天然產(chǎn)物治療肝癌的研究進(jìn)展

黃莎， 王玉華， 黃少慧， 高磊， 呂志平

南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，廣東 廣州 510515

肝癌（Liver cancer）是發(fā)生在肝臟的惡性腫瘤，其發(fā)病率居世界第六位，腫瘤相關(guān)死亡率居世界第二位，其中一半以上的新發(fā)病例和死亡病例發(fā)生在中國[1]。肝癌患者中年齡標(biāo)化的5年相對存活率僅為10.1%。超過90%的肝癌是肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）?；熀兔庖咧委熾m然是治療的常規(guī)選擇，但毒副作用大，而天然產(chǎn)物具有更低的全身毒性和更少的副作用，可以為患者提供更好的治療選擇[2-3]。本文整理了近十年來的天然產(chǎn)物治療肝癌的研究進(jìn)展并對其進(jìn)行綜述。

以 “l(fā)iver cancer， hepatocellular carcinoma，natural products，natural compound”為限定詞，在外文期刊上進(jìn)行搜索，根據(jù)主題相關(guān)度，剔除和肝癌及天然化合物無關(guān)的，剩下51條結(jié)果，如表1。整理發(fā)現(xiàn)，多種天然產(chǎn)物可以通過抑制肝癌細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡、抑制侵襲轉(zhuǎn)移、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能和提高腫瘤細(xì)胞抗耐藥性等作用達(dá)到抑制肝癌細(xì)胞的目的。

（續(xù)表1）

1 抑制肝癌細(xì)胞生長增殖

1.1 阻滯細(xì)胞周期

細(xì)胞周期是指細(xì)胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的全過程，分為間期與分裂期兩個階段。間期分為三期、即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）與DNA合成后期（G2期），分裂期又稱為M期。阻滯細(xì)胞周期是抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵性環(huán)節(jié)，細(xì)胞周期存在兩個關(guān)鍵性的轉(zhuǎn)換環(huán)節(jié)G1/S和G2/M。

研究表明，牛蒡子（A.lappa）的主要生物活性成分牛蒡子苷的衍生物3’-去甲基牛蒡子堿以及苦瓜提取物苦瓜凝集素在2.5～5.0 μM范圍內(nèi)，通過阻滯G2/M細(xì)胞周期顯著抑制HepG2肝癌細(xì)胞增殖[4-5]。從冬凌草中分離出來的主要活性化合物之一冬凌草甲素及其衍生物通過將HepG2的細(xì)胞周期阻滯在G1期，抑制HepG2細(xì)胞增殖和抑制腫瘤細(xì)胞集落的形成[6]。從白頭翁乙醇提取物中分離出的白頭翁皂苷A處理肝癌細(xì)胞后，細(xì)胞周期分析表明，很大一部分細(xì)胞被阻滯在G2/M期[7]。從麥冬中分離出的Sprengerinin C通過影響細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白B1（Cyclin B1），細(xì)胞分裂周期基因2（Cell division cycle gene 2，CDC2）和細(xì)胞分裂周期基因25（Cell division cycle gene 25，CDC25）以及增加細(xì)胞周期蛋白依靠性激酶（Cyclin-dependent kinases CDKs）抑制劑P21表達(dá)，誘導(dǎo)HepG2/BEL7402細(xì)胞中的G2/M期阻滯[8]。從黃瑞香中分離出的異戊二烯類黃酮-DaphnegiravoneD通過下調(diào)Hep3B和HepG2細(xì)胞中的細(xì)胞周期蛋白（Cyclin E1），CDK2和CDK4導(dǎo)致G0/G1停滯，從而抑制肝癌細(xì)胞的增殖[9]。

1.2 調(diào)控MAPK信號通路

絲裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase，MAPK）是普遍存在于真核生物中的一類保守的絲氨酸/蘇氨酸類蛋白激酶，MAPK級聯(lián)是信號從細(xì)胞表面?zhèn)鲗?dǎo)到細(xì)胞核內(nèi)部的重要傳遞者，在細(xì)胞增殖，分化，應(yīng)激反應(yīng)和凋亡等過程中起著關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用。

MAPK級聯(lián)由一組三個依次作用的蛋白激酶組成，即MAPK，MAPK激酶（Mitogen-activated protein kinasekinase，MAPKK），以及MAPKK激酶（Mitogenactivated protein kinase kinase kinase，MAPKKK或MEKK）?；贛APK層中的組件定義了四個MAPK級聯(lián)：（1）細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2（Extracellular regulated protein kinases，ERK1/2）級聯(lián)，主要由Raf（通常是B和C異構(gòu)體），絲裂原活化的細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2（Mitogen-activated extracellular signal-regulated kinase，MEK1/2，ERK1/2 和 幾 個MAPK活化蛋白激酶（MAPK-activated protein kinases，MAPKAPKs）組成，主要功能是細(xì)胞增殖和分化；（2）c-Jun-N-末端激酶（JNK）級聯(lián)通常由級聯(lián)的上2層（MAP4K和MAP3K）中的各種激酶組成，這些激酶進(jìn)一步將信號傳遞給MKK4/7，并進(jìn)一步到JNK1-3，該級聯(lián)反應(yīng)主要涉及應(yīng)激反應(yīng)和凋亡；（3）p38MAPKα-δ（p38s）級聯(lián)由幾個MAP3K（通常與JNK級聯(lián)，MKK3/6，p38α-δ和幾個MAPKAPKs可互換）組成，主要參與應(yīng)激反應(yīng)和免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)；（4）ERK5（也稱為BMK1）級聯(lián)由MEKK2/3，MEK5和ERK5組成，參與增殖和應(yīng)激反應(yīng)[10]。

由于MAPK級聯(lián)反應(yīng)是中央細(xì)胞信號傳導(dǎo)級聯(lián)反應(yīng)，其失調(diào)會導(dǎo)致多種疾病，其中癌癥研究最多[11]。齊墩果酸在30～60 μM濃度下抑制了HepG2細(xì)胞增殖，細(xì)胞周期分析發(fā)現(xiàn)，齊墩果酸阻滯細(xì)胞G2/M期，并且WB顯示齊墩果酸抑制腫瘤細(xì)胞P-P38和P-JNK蛋白的表達(dá)[12]。Tsai等[13]利用皮下注射SK-Hep1/luc2建立小鼠肝癌模型，研究厚樸有效成分厚樸酚對腫瘤進(jìn)展的抗癌功效和機(jī)制，厚樸酚治療后，腫瘤大小和腫瘤生長速度均得到顯著抑制，減少了P-ERK，核因子κB（Nuclear factor kappa-B，NF-κB）蛋白的表達(dá)。王宣斌等[14]發(fā)現(xiàn)黃連有效成分黃連素抑制SMMC-7721和Bel-7402這兩種肝癌細(xì)胞增殖，篩選了幾個炎癥相關(guān)的上游信號傳導(dǎo)途徑，包括P38 MAPK，Erk1/2，Src和JNK/應(yīng)激活化蛋白激酶（Stress-activated protein kinase，SAPK）。在兩種肝癌細(xì)胞中均發(fā)現(xiàn)小堿顯著抑制p38絲裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）和Erk1/2途徑的磷酸化。李彬彬等[15]發(fā)現(xiàn)與L02細(xì)胞相比，在HepG2和Hep3B細(xì)胞中觀察到總的和磷酸化的核糖體蛋白S6激酶A3（Ribosomal protein S6 kinase A3，RPS6KA3/RSK2）蛋白水平升高，過表達(dá)的RSK2能顯著促進(jìn)L02細(xì)胞的增殖。中藥補(bǔ)骨脂中的查耳酮成分-補(bǔ)骨脂乙素直接與ERK1/2和RSK2結(jié)合，并劑量依賴性地阻斷了肝癌細(xì)胞中RSK2激酶的活性，用補(bǔ)骨脂乙素處理HepG2或Hep3B細(xì)胞可顯著減弱表皮生長因子誘導(dǎo)的RSK2磷酸化，并降低其下游底物的激活，包括環(huán)磷酸腺苷（Cyclic adenosine monophosphate，cAMP）反應(yīng)元件結(jié)合蛋白，激活轉(zhuǎn)錄因子1（Transcription factor 1，TF1），組蛋白H3（Histone 3，H3），從而抑制肝癌細(xì)胞增殖。

1.3 抑制PI3K/AKT/mTOR途徑

磷脂酰肌醇-3-激酶（Phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（Protein kinase B，PKB/AKT）/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）通路在調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡、存活、代謝和分化中起著關(guān)鍵作用，由PI3K及其下游分子PKB/AKT兩部分組成[16]。PI3K/AKT/mTOR信號通路參與細(xì)胞周期過程，并促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。Ras癌基因、酪氨酸激酶或G蛋白偶聯(lián)受體激活PIK3，激活的PI3K誘導(dǎo)產(chǎn)生磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸（phosphatidylinositol triphosphate，PIP3），PIP3作為第二信使，激活磷脂酰肌醇依賴性激酶1磷脂酰肌醇依賴性激酶1（Phosphoinositide dependent kinase，PDK1）和AKT，激活的AKT直接磷酸化，從而激活了mTOR。然后，mTOR促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白D1與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶的結(jié)合，從而啟動細(xì)胞分裂。細(xì)胞周期蛋白D1的高水平表達(dá)可以誘導(dǎo)細(xì)胞周期從G1期過渡到S期，縮短細(xì)胞周期并加速癌癥的發(fā)展[17]。

牛蒡子生物活性成分牛蒡子堿已被證明抑制活化的肝星狀細(xì)胞中的PI3K/AKT/FOXO3α通路，導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期[18]。并且牛蒡子堿降低了肝癌細(xì)胞中AKT的磷酸化，在肝癌細(xì)胞中過表達(dá)組成性激活的AKT逆轉(zhuǎn)了牛蒡子堿的促凋亡活性。相反，聯(lián)合使用PI3K抑制劑和牛蒡子堿顯著增加肝癌細(xì)胞的凋亡[19]。

黃芩有效成分黃芩素在體外對HCC Bel-7402細(xì)胞系（一種內(nèi)源表達(dá)野生型p53的HCC細(xì)胞系）的抗增殖作用，結(jié)果表明黃芩素處理后的正常肝細(xì)胞系L02幾乎不受影響，用80μM黃芩素處理Bel-7402細(xì)胞24h后，細(xì)胞增殖抑制率約為70%，處理48 h后可達(dá)到約80%。細(xì)胞周期分析發(fā)現(xiàn)黃芩素主要通過誘導(dǎo)S和G2/M期的細(xì)胞周期停滯來減弱HCC細(xì)胞系Bel-7402的增殖。進(jìn)一步蛋白質(zhì)印跡法檢測了0、40和80μM黃芩素處理24h的Bel-7402細(xì)胞中Thr308和Ser473 AKT的磷酸化水平，發(fā)現(xiàn)黃芩素可顯著降低Thr308和Ser473的AKT磷酸化水平，表明黃芩素可以抑制PI3K/AKT途徑來抑制肝癌細(xì)胞增殖[20]。

中藥大薊活性成分-柳穿魚黃素具有具有抗氧化、消炎，抗腫瘤的作用，研究表明10μM柳穿魚黃素處理SMMC7721和PLC5系HCC細(xì)胞，可顯著抑制SMMC7721和PLC5細(xì)胞的增殖以及遷移和侵襲能力。同時，柳穿魚黃素還在體內(nèi)顯著抑制了HCC腫瘤的生長。進(jìn)一步實(shí)驗表明柳穿魚黃素抑制PI3K/AKT/mTOR/ERK信號通路，從而抑制SMMC7721和PLC5細(xì)胞增殖。此外，柳穿魚黃素可顯著誘導(dǎo)SMMC7721和PLC5細(xì)胞的細(xì)胞凋亡和阻滯G2/M期[21]。

1.4 通過LRP6/Wnt途徑

經(jīng)典的Wnt/β-catenin信號通路（Canonical Wnt/β-catenin pathway）在HCC中異常激活，Wnt途徑的激活是通過Wnt家族蛋白（例如，Wnt3a）與細(xì)胞表面受體低密度脂蛋白受體相關(guān)的蛋白5（LDL-receptor-related protein，LRP5）和/或 LRP6的結(jié)合來實(shí)現(xiàn)的。LRP6已被確定為多種肝臟疾?。òǚ蔷凭灾靖渭膊『透咧Y）的新型治療靶標(biāo)，而另一項研究還發(fā)現(xiàn)LRP6的上調(diào)與增強(qiáng)肝癌細(xì)胞增殖，遷移和侵襲有關(guān)[22]。

研究表明在細(xì)胞模型和異種移植/原位小鼠模型中，來源于大蒜的S-烯丙基巰基半胱氨酸均能抑制細(xì)胞增殖和腫瘤發(fā)生，同時誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞凋亡而不會影響正常肝細(xì)胞。進(jìn)一步實(shí)驗表明S-烯丙基巰基半胱氨酸與細(xì)胞膜上的Wnt途徑共受體LRP6直接相互作用，抑制腫瘤生長[23]。

1.5 靶向鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶Ⅱ

靶向鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶Ⅱ（Calmodulin dependent protein kinase Ⅱ，CaMK Ⅱ）是一種多功能的絲氨酸/蘇氨酸激酶，可調(diào)節(jié)癌癥中的許多關(guān)鍵生物學(xué)過程，包括細(xì)胞分裂，增殖和分化[24]。CaMKⅡ具有四個亞型，每個亞型由不同的基因編碼，即CaMKⅡα，β，γ和δ，CaMKⅡ可以促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖而在癌癥研究中興起。

通過藥物結(jié)構(gòu)建模篩選配體-蛋白質(zhì)結(jié)合，確定CaMKⅡδ為中藥防己有效成分-漢防己甲素潛在的結(jié)合靶點(diǎn)。為了驗證漢防己甲素與CaMKⅡδ的結(jié)合，使用MODELLER對CaMKⅡδ與鈣調(diào)蛋白的復(fù)合物的X射線晶體進(jìn)行了建模。這些結(jié)構(gòu)模型表明漢防己甲素作為一種競爭性抑制劑與CaMKⅡδ的ATP結(jié)合袋結(jié)合，從而降低CaMKⅡδ激酶的活性，或者可能與CaM蛋白的CaMKⅡδ結(jié)合界面相互作用而阻斷其活性。漢防己甲素結(jié)合導(dǎo)致CaMKⅡδ鎖定在自動抑制狀態(tài)，從而抑制T286磷酸化，抑制肝癌細(xì)胞的增殖[25]。

2 誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡

2.1 誘導(dǎo)線粒體功能障礙

誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡是許多化合物最重要的抗癌機(jī)制之一，已有報道線粒體在腫瘤細(xì)胞中活性氧（Reactive oxygen species，ROS）生成和凋亡信號傳導(dǎo)中的關(guān)鍵作用。正常細(xì)胞和癌細(xì)胞中線粒體之間的結(jié)構(gòu)和功能差異，癌細(xì)胞與正常細(xì)胞相比更容易受到氧化應(yīng)激的影響[26]。

Seydi等[27]使用二乙基亞硝胺（Diethylnitrosamine，DEN）誘導(dǎo)大鼠肝癌，差速離心從肝肝細(xì)胞分離線粒體，分析了紫葳科植物木蝴蝶中提取的一種具有廣泛藥理活性的黃酮類化合物-白楊素對從肝細(xì)胞癌大鼠模型獲得的肝線粒體的細(xì)胞毒性作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)10～40 μM白楊素抑制肝癌大鼠肝細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶活性和增加ROS水平，此外，白楊素處理后促進(jìn)了肝細(xì)胞線粒體中MMP的降解，線粒體腫脹和線粒體中細(xì)胞色素c的釋放。

靈芝中分離出的新型天然三萜GL22，GL22在體外顯著抑制肝癌細(xì)胞系Huh7.5的生長，在體內(nèi)抑制Huh7.5衍生的腫瘤異種移植物的生長。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，GL22使得Huh7.5細(xì)胞脂肪酸固定化和線粒體脂質(zhì)心磷脂的喪失，從而誘導(dǎo)線粒體功能障礙和細(xì)胞死亡[28]。從藤黃樹皮中分離鑒定出的氧雜蒽酮處理人肝癌細(xì)胞HepG2后，肝癌細(xì)胞增殖受到抑制，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)不同濃度的氧雜蒽酮（3.125，6.25，12.5，25 μM）處理HepG2 12h后，裂解的半胱氨酸蛋白酶Caspase-8，Caspase-9和Caspase-3的水平明顯降低，促凋亡基因Bax的表達(dá)顯著增加，并且凋亡抑制基因BcL-2的表達(dá)顯著降低，從而表明氧雜蒽酮通過線粒體途徑誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞凋亡[29]。割舌樹提取的檸檬苦素類化合物-Walsuronoid B通過上調(diào)ROS和p53水平，促進(jìn)G2/M期阻滯以及線粒體和溶酶體凋亡[30]。

2.2 激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（Endoplasmic reticulum，ER）應(yīng)激是由ER功能擾動觸發(fā)的，稱為未折疊蛋白反應(yīng)（Unfolded protein response，UPR）[31]。真核細(xì)胞對ER應(yīng)激有三種信號傳導(dǎo)途徑，分別由ER應(yīng)激傳感器蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（Protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase，PERK），肌醇酶1（Inositol-requiring enzyme 1，IRE1）和轉(zhuǎn)錄激活因子 6（Activating Transcription Factor 6， ATF6）啟動[32]。PERK磷酸化的真核翻譯起始因子2α（Eukaryotic initiation factor2α， EIF2α）降低翻譯起始的總體速率，并激活下游轉(zhuǎn)錄因子C/EBP同源蛋白（C/EBP homologous protein，CHOP），CHOP 參與ER應(yīng)激導(dǎo)致的細(xì)胞死亡，啟動細(xì)胞凋亡的線粒體途徑，最終導(dǎo)致Caspase-9和Caspase-3活化[33]。

金雞納樹皮中的天然化合物辛可寧可激活ER應(yīng)激誘導(dǎo)的人肝癌細(xì)胞凋亡，實(shí)驗室研究中使用了五個肝癌細(xì)胞系，包括Bel-7402，MHCC97H，HepG2，Hep3B和SMCC7721，通過MTT、流式細(xì)胞術(shù)、蛋白免疫印跡等方法測定評估辛可寧對這些肝癌細(xì)胞系的抗增殖作用，結(jié)果表明辛可寧以劑量依賴性方式抑制肝癌細(xì)胞的增殖并促進(jìn)其凋亡，同時也促進(jìn)肝癌細(xì)胞中Caspase-3的活化和多聚ADP-核糖聚合酶1（Poly ADP-ribose polymerase 1，PARP1）的裂解，此外，辛可寧通過上調(diào)葡糖調(diào)節(jié)蛋78（glucose-regulated protein 78，GRP78）并促進(jìn)PERK和EIF2α磷酸化來激活ER應(yīng)激反應(yīng)[34]。此外，胡椒植物中分離出的蓽茇酰胺對癌細(xì)胞具有高度選擇性的有效細(xì)胞毒性，蓽茇酰胺選擇性升高HCC細(xì)胞中的活性氧，通過ER-MAPKs-CHOP信號通路特異性抑制了HCC細(xì)胞的遷移/侵襲[35]。

2.3 Caspase-9和Caspase-3級聯(lián)途徑

從胡桃根皮的乙醇提取物分離出的2-甲氧基胡桃酮處理HepG2細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)HepG2出現(xiàn)細(xì)胞皺縮、膜起泡、核固縮和凋亡小體形成。碘化丙啶染色細(xì)胞周期分析顯示，2-甲氧基胡桃酮誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞周期阻滯于S期，凋亡相關(guān)蛋白的蛋白免疫印跡分析顯示，2-甲氧基胡桃酮通過釋放線粒體細(xì)胞色素C依賴激活Caspase-9和Caspase-3級聯(lián)通路誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡[36]。

3 抑制肝癌細(xì)胞遷移和侵襲

3.1 抑制基質(zhì)金屬蛋白酶MMPs表達(dá)

基質(zhì)金屬蛋白酶9（Matrix metalloproteinase，MMP-9）選擇性誘導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)（Extracellular matrix，ECM）重塑，從而促進(jìn)ECM中細(xì)胞因子和生長因子的表達(dá)。它還通過切割細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)黏附分子來加速腫瘤的侵襲和遷移。MMP-9活性的抑制可減少癌癥進(jìn)展過程中ECM的降解并減少細(xì)胞遷移，因此，靶向MMP-9活性可能為治療HCC提供有希望的治療方法[37]。

研究發(fā)現(xiàn)豆科植物苦參的一種生物堿-苦參堿可以顯著抑制癌細(xì)胞的侵襲和遷移，明膠酶譜分析和對接分析表明，抑制MMP-9的活性可能與苦參堿-MMP9的結(jié)合相互作用有關(guān)；此外，進(jìn)一步基于分子對接的方法來探索苦參堿在肝癌中抗轉(zhuǎn)移作用的機(jī)制，通過結(jié)合表面等離子共振（Surface plasmon resonance，SPR）生物傳感器分析和定點(diǎn)突變研究，他們證實(shí)了MMP9上的苦參堿結(jié)合位點(diǎn)，在MMP9中的Pro415和Arg424殘基均已突變的同時，已檢測到MMP9-苦參堿相互作用的完全消除，可見Pro415，Arg424殘基是潛在的苦參堿結(jié)合位點(diǎn)，可抑制MMP9活性并進(jìn)一步抑制HCC轉(zhuǎn)移[38]。從馬齒莧（馬齒莧科）中分離出來的新型腦苷脂化合物-馬齒莧腦苷脂A能抑制HCCLM3細(xì)胞的粘附、侵襲和遷移，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)馬齒莧腦苷脂A是通過調(diào)節(jié)腫瘤轉(zhuǎn)移基因1（Metastasis associated gene 1，MTA1）和腫瘤轉(zhuǎn)移抑制因子23（Nonmetastasis 23，NM23）來增加金屬蛋白酶組織抑制劑-2（Tissue inhibitors metalloproteinases，TIMP-2）的表達(dá)，并降低MMP-2，Ras同源基因家族成員A（Ras honolog family member A，RhoA），RhoC和Rac1/CDC42的表達(dá)，從而抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[39]。

3.2 抑制TGF-β1誘導(dǎo)的人肝癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化

上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-mesenchymal transition，EMT）定義為上皮細(xì)胞失去上皮表型而獲得間充質(zhì)特征（包括形態(tài)，細(xì)胞結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能）的過程，EMT通常發(fā)生在胚胎發(fā)育的關(guān)鍵步驟以及成人的組織修復(fù)和重塑中。然而，EMT程序的異常激活在腫瘤轉(zhuǎn)移中起重要作用，癌癥在EMT過程中發(fā)生了三個主要變化：第一，上皮細(xì)胞失去細(xì)胞間粘附力，而E-鈣黏蛋白（E-cadherin）成為上皮標(biāo)記。第二，他們獲得波形蛋白，間質(zhì)標(biāo)記物。第三，他們在細(xì)胞骨架重排，使他們能夠獲得間充質(zhì)特征，例如細(xì)胞遷移和侵襲行為。生長轉(zhuǎn)化因子 β1（transforming growth factor-β1，TGFβ1）是一種EMT刺激物，由上皮細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞，巨噬細(xì)胞和成纖維細(xì)胞產(chǎn)生，并與上皮下纖維化，氣道平滑肌重塑，黏液產(chǎn)生增加和微血管改變有關(guān)。TGF-β1是EMT的主調(diào)節(jié)器，它是負(fù)責(zé)極化上皮癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)化負(fù)責(zé)腫瘤侵襲，高度能動間充質(zhì)表型的血管內(nèi)，外滲和轉(zhuǎn)移性傳播。

研究表明姜油酮主要存在于干姜中，也由姜酚或姜烯酚的熱降解產(chǎn)生，姜油酮顯著增加上皮標(biāo)記物E-鈣黏蛋白的表達(dá)，并抑制Snail上調(diào)和間質(zhì)標(biāo)記物的表達(dá)。此外，研究發(fā)現(xiàn)姜油酮及其衍生物顯著抑制TGF-β1調(diào)節(jié)的MMP-2/9和受體調(diào)控的Smad（Receptor regulated Smad2/3，Smad2/3）的激活，并且抑制了TGF-β1誘導(dǎo)的EMT中NF-κB的核易位，ERK1/2，MAPK/AP1信號通路的激活[40]。

3.3 抑制VEGF信號通路

腫瘤血管生成是腫瘤生長的先決條件，并通過提供營養(yǎng)和氧氣在迅速擴(kuò)大的腫瘤細(xì)胞群中發(fā)揮重要作用，一旦腫瘤形成血管，腫瘤的生長就會大大加速。因此，靶向血管生成是治療實(shí)體瘤的一種有前途的方法。血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）在腫瘤血管生成中起關(guān)鍵作用。研究表明存在于麥冬中的新型化合物-Sprengerinin C處理HUVEC細(xì)胞24 h后，顯著抑制VEGF誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，侵襲和管形成，進(jìn)一步實(shí)驗證明Sprengerinin C通過PI3K/Akt/mTOR和P38/MAPK途徑抑制VEGF誘導(dǎo)的MMP2/9表達(dá)水平[8]。

4 免疫調(diào)節(jié)

4.1 調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答

免疫系統(tǒng)在保護(hù)宿主抵抗腫瘤中發(fā)揮作用，肝臟是具有免疫反應(yīng)能力的獨(dú)特微環(huán)境。目前研究表明激活免疫應(yīng)答具有抗腫瘤的作用。

將H22細(xì)胞接種到小鼠腹腔后7天，從荷瘤小鼠中提取腹水，并用PBS稀釋至1.5×107/mL的濃度，然后將0.2mL細(xì)胞懸浮液皮下接種到每只小鼠腋窩的右側(cè)建立肝癌動物模型，每天通過管飼法給予唇形科植物迷迭香中分離得到的一種水溶性的天然酚酸類化合物-迷迭香酸（75、150和300 mg/kg），持續(xù)10天。發(fā)現(xiàn)迷迭香酸在中低劑量時可以降低CD8+的百分比T淋巴細(xì)胞，在高劑量時增加CD4+/CD8+比例，表明高劑量的迷迭香酸治療可以調(diào)節(jié)整個微環(huán)境中的免疫系統(tǒng)，并且迷迭香酸抑制異位移植腫瘤中白介素-6（interleukin-6，IL-6），白介素-10（interleukin-10，IL-10）和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）的表達(dá)[41]。

4.2 增強(qiáng)免疫功能

免疫療法是一種相對新穎的腫瘤療法，由于病毒感染或肝細(xì)胞癌變過程中的慢性炎癥反應(yīng)誘導(dǎo)的許多免疫耐受因子積累，免疫療法主要針對宿主抗HCC免疫，提升免疫能力從而使宿主具有更積極有效的反攻。

DEN誘導(dǎo)的肝癌大鼠口服從刺參中分離的由氨基己糖、己糖醛酸、巖藻糖組成的多糖硫酸酯-刺參黏多糖（劑量分別為17.5 mg/kg，35 mg/kg和70 mg/kg，每周5天/周通過口服管飼），發(fā)現(xiàn)刺參黏多糖可減少腫瘤結(jié)節(jié)的數(shù)量和平均體積，降低血清α-甲胎蛋白水平和肝臟中的細(xì)胞核抗原表達(dá)以及增加P21表達(dá)來顯著抑制DEN誘導(dǎo)的肝癌。此外，刺參黏多糖給藥還改善了脾臟和胸腺的功能指標(biāo)，增強(qiáng)了巨噬細(xì)胞的吞噬作用和自然殺傷細(xì)胞（natural killer cell，NK）細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤殺傷活性，CD3+和CD4+T淋巴細(xì)胞水平顯著恢復(fù)，并且提高CD4+/CD8+細(xì)胞比率[42]。

5 抗耐藥性

口服多激酶抑制劑瑞戈非尼可以改善在索拉非尼一線治療期間疾病進(jìn)展的肝癌患者的總體生存率。但是，由于藥物毒性、耐藥性和隨后疾病復(fù)發(fā)引起的副作用，仍然是肝癌管理中的問題。有研究表明，基于天然化合物的聯(lián)合治療可改善全身藥物的作用并降低其毒性[43]。

在HepG2細(xì)胞中，單獨(dú)使用100 μM綠原酸或0.1 μM瑞戈非尼僅引起較小的作用，但在聯(lián)合治療中發(fā)揮協(xié)同抑制作用。另外，綠原酸能增強(qiáng)瑞戈非尼對細(xì)胞周期進(jìn)程的抑制作用和促進(jìn)增強(qiáng)瑞戈非尼在肝癌細(xì)胞中的凋亡作用，并且增強(qiáng)瑞戈非尼對肝癌細(xì)胞遷移的抑制作用[44]。

6 表觀遺傳修飾

表觀遺傳失調(diào)是癌癥的標(biāo)志，在癌癥發(fā)展過程中起著至關(guān)重要的作用，然而，表觀遺傳變化是可逆的，并可能成為癌癥的標(biāo)志物[45]。靶向表觀遺傳修飾是最有效的癌癥治療策略之一，與常規(guī)基因療法不同，表觀遺傳靶向療法具有在不改變其DNA序列的情況下影響癌細(xì)胞中基因表達(dá)的能力[46]。

研究表明從十字花科菜中發(fā)現(xiàn)的具有生物活性成分-蘿卜硫素是有效的抗癌劑，它會誘導(dǎo)DNA損傷，抑制腫瘤有絲分裂，從而抑制HepG2細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡，其結(jié)果顯示了DNA損傷反應(yīng)和細(xì)胞周期檢查點(diǎn)基因的上調(diào)。此外，蘿卜硫素還通過抑制組蛋白脫乙?；赴l(fā)揮表觀遺傳調(diào)控作用，推測蘿卜硫素可能通過其結(jié)合位點(diǎn)基序的甲基化影響致癌轉(zhuǎn)錄因子的活性[47]。