人MAPK3基因克隆及其在肝細(xì)胞癌細(xì)胞中的作用

倪 佳，徐瑩瑩，鄧婉玲，宋苗苗，石 靜，孫達(dá)權(quán)

(1.貴陽市婦幼保健院·貴陽市兒童醫(yī)院，貴州 貴陽 550001；2.寧波市第一醫(yī)院 疝肝膽肛腸外科，浙江 寧波 315000；3.貴州醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽 550025)

絲裂原活化蛋白激酶3(Mitogen-activated protein kinase 3，MAPK3)是由MAPK3 基因編碼的一種分子量44 kDa的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，又名細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1(Extracellular signal-regulatedkinase 1，ERK1)，是MAPK家族的重要成員之一，它通常與分子量42 kDa的絲裂原活化蛋白激酶1(Mitogen- activated protein kinase 1，MAPK1)共同組成MAPK1/3，是Ras(Rat sarcoma proto-oncoprotein)-MAPK信號(hào)通路的重要成員[1-3]。大量研究表明，MAPK1/3不僅參與細(xì)胞的多種生理功能，如細(xì)胞的生長增殖、遷移、分化、穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)和凋亡等，也與多種細(xì)胞病變有關(guān)，許多癌基因編碼的蛋白可通過持續(xù)激活MAPK1/3，誘發(fā)腫瘤的發(fā)生發(fā)展和腫瘤血管生成等[4-7]。到目前為止，雖然有許多文獻(xiàn)描述了MAPK1/3的生物學(xué)功能，但單獨(dú)研究MAPK3對(duì)肝細(xì)胞癌影響作用的文獻(xiàn)較少。本研究通過克隆人MAPK3基因和構(gòu)建MAPK3基因穩(wěn)轉(zhuǎn)克隆肝細(xì)胞癌細(xì)胞株，研究MAPK3基因?qū)Ω渭?xì)胞癌細(xì)胞生長增殖、遷移和侵襲的影響。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞 人永生化肝上皮細(xì)胞THLE-3(C4144)和人肝細(xì)胞癌細(xì)胞Hep 3B(SCSP-5045)分別購自上海冠導(dǎo)生物工程有限公司和中科院上海細(xì)胞庫，均有STR鑒定結(jié)果。THLE-3細(xì)胞用含有10 %胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)，Hep 3B細(xì)胞用含有10 %胎牛血清的MEM(minimum Eagle’s medium)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37 ℃、5 % CO2。

1.2 主要試劑 PrimeScriptTMIV 1st strand cDNA Synthesis Mix(6215A)、PrimeSTAR?Max DNA Polymerase(R045A)、TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit Ver.4.0(9762)、DL10,000 DNA Marker(3584A)、pMDTM18-T Vector Cloning Kit(6011)、EcoR I(1040A)、XhoI(1094A)、T4 DNA Ligase(2011A)(TaKaRa，日本)，質(zhì)粒小提試劑盒(DP103)、DH5a 感受態(tài)細(xì)胞(CB101)、無內(nèi)毒素質(zhì)粒小提中量試劑盒(DP118)(天根生物，中國)，MEM(含GlutaMAXTM添加劑，41090036)、RPMI 1640 培養(yǎng)基(31870082)、PierceTMBCA 蛋白定量試劑盒(23225)、TRIzolTM試劑(15596026)、LipofectamineTM2000 Transfection Reagent(11668019)、GeneticinTM選擇性抗生素(11811023)(ThermoFisher Scientific，美國)，優(yōu)級(jí)胎牛血清(11011-8611)(天杭生物，中國)，PCR引物和DNA測(cè)序(博邁德，中國)，真核表達(dá)載體pEYFP-N1長期保存于本實(shí)驗(yàn)室，可用于檢測(cè)YFP的GFP-tag (3A10) monoclonal antibody(AP0675M)、ERK1/2 (L352) polyclonal antibody(BS1112)、GAPDH polyclonal antibody(AP0063)、Stat3 (S727) polyclonal antibody(AP0366)、Stat3 (phospho-S727) polyclonal antibody(BS4180)、MMP-2 (L638) polyclonal antibody(BS1236)、HRP標(biāo)記的二抗(BS13278、BS12478)(巴傲得，中國)，E-Cadherin(WL01482)、N-Cadherin(WL01047)、Vementin(WL01960)、c-Myc(WL01781)(萬類生物，中國)，基底膠Matrigel(356234)(索萊寶，中國)。

1.3 方法

1.3.1 基因克隆與測(cè)序 根據(jù)NCBI中人MAPK3的基因序列(NM_002746)和真核表達(dá)載體pEYFP-N1的多克隆位點(diǎn)設(shè)計(jì)并合成一對(duì)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase chain reaction，PCR)引物(見表1)，在上游引物的5′端引入XhoI酶切位點(diǎn)，下游引物的5′端加入EcoR I酶切位點(diǎn)，小寫部分為XhoI酶切位點(diǎn)，最前端的兩個(gè)堿基為保護(hù)性堿基；小寫部分為EcoR I酶切位點(diǎn)，最前端的兩個(gè)堿基為保護(hù)性堿基。

表1 人MAPK3的PCR引物

用6 cm小皿培養(yǎng)人肝上皮細(xì)胞THLE-3，當(dāng)細(xì)胞生長融合至80%時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用磷酸鹽緩沖液清洗細(xì)胞3次后，加入1 mL TRIzol試劑，充分吹打和裂解細(xì)胞，按說明書程序提取細(xì)胞總RNA，并將RNA溶液定容至1 μg/μL。按cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書流程合成cDNA第一鏈。以合成的cDNA模板，用人MAPK3 PCR引物根據(jù)高保真DNA聚合酶說明書操作流程體外擴(kuò)增獲得人MAPK3基因蛋白編碼區(qū)。

用1%瓊脂糖凝膠電泳分離和純化PCR擴(kuò)增獲得的人MAPK3基因蛋白編碼區(qū)，通過3′末端加“A”試劑盒給純化的PCR產(chǎn)物加“A”，然后克隆入pMD18-T載體中。經(jīng)轉(zhuǎn)化、篩選培養(yǎng)和酶切鑒定后，對(duì)可能含有MAPK3基因的重組載體進(jìn)行DNA測(cè)序，測(cè)序結(jié)果用BioXM 2.6進(jìn)行比對(duì)，測(cè)序正確的質(zhì)粒命名為pMD18T-MAPK3。

1.3.2 構(gòu)建重組真核表達(dá)質(zhì)粒 用XhoI/EcoR I雙酶切真核表達(dá)載體pEYFP-N1和含有目的基因的pMD18T-MAPK3，用1%瓊脂糖凝膠分離和純化骨架載體和目的基因，并用T4連接酶將兩者連接起來。經(jīng)轉(zhuǎn)化、抗生素篩選培養(yǎng)、質(zhì)粒抽提和雙酶切鑒定后，對(duì)可能重組正確的質(zhì)粒進(jìn)行DNA測(cè)序，測(cè)序正確的重組真核表達(dá)載體命名為pEYFP-MAPK3。

1.3.3 構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)克隆肝細(xì)胞癌細(xì)胞株 用無內(nèi)毒素質(zhì)粒小提中量試劑盒提取質(zhì)粒pEYFP-MAPK3，并將DNA濃度定容為1 μg/μL。 在6孔板中按最大細(xì)胞數(shù)的50%鋪板人肝細(xì)胞癌細(xì)胞Hep 3B，細(xì)胞貼壁后更換為無血清的MEM細(xì)胞培養(yǎng)液，按LipofectamineTM2000 Transfection Reagent說明書對(duì)細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pEYFP-MAPK3，轉(zhuǎn)染后6 h更換為含10%胎牛血清的MEM培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，轉(zhuǎn)染后48h在倒置熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞熒光。將轉(zhuǎn)染的細(xì)胞消化并傳至10 cm細(xì)胞培養(yǎng)皿中繼續(xù)培養(yǎng)，轉(zhuǎn)移后72 h后在培養(yǎng)液中加入600 μg/mL的G418，篩選培養(yǎng)5d后更換為含300 μg/mL Geneticin的細(xì)胞培養(yǎng)液。待細(xì)胞長成單克隆后，在倒置熒光顯微鏡下挑取帶黃色熒光的單克隆細(xì)胞株，轉(zhuǎn)移到96孔板中繼續(xù)培養(yǎng)，經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)后進(jìn)行驗(yàn)證和后續(xù)實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)方法是根據(jù)文獻(xiàn)[8]和具體實(shí)驗(yàn)改編而成。

1.3.4 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn) 細(xì)胞生長融合至70%時(shí)，胰酶消化并收集細(xì)胞，抽提細(xì)胞蛋白并用BCA 蛋白定量試劑盒對(duì)蛋白溶液進(jìn)行定量，制備蛋白樣品后進(jìn)行十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)。電泳結(jié)束后對(duì)蛋白進(jìn)行濕法轉(zhuǎn)膜，用TBST清洗對(duì)PVDF膜3次，用5%脫脂奶粉在37℃封閉30 min，TBST清洗3次，一抗4℃孵育過夜，TBST清洗3次，二抗室溫孵育2 h，TBST清洗3次，ECL發(fā)光成像。用Image J獲取目的條帶的灰度值。

1.3.5 細(xì)胞生長增殖實(shí)驗(yàn) 取1 000個(gè)細(xì)胞鋪于E-Plate L16中，每孔用含10%胎牛血清的MEM定容至終體積200 μL，室溫下放置30 min，將E-Plate L16放到iCelligence分析儀上進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)。在系統(tǒng)自動(dòng)掃描“Scan Plate”后，開始繪制出相應(yīng)的細(xì)胞增殖曲線。細(xì)胞指數(shù)值與細(xì)胞數(shù)量成正相關(guān)，即細(xì)胞指數(shù)越大，孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)目越多，細(xì)胞增殖能力越強(qiáng)。

1.3.6 劃痕愈合實(shí)驗(yàn) 將細(xì)胞按100%的融合率接種于12孔板中，每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。待細(xì)胞貼壁后用10 μL的槍頭緊貼著消毒過的直尺在孔中間按“|”輕輕劃痕，PBS洗去漂浮的細(xì)胞，加入1 mL新鮮的不含血清的MEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，并在0、48 h時(shí)分別在顯微鏡下記錄細(xì)胞的愈合情況。

1.3.7 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn) 將基底膠用MEM細(xì)胞培養(yǎng)液按1∶10稀釋(冰浴操作)，取稀釋后的基底膠100 μL加入到Transwell小室中，細(xì)胞培養(yǎng)箱中放置5 h，倒掉小室中的液體，用磷酸鹽緩沖液清洗1次。將消化并用磷酸鹽緩沖液清洗后的細(xì)胞用無血清的MEM細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋混勻，按100%的融合率接種至Transwell小室中，并用MEM定容至200 μL；在24孔板的孔中加入600 μL含10%胎牛血清的MEM細(xì)胞培養(yǎng)液，將鋪了細(xì)胞的Transwell小室移入24孔板中，培養(yǎng)24 h后取出Transwell小室，4%多聚甲醛室溫固定30 min后用結(jié)晶紫染色，自來水清洗脫色，用棉簽拭去小室內(nèi)側(cè)的細(xì)胞。每孔隨機(jī)選取3個(gè)視野拍照記錄，每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用軟件SPSS 21.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。兩組組間分析采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析，P< 0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 獲得人MAPK3基因蛋白編碼區(qū)和重組真核表達(dá)質(zhì)粒pEYFP-MAPK3 如圖1A所示，以人肝上皮細(xì)胞cDNAs為模板，通過RT-PCR獲得長度約1.1 kb的人MAPK3基因的蛋白編碼區(qū)。TA克隆后，DNA測(cè)序結(jié)果顯示RT-PCR產(chǎn)物正是人MAPK3基因的蛋白編碼區(qū)，且無任何形式的突變。將人MAPK3基因蛋白編碼區(qū)通過XhoI/EcoR I酶切位點(diǎn)插入到真核表達(dá)載體pEYFP-N1中，構(gòu)建pEYFP-MAPK3(見圖1B)，DNA測(cè)序結(jié)果顯示MAPK3準(zhǔn)確插入到pEYFP-N1的預(yù)定堿基中，其質(zhì)粒圖譜如圖1C所示。

A：RT-PCR擴(kuò)增人MAPK3基因蛋白編碼；B：Xho I/ EcoR I雙酶切鑒定重組真核表達(dá)質(zhì)粒pEYFP-MAPK3；C：質(zhì)粒pEYFP-MAPK3圖譜。

2.2 建立MAPK3基因穩(wěn)轉(zhuǎn)克隆肝癌細(xì)胞株 用脂質(zhì)體法將重組質(zhì)粒pEYFP-MAPK3導(dǎo)入肝細(xì)胞癌細(xì)胞Hep 3B后，經(jīng)藥物篩選培養(yǎng)和克隆集落擴(kuò)大培養(yǎng)，選取熒光顯微鏡下呈黃色熒光的細(xì)胞集落(見圖2A)，分別用可以檢測(cè)YFP蛋白的GFP標(biāo)簽抗體和檢測(cè)MAPK3蛋白的MAPK3/2抗體對(duì)細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的目的蛋白進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果如圖2B所示，篩選獲得的單克隆肝細(xì)胞癌細(xì)胞株內(nèi)過表達(dá)帶有YFP的MAPK3融合蛋白MAPK3-YFP，證明MAPK3基因穩(wěn)轉(zhuǎn)克隆肝細(xì)胞癌細(xì)胞株構(gòu)建成功。

A：外源MAPK3基因融合蛋白(MAPK3-YFP)在熒光顯微鏡下使肝細(xì)胞癌細(xì)胞Hep 3B呈黃色；B：外源MAPK3-YFP在肝細(xì)胞癌細(xì)胞Hep 3B(Ov-MAPK3)中表達(dá)。

2.3MAPK3基因促進(jìn)肝細(xì)胞癌細(xì)胞生長增殖、遷移和侵襲 為分析MAPK3基因?qū)Ω渭?xì)胞癌細(xì)胞表型的影響，本組以表達(dá)外源YFP蛋白的Hep 3B為對(duì)照細(xì)胞，通過實(shí)時(shí)無標(biāo)記細(xì)胞分析技術(shù)發(fā)現(xiàn)表達(dá)MAPK3融合蛋白的肝細(xì)胞癌細(xì)胞的生長和增殖速率明顯提高(P=0.017，見圖3A)；同時(shí)，細(xì)胞損傷-愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示MAPK3能夠顯著提高癌細(xì)胞的遷移能力(P=0.022，見圖3B)；另外，細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示肝癌細(xì)胞表達(dá)外源MAPK3后，侵襲的癌細(xì)胞數(shù)增加(見圖3C)。以上結(jié)果顯示，在肝細(xì)胞癌細(xì)胞中過表達(dá)外源MAPK3基因后，可以促進(jìn)癌細(xì)胞的生長和增殖速度、遷移能力和侵襲能力。

A：MAPK3基因促進(jìn)肝癌細(xì)胞Hep 3B生長增殖；B：MAPK3基因促進(jìn)肝癌細(xì)胞Hep 3B遷移；C：MAPK3基因促進(jìn)肝癌細(xì)胞Hep 3B侵襲；*：與對(duì)照組比較， P<0.05。

2.4MAPK3基因影響肝癌細(xì)胞內(nèi)相關(guān)的基因表達(dá) 為分析MAPK3基因是如何影響肝細(xì)胞癌細(xì)胞表型的，本組先對(duì)MAPK3下游分子信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子(Signal transducer and activator of transcription，Stat3)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)MAPK3在不影響Stat3蛋白整體水平，但可以顯著提高p-Stats727的表達(dá)水平(P=0.046)，并促進(jìn)Stat3的靶基因蛋白c-Myc(P=0.031)和基質(zhì)金屬蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2，MMP-2)(P=0.043)的表達(dá)水平(見圖4)。此外，過表達(dá)的MAPK3還可以明顯促進(jìn)肝細(xì)胞癌細(xì)胞中N-Cadherin的表達(dá)(P=0.025)并抑制E-Cadherin(P=0.017)的表達(dá)，但Vimentin的表達(dá)基本不受MAPK3過表達(dá)的受影響(見圖4)。這些蛋白表達(dá)變化可能就是引起肝細(xì)胞癌細(xì)胞表型變化的分子基礎(chǔ)。

*：與對(duì)照組比較， P<0.05。

3 討論

肝細(xì)胞癌具有復(fù)雜的腫瘤分子發(fā)病途徑，MAPK途徑是其重要的途徑之一[9]。MAPKs是信號(hào)從細(xì)胞表面?zhèn)鲗?dǎo)到細(xì)胞核內(nèi)部的重要傳遞者，MAPK1/3是ERK家族的重要成員，主要通過修飾轉(zhuǎn)錄因子而影響靶基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)，參與細(xì)胞代謝和生理活動(dòng)[10-11]。研究表明，MAPK1/3異常表達(dá)及其信號(hào)通路活化與多種腫瘤發(fā)生發(fā)展有密切的關(guān)系[1,3,7,9,11]。但是，MAPK1/3并非是一個(gè)蛋白，也不是同一個(gè)基因的表達(dá)產(chǎn)物；實(shí)際上它們是一對(duì)由高度同源的基因，即MAPK1基因和MAPK3基因，各自編碼的不同蛋白質(zhì)，兩者在蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)上具有85%的相似性。由于這兩個(gè)蛋白的分子量相近且的免疫原相似，且具有諸多類似的生物學(xué)功能而被書寫成MAPK1/3。事實(shí)上，兩種蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)上還是存在些許差異的。首先，MAPK3蛋白在N-末端比MAPK1多出一段氨基酸殘基序列：GGEPRRTEGVGPGVPGE，這可能可以賦予MAPK3新的蛋白特性和對(duì)應(yīng)的生物學(xué)功能。研究發(fā)現(xiàn)，由于MAPK3 N-末端的這段特殊序列存在，導(dǎo)致其在胞質(zhì)中磷酸化活化后的入核速度顯著低于MAPK1，使細(xì)胞核內(nèi)MAPK3總體磷酸化水平降低，最終導(dǎo)致MAPK3的促細(xì)胞增殖能力顯著降低[12-13]。但MAPK3仍具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長增殖的能力，如在大鼠PC12細(xì)胞中，用microRNA-15b-5p結(jié)合MAPK3 3′UTR RNA，抑制ERK1表達(dá)后可減緩細(xì)胞的生長增殖速度[14]。還有研究發(fā)現(xiàn)，MAPK3可以促進(jìn)白血病細(xì)胞HL-60的生長增殖速率，這一促進(jìn)作用可以被與MAPK3 3′UTR RNA 結(jié)合的miR-143所阻斷[15]。此外，MAPK3還在其他多個(gè)方面展現(xiàn)其獨(dú)特的生物學(xué)作用，包括特異性調(diào)控脂肪細(xì)胞分化[16]、誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性哮喘[17]、誘導(dǎo)破骨細(xì)胞形成[18]、抑制視網(wǎng)膜損傷[19]、自身免疫性腦脊髓炎[20-21]以及誘導(dǎo)肝纖維化進(jìn)程[22]等。這些研究均表明，除與MAPK1相似的生物學(xué)功能外，MAPK3還具有不同于MAPK1的特殊生物學(xué)功能。因此，有必要單獨(dú)展開MAPK3和MAPK1的生物學(xué)功能研究以及兩者之間的關(guān)聯(lián)性和差異性。

為分析MAPK3在肝細(xì)胞癌細(xì)胞中的作用，本研究首先以人肝上皮細(xì)胞來源的mRNA為模板，利用RT-PCR反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增獲得人MAPK3基因的蛋白編碼區(qū)，并構(gòu)建了真核表達(dá)載體pEYFP-MAPK3；通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、geneticin藥物篩選、克隆選取培養(yǎng)與蛋白免疫印跡鑒定，成功獲得過表達(dá)MAPK3基因的肝細(xì)胞癌細(xì)胞克隆株。然后，利用實(shí)時(shí)無標(biāo)記細(xì)胞分析技術(shù)、細(xì)胞損傷-愈合實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)分別證明過表達(dá)ERK1基因可以加速肝細(xì)胞癌細(xì)胞的生長增殖速率、提高肝細(xì)胞癌細(xì)胞的遷移能力和侵襲能力。有趣的是在另一個(gè)研究中，我們發(fā)現(xiàn)當(dāng)用RNAi單獨(dú)敲低肝細(xì)胞癌細(xì)胞內(nèi)源性MAPK3后，細(xì)胞的生長增殖能力并未受到顯著影響(數(shù)據(jù)未列出)，這可能與肝細(xì)胞中MAPK1的表達(dá)量顯著多于MAPK3有關(guān)，并且在四肢類生物中MAPK3基因和MAPK1基因呈現(xiàn)功能冗余[23]。由此我們認(rèn)為，要完全了解MAPK3在肝細(xì)胞癌細(xì)胞中的作用，不僅要結(jié)合MAPK3基因敲除的結(jié)果，還要與MAPK1基因過表達(dá)與敲除的肝細(xì)胞癌細(xì)胞表型相結(jié)合，才有可能能得出全面并精準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)論，準(zhǔn)確掌握MAPK3在肝細(xì)胞癌細(xì)胞中的生物學(xué)功能。

此外，我們還對(duì)過表達(dá)MAPK3后導(dǎo)致肝細(xì)胞癌細(xì)胞表型惡化的分子基礎(chǔ)進(jìn)行了初步探索，發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞癌細(xì)胞過表達(dá)MAPK3后，細(xì)胞內(nèi)MAPK3的下游靶蛋白Stat3的磷酸化水平上升。Stat3是一種功能復(fù)雜的核轉(zhuǎn)錄因子和癌蛋白，廣泛高表達(dá)和超活化于多種癌細(xì)胞和腫瘤生態(tài)系統(tǒng)中的非癌細(xì)胞中，研究指出人類有超過50%的腫瘤組織中Stat3高度表達(dá)并具有成百上千個(gè)轉(zhuǎn)錄靶基因[24-25]。我們對(duì)其中兩個(gè)具有促進(jìn)細(xì)胞生長作用的c-Myc和可引起細(xì)胞外基質(zhì)降解的MMP-2的靶基因蛋白進(jìn)行分析驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)的c-Myc和MMP-2表達(dá)同時(shí)升高。另外，研究還發(fā)現(xiàn)過表達(dá)MAPK3可以促進(jìn)N-Cadherin并抑制E-Cadherin的表達(dá)。這些基因的表達(dá)變化可能與MAPK3誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲有關(guān)。但是，我們相信MAPK3增強(qiáng)肝細(xì)胞癌細(xì)胞的癌性不僅僅與上述基因的表達(dá)變化有關(guān)，應(yīng)該還有更多基因受MAPK3的表達(dá)而受到影響，而這些基因需要進(jìn)一步去探索和挖掘。