紫外分光光度法在保健食品檢測(cè)中的應(yīng)用研究與分析

朱穎異

摘 要：為了建立能簡(jiǎn)易、準(zhǔn)確測(cè)定保健食品中總黃酮、總皂苷、總蒽醌含量的方法，筆者對(duì)紫外分光光度法的應(yīng)用進(jìn)行了研究分析，分別采用紫外分光光度法、香草醛-高氯酸分光光度法、酸解處理后分光光度法對(duì)保健食品樣品中的總黃酮、總皂苷、總蒽醌的含量進(jìn)行了測(cè)定，發(fā)現(xiàn)應(yīng)用紫外分光光度法檢測(cè)保健食品具有簡(jiǎn)易且重現(xiàn)性好的優(yōu)點(diǎn)。

關(guān)鍵詞：紫外分光光度法 保健食品 黃酮 皂苷 蒽醌

1.紫外分光光度法概述

紫外分光光度法是一種用于定性、定量、結(jié)構(gòu)分析的方法，方法原理是不同物質(zhì)分子對(duì)波長(zhǎng)在200至760納米范圍內(nèi)電磁波的吸收特性不同。該方法具有操作方便、成本低、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高的優(yōu)點(diǎn)，目前保健食品檢測(cè)中普遍應(yīng)用紫外分光光度法進(jìn)行檢測(cè)。紫外分光光度法在保健食品檢測(cè)中的應(yīng)用主要是檢測(cè)有效成分含量，如總黃酮、總皂苷、總蒽醌等。黃酮類(lèi)化合物是自然界中廣泛存在的一類(lèi)化合物，大多數(shù)的黃酮類(lèi)化合物都具有顏色，該類(lèi)化合物具有抗氧化、抗突變、抗腫瘤等多項(xiàng)功能，基于此，其被做成藥品、保健品，是藥品、保健品中的重要有效成分。保健食品中總黃酮含量測(cè)定的方法主要有硝酸鋁顯色法、紫外分光光度法，前者的專(zhuān)屬性不強(qiáng)，為此結(jié)果可靠性不足，用紫外分光光度法檢測(cè)則具有較高的準(zhǔn)確性。得到廣泛應(yīng)用的總皂苷的含量測(cè)定方法是香草醛-高氯酸法，同時(shí)，顯色法在總皂苷的含量測(cè)定中也得到了一定的應(yīng)用，顯色法的原理是皂苷中的糖基會(huì)與蒽醌顯藍(lán)綠色。顯色法和香草醛-高氯酸法在皂苷含量測(cè)定中都具有良好的重現(xiàn)性和較高的準(zhǔn)確性。蒽醌類(lèi)化合物的含量測(cè)定方法如下：甲醇提取，酸解氧化，醋酸鎂或混合堿顯色。

2.檢測(cè)材料與方法

用紫外分光光度法檢測(cè)總黃酮、總皂苷、總蒽醌在樣品中的含量所用的材料如下：儀器方面是UV-1800紫外分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、電子天平;試劑方面，蘆丁、人參皂苷、蒽醌的標(biāo)準(zhǔn)品，分析純的乙醇、甲醇、苯、香草醛、冰乙酸、高氯酸、醋酸鎂、鹽酸等。試驗(yàn)方法主要包括配置標(biāo)準(zhǔn)品溶液、制備樣品檢測(cè)液、制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，表1概括了上述幾種液體制備所用的試劑。

標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配置過(guò)程如下：精密稱取一定量的蘆丁、人參皂苷、1，8-二羥基蒽醌，分別溶解在甲醇中制備成濃度為一毫升五十微克的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液和濃度為一毫升一百微克的人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液，以及濃度為一毫升一百微克的蒽醌標(biāo)準(zhǔn)品溶液。樣品測(cè)試液的制備過(guò)程如下：總黃酮測(cè)試液，準(zhǔn)確稱取定量樣品溶于95%乙醇，搖勻后超聲提取、靜置，取一毫升上清液于十毫升的層析柱中在六十?dāng)z氏度的烘箱中揮發(fā)干乙醇，用20毫升苯洗后用甲醇洗脫，洗脫液定容至二十五毫升，而后在360納米出測(cè)定吸光度;總皂苷測(cè)試液，準(zhǔn)確稱取定量樣品溶于水中，超聲提取，定容，搖勻，靜置，在十毫升的注射器中裝脫脂棉、大孔樹(shù)脂以作為層析管，取上清液于層析管中，用二十五毫升水洗，再用二十五毫升70%乙醇洗脫，洗脫液在蒸發(fā)皿中先六十度水浴揮干乙醇，而后用5%香草醛冰乙酸溶解，再加高氯酸，而后六十度水浴加熱十分鐘，冷卻后加入冰乙酸，在560納米處測(cè)吸光度;總蒽醌測(cè)試液，稱取定量樣品加甲醇溶解，水浴回流兩小時(shí)后冷卻過(guò)濾，濾液先蒸干而后用水溶解，加過(guò)氧化氫和鹽酸，沸水浴回流半小時(shí)，冷卻，轉(zhuǎn)移至分液漏斗用乙醚萃取，乙醚液合并水洗，揮干，用醋酸鎂甲醇溶解，510納米處測(cè)吸光度。標(biāo)準(zhǔn)品溶液和測(cè)試液制備好后，利用標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備總黃酮、總皂苷、總蒽醌的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到不同濃度總黃酮的甲醇溶液在360納米處的吸光度曲線，不同濃度總皂苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液在560納米處的吸光度曲線，以及不同濃度總蒽醌標(biāo)準(zhǔn)品溶液在510納米處的吸光度曲線。

3.檢測(cè)結(jié)果

當(dāng)總黃酮、總皂苷、總蒽醌的標(biāo)準(zhǔn)曲線得到后，則可得出這三者的工作曲線，確定三者標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度與吸光度之間的線性回歸方程，從而根據(jù)樣品的吸光度值確定樣品中黃酮、皂苷、蒽醌的質(zhì)量濃度，計(jì)算出樣品中有效成分的含量。利用此測(cè)定方法應(yīng)進(jìn)行精密度試驗(yàn)、回收率試驗(yàn)、以及不同樣品有效成分含量測(cè)定，其中精密度試驗(yàn)分別平行測(cè)定六次總黃酮、總皂苷、總蒽醌的樣品含量，三者的RSD分別為3.1%、2.3%、4.2%，表明紫外分光光度法在保健食品檢測(cè)中具有良好的精密度。不同樣品有效成分含量測(cè)定試驗(yàn)中，硬膠囊的試驗(yàn)結(jié)果如表2所示。

4.小結(jié)

應(yīng)用紫外分光光度法測(cè)定保健食品中的總黃酮、總皂苷、總蒽醌等有效成分，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，同時(shí)還具有操作簡(jiǎn)便、成本低、重現(xiàn)性好的優(yōu)點(diǎn)。但目前我國(guó)尚未制定保健食品中總黃酮、總皂苷測(cè)定方法的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，為了更好的發(fā)揮紫外分光光度法在檢測(cè)中的價(jià)值，應(yīng)完善相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范。

參考文獻(xiàn)

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