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    紫外分光光度法測定藏藥二十五味余甘子丸中總鞣質(zhì)的含量

    2016-10-25 19:18:13德吉措姆尼珍阿萍
    關(guān)鍵詞:紫外分光光度法含量測定

    德吉措姆+尼珍+阿萍

    【摘 要】 目的:建立二十五味余甘子丸中總鞣質(zhì)的含量測定方法。方法:以沒食子酸為對照品,磷鉬鎢酸為顯色劑,檢測波長760nm。結(jié)果:沒食子酸的線性范圍為1.024~10.24μg(r=0.9996),平均回收率99.2%,RSD=0.6% 。結(jié)論:該方法簡單、準確、重復(fù)性好,可用于二十五味余甘子丸中總鞣質(zhì)的含量測定。

    【關(guān)鍵詞】 二十五味余甘子丸;紫外分光光度法;總鞣質(zhì);含量測定

    【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517(2016)14-0013-02

    Abstract:ObjectiveTo set up a method for determination total tannin in ershiwuwei yuganzi pill. Methods Gallic acid to be reference, and colored with Phos phorus molybdenum tungsten acid, the wavelength of detect was set at 760 nm. Results The linearity was obtained within the range of 1.024~10.240 μg (r=0.9996);The average recovery(n=6) was 99.2%, and RSD was 0.6%. Conclusion The method is simple, accurate and repeatable. It could be adopted to determinate the total tannin in ershiwuwei yuganzi pill.

    Keywords:ershiwuwei yuganzi pill; UV; total tannin; content determination

    藏藥二十五味余甘子丸為藏醫(yī)傳統(tǒng)驗方,處方由余甘子、巴夏嘎、甘青蘭等二十六味藥材制成的復(fù)方制劑,臨床用于多血癥、高血壓、肝膽疼痛、聲啞目赤、口渴、口唇發(fā)紫、月經(jīng)不調(diào)[1]。研究采用紫外分光光度法測定[2-3]十一批不同廠家的二十五味余甘子丸中總鞣質(zhì)的含量,為其質(zhì)量控制提供實驗依據(jù)。

    1 儀器與材料

    1.1 儀器 TU1901雙光速紫外可見分光光度計(北京普析通用公司);XP205 微量電子天平( 瑞士METTLER 公司);KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)。

    1.2 材料 沒食子酸對照品(批號:110831-200803,中國藥品生物制品檢定所);所用的試劑均為分析純,二十五味余甘子丸樣品(見表1)。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 對照品溶液制備 精密稱取沒食子酸對照品11.36mg,置20mL棕色量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度,精密量取5mL,置50mL棕色量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,即得濃度為0.0512 mg/mL的沒食子酸對照品溶液。

    2.2 供試品溶液制備 精密稱取供試品細粉2.0g,置250 mL棕色容量瓶中,加入30% 的甲醇溶液150mL,超聲提取40 min,放冷,加30%甲醇稀釋至刻度,搖勻,過濾,取續(xù)濾液20 mL,置100 mL棕色容量瓶中,加水至刻度,即得。

    2.3 標準曲線的制備 精密量取濃度為0.0512mg/mL沒食子酸對照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL,分別置25 mL棕色量瓶中,各加入磷鉬鎢酸試液1 mL,再分別加水11.5、11、10、9、8、7 mL,用29% 碳酸鈉溶液稀釋至刻度,搖勻,放置30 min,以相應(yīng)的試劑為空白,在760 nm 處測定吸光度。以吸光度為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準曲線得回歸方程Y=0.12163X+0.06147(r=0.9996),表明沒食子酸在1.024~10.24μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

    2.4 精密度試驗 取供試品溶液(批號:101201)6份,分別制成供試品溶液,按照“2.3”項下方法操作,于760 nm 處測定吸光度,結(jié)果吸光度的相對標準偏差(RSD)為1.3%,說明儀器的精密度良好。

    2.5 穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液(批號:101201)1mL,按“2.3”項下方法操作,顯色30 min后,每隔5min測定一次吸光度,共6次,計算(RSD)為1.2%(n=6),表明二十五味余甘子丸的鞣質(zhì)在顯色終止反應(yīng)后30 min內(nèi)測結(jié)果穩(wěn)定。

    2.6 回收率試驗 取已知含量(批號:101201)的樣品6 份,精密稱取2.0g細粉,各加入沒食子酸對照品20.0 mg,按照供試品溶液制備方法制備,并按“2.3”項下方法測定含量,結(jié)果6次測定的平均回收率為99.2%,RSD=0.6%,說明該測定方法回收率較好。見表2。

    2.7 總鞣質(zhì)含量測定

    2.7.1 總酚 精密量取供試品溶液2mL,置25mL棕色量瓶中,加入磷鉬鎢酸試液1mL,再加水10mL,用29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度,搖勻,放置30min,測定吸光度。

    2.7.2 不被吸附的多酚 精密量取供試品溶液25mL,加至已盛有0.6g干酪素的100mL具塞錐形瓶中,密塞,于30℃水浴中保溫1h,時時振搖,取出,放冷,搖勻,濾過,棄去初濾液,精密量取續(xù)濾液2mL,置25mL棕色量瓶中,加入磷鉬鎢酸試液1mL,再加水10mL,用29% 碳酸鈉溶液稀釋至刻度,搖勻,放置30min, 測定吸光度。結(jié)果見表3。

    3 討論

    為了能夠較為準確的測定總鞣質(zhì)的含量,研究對供試品的制備方法進行了優(yōu)選。通過比較水、50% 丙酮、30%甲醇超聲提取制備的供試品中總鞣質(zhì)的含量,發(fā)現(xiàn)50%丙酮和30%甲醇提取所得總鞣質(zhì)含量最高,因此確定二十五味余甘子丸提取溶劑為30%的甲醇;而50%丙酮雖含量比30%甲醇高但是在試驗過程中二十五味余甘子丸中有些藥材在丙酮提取時對鞣質(zhì)含量有影響。同時比較了超聲提取和放置過夜提取兩種提取方法,發(fā)現(xiàn)超聲提取不僅提取完全,而且由于可以常溫提取,不會影響鞣質(zhì)的含量。因此,確定采用超聲提取。

    由于鞣質(zhì)類化合物性質(zhì)不穩(wěn)定,所以對樣品的制備、處理等均應(yīng)考慮環(huán)境的影響,避免鞣質(zhì)類化合物發(fā)生變化,如:樣品制備和超聲時注意溫度的影響,提取液應(yīng)避光保存,且宜迅速測定等。

    參考文獻

    [1]國家藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準(藏藥,第一冊)[S]. 1995 :148.

    [2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S] . 北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:62.

    [3]孫中文,劉漢青,黃一平,等. 藏藥余甘子中總鞣質(zhì)和沒食子酸的含量測定[J].現(xiàn)代中藥研究與實踐,2010,24(3):60 .

    (收稿日期:2016.04.26)

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