)中心。GIGA法使用英科新創(chuàng)(廈門(mén))科技有限公司乙肝五項(xiàng)檢查卡。兩種方法試劑均按說(shuō)明書(shū)要求保存,使用前從冰箱取出,恢復(fù)至室溫,均在有效期內(nèi)使用。

    1.2.2儀器 科華生物ST-360全自動(dòng)酶標(biāo)儀,全自動(dòng)快速立式洗板機(jī)。

    1.3方法

    所有患者均在空腹?fàn)顟B(tài)下抽取靜脈血,4000 r/min離心5 min,將分離的血清保存待檢,溶血標(biāo)本要求重抽標(biāo)本。

    1.3.1 ELISA法 由專人根據(jù)試劑盒里面的說(shuō)明進(jìn)行操作。分別對(duì)HBsAg、HBsAb以及HBeAg樣本相應(yīng)的D(450 nm)值進(jìn)行測(cè)定計(jì)算;若S/CO≥陰性對(duì)照孔×2.1,表明結(jié)果為陽(yáng)性;相反,則為陰性;對(duì)HBeAb、HBcAb樣本相應(yīng)的D(450 nm)值進(jìn)行測(cè)定,若S/CO≥陰性對(duì)照孔均值×0.5,表明結(jié)果為陰性;相反,則表明結(jié)果為陽(yáng)性。

    1.3.2 GIGA法 根據(jù)試劑盒標(biāo)注的說(shuō)明進(jìn)行規(guī)范操作。測(cè)試卡,均選擇膠體金免疫技術(shù):于加樣區(qū)中摻加樣品,15 min后對(duì)結(jié)果進(jìn)行查看,若>30 min,表明結(jié)果無(wú)效。質(zhì)控區(qū)(C)出現(xiàn)紫紅色條帶,表明此測(cè)試板有效,層析過(guò)程符合正常標(biāo)準(zhǔn),且標(biāo)本量足夠;若質(zhì)控區(qū)(C)無(wú)明顯條帶出現(xiàn),原因可能是此測(cè)試板無(wú)效或失效,標(biāo)本量不足,或?qū)游鲞^(guò)程不符合正常標(biāo)準(zhǔn),應(yīng)棄用此無(wú)效測(cè)試板,并使用新的測(cè)試板重新測(cè)試。HBsAg、HBsAb、HBeAg檢測(cè)試紙區(qū)中,測(cè)試區(qū)(T)若出現(xiàn)紫紅色條帶,則為陽(yáng)性;若無(wú)紫紅色條帶,則為陰性。HBeAb以及HBcAb試紙區(qū),若測(cè)試區(qū)(T)未見(jiàn)紫紅色條帶,表明結(jié)果為陽(yáng)性;若出現(xiàn)紫紅色條帶,則為陰性。

    1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,兩組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料用率表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2結(jié)果

    2.1乙肝五項(xiàng)GIGA法和ELISA法檢測(cè)結(jié)果

    357例通過(guò)GIGA法、ELISA法分別對(duì)乙肝五項(xiàng)同時(shí)進(jìn)行檢測(cè),有286例乙肝五項(xiàng)的結(jié)果完全符合,總符合率達(dá)80.11%。71例結(jié)果不完全相符。按模式的慣性順序:HBsAg為1,HBsAb為2,HBeAg為3、HBeAb為4,而HBcAb為5,依次對(duì)陽(yáng)性結(jié)果作出判定。兩種檢測(cè)方法檢查的乙肝五項(xiàng)結(jié)果比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

    2.2乙肝五項(xiàng)各項(xiàng)指標(biāo)GIGA法與ELISA法檢測(cè)結(jié)果比較

    對(duì)HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb五項(xiàng)的檢測(cè)結(jié)果分別進(jìn)行單項(xiàng)比較,ELISA法檢測(cè)為陰性的標(biāo)本,GIGA法基本為陰性,陰性符合率除HBsAb外,其余4項(xiàng)均在90.00%以上。在陽(yáng)性符合率方面,HBcAb表現(xiàn)差點(diǎn),符合率僅為64.56%,說(shuō)明有部分陽(yáng)性標(biāo)本會(huì)漏檢(表2)。

    3討論

    比較分析的357例標(biāo)本中,286例標(biāo)本兩方法檢測(cè)五項(xiàng)結(jié)果完全符合,符合率達(dá)80.11%,分析陽(yáng)性結(jié)果模式比較,發(fā)現(xiàn)兩方法結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),可能是由于兩種方法檢測(cè)原理的差異。ELISA法結(jié)合了酶聯(lián)免疫吸附原理,借助酶催化底物所發(fā)生的生物放大效果,使抗原抗體反應(yīng)有更強(qiáng)的靈敏度,其特異性相對(duì)突出,有不錯(cuò)的重復(fù)性。而GIGA法則是采用膠體GIGA記技術(shù)和蛋白質(zhì)層析技術(shù),膠體金是氯酸金在還原劑作用下,聚合成大小為1~100 nm的金顆粒所形成的疏水膠溶液,抗原或者是抗體蛋白,在膠體金顆粒成功吸附的狀態(tài)下,便可產(chǎn)生GIGA抗原或者是抗體(也就是免疫金)。膠體金若要顯色,必定需有濃度高的標(biāo)記物,而且金顆粒要達(dá)到足夠的直徑,其靈敏度才能合格,從而導(dǎo)致其檢測(cè)靈敏度受到一定限制[9]。有研究表明[10],GIGA法檢測(cè)HBsAg的靈敏度為1 ng/ml,而ELISA法檢測(cè)的靈敏度明顯高于GIGA法,為0.5 ng/ml。分析本次研究結(jié)果可知,兩方法檢測(cè)10例大三陽(yáng)(1,3,5)結(jié)果完全一致,18例小三陽(yáng)(1,4,5)結(jié)果GIGA法有2例未檢出,其中1例GIGA法未檢出HBsAg。此外,36例HBsAg陽(yáng)性標(biāo)本中,GIGA法僅此1例未檢出??赡茉?yàn)闃?biāo)本中HBsAg濃度較低,導(dǎo)致GIGA法漏檢。

    分析本次研究結(jié)果后發(fā)現(xiàn),HBsAb陰性符合率最低,GIGA法與ELISA法相比陰性符合率只有77.90%。在以往標(biāo)本檢測(cè)中發(fā)現(xiàn),GIGA法檢測(cè)HBsAb敏感性明顯低于ELISA法,對(duì)于ELISA法檢測(cè)顯色淺的標(biāo)本,使用GIGA法檢測(cè)常未能在判定結(jié)果的限定時(shí)間內(nèi)檢出,或是測(cè)試區(qū)條帶顯色過(guò)淺,肉眼難以觀察。故對(duì)于ELISA法檢測(cè)HBsAb顯色淺的標(biāo)本,不宜用GIGA法復(fù)檢,可使用ELISA法重新檢測(cè),或直接用化學(xué)發(fā)光法復(fù)核。有研究分析表明[11],ELISA中用雙抗原夾心法和雙抗體夾心法檢測(cè)進(jìn)行檢測(cè)時(shí),采用二步法能有效降低“鉤狀效應(yīng)”的出現(xiàn),提高陽(yáng)性率。同時(shí)也可選擇有很高的靈敏度、線性范圍相對(duì)寬的酶免疫分析技術(shù)(CLEIA)或者是電化學(xué)發(fā)光分析(ECLIA)對(duì)其進(jìn)行復(fù)查。HBcAb的陽(yáng)性符合率也較低,才64.56%,GIGA法檢出率較低可能是由于HBcAb的檢測(cè)使用的是競(jìng)爭(zhēng)抑制法,標(biāo)本陽(yáng)性時(shí)測(cè)試區(qū)(T)無(wú)條帶出現(xiàn),若標(biāo)本中HBcAb濃度低,測(cè)試區(qū)(T)可能會(huì)出現(xiàn)與質(zhì)控區(qū)(C)條帶相比顏色稍淺的條帶,肉眼觀察難以分辨。也可能是直接用原血清進(jìn)行檢測(cè)導(dǎo)致的,將來(lái)用1∶30的稀釋血清進(jìn)一步進(jìn)行研究,再另行報(bào)道。HBeAb陰性符合率雖較高,達(dá)到97.00%,但陽(yáng)性符合率才70.59%,造成GIGA法有10例陽(yáng)性標(biāo)本漏檢,可能原因與HBcAb相似,兩者同樣使用競(jìng)爭(zhēng)抑制法。使用ELISA法檢測(cè)時(shí),用酶標(biāo)儀比色判定結(jié)果,相對(duì)GIGA法更加準(zhǔn)確,漏檢率較低。但有2例標(biāo)本的HBcAb GIGA法檢測(cè)為陽(yáng)性而ELISA法為陰性,由于ELISA法檢測(cè)HBcAb時(shí),需要對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,反應(yīng)孔中加入約50 μl生理鹽水和5 μl待測(cè)血清樣品,標(biāo)本量加入不宜過(guò)多,若標(biāo)本中HBcAb濃度低,經(jīng)稀釋后檢測(cè)可能會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果。觀察表2其他項(xiàng)目GIGA法與ELISA法檢測(cè)結(jié)果基本相符,HBsAg陰性符合率為99.69%,陽(yáng)性符合率為97.22%,與學(xué)者劉珊等[14-15]的研究一致。HBeAg陰性陽(yáng)性符合率均為100.00%,符合臨床檢驗(yàn)的需求。

    乙肝是我國(guó)常見(jiàn)的傳染病,乙肝五項(xiàng)的檢測(cè)對(duì)于預(yù)防乙肝的傳染有十分重要的作用。在現(xiàn)階段臨床實(shí)驗(yàn)室中,ELISA法能很好地適應(yīng)檢測(cè)的要求,檢測(cè)靈敏度高、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性好。相較于Q-PCR技術(shù),ELISA法對(duì)乙肝五項(xiàng)進(jìn)行檢查,其準(zhǔn)確性略高但未見(jiàn)太大差異。有研究也提到:對(duì)于隱匿性HBV感染,ELISA法相較于熒光定量PCR,在敏感性上略差[12]。不過(guò),ELISA法改進(jìn)和復(fù)檢,有助于提升檢出的陽(yáng)性率。在臨床實(shí)踐中,對(duì)于ELISA法檢測(cè)懷疑假陰性標(biāo)本,復(fù)檢仍然陰性者,可通過(guò)化學(xué)發(fā)光法或電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行定量分析,或進(jìn)行HBV-DNA分析,判斷結(jié)果。本次研究中,ELISA法陽(yáng)性檢出率明顯高于GIGA法,漏檢率低。在以往實(shí)踐中,ELISA法檢測(cè)乙肝五項(xiàng)準(zhǔn)確性較高,假陰性結(jié)果較少,檢測(cè)結(jié)果較為可靠。

    近些年,GIGA法有比較顯著的發(fā)展。作為操作簡(jiǎn)單的檢測(cè)技術(shù),GIGA法無(wú)需提供完善的實(shí)驗(yàn)條件,對(duì)操作人員也沒(méi)有嚴(yán)格的要求,無(wú)需其他獨(dú)特的儀器設(shè)施,試劑相對(duì)穩(wěn)定,在臨床檢驗(yàn)上使用廣泛。本實(shí)驗(yàn)得知:GIGA法在對(duì)乙肝五項(xiàng)進(jìn)行檢測(cè)時(shí),其準(zhǔn)確性以及靈敏度相較于ELISA法均有一定的劣勢(shì)。針對(duì)HBsAb、HBcAb兩項(xiàng)指標(biāo),ELISA法遠(yuǎn)優(yōu)于GIGA法,且GIGA法成本較ELISA法高。結(jié)合實(shí)驗(yàn)過(guò)程和實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析,GIGA法基本適用于急診手術(shù)前少量標(biāo)本的檢測(cè),快速得出初步篩查結(jié)果,對(duì)醫(yī)護(hù)人員因職業(yè)暴露感染HBV進(jìn)行預(yù)防,但不能以初篩結(jié)果作為診斷,需要用ELISA法或其他靈敏度及準(zhǔn)確性更好的方法進(jìn)行復(fù)查確證。若要檢測(cè)批量的標(biāo)本,或是要求準(zhǔn)確性較高的檢測(cè),使用ELISA法較GIGA法好。

    GIGA法還常用于獻(xiàn)血前對(duì)進(jìn)行HBsAg的快速篩查。HBsAg檢測(cè)是在獻(xiàn)血過(guò)程中預(yù)防HBV的一線屏障,高敏感性的篩選實(shí)驗(yàn)對(duì)于減少輸血相關(guān)的HBV感染的風(fēng)險(xiǎn)非常重要。本次實(shí)驗(yàn)中,GIGA法檢測(cè)HBsAg的符合率高,與ELISA法相比較敏感性相差不遠(yuǎn),漏檢率低,能滿足獻(xiàn)血前的HBsAg快速篩查的要求。使用GIGA法對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行快速篩查除了能減少獻(xiàn)血前的HBV傳染風(fēng)險(xiǎn),還利于乙肝的早期發(fā)現(xiàn)診斷,檢測(cè)的陽(yáng)性結(jié)果可以在采血現(xiàn)場(chǎng)向獻(xiàn)血者反饋 ,從而讓獻(xiàn)血者可以在當(dāng)?shù)蒯t(yī)療機(jī)構(gòu)作出診治[13]。

    對(duì)乙肝五項(xiàng)進(jìn)行檢測(cè)時(shí),GIGA法的準(zhǔn)確性略低于ELISA法,存在一定的漏檢率,但GIGA法在操作步驟、實(shí)驗(yàn)儀器、檢測(cè)時(shí)間方面較ELISA法簡(jiǎn)單快速,用作初步篩查檢測(cè)結(jié)果較為可靠。GIGA法適用于急診標(biāo)本以及獻(xiàn)血前的快速篩查,也可用于普通健康體檢或流行病學(xué)的調(diào)查,對(duì)保護(hù)醫(yī)護(hù)人員的安全以及預(yù)防HBV的感染有重要的作用。

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