疏花薔薇果總多酚抗氧化活性

王東東， 湯紫薇， 黨穩(wěn)梅， 郭萍萍， 王慧杰， 田 莉

(新疆醫(yī)科大學中醫(yī)學院，新疆烏魯木齊 830011)

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疏花薔薇果總多酚抗氧化活性

王東東， 湯紫薇， 黨穩(wěn)梅， 郭萍萍， 王慧杰， 田 莉*

(新疆醫(yī)科大學中醫(yī)學院，新疆烏魯木齊 830011)

疏花薔薇果為薔薇科(Rosaceae)植物疏花薔薇(RosalaxaRatz.)的干燥果實。多產(chǎn)于我國海拔500～1 150 m的灌木叢中或河谷旁，其中以新疆阿爾泰山區(qū)、額敏河谷平原、準噶爾山區(qū)以及南疆沿天山一帶分布較多[1]，主要含有內(nèi)酯、香豆素、糖和苷類、黃酮類、有機酸和酚類鞣質(zhì)類等化學成分[2-3]。疏花薔薇果在維吾爾族民間多有使用，是一種維吾爾傳統(tǒng)藥材，收錄于1999年版的《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》(維吾爾藥分冊)。研究表明，疏花薔薇的經(jīng)濟藥用價值較高，其葉子外用可治腫毒，根能活血化瘀，花能清暑熱解渴止血，特別是果實含有多種營養(yǎng)成分[4]。

多酚類化合物的生理活性與其較強的清除自由基和抗氧化性密切相關。隨著近20年來抗氧化劑的蓬勃發(fā)展，目前已從單純的合成抗氧化劑和食品抗氧化劑逐漸發(fā)展成為天然抗氧化劑與體內(nèi)自由基清除劑，從天然植物中尋找體內(nèi)自由基消除劑也將是現(xiàn)代醫(yī)藥和保健行業(yè)的發(fā)展趨勢。疏花薔薇果中多酚類化合物研究尚未報道，筆者利用前期已優(yōu)化的超聲波提取工藝對其多酚類物質(zhì)抗氧化能力進行了研究，以期為藥用植物資源的綜合開發(fā)利用提供科學依據(jù)。

1材料與方法

1.1試藥疏花薔薇果(RosalaxaRatz.Fruits)藥材購于烏魯木齊市二道橋維藥材市場，經(jīng)新疆醫(yī)科大學中醫(yī)學院烏莉婭·沙衣提教授鑒定為疏花薔薇(RosalaxaRatz.)的干燥果實。其余試劑均為分析純，水為蒸餾水。

1.2儀器KQ3200DE數(shù)控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，752紫外可見分光光度計(上海菁華科技儀器有限公司)。

1.3試驗方法

1.3.1沒食子酸標準曲線的制備。精密稱定沒食子酸對照品25 mg，置于250 mL量瓶中，加水配成0.1 mg/mL的對照品溶液。精密量取沒食子酸對照品溶液0、2、3、4、5、6 mL，分別置于10 mL棕色容量瓶中，各加入Folin-Ciocalteu試劑0.5 mL，在1～8 min內(nèi)加入20% Na2CO3溶液1.5 mL，搖勻，加水稀釋定容至刻度，搖勻，75 ℃水浴15 min，快速冷卻，在400～800 nm波長下掃描最大吸收波長。

1.3.2供試品溶液的制備及多酚含量測定。疏花薔薇果粉碎，過2號篩，精密稱取約6 g，分別用等量的石油醚超聲萃取2次，過濾，棄去石油醚。利用響應曲面法已優(yōu)化的超聲波提取工藝(45%乙醇、料液比1∶18、超聲時間50 min)提取，超聲提取后4 000 r/min離心5 min，取上清液，定容至100 mL，即得供試品溶液。精密量取供試品溶液1 mL，用45%乙醇定容于1 000 mL量瓶中，按照“1.3.1”方法制備溶液，在紫外分光光度計下測定吸光度，計算疏花薔薇果中總多酚的含量。

1.3.3DPPH自由基清除能力測定。精密稱取2 mg DPPH，用無水乙醇定容至25 mL (有效期1 d)，配制成2×10-4mol/L的溶液，避光。將供試品溶液用45%乙醇制成生藥濃度為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mg/mL的溶液，待測。取3支試管，編號為A、B、C，A中加入2×10-4mol/L的DPPH乙醇溶液 2 mL，再加入2 mL的生藥濃度分別為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mg/mL的藥液，搖勻，在黑暗室溫下反應30 min，于波長517 nm處測得吸光度值，記作Ai；B中加入2×10-4mol/L的DPPH乙醇溶液2 mL、無水乙醇2 mL，搖勻后測得吸光度值A0；C中加入2 mL藥液(不同濃度)、2 mL無水乙醇，搖勻，測得吸光度值Aj；以抗壞血酸(VC)為陽性藥物對照[5]。按下式計算抗氧化劑對DPPH自由基的清除率：DPPH自由基清除率=[1-(Ai-Aj)/A0]×100%。

1.3.4羥基自由基清除能力測定。供試品溶液配制成1、2、3、4、5、6 mg/mL 的6個濃度，取18支試管，每個濃度設3個平行管，每管中加入9 mmol/L的FeSO4溶液1 mL、9 mmol/L的水楊酸-乙醇溶液1 mL，再加入各濃度下的供試品溶液2 mL，最后加入0.5 mL 8.8 mmol/L的H2O2啟動反應，37 ℃水浴中反應30 min，以蒸餾水調(diào)儀器零點，在510 nm處測量各濃度下的吸光度，通過公式計算其清除率。以蒸餾水代替樣品溶液，為空白對照液的吸光度，記為A0；加入藥物溶液后的吸光度，記為Ai；以蒸餾水代替H2O2，樣品溶液本底的吸光度，記為Aj，以VC為陽性藥物對照[6-8]。清除率=[A0-(Ai-Aj) ] /A0×100%。

1.3.5超氧陰離子自由基消除能力測定。采用鄰苯三酚自氧化法產(chǎn)生O2-，試驗分別設置對照管和加藥管，對照組管設3個平行管，分別加入50 mmol/L的Tris-HCl緩沖溶液(pH 8.2，含2 mmol/L的EDTA) 3 mL，加入1 mL蒸餾水，混勻后25 ℃水浴保溫20 min，取出后立即加入25 ℃水浴中預熱的2.5 mmol/L鄰苯三酚1 mL (以10 mmol/L HCl代替鄰苯三酚作為空白)，混勻后立即倒入比色杯，于320 nm處每隔30 s測吸光度值(A)9次，共測4 min，計算對照管溶液吸光度隨時間的變化率(ΔA)。加藥組(2、4、6、8、10、12 mg/mL)每個濃度設3個平行管，在加入鄰苯三酚前先加入1 mL不同濃度梯度的藥液和50 mmol/L的Tris-HCl緩沖溶液3 mL，混勻后25 ℃水浴保溫20 min，取出后立即加入在25 ℃水浴中預熱的2.5 mmol/L鄰苯三酚1 mL，混勻后立即倒入比色杯，于320 nm處每隔30 s測A0值，共9次，測4 min，計算藥液吸光度隨時間的變化率(ΔA0)?？瞻坠芤?0 mmol/L的鹽酸代替鄰苯三酚,其余按照樣品管加樣，不同濃度藥液測試時分別以其對應的空白管調(diào)儀器零點。以抗壞血酸為陽性藥物對照。超氧陰離子自由基O2-清除率=(ΔA-ΔA0)/ΔA×100%，式中，ΔA為表示對照管鄰苯三酚自氧化變化速率，ΔA0為表示加藥管鄰苯三酚自氧化變化速率。

2結果與分析

2.1沒食子酸標準曲線的制備及總多酚含量測定結果波長掃描結果表明，沒食子酸在760 nm處有強吸收峰，故選擇760 nm為測定波長。以吸光度為縱坐標、沒食子酸濃度為橫坐標，繪制標準曲線，回歸方程為y=1 374.0x-0.002 2(R=0.999 7)，表明沒食子酸在0.02～0.06 mg/mL與吸光度呈良好的線性關系。按“1.3.2”方法制備供試品溶液，測定吸光度，計算得出疏花薔薇果中總多酚的含量為0.69%。

2.2疏花薔薇果總多酚對DPPH自由基的清除作用由圖1可見，疏花薔薇果總多酚在試驗濃度(0.2～1.2 mg/mL)范圍內(nèi)，對DPPH自由基有較強的清除能力，且清除效果與多酚濃度之間具有明顯的量效關系，IC50約為0.45 mg/mL，抗壞血酸(VC)的IC50約為0.25 mg/mL，表明其清除能力弱于VC。

圖1　疏花薔薇果多酚、VC對DPPH自由基的清除作用Fig.1　The scavenging capacities of polyphenol and VCfrom Rosa laxa Ratz.fruits on the DPPH radical

2.3疏花薔薇果總多酚對·OH自由基的清除作用從圖2可看出，疏花薔薇果總多酚在1 mg/mL時，其清除率僅為21.11 %。但當疏花薔薇果總多酚濃度升高后，清除羥自由基的能力也開始增強，表明其清除能力與疏花薔薇果總多酚濃度間有一定的量效關系。隨著濃度的增加，其對·OH的清除作用逐漸增強，在6 mg/mL濃度時，對·OH的清除率可達99.39%，IC50約為3 mg/mL，VC的IC50約為0.5 mg/mL，表明其清除能力弱于VC。

圖2　疏花薔薇果多酚(a)和VC(b)對羥基自由基的清除作用Fig.2　The scavenging capacities of polyphenol(a) and VC(b) from Rosa laxa Ratz.fruits on hydroxyl radical

圖3　疏花薔薇果多酚(a)和VC(b)對超氧陰離子自由基的清除作用Fig.3　The scavenging capacities of polyphenol(a) and VC(b) from Rosa laxa Ratz.fruits on superoxide anion radical

2.4疏花薔薇果總多酚對超氧陰離子自由基的清除作用圖3顯示，疏花薔薇果多酚對超氧陰離子自由基具有較強的清除能力，且清除率隨多酚濃度的增加而增大，表明其清除能力與疏花薔薇果總多酚的濃度間有一定的量效關系。當總多酚濃度為12 mg/mL時，超氧陰離子自由基清除率為96.07%，IC50約為3 mg/mL，VC的IC50約為0.4 mg/mL，表明其清除能力弱于VC。

3結論與討論

利用已優(yōu)化的響應曲面法提取疏花薔薇果中的總多酚，并應用3種抗氧化模型，以抗壞血酸為陽性對照，研究疏花薔薇果中總多酚的體外抗氧化能力，結果發(fā)現(xiàn)，疏花薔薇果總多酚提取物對DPPH自由基、超氧陰離子自由基和羥基自由基均具有明顯的清除能力，表明疏花薔薇果總多酚具有較強的自由基清除能力以及較強的抗氧化活性，且在各個體系中，疏花薔薇果多酚的抗氧化活性和其濃度間均有良好的量效關系。多酚類的抗氧化能力已被公認，且在某些藥用植物中抗氧化能力和其所含的多酚類含量呈正比[9-12]。由試驗數(shù)據(jù)可知疏花薔薇果總多酚對自由基的清除能力不及抗壞血酸，可能是由于多酚提取物純度較低，限制了其清除能力的發(fā)揮。

我國是薔薇屬植物的主要原產(chǎn)地之一，疏花薔薇廣泛分布于新疆各地區(qū)，資源豐富，可以成為天然抗氧化活性物質(zhì)的提取素材，是抗氧化劑的豐富來源。分離提取疏花薔薇果中的抗氧化活性成分，作為藥品、保健食品及天然食品抗氧化劑來開發(fā)，具有廣闊的前景。

參考文獻

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摘要[目的]研究疏花薔薇果中總多酚的抗氧化能力，為進一步開發(fā)疏花薔薇果提供試驗數(shù)據(jù)。[方法]利用已優(yōu)化的響應曲面法提取疏花薔薇果中的總多酚，并測定其含量；應用3種抗氧化模型(清除DPPH自由基、清除羥基自由基、清除超氧陰離子自由基)，建立疏花薔薇果中的多酚類成分抗氧化能力模型，以抗壞血酸為陽性對照，評價疏花薔薇果中總多酚的體外抗氧化能力。[結果]在試驗濃度范圍內(nèi)，疏花薔薇果總多酚對羥基自由基、超氧陰離子自由基、DPPH自由基均有較強的清除能力，其清除率與總多酚濃度有一定的量效關系。[結論]疏花薔薇果總多酚有明顯的清除自由基能力，可以作為一種有效的天然抗氧化劑來開發(fā)利用。

關鍵詞疏花薔薇果；總多酚；抗氧化活性

Antioxidant Activity of Total Polyphenols fromRosalaxaRatz.Fruits

WANG Dong-dong,TANG Zi-wei,DANG Wen-mei,TIAN Li*et al(Institute of TCM,Xinjiang Medical University,Urumqi,Xinjiang 830011)

Abstract[Objective]To study antioxidant activity of total polyphenols fromRosalaxaRatz.fruits,to provide experimental data for the further development ofRosalaxaRatz.fruits.[Method] Total polyphenols fromRosalaxaRatz.fruits was extracted by optimized response surface methodology,and its content was determined.Utilizing the three types of antioxidant activity models(the active effect of clearing DPPH radical,hydroxyl radical and superoxide anion radical),the antioxidant activity models of polyphenols ingredient fromRosalaxaRatz.fruits were established,with ascorbic acid as a positive control,the antioxidant activity abilityinvitroof total polyphenol fromRosalaxaRatz.fruits was evaluated.[Result]With a certain range of concentrations,total polyphenols fromRosalaxaRatz.fruits showed strong scavenging capacities on the DPPH radical,hydroxyl radical and superoxide anion radical.And the effect was enhanced with an increase in the concentration,and the scavenging rate was certain dose-dependent manner.[Conclusion]Total polyphenols fromRosalaxaRatz.fruits has significant capacity of scavenging free radical,it can be applied as an effective natural antioxidant.

Key wordsRosalaxaRatz.fruits; Total polyphenols; Antioxidant activity

收稿日期2015-12-02

作者簡介王東東(1985- )，男，甘肅天水人，實驗師，碩士，從事中藥活性成分研究。*通訊作者，教授，博士，碩士生導師，從事中藥新藥研究與開發(fā)工作。

基金項目國家級大學生創(chuàng)新項目(CX2014016)。

中圖分類號S 567

文獻標識碼A

文章編號0517-6611(2016)01-162-03