HPLC法測定婦炎舒片中丹酚酸B的含量

王粉安 鄭海波 趙東玲

[摘要] 目的 建立婦炎舒片中丹酚酸B的含量測定方法。 方法 以丹酚酸B為測定指標，HPLC測定婦炎舒片中丹酚酸B的含量。色譜條件：色譜柱為KromasilC18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）；檢測波長：286 nm；流速：1.0 mL/min。 結果 丹酚酸B對照品在0.508～3.176 μg范圍內線性關系良好，r ＝ 0.999 9；平均回收率為97.94%，RSD = 1.14（n = 6）。 結論 本定量方法簡便、準確、專屬性強，能有效控制婦炎片的質量。

[關鍵詞] 婦炎舒片；高效液相色譜法；丹酚酸B；含量測定

[中圖分類號] R286.0[文獻標識碼] B[文章編號] 1674-4721（2012）07（c）-0079-02

Determination of salvianolic acid B in Fuyanshu Tablets by HPLC

WANG Fen'an1 ZHENG Haibo2 ZHAO Dongling3

1.Ruixin Pharmaceuticals Co.Ltd of Xi'an Jiaotong University in Shannxi Province, Xi'an 710061, China; 2.Medical college of Xi'an Jiaotong University in Shannxi Province, Xi'an 710061, China; 3. Hospital of Xi'an Jiaotong University in Shannxi Province, Xi'an 710061, China

[Abstract] Objective To determine of salvianolic acid B in Fuyanshu tablets by HPLC. Methods With salvianolic acid B as the Determination index, HPLC was used to determine the contents of salvianolic acid B in Fuyanshu tablets. The analysis was performed on a Kromasil C18 column(250 mm×4.6 mm, 5 μm); The mobile phase was methanol-acetonitrile- formic acid-water (30∶10∶1∶59) at a flow rate of 1.0 mL/min; The detective wavelength was 286 nm. Results The standard of curves of salvianolic acid B showed a good linearity from 0.508 μg to 3.176 μg, (r = 0.999 9); average recovery was 97.94%，RSD = 1.14(n = 6). Conclusion The quantitative method is simple and convenient, accuracy, and strong specificity which can effective control the quality of Fuyanshu Tablets.

[Key words] Fuyanshu tablets; HPLC；Salvianolic acid B; Content determination

婦炎舒膠囊為《國家藥品監(jiān)督管理局國家藥品標準中成藥地標升國標外科婦科分冊》中收載的品種，具有清熱涼血，活血止痛的功效[1]。婦炎舒片為改劑型品種，處方由忍冬藤、大血藤、丹參、芍藥、甘草等十一味藥味組成，文獻報道及該制劑質量標準中都采用HPLC法測定芍藥中芍藥苷的含量[2-3]。處方中丹參具有祛瘀止痛、涼血消癰、清心除煩的功效[4]，本文筆者結合文獻采用HPLC法增加丹參中丹酚酸B的含量測定方法[5-6]，有利于制劑中多組分的質量控制，報道如下：

1 儀器與試劑

1.1 儀器

島津LC-2010CHT 型高效液相色譜儀，LCsolution工作站。

1.2 試劑

丹酚酸B對照品（購自中國藥品生物制品檢定所，批號：111562-200605）；婦炎舒片（自制，批號：01、02、03）。

2方法與結果

2.1 色譜條件

Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）；流速：1.0 mL/min；檢測波長286 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。在此條件下，色譜圖顯示供試品中丹酚酸B與其他雜質峰基線分離。見圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取對照品丹酚酸B 15.88 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇制成每1毫升含0.635 2 mg的溶液，作為貯備液。分別精密吸取2、3、5、3、5mL貯備液分別置于25、25、25、10、10 mL量瓶中，加入70%甲醇稀釋至刻度，分別得到每1毫升含丹酚酸B 0.050 8、0.076 2、0.127 0、0.190 6、0.317 6 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品10片，研細，取約0.5 g，精密稱定，精密加入70%甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，稱定重量，加70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按供試品處方工藝制備不含丹參的陰性樣品1 g，按2.2.2項下方法制成陰性對照溶液。

2.3 線性試驗

精密吸取上述對照品溶液各10 μL，按2.1項下色譜條件測定峰面積，以進樣量（C，μg）對峰面積（A）作標準曲線，計算丹酚酸B的回歸方程為A=6.605 6×105C-8 230.7（r = 0.999 8），結果表明在0.508～3.176 μg范圍內線性關系良好。

2.4 精密度試驗

精密吸取供試品溶液10 μL，重復進樣5次，測定色譜峰面積，丹酚酸B RSD = 0.57。

2.5 重復性試驗

取同一批號供試品（批號：01），平行稱取6份，按2.2.2項下方法制備，精密吸取10 μL，按2.1項下色譜條件測定，樣品平均含量9.91 mg/g，RSD = 1.15。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取同一批供試品溶液，精密吸取10 μL，按2.1項下色譜條件分別在0、2、4、8、24、48 h測定，丹酚酸B色譜峰面積RSD = 1.09，表明穩(wěn)定性良好。

2.7 加樣回收率試驗

取2.3項下已知含量的樣品（批號：01，樣品平均含量9.91 mg/g）約0.25 g，平行精密稱取6份，分別精密加入丹酚酸B對照品（0.127 0 mg/mL）溶液2 mL，揮干溶劑后，按2.2.2項下同法制備，測定含量，平均回收率為97.94%，RSD = 1.14。見表1。

2.8 樣品測定

按2.1項下色譜條件，精密吸取供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，結果見表2。

3 討論

（1）由于處方中丹參經過乙醇提取，筆者結合文獻考察了丹參飲片中丹酚酸B在提取工藝中的含量變化，再結合芍藥苷的含量變化，多指標優(yōu)化工藝參數[7-8]，有利于在批量生產中保持藥品質量的穩(wěn)定。（2）本試驗對樣品的處理方法進行了考察，比較了樣品回流提取、超聲提取的方法，證明兩種方法測定結果接近，而超聲處理方法相對簡便，故選用超聲提取的方式。但由于丹酚酸B含有多個酚羥基和酯鍵，對光和溫度都比較敏感，非常容易發(fā)生氧化和水解反應。因此，在制備和放置樣品的過程中應注意保持低溫和避光，且超聲時間不宜過長，以免因溶液過熱而發(fā)生降解。經試驗比較，超聲10 min即可。（3）關于檢測波長的選擇，筆者用丹酚酸B對照品在200～400 nm進行紫外掃描，發(fā)現其在286 nm波長處有最大吸收，響應值大、靈敏度高、便于檢測，故選擇286 nm為檢測波長。（4）關于流動相的選擇，筆者經查閱文獻，對不同的流動相如：甲醇-乙腈-冰醋酸-水（15∶15∶5∶65）、乙腈-水（10∶90）、乙腈-0.1%磷酸溶液（13∶87）、甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）以及本文采用的甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）等進行了比較，因為丹酚酸B為酸性化合物，在流動相中加入適量的酸可以改善峰形，避免發(fā)生拖尾現象，故本試驗采用甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）為流動相，可以達到很好的分離效果，且陰性試驗無干擾。（5）筆者增加制劑中丹酚酸B的含量測定方法，重復性好，能整體控制藥品的質量，保證療效。

[參考文獻]

[1]國家藥品監(jiān)督管理局. 國家藥品監(jiān)督管理局國家藥品標準地標升國標外科婦科分冊[S]. 2002：302-305.

[2]齊曉飛，張伏，張璐，等. HPLC法測定婦炎舒丸中芍藥苷的含量[J]. 實用藥物與臨床，2011，14（1）：43-44.

[3]劉立，楊伍. 婦炎舒片的質量標準研究[J]. 現代醫(yī)藥衛(wèi)生，2011，27（2）：202-203.

[4]國家藥典委員會編. 中華人民共和國藥典[S]. 一部. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：70-71.

[5]鄧松岳，王偉麗，張穎，等. HPLC法測定丹參益坤口服液中丹酚酸B的含量[J]. 河南中醫(yī)，2012，32（2）：235.

[6]丁寧，鄭云楓，程建明，等. RP-HPLC法分離丹參滴注液中的丹酚酸D及測定4種酚酸類的含量[J]. 中國藥房，2012，23（8）：744-746.

[7]黃愛萍. 多指標優(yōu)化姜黃連炮制工藝分析[J]. 中國當代醫(yī)藥，2011，18（16）：144-145.

[8]劉欣媛，李培鋒，關紅. 從牛膽汁中提取?；悄懰岬墓に囇芯縖J]. 中國當代醫(yī)藥，2011，18（15）：11-12.

（收稿日期：2012-04-17本文編輯：魏玉坡）