氧化低密度脂蛋白、血清可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體-1與痛風(fēng)患者亞臨床動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系*

鄭雪娜，聶 豪，戢 操，李 敏

1.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院血液內(nèi)科，湖北十堰 442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬十堰市太和醫(yī)院內(nèi)分泌風(fēng)濕病科，湖北十堰442000

痛風(fēng)的病理機(jī)制與嘌呤代謝異常、尿酸排泄障礙所致的高尿酸血癥(HUA)及尿酸鹽沉積有關(guān)，其主要癥候群包括：單純HUA、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)石形成以及痛風(fēng)性腎病[1]。近年來，隨著飲食結(jié)構(gòu)的改變，痛風(fēng)的發(fā)病率逐年升高，痛風(fēng)并發(fā)癥嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[2]。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，痛風(fēng)與肥胖、高脂血癥、糖尿病等代謝性疾病的發(fā)生密切相關(guān)，HUA是冠心病、腦卒中等動(dòng)脈粥樣硬化(AS)性疾病的共同危險(xiǎn)因素，是患者致死、致殘的潛在威脅[3-4]。因此，利用血清生物學(xué)標(biāo)志物早期診斷和動(dòng)態(tài)監(jiān)測AS的發(fā)生，對改善心腦血管疾病的診斷、治療和預(yù)后具有重要意義。氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)在AS中的致病性已得到公認(rèn)，被認(rèn)為是AS性心血管疾病的潛在生物標(biāo)志物[5]。凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體-1(sLOX-1)可結(jié)合氧化型低密度脂蛋白，促進(jìn)冠心病的發(fā)生、發(fā)展，sLOX-1是LOX-1在血清中的存在形式，sLOX-1水平與AS密切相關(guān)[6]。本研究通過測定痛風(fēng)患者血清ox-LDL和sLOX-1水平，并進(jìn)行雙側(cè)動(dòng)脈彩超檢查，用頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度(IMT)和頸動(dòng)脈微斑塊來反映亞臨床AS，分析痛風(fēng)患者循環(huán)ox-LDL、sLOX-1水平以及血糖、血脂、胰島素抵抗指數(shù)等其他AS常見危險(xiǎn)因素與痛風(fēng)患者出現(xiàn)亞臨床AS的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 根據(jù)2015年歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟和美國風(fēng)濕病學(xué)會共同制定的痛風(fēng)分類標(biāo)準(zhǔn)[7]，于2020年6月至2021年10月納入十堰市太和醫(yī)院內(nèi)分泌風(fēng)濕病科門診及住院的痛風(fēng)患者68例作為研究對象。其中男64例，女4例；年齡39～73歲，平均(63.24±29.29)歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)腫瘤放療、化療后，骨髓增殖性疾病，急、慢性腎衰竭等所致的繼發(fā)性痛風(fēng)；(2)正在使用降尿酸藥物、鈣調(diào)蛋白酶抑制劑(他克莫司、環(huán)孢素)、利尿劑(氫氯噻嗪、速尿片)、抗結(jié)核藥物(異煙肼、利福平)或水楊酸制劑；(3)有酗酒史；(4)既往或目前有明確心腦血管病史者；(5)高血壓、糖尿病患者；(6)體質(zhì)量指數(shù)(BMI)≥28 kg/m2的肥胖者。通過雙側(cè)頸動(dòng)脈彩超檢查結(jié)果，將痛風(fēng)患者分為亞臨床AS組(AS組)[共38例，其中男36例，女2例；年齡40～72歲，平均(55.34±13.56)歲；病程(8.12±3.34)年]和非亞臨床AS組(non-AS組)[共30例，其中男28例，女2例；年齡39～69歲，平均(51.56±19.78)歲；病程(5.32±2.27)年]。另選取43例來自湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院體檢中心的體檢健康者作為對照組，其中男40例，女3例；年齡40～72歲，平均(53.28±10.26)歲。對照組排除BMI≥28 kg/m2的肥胖者，排除高血壓、冠心病、腦卒中、糖尿病、腫瘤、感染性疾病和自身免疫性疾病患者。本研究已通過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1頸動(dòng)脈彩超測量方法 通過彩色多普勒超聲儀(飛利浦，EPIQ 7)測量頸動(dòng)脈IMT并評價(jià)動(dòng)脈斑塊。操作如下：選擇雙側(cè)頸總動(dòng)脈竇遠(yuǎn)端1 cm處及動(dòng)脈竇部兩段血管測量IMT，每段血管測量3個(gè)點(diǎn)的IMT，共計(jì)12個(gè)點(diǎn)，IMT取12個(gè)點(diǎn)的平均值。頸動(dòng)脈IMT增厚定義：任何部位出現(xiàn)IMT>1.0 mm。符合以下任一標(biāo)準(zhǔn)，則動(dòng)脈斑塊形成：(1)局部IMT≥1.5 mm；(2)局限性隆起凸入管腔≥0.5 mm；(3)局部IMT增厚超過周邊IMT≥50%。將頸動(dòng)脈IMT增厚和(或)動(dòng)脈斑塊形成定義為亞臨床AS。

1.2.2實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的測定 采集研究對象空腹靜脈血5 mL，置于離心管，以3 000 r/min離心10 min，分離血清，分裝保存置于—80 ℃冰箱內(nèi)保存。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測定血清ox-LDL和sLOX-1水平，酶標(biāo)儀由英國Biochrom公司生產(chǎn)(型號：Anthos 2010)，試劑盒由武漢USCN公司提供，按照ELISA試劑盒說明書操作。采用生化方法(日本，日立7060全自動(dòng)生化分析儀)測定所有受試者血尿酸(UA)、空腹血糖(FBG)、空腹胰島素、超敏C反應(yīng)蛋白(hsCRP)、三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平；糖化血紅蛋白(HbA1c)采用高效液相色譜法測定(日本，Arkray糖化血紅蛋白分析儀)胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)計(jì)算公式：空腹胰島素×FBG/22.5。

2 結(jié) 果

2.1各組一般臨床資料比較 AS組、non-AS組與對照組比較，年齡、BMI、FBG、TC、HDL-C和HbA1c差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，AS組、non-AS組頸動(dòng)脈IMT、UA、TG、LDL-C、hs-CRP、HOMA-IR均高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其中，AS組與non-AS組比較，頸動(dòng)脈IMT、病程、HOMA-IR及hs-CRP水平均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而UA、TG、LDL-C差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組一般臨床資料比較

2.2三組血清ox-LDL和sLOX-1水平比較 AS組患者血清ox-LDL[42.37(20.77，181.20)ng/mL]、sLOX-1[7.66(4.43，14.03)ng/mL]水平高于non-AS組[oxLDL：19.03(8.46，32.44)ng/mL，sLOX-1：5.70(2.41，10.87)ng/mL]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而non-AS組患者血清ox-LDL、sLOX-1水平則高于對照組[ox-LDL:10.71(4.22,14.74)ng/mL，sLOX-1：0.98(0.49,3.18)ng/mL]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖1、圖2。

圖1 三組ox-LDL水平比較

圖2 三組sLOX-1水平比較

2.3痛風(fēng)患者血清ox-LDL與sLOX-1的相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，痛風(fēng)患者ox-LDL與sLOX-1呈正相關(guān)(r=0.531，P<0.001)。

2.4血清ox-LDL和sLOX-1對痛風(fēng)患者合并亞臨床AS的診斷效能分析 單因素ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清ox-LDL水平診斷痛風(fēng)患者合并亞臨床AS的AUC為0.718(P=0.0023)，血清sLOX-1水平診斷痛風(fēng)患者合并亞臨床AS的AUC為0.769(P=0.0002)，見圖3。

注：A為ox-LDL診斷痛風(fēng)患者合并亞臨床AS的ROC曲線；B為sLOX-1診斷痛風(fēng)患者合并亞臨床AS的ROC曲線。

2.5影響痛風(fēng)患者頸動(dòng)脈IMT的多因素Logsistic回歸分析 以痛風(fēng)患者年齡、性別、病程、BMI、ox-LDL、sLOX-1、UA、HOMA-IR、HbA1c、FBG、TG、TC、HDL-C、LDL-C作為自變量，頸動(dòng)脈IMT作為因變量，進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，年齡、病程、TG、LDL-C、HOMA-IR、ox-LDL是痛風(fēng)患者合并亞臨床AS的影響因素。見表2。

表2 影響痛風(fēng)患者頸動(dòng)脈IMT的多因素Logistic回歸分析結(jié)果

3 討 論

流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在過去的幾十年里痛風(fēng)的發(fā)病率持續(xù)升高，并有年輕化趨勢，痛風(fēng)、HUA及其密切關(guān)聯(lián)的心腦血管疾病已成為危害人民身體健康的重要原因[8]。目前的觀點(diǎn)認(rèn)為AS是一種由脂代謝紊亂、血管內(nèi)皮損傷、巨噬-單核細(xì)胞募集及遷徙、血管平滑肌細(xì)胞增殖、泡沫細(xì)胞形成等多種病理生理學(xué)機(jī)制介導(dǎo)，最終形成血管粥樣硬化斑塊的慢性炎癥性過程[9]。HUA是痛風(fēng)發(fā)生的病理學(xué)基礎(chǔ)，美國一項(xiàng)回顧性研究表明，血尿酸水平每增加1 mg/dL，心、腦血管系統(tǒng)疾病病死率相應(yīng)升高39%，循環(huán)高水平尿酸及其導(dǎo)致的尿酸鹽結(jié)晶可通過損傷血管內(nèi)膜、氧化應(yīng)激效應(yīng)和炎癥募集等多種生物學(xué)作用參與AS的發(fā)生、發(fā)展[10]。

循證醫(yī)學(xué)證據(jù)表明，與普通人群相比，痛風(fēng)患者急性心肌梗死導(dǎo)致的病死率顯著升高，且獨(dú)立于單純HUA患者，提示HUA可能不僅僅是痛風(fēng)患者AS高發(fā)生率的原因，傳統(tǒng)的AS危險(xiǎn)因素如肥胖、高脂血癥和糖尿病也是痛風(fēng)患者常見的合并癥，它們共同參與患者急性心肌梗死、腦梗死等不良預(yù)后事件[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，兩組痛風(fēng)患者TG、LDL-C水平較對照組升高，符合致AS血脂譜的典型特征，國外其他研究則表明TG、載脂蛋白B(ApoB)等血脂成分可能同樣參與痛風(fēng)患者AS的發(fā)生[12]。

早期診斷并治療AS是預(yù)防其發(fā)展成動(dòng)脈缺血、閉塞而引起嚴(yán)重心腦血管疾病的重要方案，是改善患者預(yù)后的關(guān)鍵?；陬i動(dòng)脈IMT及斑塊形成的頸動(dòng)脈彩超檢查是診斷亞臨床AS科學(xué)、簡便的方法，是評估患者心腦血管疾病風(fēng)險(xiǎn)的良好指標(biāo)[13]。本研究采用多點(diǎn)測量雙側(cè)頸動(dòng)脈IMT作為評價(jià)亞臨床AS的依據(jù)，發(fā)現(xiàn)痛風(fēng)患者頸動(dòng)脈IMT水平高于對照組，結(jié)果與李敏等[14]報(bào)道一致。提示痛風(fēng)患者較健康人群具有更高的AS發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，故推薦對痛風(fēng)患者進(jìn)行頸動(dòng)脈彩超篩查，以利于早期發(fā)現(xiàn)AS。

氧化應(yīng)激效應(yīng)是多種刺激因素導(dǎo)致機(jī)體氧化與抗氧化系統(tǒng)失衡，氧自由基團(tuán)(ROS)增加，從而引起一系列組織損傷反應(yīng)的過程，它主要通過兩個(gè)方面促進(jìn)AS的發(fā)生：一方面，ROS及其氧化產(chǎn)物作為上游功能性炎癥信號分子，激活炎癥信號通路，通過多種生物學(xué)效應(yīng)引起動(dòng)脈炎性反應(yīng)；另一方面，ROS通過氧化作用引起脂質(zhì)、核酸、蛋白質(zhì)等大分子成分產(chǎn)生過氧化產(chǎn)物，ox-LDL即是LDL中的蛋白質(zhì)及脂質(zhì)成分受到ROS攻擊而氧化修飾形成，可介導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞變性、壞死，內(nèi)膜通透性改變，增加脂質(zhì)在內(nèi)膜的浸潤，直接或間接造成血管內(nèi)皮損傷從而參與AS[15]。LOX-1屬于C型凝集素家族成員，最初發(fā)現(xiàn)于牛主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中，它主要識別ox-LDL，也能識別C反應(yīng)蛋白、熱休克蛋白等多種配體，參與AS的發(fā)生、發(fā)展。sLOX-1是LOX在血清中的存在形式，眾多臨床研究表明，sLOX-1與多種AS性疾病有相關(guān)性，尤其對冠心病的早期診斷有較高的特異度和靈敏度[16]?；A(chǔ)研究表明，作為ox-LDL配體，LOX-1介導(dǎo)了其大部分毒性作用，ox-LDL/LOX-1可通過激活核因子NF-κB、炎性體 Nod 樣受體蛋白 3等炎癥信號通路，誘導(dǎo)多種細(xì)胞分泌炎癥因子(腫瘤壞死因子α、白細(xì)胞介素-1、白細(xì)胞介素-6等)、趨化因子及黏附分子，促進(jìn)炎性細(xì)胞向內(nèi)膜下趨化、黏附，引起血管炎癥效應(yīng)[17]。本研究結(jié)果顯示，兩組痛風(fēng)患者ox-LDL、sLOX-1水平均較對照組升高，提示患者體內(nèi)脂質(zhì)過氧化效應(yīng)增強(qiáng)。此外，AS組患者血清ox-LDL、sLOX-1水平高于non-AS組，而痛風(fēng)患者血清ox-LDL與sLOX-1水平呈正相關(guān)，它們的一致性變化進(jìn)一步驗(yàn)證其在痛風(fēng)患者AS發(fā)病機(jī)制中潛在的促進(jìn)作用，循環(huán)ox-LDL/sLOX-1可能通過活化下游炎癥信號通路參與痛風(fēng)患者AS的發(fā)生。本研究結(jié)果顯示，AS組平均病程較non-AS組長，血清hs-CRP水平較non-AS組升高，提示長病程可能導(dǎo)致痛風(fēng)患者體內(nèi)微炎癥狀態(tài)的出現(xiàn)，而這種微炎癥狀態(tài)可能與脂質(zhì)過氧化效應(yīng)互為因果關(guān)系[17]。

臨床中用于診斷AS的血清學(xué)特異性標(biāo)志物相對缺乏，盡管較多研究顯示冠心病、腦卒中等AS性疾病患者血清ox-LDL、sLOX-1有不同程度的升高，然而ox-LDL、sLOX-1是否可以作為AS的潛在生物標(biāo)志物目前還不清楚[18]。本研究進(jìn)行的單因素ROC曲線分析結(jié)果顯示，ox-LDL診斷痛風(fēng)合并亞臨床AS的AUC為0.718，sLOX-1診斷痛風(fēng)合并亞臨床AS的AUC為0.769，二者均展現(xiàn)出較好的診斷價(jià)值。進(jìn)一步作多因素Logisitic回歸分析，結(jié)果表明ox-LDL是痛風(fēng)患者合并亞臨床AS的獨(dú)立影響因素，提示聯(lián)合檢測痛風(fēng)患者血清ox-LDL、sLOX-1對AS的早期診斷有一定臨床意義。胰島素抵抗(IR)是代謝綜合征的重要組分，是2型糖尿病的基本病理生理學(xué)基礎(chǔ)，可促進(jìn)AS的發(fā)生、發(fā)展，HOMA-IR是衡量IR程度簡便、實(shí)用的臨床指標(biāo)。已有研究表明，合并肥胖、高血壓的痛風(fēng)患者存在不同程度的IR與糖尿病[19]。本項(xiàng)研究中，盡管納入的痛風(fēng)患者未合并肥胖、糖代謝異常等情況，但AS組患者HOMA-IR顯著升高，多因素Logisitic回歸分析提示病程、血脂和HOMA-IR是痛風(fēng)合并亞臨床AS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

綜上所述，本研究結(jié)果表明痛風(fēng)患者早發(fā)AS是多因素共同作用的結(jié)果，高脂血癥和IR等AS傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素在此過程中起促進(jìn)作用，循環(huán)中的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物ox-LDL及其受體sLOX-1水平的升高及其介導(dǎo)的炎癥效應(yīng)可能是患者AS發(fā)生的另一重要原因。然而，作為一個(gè)回顧性、橫斷面調(diào)查，本研究樣本量較小，研究結(jié)論存在一定局限性，未來需進(jìn)行前瞻性、大樣本量的臨床研究進(jìn)一步驗(yàn)證，并需通過ox-LDL/sLOX-1致AS的基礎(chǔ)研究，明確其在AS中的確切作用。