• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    墨蘭(Cymbiduim sinense)組培快繁技術體系研究

    2018-05-14 14:44許申平袁秀云王默霏崔波
    熱帶作物學報 2018年5期
    關鍵詞:組織培養(yǎng)分化

    許申平 袁秀云 王默霏 崔波

    摘 要 墨蘭種子無胚乳的結構特征使其自然萌發(fā)率極低,從而導致墨蘭種苗的繁殖速度不能滿足市場需求。本研究以成熟墨蘭種子誘導出的生長良好、性狀統(tǒng)一的根狀莖為材料,研究墨蘭根狀莖的增殖、綠芽分化及生根壯苗的情況。結果表明:MS培養(yǎng)基為最適合墨蘭根狀莖增殖的基本培養(yǎng)基,在該培養(yǎng)基中加入6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)1.0 mg/L與吲哚丁酸(IBA)0.1 mg/L時,根狀莖增殖的效果最好,增值系數(shù)達到10.33;在根狀莖分化階段,培養(yǎng)基中最佳的激素配比為6-BA 5.0 mg/L+萘乙酸(NAA)0.5 mg/L,分化系數(shù)達到6.43;生根壯苗階段,在不添加激素的生根培養(yǎng)基中,生根率達到100%。本研究建立了墨蘭組培快繁技術體系,可實現(xiàn)短時間內大量的種苗繁殖。

    關鍵詞 墨蘭;組織培養(yǎng);根狀莖;分化

    中圖分類號 S682.3 文獻標識碼 A

    Abstract The propagation of C. sinense is greatly restricted by the low seed germination rate due to immature embryo and no endosperm under natural conditions. In this study, the rhizomes of well grown and uniformity induced by seeds in C. sinense were used as the materials. The influence of different plant growth regulators on culture in vitro of C. sinense was studied. The results showed that the optimum basic medium for the multiplication and growth of the rhizomes was MS medium, and the best hormone combinations of multiplication was 6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L, with a multiplication rate of rhizomes up to 10.33. The optimum plant growth regulator combination for differentiation of rhizomes was 6-BA 5.0 mg/L+ NAA 0.5 mg/L, with a regeneration rate 6.43. All buds produced roots on basic medium with no plant hormone on MS medium. The present study established an efficient propagation system during industrial seedling production and provided a good theoretical and technological support for improving seedlings quality of C. sinense and its industrial production in a large scale.

    Key words Cymbidium sinensis; tissue culture; rhizome; differentiation

    doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2018.05.015

    墨蘭(Cymbiduim sinense)為蘭科(Orchidaceae)蘭屬(Cymbidium)多年生草本花卉,主要分布于中國臺灣、福建、云南、廣西和廣東等地區(qū)。因其葉形獨特,花色素雅,花香馥郁,素有“花中四君子”之一的美稱;深受人們的喜愛,具有很高的經(jīng)濟價值和觀賞價值。墨蘭和多數(shù)蘭科植物一樣,種子無胚乳,自然萌發(fā)率極低。傳統(tǒng)的墨蘭繁育多采用分株繁殖,但分株繁殖率不高,繁殖的時間較長,繁殖得到的植株還容易引起病毒,不能實現(xiàn)墨蘭大批量生產以滿足市場的需求。墨蘭種苗的繁殖速度慢是影響墨蘭產業(yè)興起的重要因素之一。

    隨著組織培養(yǎng)技術的發(fā)展,該技術已成為墨蘭進行大量繁殖的重要手段[2-3]。早在80年代,Hasegawa等[4]就報道了分別用種子和莖尖進行墨蘭的組織培養(yǎng)。隨后,國內外開展了一系列墨蘭組織培養(yǎng)的研究。外植體的選擇主要涉及根狀莖[5]、種子[6-7]、莖尖[7]、幼葉[8]和花芽[7]等。后續(xù)的研究多以根狀莖為外植體。在墨蘭組織培養(yǎng)的研究中,常見的培養(yǎng)基有1/2 MS、MS、花寶1號、花寶2號、ZW和KC[9],但對于最優(yōu)基本培養(yǎng)基目前并沒有統(tǒng)一的標準。鄭艷艷等[10]認為,在根狀莖的增殖試驗中,花寶1號和花寶2號混合使用時明顯好于MS培養(yǎng)基;而丁雪珍等[11]認為最適于墨蘭根狀莖增殖的基本培養(yǎng)基為1/2 MS。關于激素的使用,目前涉及較多的有6-BA、NAA、KT、IBA、TDZ等,但關于激素的最適劑量并不統(tǒng)一,如在墨蘭根狀莖增殖研究中,施福軍等[9]認為2.0 mg/L 6-BA和1.0 mg/L

    NAA較適宜墨蘭根狀莖增殖培養(yǎng);鄭艷艷等[12]認為添加2.0 mg/L 6-BA和0.2 mg/L NAA時根狀莖的增殖效果最佳;丁雪珍等[11]認為2.0 mg/L 6-BA和0.1 mg/L

    NAA組合對墨蘭的增殖效果最好;墨蘭的增殖系數(shù)基本在8左右。在墨蘭根狀莖分化綠芽的研究中,有研究認為6-BA 0.5~1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L的MS培養(yǎng)基中,誘導芽分化的效果最佳[13];傅雪琳等[14]認為綠芽分化最佳的激素配比為5.00 mg/L 6-BA+0.50 mg/L NAA;陳蘭芬等[15]認為墨蘭根狀莖分化的最適培養(yǎng)基為MS+0.1 mg/L KT+1.0 mg/L NAA。在墨蘭生根壯苗的研究中,魯雪華等[13]認為在附加0.2 mg/L NAA的MS培養(yǎng)基中,幼苗的生根效果最佳;項艷等[16]認為生根的最佳培養(yǎng)基為:1/2 MS+NAA 3.0 mg/L;黃顯進等[16]則認為MS+NAA 5.0 mg/L生根效果最好。

    綜上所述,雖然墨蘭的組織培養(yǎng)和快速繁殖已經(jīng)取得了較大的進展,但研究結果并不統(tǒng)一,大部分研究僅涉及墨蘭組織培養(yǎng)的其中一個階段,如根狀莖的增殖、根狀莖分化成苗究、試管苗快速生根試驗研究等;即使是關于墨蘭組織培養(yǎng)技術體系的研究,仍然存在一些問題,如在培養(yǎng)過程中繁殖系數(shù)偏低、生長緩慢、繼代周期長等[18]。為了提高墨蘭繁育的效率,本研究在前期研究的基礎上,通過對墨蘭根狀莖增殖、綠芽分化及生根壯苗進行系統(tǒng)研究,以期建立一套適合墨蘭種苗工廠化生產的組織培養(yǎng)技術體系,為墨蘭大規(guī)模快繁生產提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    在無菌條件下,將成熟的墨蘭種子播種于1/2 MS+椰汁20%+瓊脂7.5 g/L+蔗糖20 g/L+活性炭1 g/L培養(yǎng)基上,誘導萌發(fā)根狀莖。60 d后,以誘導的生長良好、性狀統(tǒng)一的根狀莖為試驗材料。椰汁為原產海南的新鮮椰子直接提取;瓊脂購于福建省石獅市閩南瓊膠有限公司;墨蘭種子由鄭州師范學院生物研究所提供。

    1.2 方法

    1.2.1 根狀莖增殖基本培養(yǎng)基的篩選 為了研究不同培養(yǎng)基對根狀莖增殖的影響,分別以MS、1/2 MS和花寶一號培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基,添加25 g/L蔗糖、7.5 g/L瓊脂和2 g/L活性炭進行試驗,以篩選出最適根狀莖增殖的基本培養(yǎng)基。將生長良好、性狀統(tǒng)一的根狀莖切取1 cm左右,接入MS、1/2 MS和花寶一號這3種基本培養(yǎng)基中。每瓶接種5根,6瓶為 1 個重復,設3 個重復,60 d后觀察其生長情況,并算出每種培養(yǎng)基的增殖系數(shù)。

    1.2.2 激素配比對根狀莖增殖培養(yǎng)的影響 以MS+25 g/L糖+7.5 g/L瓊脂+2 g/L活性炭為基本培養(yǎng)基,將種子誘導的根狀莖接種在附加6-BA和IBA的不同濃度配比的培養(yǎng)基上,6-BA的濃度分別是1.0、3.0、5.0 mg/L,IBA的濃度分別是0.1、0.3、0.5 mg/L,進行雙因素正交試驗,觀察根狀莖的增殖情況,以篩選最佳培養(yǎng)基。每瓶接種5根,每根

    1 cm左右,6瓶為 1個重復,設3個重復,每種濃度共接種30根根狀莖,2個月后統(tǒng)計分化根狀莖數(shù),并計算增殖系數(shù)。

    1.2.3 根狀莖的綠芽分化 為探究不同激素配比對墨蘭根狀莖綠芽分化的影響,以MS+25 g/L糖+7.5 g/L

    瓊脂為基本培養(yǎng)基,將誘導出的根狀莖接種到附加6-BA和NAA不同濃度配比的培養(yǎng)基上,6-BA的濃度分別是1.0、3.0、5.0 、7.0 mg/L,NAA的濃度分別是0.1、0.3、0.5 、0.7 mg/L,進行雙因素正交試驗。每瓶接種根狀莖5個,長度1 cm左右,每個濃度6瓶,設3個重復。60 d后根據(jù)根狀莖芽的分化情況統(tǒng)計出芽總數(shù),觀察綠苗的長勢,并計算平均每個根狀莖的分化系數(shù)。

    1.2.4 生根壯苗 為探究墨蘭根狀莖分化綠芽的最適培養(yǎng)基,將根狀莖誘導出的綠芽接種到附加不同激素配比的培養(yǎng)基上,以MS+25 g/L蔗糖+7.5 g/L瓊脂+2 g/L活性炭為基本培養(yǎng)基,其中6-BA的濃度分別是0、0.1、0.3 mg/L,NAA的濃度分別是0、0.3、0.5 mg/L,進行雙因素正交試驗。每瓶接種5個根狀莖分化的綠芽,每個濃度接種6瓶,設3個重復。

    60 d后觀察綠芽的生長和生根情況,統(tǒng)計生根總數(shù),并計算出每個芽生根數(shù)及生根率。

    1.2.5 培養(yǎng)條件 試驗中組織培養(yǎng)室的培養(yǎng)溫度為(25±2)℃,光照強度為1 500~2 500 lx,每天12~14 h。所有培養(yǎng)基的pH值介于5.8~6.2之間。

    1.3 統(tǒng)計分析

    數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析以Excel 2010和SPSS 22.0軟件進行,平均數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標準誤(S.E.)表示,多重比較采用鄧肯氏新復極差檢驗法(Duncans multiple ranger test)。統(tǒng)計數(shù)據(jù)指標包括:根狀莖增值系數(shù)=新增根狀莖數(shù)/接種根狀莖數(shù);根狀莖分化系數(shù)=分化芽總數(shù)/接種根狀莖數(shù);綠芽生根數(shù)=生根總數(shù)/接種芽數(shù),綠芽生根率=(生根芽數(shù)/接種芽數(shù))×100%。

    2 結果與分析

    2.1 根狀莖增殖基本培養(yǎng)基的篩選

    由表1可知,由于未添加激素,墨蘭根狀莖在MS、1/2 MS和花寶1號3種培養(yǎng)基中的增殖系數(shù)均比較低。其中,MS培養(yǎng)基中的根狀莖粗壯,且每個根狀莖的分枝最多,增殖系數(shù)為3.50;花寶1號培養(yǎng)基中的根狀莖生長狀態(tài)較好,每個根狀莖增殖的數(shù)量較多,增殖系數(shù)為3.16,但不及MS培養(yǎng)基中的根狀莖數(shù);接入1/2 MS培養(yǎng)基中的根狀莖生長情況最差,增殖系數(shù)僅為2.02,最不適合根狀莖的生長??梢姼鶢钋o最適合在MS中生長,因此,在后續(xù)的研究中均以MS為基本培養(yǎng)基。

    2.2 不同濃度配比的6-BA與IBA對根狀莖增殖培養(yǎng)的影響

    經(jīng)過2個月培養(yǎng)后,根狀莖分化培養(yǎng)的結果統(tǒng)計如表2所示。試驗1組6-BA 1 mg/L+IBA 0.1 mg/L的激素配比對根狀莖的增殖效果最顯著,根狀莖嫩綠、粗壯、生長較迅速且增殖的根狀莖數(shù)量較多,增殖系數(shù)可達12.33(圖1-A);試驗2組6-BA 1 mg/L+IBA 0.1 mg/L的激素配比對根狀莖的增殖效果也較好,雖然增殖系數(shù)低于第1組,但增殖系數(shù)可達10.53;其它激素組合的根狀莖生長速度比較緩慢,長勢不好,比較細弱,且增殖數(shù)量較少。本試驗結果顯示,當6-BA的濃度增加時,根狀莖的增殖效果不好,而低濃度時根狀莖的分化率較高,可能是高濃度的6-BA對根狀莖的增殖有一定的抑制作用。

    2.3 不同培養(yǎng)基對根狀莖芽分化的影響

    由表3可知,將根狀莖接入分化芽培養(yǎng)基培養(yǎng)2個月后,試驗11組的出芽總數(shù)最高,30個根狀莖共分化出193個綠芽,分化系數(shù)達到6.43;試驗10組和12組對根狀莖的分化也有顯著的促進作用,分化系數(shù)分別達5.33和5.20;當6-BA的濃度高于或低于5 mg/L時,根狀莖的分化系數(shù)均出現(xiàn)下降的趨勢,這說明6-BA對促進墨蘭根狀莖芽的分化具有一定的濃度范圍,高于或低于這個范圍均不利于根狀莖芽的分化。因此,在基本培養(yǎng)基中添加6-BA 5 mg/L與NAA 0.5 mg/L時,根狀莖的綠芽分化效果最好,且分化的芽飽滿色綠(圖1-B)。

    2.4 生根壯苗

    將墨蘭根狀莖分化的綠芽接種到不同激素配比的培養(yǎng)基中,2個月后各處理的綠芽生根情況如表4所示。在不添加任何激素的MS+25 g/L糖+7.5 g/L瓊脂+2 g/L活性炭的基本培養(yǎng)基中,墨蘭的生根效果最好,每個綠芽平均生根8條,生根率達到100%,而且綠芽生長健壯(圖1-C)。隨著NAA濃度的增加,綠芽生根率降低,每個芽的平均根數(shù)也有所降低,當NAA的含量增加到0.5時,生根率為85%。但6-BA的附加顯著降低了綠芽的生根率,這說明在墨蘭綠芽生根壯苗的過程中隨著植物激素的增加幼苗生根率逐漸降低,因此,在墨蘭生根壯苗的培養(yǎng)基中不適宜添加6-BA和NAA。

    3 討論

    墨蘭的組織培養(yǎng)是其進行大量繁殖的重要手段,一般包括根狀莖的誘導、增殖、分化和生根壯苗四大步驟[19]。墨蘭的根狀莖誘導率高,既能方便保存又能快速地分化出芽和根,在墨蘭快繁體系中非常重要。目前,在大部分的墨蘭快繁研究中,均以根狀莖為試驗材料[9-10, 14],本研究也以種子誘導的根狀莖為外植體,開展一系列的研究。不同基本培養(yǎng)基對墨蘭根狀莖增殖分化效果不同,以MS較適宜,這與以往的研究認為墨蘭需要無機鹽較高的培養(yǎng)基一致[20-21]。影響根狀莖增殖速度和芽分化率的因素較多,其中較為重要的有基本培養(yǎng)基類型、植物生長調節(jié)劑的種類及其使用濃度和培養(yǎng)條件。

    大多數(shù)植物激素在調控植物生長發(fā)育過程中的作用比較復雜,同一種激素可調控多個發(fā)育過程,而同一個特定的發(fā)育過程需要多種不同激素的協(xié)同作用[22]。6-BA能誘導不定芽的產生,促進側芽生長和細胞分裂;IBA能促進細胞分裂與細胞再生,誘導形成不定根[2]。在本研究中,以6-BA 1 mg/L+IBA 0.1 mg/L激素配比誘導的根狀莖伸長生長速度遠大于增粗生長,且產生多個細小分枝,在提高墨蘭根狀莖分化率的同時有利于延緩高代繁殖根狀莖的老化,同時該激素配比使墨蘭根狀莖的增殖系數(shù)可達12.33,遠超過前人研究所得(8.3[11]、7.4[9]和5.9[23]等)。與前人的研究不同,本研究將IBA應用于墨蘭根狀莖的增殖,并取得了較好的增殖效果。在線藝春蘭的研究中發(fā)現(xiàn)0~3.0 mg/L范圍內,IBA促進根狀莖的生長較NAA效果好[23],但對這一影響機理還有待于進一步研究。

    在墨蘭根狀莖綠芽分化的研究中,較低的分化率增加了墨蘭組織培養(yǎng)的難度,大量研究結果表明,墨蘭根狀莖綠芽分化階段需要較高的細胞分裂素濃度和較低的生長素濃度,且二者比例合適,才能由脫分化階段轉入分化階段,進行綠芽再生[18]。本研究利用6-BA 5 mg/L與NAA 0.5 mg/L的激素配比,使墨蘭根狀莖綠芽分化系數(shù)達到6.43。這一結果進一步證實了高濃度的6-BA和低濃度的生長素有利于不定芽分化的結論。雖然這一激素配比與傅雪琳等[14]的研究一致,但其分化率僅為180%,導致這一結果的主要原因可能是墨蘭根狀莖增殖階段應用的外源激素不同,使得根狀莖內源激素積累的不平衡,影響了綠芽的分化階段。在墨蘭生根壯苗的研究中,以添加NAA的報道居多,但添加劑量各不相同,從0.2~5 mg/L[13, 16-17]都有報道,在本研究中,以基本培養(yǎng)基不添加任何激素最佳,生根率達到100%,這可能與蘭花葉根同生的特性相關。

    總之,關于墨蘭的許多研究結果接近但又不一致,其一可能與墨蘭不同品種、不同外植體部位對培養(yǎng)基組分和培養(yǎng)條件的要求不同;其二可能與墨蘭組織培養(yǎng)的階段性有關,目前大部分的研究,僅選擇根狀莖的誘導、增殖、分化和生根壯苗的其中一個階段進行研究,但不同階段激素的用量會通過在植物體內的積累影響下一階段的結果,而對于墨蘭系統(tǒng)性研究的報道并不多見。因此,本研究通過對墨蘭組織培養(yǎng)系統(tǒng)的研究,結果發(fā)現(xiàn)MS培養(yǎng)基為最適墨蘭根狀莖增殖的基本培養(yǎng)基,在該培養(yǎng)基中加入6-BA 1.0 mg/L與IBA 0.1 mg/L時根狀莖增殖的效果最好;在根狀莖分化階段,培養(yǎng)基中最佳的激素配比為6-BA 5.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L;生根壯苗階段,在不添加激素的基本培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)生根率可達100%。

    參考文獻

    [1] 劉仲健,陳心啟,茹正忠. 中國蘭屬植物[M]. 北京:科學出版社,2006:360.

    [2] 張小娟,陳秀萍,李云霞,等. 墨蘭種子無菌萌發(fā)及根狀莖誘導分化研究[J]. 中國園藝文摘,2017,33(10):12-16.

    [3] 左利娟,湯久楊,李志強. 墨蘭雜交及F1代離體培養(yǎng)研究[J]. 北京農業(yè)職業(yè)學院學報,2017,31(3):22-25.

    [4] Hasegawa A,Ohashi H,Goi M. Effects of BA,rhizome length,mechanical treatment and liquid sharking culture on the shoot formation from rhizome in Cymbidium faberi Rolfe[J]. Acta Hortic,1985(166):25-40.

    [5] 翁錦周,林加耕,林江波. 不同濃度活性炭對墨蘭離體培養(yǎng)的影響[J]. 亞熱帶植物科學,2006,35(3):37-38.

    [6] 彭曉明,曾宋君,張京麗,等. 三種墨蘭的瓶播培養(yǎng)(簡報)[J]. 熱帶亞熱帶植物學報,2000,8(1):60-62.

    [7] 張志勝,歐秀娟. 墨蘭的組織培養(yǎng)[J]. 園藝學報,1995,23(3):303-304.

    [8] 曾宋君,程式君,張京麗,等. 墨蘭及其雜種的組織培養(yǎng)與快速繁殖[J]. 廣西植物,1998(2):58-61.

    [9] 施福軍,莫昭展,韋江萍,等. 墨蘭的無菌播種及根狀莖的增殖研究[J]. 安徽農業(yè)科學,2008,36(32):13 968-13 969.

    [10] 鄭艷艷,樸炫春,李 嬿,等. 幾種因素對墨蘭根狀莖增殖生長的影響[J]. 延邊大學農學學報,2010,32(4):254-256.

    [11] 丁雪珍,韓 磊,張文靜. 墨蘭增殖培養(yǎng)基的篩選研究[J]. 北方園藝,2009(8):208-209.

    [12] 鄭艷艷. 墨蘭組培體系的優(yōu)化及根狀莖在生物反應器培養(yǎng)的研究[D]. 延吉:延邊大學,2011.

    [13] 魯雪華,郭文杰,林 勇. 墨蘭的無菌播種和植株再生[J]. 亞熱帶植物科學,1999,28(1):34-37.

    [14] 傅雪琳,張志勝,何 平,等. 墨蘭根狀莖綠芽分化的研究[J]. 華南農業(yè)大學學報,2000,21(3):53-55.

    [15] 陳蘭芬,王 晶,田亦平,等. 墨蘭組織培養(yǎng)根狀莖分化技術研究[J]. 河北林果研究,2011,26(1):22-24.

    [16] 項 艷,於鳳安,彭鎮(zhèn)華. 墨蘭離體快繁研究[J]. 林業(yè)科學研究,2003,16(4):434-438.

    [17] 黃顯進. 白墨蘭試管苗快速生根試驗研究[J]. 現(xiàn)代農業(yè)科技,2010(5):175-177.

    [18] 程芬芳,陳新榮,陳瑩瑩,等. 墨蘭的組織培養(yǎng)研究進展[J]. 黑龍江農業(yè)科學,2015(3):155-159.

    [19] 于永暢,牛 田,孫 芳,等. 國蘭組織培養(yǎng)研究進展[J]. 山東林業(yè)科技,2012,42(4):100-103.

    [20] 陳麗,潘瑞熾,陳汝民. 墨蘭原球莖生長的研究[J]. 熱帶亞熱帶植物學報,1999(1):59-64.

    [21] 朱根發(fā),葉秀斌,陳明莉,等. 培養(yǎng)基不同成分對墨蘭根狀莖分化成苗的影響[J]. 中南林學院學報,2003,23(5):42-44,58.

    [22] 熊國勝,李家洋,王永紅. 植物激素調控研究進展[J]. 科學通報,2009,54(18):2 718-2 733.

    [23] 鄭艷艷,樸炫春,高 日,等. 墨蘭根狀莖增殖及生物反應器培養(yǎng)的可行性研究[J]. 安徽農業(yè)科學,2011,39(28):17 225-17 227.

    [24] 石樂娟,張放,張士良,等. 植物生長調節(jié)劑對線藝春蘭根狀莖的增殖與分化的影響[J]. 園藝學報,2006,33(4):887-890.

    猜你喜歡
    組織培養(yǎng)分化
    兩次中美貨幣政策分化的比較及啟示
    紅花木蓮組織培養(yǎng)外植體消毒方法初步研究
    文心蘭切花無病毒種苗組培快繁生產技術
    東方百合“甜夢”花器官組織培養(yǎng)再生植株研究
    IPS細胞定向分化為造血干細胞關鍵技術的研究進展
    天然植物激素對鐵皮石斛組培苗誘導芽分化的影響
    論國際貿易格局分化與國際貿易秩序演變
    《詩經(jīng)·大車》正音與談部中古分化探
    精品午夜福利视频在线观看一区| 色哟哟哟哟哟哟| 无遮挡黄片免费观看| 一二三四社区在线视频社区8| 啪啪无遮挡十八禁网站| 精品日产1卡2卡| 国产亚洲精品av在线| 欧美三级亚洲精品| 国产精品一区二区三区四区久久| 99久久无色码亚洲精品果冻| 免费看日本二区| 看黄色毛片网站| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲成人免费电影在线观看| 欧美日韩精品网址| 女同久久另类99精品国产91| 午夜日韩欧美国产| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国产真人三级小视频在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 麻豆成人午夜福利视频| 国内精品久久久久精免费| 中文亚洲av片在线观看爽| av欧美777| 免费观看人在逋| 在线观看免费午夜福利视频| 99国产精品99久久久久| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产三级黄色录像| 免费在线观看成人毛片| 香蕉久久夜色| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲中文av在线| 麻豆成人午夜福利视频| 国产成人精品久久二区二区免费| av天堂在线播放| 国产三级黄色录像| 色视频www国产| 国产成人精品久久二区二区免费| 午夜影院日韩av| or卡值多少钱| xxxwww97欧美| 国产精品99久久久久久久久| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 露出奶头的视频| 成人性生交大片免费视频hd| 成人一区二区视频在线观看| 久久精品人妻少妇| 黄色视频,在线免费观看| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 脱女人内裤的视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产一区二区激情短视频| 精品欧美国产一区二区三| 久久久久精品国产欧美久久久| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 午夜福利18| 天天添夜夜摸| 中出人妻视频一区二区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 最新中文字幕久久久久 | 99精品久久久久人妻精品| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲 国产 在线| 久久精品综合一区二区三区| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 一进一出抽搐gif免费好疼| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 99在线视频只有这里精品首页| 精品国内亚洲2022精品成人| 我的老师免费观看完整版| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲欧美日韩高清专用| 91在线观看av| 一a级毛片在线观看| 欧美zozozo另类| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 小说图片视频综合网站| 长腿黑丝高跟| 欧美日韩一级在线毛片| 搡老熟女国产l中国老女人| 最好的美女福利视频网| 色播亚洲综合网| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 少妇熟女aⅴ在线视频| 搡老岳熟女国产| 51午夜福利影视在线观看| 99久久综合精品五月天人人| 国产视频一区二区在线看| 他把我摸到了高潮在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 超碰成人久久| 久久亚洲精品不卡| 久久久色成人| 欧美日韩国产亚洲二区| 在线视频色国产色| 中亚洲国语对白在线视频| 午夜久久久久精精品| 日本黄色视频三级网站网址| 欧美黑人欧美精品刺激| aaaaa片日本免费| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 中亚洲国语对白在线视频| 日韩欧美国产在线观看| 又粗又爽又猛毛片免费看| 露出奶头的视频| 性欧美人与动物交配| www日本在线高清视频| 在线观看一区二区三区| 欧美乱妇无乱码| 99久久精品一区二区三区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 免费看a级黄色片| 久久精品综合一区二区三区| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 久久久久久久久久黄片| 无人区码免费观看不卡| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产免费av片在线观看野外av| 丝袜人妻中文字幕| 亚洲成av人片在线播放无| 成人三级黄色视频| a在线观看视频网站| 亚洲在线观看片| ponron亚洲| 中文字幕熟女人妻在线| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲国产高清在线一区二区三| 日本精品一区二区三区蜜桃| 欧美黄色淫秽网站| 日本黄色视频三级网站网址| 免费看美女性在线毛片视频| 无人区码免费观看不卡| 天堂影院成人在线观看| 欧美乱色亚洲激情| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 青草久久国产| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 18美女黄网站色大片免费观看| 久久久精品大字幕| 欧美又色又爽又黄视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产精品亚洲av一区麻豆| 成年版毛片免费区| 久久久久久大精品| 国产久久久一区二区三区| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 久久久久久久久中文| 日本与韩国留学比较| а√天堂www在线а√下载| 黄色丝袜av网址大全| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲国产精品成人综合色| 一本精品99久久精品77| 国产野战对白在线观看| 免费观看的影片在线观看| 波多野结衣巨乳人妻| 五月伊人婷婷丁香| 成人性生交大片免费视频hd| 国产精品98久久久久久宅男小说| 成人特级av手机在线观看| 精品久久蜜臀av无| ponron亚洲| 性色av乱码一区二区三区2| av黄色大香蕉| 日本与韩国留学比较| 嫩草影院入口| 中文字幕高清在线视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| tocl精华| 岛国在线观看网站| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 两人在一起打扑克的视频| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产成人福利小说| 国产成人欧美在线观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 90打野战视频偷拍视频| 国产高清三级在线| 亚洲国产精品sss在线观看| 十八禁人妻一区二区| 日韩欧美在线乱码| 美女黄网站色视频| 亚洲av电影不卡..在线观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 日本a在线网址| 国产在线精品亚洲第一网站| 在线观看一区二区三区| 很黄的视频免费| 曰老女人黄片| 成在线人永久免费视频| 精品久久久久久久久久久久久| 老熟妇仑乱视频hdxx| 两个人视频免费观看高清| 久久午夜综合久久蜜桃| av国产免费在线观看| 午夜精品在线福利| 激情在线观看视频在线高清| 中文字幕熟女人妻在线| 日韩大尺度精品在线看网址| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲成av人片在线播放无| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 香蕉国产在线看| 日韩欧美国产在线观看| 特级一级黄色大片| 色哟哟哟哟哟哟| 婷婷六月久久综合丁香| 欧美一区二区国产精品久久精品| 亚洲国产色片| 精品福利观看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 校园春色视频在线观看| 大型黄色视频在线免费观看| 国产成人影院久久av| 日韩欧美在线乱码| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产单亲对白刺激| 此物有八面人人有两片| 久久九九热精品免费| 一本综合久久免费| 欧美一区二区国产精品久久精品| 最新美女视频免费是黄的| 村上凉子中文字幕在线| 欧美色视频一区免费| 国产精品国产高清国产av| 十八禁网站免费在线| 欧美中文日本在线观看视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 黄色成人免费大全| 国产精品女同一区二区软件 | 欧美午夜高清在线| 最新在线观看一区二区三区| 日韩欧美 国产精品| 国产高清有码在线观看视频| 国产成人精品久久二区二区免费| 宅男免费午夜| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 波多野结衣高清无吗| 精品久久久久久久末码| 国产免费男女视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 一区二区三区高清视频在线| www.www免费av| 国产午夜精品论理片| 国产高清视频在线观看网站| 日本三级黄在线观看| 波多野结衣高清无吗| 桃红色精品国产亚洲av| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 一二三四社区在线视频社区8| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 两个人的视频大全免费| 久久久久国内视频| 亚洲av五月六月丁香网| 制服丝袜大香蕉在线| 精品国产乱子伦一区二区三区| av国产免费在线观看| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲精品在线美女| 色精品久久人妻99蜜桃| 特级一级黄色大片| av在线天堂中文字幕| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产美女午夜福利| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 18禁美女被吸乳视频| 一级毛片女人18水好多| 国产欧美日韩一区二区三| 国产69精品久久久久777片 | 精品久久蜜臀av无| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 一级作爱视频免费观看| 动漫黄色视频在线观看| 欧美黑人巨大hd| 9191精品国产免费久久| 变态另类丝袜制服| 黑人欧美特级aaaaaa片| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 亚洲欧美激情综合另类| 97碰自拍视频| 99精品久久久久人妻精品| 手机成人av网站| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 淫妇啪啪啪对白视频| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产淫片久久久久久久久 | 欧美黄色淫秽网站| 亚洲精品在线观看二区| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 精品一区二区三区视频在线观看免费| cao死你这个sao货| 日韩国内少妇激情av| 亚洲av电影在线进入| 午夜久久久久精精品| 成人三级黄色视频| 欧美黄色淫秽网站| 久久久国产欧美日韩av| 欧美色欧美亚洲另类二区| 日韩欧美 国产精品| 国模一区二区三区四区视频 | www.www免费av| 少妇熟女aⅴ在线视频| 久久久久久大精品| 人人妻人人看人人澡| 香蕉av资源在线| e午夜精品久久久久久久| 中文亚洲av片在线观看爽| 色播亚洲综合网| 搡老熟女国产l中国老女人| 久久久久久久久久黄片| 亚洲国产中文字幕在线视频| 日本与韩国留学比较| 国产麻豆成人av免费视频| 国产精品99久久99久久久不卡| 色综合亚洲欧美另类图片| 最近在线观看免费完整版| 桃红色精品国产亚洲av| 精品欧美国产一区二区三| 免费一级毛片在线播放高清视频| 又黄又爽又免费观看的视频| 午夜福利欧美成人| 日韩欧美精品v在线| 亚洲片人在线观看| 男人和女人高潮做爰伦理| 日韩大尺度精品在线看网址| 国产极品精品免费视频能看的| 一区福利在线观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲人与动物交配视频| 看片在线看免费视频| 人人妻人人澡欧美一区二区| 极品教师在线免费播放| 99热这里只有精品一区 | 亚洲精品在线观看二区| 岛国在线免费视频观看| 欧美丝袜亚洲另类 | 日韩成人在线观看一区二区三区| 欧美zozozo另类| 久久久精品大字幕| 2021天堂中文幕一二区在线观| 51午夜福利影视在线观看| 成人三级做爰电影| 国产精品亚洲一级av第二区| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲成a人片在线一区二区| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产欧美日韩一区二区三| 操出白浆在线播放| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 久久天堂一区二区三区四区| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产成+人综合+亚洲专区| 在线永久观看黄色视频| 一级作爱视频免费观看| 不卡av一区二区三区| 天堂动漫精品| 亚洲国产中文字幕在线视频| 午夜视频精品福利| 亚洲国产精品成人综合色| 日日夜夜操网爽| www日本黄色视频网| 麻豆国产av国片精品| 欧美高清成人免费视频www| 在线永久观看黄色视频| x7x7x7水蜜桃| 亚洲色图av天堂| 免费高清视频大片| 国产视频内射| 亚洲专区国产一区二区| 欧美一区二区国产精品久久精品| 校园春色视频在线观看| 悠悠久久av| 亚洲黑人精品在线| 一级毛片高清免费大全| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 99热6这里只有精品| 99视频精品全部免费 在线 | 无限看片的www在线观看| 亚洲激情在线av| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 黄色日韩在线| 麻豆国产97在线/欧美| 亚洲精品456在线播放app | 久久99热这里只有精品18| 欧美日韩一级在线毛片| 欧美不卡视频在线免费观看| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 99热这里只有精品一区 | 午夜亚洲福利在线播放| 欧美最黄视频在线播放免费| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产精华一区二区三区| 国产免费男女视频| 欧美成人性av电影在线观看| 欧美最黄视频在线播放免费| 久久久久久九九精品二区国产| 午夜福利免费观看在线| www.精华液| 全区人妻精品视频| 制服丝袜大香蕉在线| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲 国产 在线| 欧美zozozo另类| 精品久久久久久久久久免费视频| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 午夜亚洲福利在线播放| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产精品综合久久久久久久免费| 免费看美女性在线毛片视频| 精品久久久久久成人av| 国产极品精品免费视频能看的| 我要搜黄色片| 色尼玛亚洲综合影院| 久久欧美精品欧美久久欧美| 男女视频在线观看网站免费| 久久国产精品人妻蜜桃| 欧美日韩黄片免| 日日干狠狠操夜夜爽| 99国产精品一区二区三区| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| xxx96com| 黄片小视频在线播放| 制服人妻中文乱码| 色综合亚洲欧美另类图片| 日本在线视频免费播放| 国产精品av视频在线免费观看| 午夜成年电影在线免费观看| 成人特级av手机在线观看| 国产探花在线观看一区二区| 欧美性猛交黑人性爽| 中文字幕高清在线视频| 观看美女的网站| 一个人看视频在线观看www免费 | 久久久久性生活片| www日本黄色视频网| 91麻豆av在线| 美女午夜性视频免费| 国产精品久久电影中文字幕| 国产精品,欧美在线| 久久人妻av系列| 天堂√8在线中文| 国产精品野战在线观看| 99国产综合亚洲精品| 国产伦在线观看视频一区| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲最大成人中文| 最近最新免费中文字幕在线| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产淫片久久久久久久久 | 黑人欧美特级aaaaaa片| 哪里可以看免费的av片| 国产1区2区3区精品| 99在线人妻在线中文字幕| 久久久久久久久中文| 99国产综合亚洲精品| 99国产精品一区二区三区| 最近最新中文字幕大全免费视频| 国产精品99久久99久久久不卡| 高清毛片免费观看视频网站| 免费在线观看影片大全网站| 无人区码免费观看不卡| 日韩成人在线观看一区二区三区| 级片在线观看| 五月伊人婷婷丁香| 99久久精品国产亚洲精品| 欧美日韩精品网址| 精品国产亚洲在线| 国产精品精品国产色婷婷| 人妻久久中文字幕网| 1000部很黄的大片| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 香蕉久久夜色| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产高清videossex| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 午夜精品在线福利| 国产人伦9x9x在线观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产精品精品国产色婷婷| 麻豆一二三区av精品| 九九热线精品视视频播放| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲美女视频黄频| 亚洲欧美精品综合久久99| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 舔av片在线| 一本精品99久久精品77| 精品人妻1区二区| 亚洲欧美日韩高清专用| 变态另类成人亚洲欧美熟女| av在线天堂中文字幕| 高清在线国产一区| 久久久国产欧美日韩av| 欧美日韩福利视频一区二区| 精品不卡国产一区二区三区| 90打野战视频偷拍视频| 九色国产91popny在线| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 精品无人区乱码1区二区| 不卡一级毛片| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产精品国产高清国产av| 亚洲熟妇熟女久久| 欧美国产日韩亚洲一区| 一级a爱片免费观看的视频| 99久国产av精品| 国产精品久久久av美女十八| 桃色一区二区三区在线观看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 熟女人妻精品中文字幕| 久久国产精品影院| 日韩av在线大香蕉| 中文资源天堂在线| 午夜福利免费观看在线| 亚洲在线观看片| 免费电影在线观看免费观看| 成人亚洲精品av一区二区| 日韩欧美精品v在线| 国产真实乱freesex| 全区人妻精品视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 麻豆一二三区av精品| 99热只有精品国产| 成人18禁在线播放| 99re在线观看精品视频| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产高潮美女av| 麻豆av在线久日| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产综合懂色| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 女人被狂操c到高潮| 日本五十路高清| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 欧美一区二区精品小视频在线| 三级毛片av免费| 美女午夜性视频免费| 国内精品久久久久精免费| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 99视频精品全部免费 在线 | 国产 一区 欧美 日韩| 国产精品久久久人人做人人爽| 99久国产av精品| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产综合懂色| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 激情在线观看视频在线高清| 99精品久久久久人妻精品| 国产一区在线观看成人免费| 国产精品一区二区免费欧美| 免费观看人在逋| 成年女人看的毛片在线观看| 很黄的视频免费| 国产精品av视频在线免费观看| 可以在线观看毛片的网站| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产午夜福利久久久久久| 欧美一级a爱片免费观看看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 手机成人av网站| 亚洲成人久久爱视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产探花在线观看一区二区| 一夜夜www| 久久久久久人人人人人| 精品日产1卡2卡| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 曰老女人黄片| 黄色片一级片一级黄色片| 国产精品av视频在线免费观看| 日韩欧美在线乱码| 丝袜人妻中文字幕| 99国产极品粉嫩在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 叶爱在线成人免费视频播放| 午夜两性在线视频| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲熟妇熟女久久| 欧美精品啪啪一区二区三区| 午夜精品在线福利| 日本 av在线| 国产精品野战在线观看| 亚洲精华国产精华精| 亚洲乱码一区二区免费版| 最近最新中文字幕大全电影3| 我要搜黄色片| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲avbb在线观看| 久久久久久久久久黄片| 色老头精品视频在线观看| 国产欧美日韩一区二区精品| 无遮挡黄片免费观看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 母亲3免费完整高清在线观看| 日本免费一区二区三区高清不卡| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 久久久国产成人精品二区| 麻豆国产97在线/欧美| av天堂中文字幕网| 在线看三级毛片| АⅤ资源中文在线天堂|