黃連湯與加味黃連湯對(duì)小鼠胰腺癌移植瘤的抑制作用

史雯　陳信義　田劭丹　姚靚　何昊

〔摘要〕 目的 觀察黃連湯、加味黃連湯對(duì)胰腺癌移植瘤模型小鼠體質(zhì)量、游泳時(shí)間、腫瘤體積、腫瘤抑制率的影響。方法 將小鼠胰腺癌細(xì)胞接種于BALB/c小鼠右前肢腋窩下，構(gòu)建胰腺癌移植瘤模型。造模后將84只小鼠隨機(jī)分為7組：模型對(duì)照組（0.01 mL/g），黃連湯中劑量組（5.98 mg/g）、黃連湯高劑量組（11.96 mg/g）、加味黃連湯中劑量組（8.32 mg/g）、加味黃連湯高劑量組（16.64 mg/g）、吉西他濱中劑量組（0.25 mg/g）、吉西他濱高劑量組（0.50 mg/g），每組12只。模型對(duì)照組每日給予生理鹽水灌胃，黃連湯中、高劑量組給予相應(yīng)劑量黃連湯灌胃，加味黃連湯中、高劑量組給予相應(yīng)劑量加味黃連湯灌胃，吉西他濱中、高劑量組皮下注射相應(yīng)劑量注射用鹽酸吉西他濱，各組均連續(xù)干預(yù)14 d。實(shí)驗(yàn)過程中和實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，觀察各組小鼠體質(zhì)量、游泳時(shí)間、腫瘤體積、腫瘤抑制率。結(jié)果 模型對(duì)照組、黃連湯中劑量組、黃連湯高劑量組第4、8、12天，加味黃連湯高劑量組第8、12天，吉西他濱高劑量組第4、8天腫瘤體積均明顯大于給藥前（P<0.05）。黃連湯中、高劑量組第12天，加味黃連湯高劑量組第8天腫瘤體積均明顯大于第4天（P<0.05）。模型對(duì)照組、黃連湯中劑量組、加味黃連湯中劑量組第12天腫瘤體積均明顯大于第8天（P<0.05）。吉西他濱高劑量組第12天腫瘤體積明顯小于第8天（P<0.05）。黃連湯中劑量組、黃連湯高劑量組、加味黃連湯中劑量組第4、8、12天，加味黃連湯高劑量組第12天體質(zhì)量均明顯大于給藥前（P<0.05）。加味黃連湯中、高劑量組第12天體質(zhì)量均明顯大于第8天（P<0.05）。吉西他濱中、高劑量組第12天體質(zhì)量均明顯小于第4、8天（P<0.05）。黃連湯中劑量組、加味黃連湯中劑量組、加味黃連湯高劑量組第7、14天，黃連湯高劑量組、吉西他濱中劑量組、吉西他濱高劑量組第14天游泳時(shí)間均明顯短于給藥前（P<0.05）。模型對(duì)照組第14天游泳時(shí)間明顯短于第7天（P<0.05）。第12天，黃連湯高劑量組、加味黃連湯高劑量組體質(zhì)量、腫瘤體積均明顯大于吉西他濱高劑量組（P<0.05）;黃連湯中劑量組、加味黃連湯中劑量組體質(zhì)量均明顯大于吉西他濱中劑量組（P<0.05）。第14天，黃連湯高劑量組、加味黃連湯高劑量組游泳時(shí)間均明顯長(zhǎng)于吉西他濱高劑量組（P<0.05）;黃連湯中劑量組、加味黃連湯中劑量組游泳時(shí)間均明顯長(zhǎng)于吉西他濱中劑量組（P<0.05）。加味黃連湯高劑量、吉西他濱中劑量組、吉西他濱高劑量組腫瘤抑制率均明顯高于模型對(duì)照組（P<0.05，P<0.01）。結(jié)論 高劑量的加味黃連湯抑制小鼠胰腺癌移植瘤的效果與吉西他濱相近，雖然在縮小腫瘤體積方面不如吉西他濱，但在增加體質(zhì)量及延長(zhǎng)游泳時(shí)間方面明顯優(yōu)于吉西他濱。而黃連湯僅在增加體質(zhì)量及延長(zhǎng)游泳時(shí)間方面優(yōu)于吉西他濱。

〔關(guān)鍵詞〕 胰腺癌;黃連湯;加味黃連湯;胰腺癌移植瘤;腫瘤抑制率;吉西他濱;疏肝健脾;平調(diào)寒熱

〔中圖分類號(hào)〕R273? ? ? ? 〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ? 〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2022.04.010

Inhibitory effect of Huanglian Decoction and Jiawei Huanglian Decoction on mouse

pancreatic cancer transplanted tumor

SHI WenCHEN Xinyi TIAN Shaodan YAO Liang HE Hao

（1. Dongzhimen Hospital of Beijing University of Chinese Medcine， Beijing 100700， China; 2. The Sixth Hospital of

Beijing， Beijing 100007， China; 3. School of Pharmacy， Xi'an Medical University， Xi'an， Shaanxi 710021， China）

〔Abstract〕 Objective To observe the effects of Huanglian Decoction and Jiawei Huanglian Decoction on the body weight， swimming time， tumor volume and tumor inhibition rate of pancreatic cancer transplanted tumor model mice. Methods Mouse pancreatic cancer cells were inoculated under the armpit of the right forelimb of BALB/c mice to construct a pancreatic cancer transplanted tumor model. After tumor formation， 84 mice were randomly divided into 7 groups： model control group （0.01 mL/g）， Huanglian Decoction medium-dose group （5.98 mg/g）， Huanglian Decoction high-dose group （11.96 mg/g）， Jiawei Huanglian Decoction

medium-dose group （8.32 mg/g）， Jiawei Huanglian Decoction high-dose group （16.64 mg/g）， gemcitabine medium-dose group （0.25 mg/g） and gemcitabine high-dose group （0.50 mg/g）， with 12 mice in each group. The model control group was given normal saline intragastric administration daily， the medium-dose and high-dose groups of Huanglian Decoction were given corresponding doses of Huanglian Decoction， the medium-dose and high-dose groups of Jiawei Huanglian Decoction were given corresponding doses of Jiawei Huanglian Decoction intragastric administration， and the medium-dose and high-dose gemcitabine groups were subcutaneously injected with appropriate doses of gemcitabine hydrochloride for injection， and the intervention lasted for 14 days. During and after the experiment， the body weight， swimming time， tumor volume and tumor inhibition rate of each group were observed. Results The tumor volume of model control group， medium-dose and high-dose groups of Huanglian Decoction on the 4th， 8th and 12th day， Jiawei Huanglian Decoction high-dose group on the 8th and 12th day， and gemcitabine high-dose group on the 4th and 8th day were significantly higher than before （P<0.05）. The tumor volume of medium-dose and high-dose groups of Huanglian Decoction on the 12th day and Jiawei Huanglian Decoction high-dose group on the 8th day were significantly higher than that on the 4th day （P<0.05）. The tumor volume of model control group， Huanglian Decoction medium-dose group and Jiawei Huanglian Decoction

medium-dose group on the 12th day was significantly higher than that on the 8th day （P<0.05）. The tumor volume of gemcitabine

high-dose group on the 12th day was significantly lower than that on the 8th day （P<0.05）. The body weight in medium-dose and high-dose groups of Huanglian Decoction， Jiawei Huanglian Decoction medium-dose group on the 4th， 8th and 12th day and Jiawei Huanglian Decoction medium-dose group on the 12th day were significantly higher than before （P<0.05）. The body weight on the 12th day in the medium-dose and high-dose groups of Jiawei Huanglian Decoction was significantly higher than that on the 8th day （P<0.05）. In medium-dose and high-dose groups of gemcitabine， the body weight on the 12th day was significantly lower than that on the 4th day and 8th day （P<0.05）. The swimming time of the Huanglian Decoction medium-dose group， the medium-dose and high-dose groups of Jiawei Huanglian Decoction on the 7th and 14th day， the Huanglian Decoction high-dose group， the medium-dose and high-dose groups of gemcitabine on the 14th day were significantly shorter than before （P<0.05）. The swimming time of model control group on the 14th day was significantly shorter than that on the 7th day （P<0.05）. On the 12th day， body weight and tumor volume of Huanglian Decoction high-dose group and Jiawei Huanglian Decoction high-dose group were significantly higher than those of gemcitabine high-dose group （P<0.05）; the body weight of the Huanglian Decoction medium-dose group and Jiawei Huanglian Decoction medium-dose group was significantly higher than that of gemcitabine medium-dose group （P<0.05）. On the 14th day， the swimming time of Huanglian Decoction high-dose group and Jiawei Huanglian Decoction high-dose group was significantly longer than that of gemcitabine high-dose group （P<0.05）; the swimming time of Huanglian Decoction medium-dose group and Jiawei Huanglian Decoction medium-dose group was significantly longer than that of gemcitabine medium-dose group （P<0.05）. The tumor inhibition rate of Jiawei Huanglian Decoction high-dose， medium-dose and high-dose groups of gemcitabine were significantly higher than that of model control group （P<0.05， P<0.01）. Conclusion The inhibitory effect of high-dose Jiawei Huanglian Decoction on transplanted mouse pancreatic cancer is similar to gemcitabine. Although it is not as effective as gemcitabine in reducing tumor volume， it is superior to gemcitabine in increasing body weight and prolonging swimming time. Huanglian Decoction is superior to gemcitabine only in increasing body weight and prolonging swimming time.

〔Keywords〕 pancreatic cancer; Huanglian Decoction; Jiawei Huanglian Decoction; pancreatic cancer transplanted tumor; tumor inhibition rate; gemcitabine; soothing liver and strengthening spleen; moderating cold and heat

胰腺癌是一種惡性程度高、預(yù)后差的消化系統(tǒng)惡性腫瘤。總體發(fā)病率和病死率在全世界范圍內(nèi)均呈逐年上升趨勢(shì)。研究表明，2018年胰腺癌全球發(fā)病人數(shù)超45萬例，死亡人數(shù)超過43萬例[1]，死亡與發(fā)病人數(shù)比值超過0.9。其中，美國(guó)新發(fā)胰腺癌病例數(shù)≥55 000例，死亡病例數(shù)達(dá)44 330例。預(yù)計(jì)至2030年，胰腺癌病死率將躍居腫瘤相關(guān)病死率第2位[2-3]。對(duì)于早期、沒有轉(zhuǎn)移的胰腺癌，外科切除依然是目前重要的治療方式。晚期胰腺癌治療的重點(diǎn)已從無效的化學(xué)治療逐步轉(zhuǎn)向包括靶向、免疫等綜合治療，為長(zhǎng)期生存爭(zhēng)取了條件[4-6]。

黃連湯來源于《傷寒雜病論》，由黃連、人參、干姜、桂枝、半夏、大棗、甘草組成。《傷寒雜病論·辨陽明病脈證并治》曰：“傷寒胸中有熱，胃中有邪氣，腹中痛，欲嘔吐者，黃連湯主之?！比街T藥合用，辛開苦降，寒散熱消，中焦得和，升降復(fù)常[7]?，F(xiàn)代多用于急慢性胃炎等[8-9]。臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，60%的胰腺癌患者以腹痛為首發(fā)癥狀，病程中有90%的患者出現(xiàn)中上腹或左側(cè)季肋部腹痛;大部分患者會(huì)出現(xiàn)食欲減退、消化不良等癥狀，如腹脹、惡心、嘔吐等[10-11]?；谥嗅t(yī)病機(jī)理論，結(jié)合胰腺癌常見臨床癥狀，認(rèn)為胰腺癌與中焦寒熱失調(diào)，肝木克土，胃失和降密切相關(guān)[12]，宜用和胃降逆法治療[13-14]。故而，陳信義教授在黃連湯基礎(chǔ)上，加柴胡、枳實(shí)組成“加味黃連湯”疏肝健脾、平調(diào)寒熱，治療胰腺癌或消化道腫瘤，以控制患者臨床癥狀，改善生存質(zhì)量。本研究團(tuán)隊(duì)試通過黃連湯、加味黃連湯對(duì)胰腺癌移植瘤模型小鼠相關(guān)指標(biāo)影響的比較性實(shí)驗(yàn)研究，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1? 主要實(shí)驗(yàn)藥物

黃連湯由黃連9 g，人參10 g，干姜3 g，桂枝3 g，清半夏9 g，大棗6 g，甘草6 g組成。加味黃連湯由黃連9 g，人參10 g，干姜3 g，桂枝3 g，清半夏9 g，大棗6 g，柴胡9 g，枳實(shí)9 g，甘草6 g組成。兩方均由中國(guó)北京康仁堂藥業(yè)有限公司按照原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局確定的顆粒飲片制備工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制備（單味中藥水提后混合），并提供。注射用鹽酸吉西他濱（江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：20170311）。

1.2? 細(xì)胞系

小鼠胰腺癌細(xì)胞Panc02細(xì)胞系，購(gòu)自于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所，培養(yǎng)條件為DMEM培養(yǎng)基，10%FBS，濕度95%，5%CO₂，37 ℃。

1.3? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

BALB/c小鼠（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：0034331），雌雄各半，體質(zhì)量（19.92±2.55） g，由中國(guó)空軍軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（陜）2014-002。飼養(yǎng)于中國(guó)西安醫(yī)學(xué)院中藥藥理實(shí)驗(yàn)室，使用許可證號(hào)：SYXK（陜）2016-004，室溫20～25 ℃，相對(duì)濕度45%～70%。

1.4? 主要試劑與儀器

CO2培養(yǎng)箱、超純水機(jī)、高速離心機(jī)均來自美國(guó)Thermo Fisher公司（型號(hào)分別為3111、MicroPure、Stratos）;倒置顯微鏡（日本Nikon公司，型號(hào)：IX73）;超凈工作臺(tái)（天津泰斯特儀器有限公司，型號(hào)：CJ-2S104）;電子天平（美國(guó)OHAUS公司，型號(hào)：AX224ZH型）。

DMEM培養(yǎng)基、FBS胎牛血清、青鏈霉素混合液均購(gòu)自美國(guó)HyClone公司（批號(hào)分別為AD17628284、NYM1035、J180029）;二甲基亞砜（美國(guó)Sigma公司，批號(hào)：RNBG6370）;PBS磷酸鹽緩沖液（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：181127）。

1.5? 胰腺癌移植瘤模型的建立

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的小鼠胰腺癌細(xì)胞Panc02細(xì)胞，0.5%胰蛋白酶消化，離心洗滌3次，無血清培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度為1×10⁷個(gè)/mL，1 mL的6號(hào)針頭注射器抽取細(xì)胞懸液接種于小鼠右前肢腋窩，每只小鼠接種0.2 mL[15]。模型小鼠皮下出現(xiàn)腫瘤結(jié)節(jié)，直徑>5 mm，表明胰腺癌皮下移植瘤小鼠模型構(gòu)建成功[16]。

1.6? 實(shí)驗(yàn)藥物計(jì)算

參照《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》[17]“種屬間等效劑量的折算表”進(jìn)行給藥劑量計(jì)算，其中，70 kg人與20 g小鼠間系數(shù)為0.0026。黃連湯，人每日用藥劑量為46 g，即46 g/70 kg=0.6571 g/kg，換算成小鼠中劑量為5.98 mg/g。加味黃連湯，人每日用藥劑量為64 g，即64 g/70 kg=0.9142 g/kg，換算成小鼠中劑量為8.32 mg/g。以上兩方中劑量乘以2為相應(yīng)高劑量。注射用鹽酸吉西他濱按照人體標(biāo)準(zhǔn)用藥劑量，換算成小鼠劑量，吉西他濱中劑量為0.25 mg/g，高劑量為0.50 mg/g。

1.7? 實(shí)驗(yàn)分組給藥

接種6 d后，小鼠右前肢腋窩皮下可觸及腫瘤結(jié)節(jié)，將出瘤的84只小鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組、加味黃連湯中劑量組、加味黃連湯高劑量組、黃連湯中劑量組、黃連湯高劑量組、吉西他濱中劑量組、吉西他濱高劑量組，共7組，每組12只。模型對(duì)照組每日給予0.01 mL/g生理鹽水（約為0.01 mg/g）灌胃。加味黃連湯中、高劑量組及黃連湯中、高劑量組每日給予相應(yīng)劑量藥物灌胃。吉西他濱中、高劑量組每日給予相應(yīng)劑量注射用鹽酸吉西他濱皮下注射。各組均連續(xù)干預(yù)14 d。

1.8? 觀察指標(biāo)

1.8.1? 腫瘤體積? 待腫瘤形成后，給藥前及給藥后第4、8、12天分別測(cè)量瘤徑1次，利用游標(biāo)卡尺測(cè)量其最長(zhǎng)徑（a）及其垂直徑（b），計(jì)算腫瘤體積（V），公式為V=1/2ab²。

1.8.2? 腫瘤抑制率? 實(shí)驗(yàn)結(jié)束，斷頸處死小鼠，迅速剝離腫瘤并稱質(zhì)量，計(jì)算腫瘤抑制率。腫瘤抑制率=（1-給藥組平均瘤質(zhì)量/模型對(duì)照組平均瘤質(zhì)量）×100%[18]。

1.8.3? 體質(zhì)量? 各組小鼠給藥前及給藥后第4、8天、12天分別稱體質(zhì)量。

1.8.4? 游泳時(shí)間? 水深20 cm，水溫（20±0.5） ℃，在尾部加質(zhì)量2 g左右重物。將小鼠分別放入水缸內(nèi)游泳，并記錄時(shí)間。當(dāng)小鼠頭部沉入水中3 s不能浮出水面即為體力耗竭，撈出小鼠，記錄時(shí)間。藥物給藥前及給藥后第7、14天各測(cè)1次。可體現(xiàn)各組實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)小鼠抗疲勞效果的影響。

1.9? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

分析采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料用“x±s”進(jìn)行描述，數(shù)據(jù)分析前均進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)及方差齊性檢驗(yàn)排除抽樣誤差，兩組多個(gè)時(shí)間點(diǎn)間比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析;計(jì)數(shù)資料組間差異性分析采用？字2檢驗(yàn)。以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1? 各組小鼠腫瘤體積比較

給藥前，各組腫瘤體積比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。模型對(duì)照組、黃連湯中、高劑量組第4、8、12天腫瘤體積均明顯大于給藥前（P<0.05）。加味黃連湯高劑量組第8、12天腫瘤體積均明顯大于給藥前（P<0.05）。吉西他濱高劑量組第4、8天腫瘤體積均明顯大于給藥前（P<0.05）。黃連湯中、高劑量組第12天腫瘤體積均明顯大于第4天（P<0.05）。加味黃連湯高劑量組第8天腫瘤體積明顯大于第4天（P<0.05）。模型對(duì)照組、黃連湯中劑量組、加味黃連湯中劑量組第12天腫瘤體積均明顯大于第8天（P<0.05）。吉西他濱高劑量組第12天腫瘤體積明顯小于第8天（P<0.05）。第12天，黃連湯高劑量組、加味黃連湯高劑量組腫瘤體積均明顯大于吉西他濱高劑量組（P<0.05）。見表1、圖1。

2.2? 各組小鼠體質(zhì)量比較

給藥前，各組體質(zhì)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。黃連湯中劑量組、黃連湯高劑量組、加味黃連湯中劑量組第4、8、12天體質(zhì)量均明顯大于給藥前（P<0.05）。加味黃連湯高劑量組第12天體質(zhì)量明顯大于給藥前、第8天（P<0.05）。加味黃連湯中劑量組第12天體質(zhì)量明顯大于第8天（P<0.05）。吉西他濱中、高劑量組第12天體質(zhì)量均明顯小于第4、8天（P<0.05）。第12天，黃連湯中劑量組、加味黃連湯中劑量組體質(zhì)量均明顯大于吉西他濱中劑量組（P<0.05）。第12天，黃連湯高劑量組、加味黃連湯高劑量組體質(zhì)量均明顯大于吉西他濱高劑量組（P<0.05）。見表2。

2.3? 各組小鼠游泳時(shí)間比較

給藥前，各組游泳時(shí)間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。黃連湯中劑量組、加味黃連湯中劑量組、加味黃連湯高劑量組第7、14天游泳時(shí)間均明顯短于給藥前（P<0.05）。黃連湯高劑量組、吉西他濱中劑量組、吉西他濱高劑量組第14天游泳時(shí)間均明顯短于給藥前（P<0.05）。模型對(duì)照組第14天游泳時(shí)間明顯短于第7天（P<0.05）。第14天，黃連湯高劑量組、加味黃連湯高劑量組游泳時(shí)間均明顯長(zhǎng)于吉西他濱高劑量組（P<0.05）。第14天，黃連湯中劑量組、加味黃連湯中劑量組游泳時(shí)間均明顯長(zhǎng)于吉西他濱中劑量組（P<0.05）。見表3。

2.4? 各組小鼠腫瘤抑制率比較

黃連湯中劑量組、黃連湯高劑量組、加味黃連湯中劑量組腫瘤抑制率與模型對(duì)照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。加味黃連湯高劑量、吉西他濱中劑量組、吉西他濱高劑量組腫瘤抑制率均明顯高于模型對(duì)照組（P<0.05，P<0.01）。見表4。

3 討論

基于方藥現(xiàn)代研究分析，本研究團(tuán)隊(duì)擬定的加味黃連湯中的藥物有直接或間接的抗腫瘤效應(yīng)。

君藥黃連內(nèi)含有多種化學(xué)成分，小檗堿是黃連中有效成分的一種，又稱黃連素，可通過調(diào)節(jié)自噬、增敏增效、逆轉(zhuǎn)耐藥、抑制腫瘤細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移、抗血管生成、調(diào)控細(xì)胞周期、抑制細(xì)胞增殖、清除自由基等多種機(jī)制參與抗腫瘤過程[19]。

干姜溫中散寒，與黃連配伍可以顯著抑制葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的結(jié)腸炎癥狀和局部的病理損傷，其作用機(jī)制可能與抑制IL-6/STAT3信號(hào)通路有關(guān)，黃連-干姜可能作為炎性腸病的一種有效預(yù)防藥物，黃連-干姜寒熱相伍，和胃止痛，可用于消化道腫瘤及放化療過程中出現(xiàn)的胃腸道反應(yīng)[20]。

人參大補(bǔ)元?dú)?，尚有抗炎、抗過敏、抗利尿及抗腫瘤等多種作用。人參的藥理活性常因機(jī)體功能狀態(tài)不同而呈雙向作用。研究發(fā)現(xiàn)，人參炔醇在體外能有效地抑制胰腺癌SW1990細(xì)胞的遷移能力，而實(shí)現(xiàn)這一效應(yīng)的主要機(jī)制，可能是通過抑制細(xì)胞的增殖及上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化[21]。

佐藥桂枝的主要化學(xué)成分為桂皮醛等，另外尚含有酚類、有機(jī)酸、多糖、苷類、香豆精等。研究表明，桂枝水提取物桂皮醛對(duì)人胃癌細(xì)胞BCG823細(xì)胞、人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-4355細(xì)胞、人宮頸癌細(xì)胞Hela細(xì)胞株和人肺癌細(xì)胞株A549，均有誘導(dǎo)凋亡及抑制細(xì)胞增殖作用[22]。桂枝提取物主要作用于細(xì)胞周期的G1期，并通過與微管蛋白的作用，導(dǎo)致微管解聚，破壞細(xì)胞的有絲分裂和紡錘體的形成，從而使細(xì)胞有絲分裂停止于G1期，促使細(xì)胞凋亡，達(dá)到抑制細(xì)胞增殖的目的，因此，在分子生物學(xué)水平檢測(cè)桂枝的生物活性，進(jìn)一步闡明桂枝提取物抗腫瘤機(jī)制[23]。

半夏的稀醇和水浸液或其多糖組分、生物堿具有較廣泛的抗腫瘤作用。半夏多糖對(duì)3種瘤株引發(fā)的實(shí)體瘤均有不同程度的抑制作用。其中對(duì)S180抑制作用較好，對(duì)H22、EAC的抑制作用較弱，可能是S180瘤株對(duì)藥物較敏感所致，半夏多糖不良反應(yīng)較小。半夏能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，多糖可能是其誘導(dǎo)凋亡的有效成分之一[24]。

柴胡具有抗腫瘤、保肝、抗菌、解熱等作用[25]，柴胡皂苷是從柴胡中提取的具有多種藥理特征的提取物，柴胡皂苷主要通過以下機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用：誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、分化，抑制腫瘤血管生長(zhǎng)，抑制腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移，逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞多藥耐藥，免疫調(diào)節(jié)作用，調(diào)控腫瘤細(xì)胞自噬、抑制環(huán)氧合酶等。腫瘤的生長(zhǎng)與細(xì)胞凋亡過程被抑制從而延長(zhǎng)已轉(zhuǎn)化的細(xì)胞生存期限有關(guān)，通過藥物改變腫瘤細(xì)胞或其生存環(huán)境，在體內(nèi)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，從而控制腫瘤細(xì)胞的增長(zhǎng)速度，可以達(dá)到治療腫瘤的目的。研究證實(shí)，柴胡皂苷可以通過以上途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[26]。

現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，枳實(shí)具有一定的抗腫瘤作用，黃酮類在枳實(shí)中的含量高達(dá)5%～28%，是枳實(shí)通達(dá)氣滯、消積祛痰的重要基礎(chǔ)物質(zhì)[27]，枳實(shí)的抗腫瘤作用與其黃酮類成分密切相關(guān)。如柚皮苷可以下調(diào)PI3K p110、cyclin D1和bcl-2蛋白表達(dá)，促進(jìn)bax蛋白表達(dá)來抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)[28]。此外還可通過上調(diào)ARHI基因的表達(dá)提高結(jié)腸癌細(xì)胞的抑制率和凋亡率[29]。橙皮苷和柚皮苷可能通過抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子釋放達(dá)到抑制大鼠乳腺癌的作用[30]。而柚皮苷又具備一定的抗突變作用。橙皮苷能抑制結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，并誘導(dǎo)其凋亡，其機(jī)制與抑制AKT的活化相關(guān)[31]。

研究發(fā)現(xiàn)，大棗多肽裂解液提取物對(duì)小鼠MFC實(shí)體腫瘤模型及小鼠S₁₈₀肉瘤模型均有抑制作用，重現(xiàn)性好，且未見有明顯不良反應(yīng)，對(duì)小鼠的MFC的抑制作用較強(qiáng)，而對(duì)小鼠S₁₈₀的抑制作用較弱，大棗多肽裂解液可刺激小鼠脾淋巴細(xì)胞發(fā)生增殖反應(yīng)，提高了小鼠的細(xì)胞免疫活性，對(duì)白細(xì)胞有一定的保護(hù)作用，從而緩解放化療中白細(xì)胞下降等不良反應(yīng)[32]。朱虎虎等[33]研究通過與環(huán)磷酰胺等傳統(tǒng)化療藥物比較，新疆大棗不但可以直接殺傷腫瘤細(xì)胞，而且通過明顯的非特異性免疫系統(tǒng)，使免疫狀態(tài)由低下恢復(fù)到接近于正常，使腫瘤生長(zhǎng)受抑制，從而發(fā)揮其抗癌作用。

使藥甘草藥理作用非常廣泛，甘草酸是甘草的主要成分，分子結(jié)構(gòu)中含1分子甘草次酸和2分子葡萄糖醛酸。體外研究表明，甘草酸可顯著抑制抗原對(duì)T細(xì)胞的過度激活作用及由腫瘤壞死因子-α介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用，從而調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，調(diào)節(jié)T細(xì)胞釋放細(xì)胞因子，使Th1/Th2保持平衡。近年來研究發(fā)現(xiàn)，甘草酸苷從多方面發(fā)揮抗腫瘤作用，如抑制腫瘤細(xì)胞N-乙酰轉(zhuǎn)移酶活性[34]，降低腫瘤細(xì)胞增殖速度[35]，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移[36]。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：高劑量加味黃連湯對(duì)小鼠胰腺癌移植瘤具有良好的抑制作用，尚能維持該模型小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)，避免因使用吉西他濱出現(xiàn)的模型小鼠游泳時(shí)間快速縮短的現(xiàn)象。目前，我國(guó)中醫(yī)藥在抗惡性腫瘤生長(zhǎng)、改善放化療不良反應(yīng)、提高患者生活質(zhì)量方面取得一定療效，但是中醫(yī)藥治療胰腺癌的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)不多，還需要積極開展臨床多中心實(shí)驗(yàn)研究[37]。

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