薄層析-紫外分光光度法測(cè)定川芎中阿魏酸含量

蘇秀蘭，楊倚麟　(四川文理學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院，四川達(dá)州 635000)

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薄層析-紫外分光光度法測(cè)定川芎中阿魏酸含量

蘇秀蘭，楊倚麟(四川文理學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院，四川達(dá)州 635000)

摘要[目的]建立一種測(cè)定川芎中阿魏酸含量的簡(jiǎn)單方法。[方法]利用薄層析法將川芎提取液中的阿魏酸與其他物質(zhì)進(jìn)行分離，再采用紫外分光光度法測(cè)定分離出的阿魏酸含量。[結(jié)果]薄層析展開劑為乙酸乙酯∶石油醚=2∶1(V/V)時(shí)阿魏酸能與其他物質(zhì)完全分離，比移值(Rf)為0.53；阿魏酸的最大吸收波長(zhǎng)為324 nm，質(zhì)量濃度為0.5～1.7 μg/mL范圍內(nèi)濃度與吸光度呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=0.143A+0.004 3；4 h內(nèi)阿魏酸在乙醇中的穩(wěn)定性良好，樣品川芎中阿魏酸含量約為0.1%，加樣回收率為98.6%，RSD為1%～3%，精密度良好。[結(jié)論]薄層析-紫外分光光度法能夠準(zhǔn)確測(cè)定川芎中阿魏酸含量。

關(guān)鍵詞川芎；阿魏酸；薄層析；紫外分光光度法

川芎為傘形科藁本屬植物川芎的干燥根莖，是我國(guó)傳統(tǒng)中藥材，最早的藥用記錄可追溯至秦漢時(shí)期醫(yī)家所著《神農(nóng)本草經(jīng)》。自古以來以四川省境內(nèi)所產(chǎn)藥效最好，最為道地，故稱為川芎。中醫(yī)認(rèn)為，川芎具有活血化瘀、行氣開郁和祛風(fēng)止痛的功效，能夠用來治療各種頭痛[1]、月經(jīng)不調(diào)[2]、風(fēng)寒濕痹及跌打損傷[3]等，現(xiàn)代臨床主要用于治療各種心腦血管疾病[4]，如冠心病[5]、腦溢血[6]等。川芎中的有效成分主要為藁本內(nèi)酯、川芎內(nèi)酯、川芎嗪和有機(jī)酸[7]，其中有機(jī)酸主要以阿魏酸為代表。研究發(fā)現(xiàn)，阿魏酸不僅具有明顯的抗氧化和自由基清除作用[8]，還具有抗血小板凝集與降血脂的功效，能夠增強(qiáng)前列腺素活性、鎮(zhèn)痛、緩解血管痙攣[9]，是生產(chǎn)用于治療心腦血管疾病及白細(xì)胞減少等癥藥品的基本原料。

由于川芎中含有多種有效成分，單獨(dú)用紫外分光光度法測(cè)定川芎中阿魏酸含量時(shí)，容易受到其他物質(zhì)的干擾，造成較大偏差，因此目前多采用具有自動(dòng)分離功能的高效液相色譜法(HPLC)[10-11]、薄層掃描法(TLCS)[12]和毛細(xì)管電泳法[13]等測(cè)定阿魏酸含量。這些測(cè)試方法能對(duì)樣品中的多種有效成分自動(dòng)進(jìn)行分離，測(cè)定精度高，適用性強(qiáng)，但所用設(shè)備較為昂貴，且對(duì)藥劑純度也有較高要求，因此不適用于規(guī)模較小、資金有限的中小企業(yè)。該研究將薄層析法和紫外分光光度法結(jié)合起來，先利用薄層析法分離出川芎中的阿魏酸，再用紫外分光光度法測(cè)定阿魏酸含量。

1材料和方法

1.1試料試驗(yàn)用川芎購(gòu)于愛民大藥房，并打成200目細(xì)粉。阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品(色譜級(jí))購(gòu)于阿拉丁試劑有限公司。乙醇、乙酸乙酯、石油醚均為分析純，均購(gòu)于成都市科龍化工試劑廠。

1.2儀器752型紫外-可見分光光度儀，購(gòu)于上海精科儀器設(shè)備有限公司；RE-2000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，購(gòu)于上海雅榮生化儀器廠；DF-101S集熱式恒溫磁力攪拌器，購(gòu)于鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；TG20-WS離心機(jī)，購(gòu)于長(zhǎng)沙湘智離心機(jī)儀器有限公司；微量移液器，購(gòu)于大龍醫(yī)療設(shè)備有限公司；薄層析硅膠板(2 cm×7 cm，10 cm×10 cm)，購(gòu)于青島海洋化工廠；3 mm毛細(xì)管點(diǎn)樣器，購(gòu)于華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1川芎有效成分的提取。采用溶劑提取法。試驗(yàn)前先將川芎細(xì)粉60 ℃干燥1 h，稱取干燥后的川芎粉末10 g于圓底燒瓶中，加入100 mL無水乙醇，80 ℃回流30 min，抽濾，收集濾液，棕色瓶保存。如此重復(fù)提取2次，合并3次提取濾液。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸餾除去溶劑，得棕褐色膏狀物。

1.3.2薄層析法分離川芎提取液中阿魏酸。 取少量川芎膏狀物，加適量乙醇溶解，用毛細(xì)管吸取溶液點(diǎn)于薄層硅膠板(2 cm×7 cm)上。以乙酸乙酯和石油醚為展開劑，不斷調(diào)整二者比例，并與阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對(duì)比，直至找到合適配比使提取液中阿魏酸能與其他物質(zhì)完全分開。

1.3.3最大吸收波長(zhǎng)的測(cè)定。 取一定量阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品，用95%乙醇稀釋至2 μg/mL。以95%乙醇做空白對(duì)照，300～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)全波長(zhǎng)掃描。吸光度最大處的波長(zhǎng)即為阿魏酸最大吸收波長(zhǎng)。

1.3.4阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。精確稱取阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品25 mg，用適量95%乙醇溶解，轉(zhuǎn)入25 mL棕色容量瓶中，定容，即得1 mg/mL阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。量取阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)液，依次稀釋至50、80、110、140、170 μg/mL。用微量移液器吸取上述稀釋液各50 μL，條狀點(diǎn)于5片薄層析硅膠板(10 cm×10 cm)上。用調(diào)整好比例的展開劑跑板，冷風(fēng)吹干，紫外燈下定位，刮板，并刮取等體積的空白硅膠板作為對(duì)照組。將刮取的硅膠分別放入6個(gè)10 mL離心管中，精確加入5 mL 95%乙醇，震蕩3 min，4 000 r/min離心10 min，取上層清液于最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.5乙醇中阿魏酸穩(wěn)定性試驗(yàn)。 取標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(50、80、110、140、170 μg/mL )各50 μL，按“1.3.4”方法每隔1 h測(cè)一次吸光度，4 h后終止。

1.3.6精密度試驗(yàn)。取標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(50、80、110、140、170 μg/mL )各50 μL，按“1.3.4”方法測(cè)吸光度，每組稀釋液重復(fù)測(cè)定5次。將測(cè)得的吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算濃度，并根據(jù)5個(gè)濃度值計(jì)算每組試驗(yàn)的RSD。

1.3.7提取液中阿魏酸含量測(cè)定。將制得的膏狀物用適量95%乙醇溶解，轉(zhuǎn)入25 mL容量瓶中，定容，得樣品液。取30 μL樣品液，按“1.3.4”方法測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線即得樣品液中阿魏酸含量。

1.3.8加樣回收率試驗(yàn)。精確吸取樣品液0.5、1.0、1.5、2.0 mL，各加入10 μL 1 mg/mL阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)液，用95%乙醇定容至5 mL。按“1.3.4”測(cè)定吸光度，并計(jì)算加樣回收率。每組測(cè)3次。

2結(jié)果與分析

2.1薄層析試驗(yàn)參數(shù)川芎提取液薄層色譜圖與阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對(duì)照(圖1)可知，以乙酸乙酯和石油醚為展開劑，二者體積比為2∶1時(shí)，能將阿魏酸與川芎提取液中的其他物質(zhì)完全分開，且點(diǎn)規(guī)整，無拖尾現(xiàn)象。經(jīng)計(jì)算，比移值(Rf)為0.53。

2.2阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品紫外吸收光譜由阿魏酸乙醇(95%)溶液在300～400 nm范圍內(nèi)的全波長(zhǎng)掃描圖譜(圖2)可知，阿魏酸的最大吸收波長(zhǎng)為324 nm。

2.3阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)曲線由圖3可知，阿魏酸質(zhì)量濃度在0.5～1.7 μg/mL范圍內(nèi)時(shí)，濃度與吸光度呈良好的線性關(guān)系。經(jīng)計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y=0.143A+0.004 3，其中Y為阿魏酸濃度，A為吸光度。

2.4阿魏酸在乙醇中的穩(wěn)定性由表1可知，4 h內(nèi)各濃度阿魏酸在乙醇溶液中的吸光度均變化不大，基本穩(wěn)定，因此乙醇可作為阿魏酸濃度測(cè)定時(shí)的溶劑。但為了盡可能減少試驗(yàn)誤差，測(cè)試液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，避免過夜，且于棕色瓶中保存。

2.5精密度試驗(yàn)由表2可知，5組試驗(yàn)數(shù)據(jù)RSD為1%～3%，其值在誤差允許的范圍內(nèi)，表明該方法精密度良好，重現(xiàn)性高。

2.6川芎中阿魏酸含量經(jīng)測(cè)定，川芎樣品中阿魏酸含量約為0.1%，與朱麗波等[14]HPLC測(cè)定方法結(jié)果基本一致。

2.7加樣回收率試驗(yàn)由表3可知，薄層析-紫外分光光度法的平均加樣回收率為98.6%，回收率較高，試驗(yàn)結(jié)果良好，可以用來測(cè)定川芎中阿魏酸含量。

3結(jié)論與討論

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用水或乙醇與水的混合物作提取溶劑時(shí)，需要較多次提取才能將川芎中的有效成分完全提取出來。若溶劑中水的比例過大，還會(huì)造成抽濾困難。且水的沸點(diǎn)比乙醇高，需要更高的溫度才能將水除去，但高溫易造成阿魏酸分解。因此該試驗(yàn)選用10倍量無水乙醇作溶劑，提取3次(80 ℃)，每次回流30 min，此時(shí)川芎中的有效成分基本完全被提取出來。阿魏酸為有機(jī)弱酸，易氧化分解，應(yīng)制成膏狀存放于棕色試劑瓶中。使用溶液時(shí)現(xiàn)用現(xiàn)配。

由于川芎中的其他物質(zhì)在阿魏酸最大吸收波長(zhǎng)處也有一定的吸收，影響試驗(yàn)精度，該試驗(yàn)采用薄層析法將川芎中的阿魏酸和其他物質(zhì)進(jìn)行初步分離，再采用紫外分光光度法測(cè)定分離出的阿魏酸含量。結(jié)果表明，薄層色譜展開劑乙酸乙酯和石油醚體積比為2∶1時(shí)，阿魏酸和其他物質(zhì)能夠完全分離，Rf值為0.53；阿魏酸的最大吸收波長(zhǎng)為324 nm，質(zhì)量濃度在0.5～1.7 μg/mL范圍內(nèi)吸光度與濃度呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=0.143A+0.004 3；阿魏酸在乙醇中的穩(wěn)定性良好，4 h內(nèi)吸光度無顯著變化；樣品川芎中阿魏酸含量約0.1%，加樣回收率為98.6%；此方法RSD為1%～3%，精密度較好。綜上所述，薄層析-紫外分光光度法操作簡(jiǎn)便，對(duì)設(shè)備要求較低，可適用于川芎中阿魏酸含量的測(cè)定。

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Determination of the Content of Ferulic Acid in Rhizome of Chuanxiong by TLC-Ultraviolet Spectrophotometry Method

SU Xiu-lan, YANG Yi-lin

(School of Chemistry and Chemical Engineering, Sichuan University of Arts and Science, Dazhou, Sichuan 635000)

Key wordsRhizome of Chuanxiong; Ferulic acid; TLC; Ultraviolet spectrophotometry

Abstract[Objective] To establish a simple method for determination of the content of ferulic acid in Rhizome of Chuanxiong. [Method] TLC was used to separate ferulic acid from other compounds, and then the content of ferulic acid was determined by ultraviolet spectrophotometry. [Result] Ferulic acid and other compounds could be completely separated by using ethyl acetate-petroleum∶ether (2∶1) as developing solvent,Rfwas 0.53; the maximum absorption wavelength of ferulic acid was 324 nm; the linear range of ferulic acid was 0.5-1.7 μg/mL, and the liner regression equation wasY=0.143A+0.004 3; the stability of ferulic acid in ethanol was good within 4 h, the content of ferulic acid in Chuanxiong samples was about 0.1%; the recovery rate of the method was 98.6%andRSDwas between 1%-3%. [Conclusion] TLC-ultraviolet spectrophotometry method can accurately determine the content of ferulic acid in Rhizome of Chuanxiong.

基金項(xiàng)目四川文理學(xué)院校級(jí)項(xiàng)目(2014Z014Y)。

作者簡(jiǎn)介蘇秀蘭(1988- )，女，安徽阜陽人，助教，碩士，從事天然藥物研究開發(fā)工作。

收稿日期2016-01-31

中圖分類號(hào)S 567；O 658.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

文章編號(hào)0517-6611(2016)07-142-03