經(jīng)方桂枝茯苓丸“異病同治”任脈癥瘕類疾病的網(wǎng)絡(luò)藥理學研究＊

石雅馨，王 新，張乘源，張緒丹，劉 雙，王雁飛，師 偉

（1.山東中醫(yī)藥大學中醫(yī)學院 濟南250014；2.山東中醫(yī)藥大學第一臨床醫(yī)學院 濟南250014；3.山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院 濟南250014）

子宮腺肌?。╝denomyosis，AMs）是指子宮肌層內(nèi)出現(xiàn)具有活性的子宮內(nèi)膜組織（腺體和間質(zhì)）的一類雌激素依賴性的疾病[1-2]。甲狀腺結(jié)節(jié)（thyroid nodule，TN）是指甲狀腺局部細胞異常增生所引起的組織結(jié)構(gòu)團塊狀病變[3]，一般認為其發(fā)病多與碘攝入量、自身免疫因素、激素水平密切相關(guān)[4]，且有良惡性之分。乳腺結(jié)節(jié)（breast nodule，BN）目前為止尚無準確的定義，臨床主要分為乳腺良性結(jié)節(jié)與乳腺惡性腫瘤，多通過超聲影像學檢測發(fā)現(xiàn)[5]。此三種疾病雖分屬不同器官的不同疾病，但均受下丘腦-垂體-腺體軸的調(diào)控，為內(nèi)分泌的靶器官。西醫(yī)發(fā)病機制為內(nèi)分泌紊亂、雌激素水平過高等因素導致腺體局部細胞異常增生而致組織結(jié)構(gòu)紊亂[6-7]。且有研究證明，甲狀腺、乳腺、子宮疾病發(fā)病過程有明確相關(guān)性[8]。目前西醫(yī)治療較單一且療效差強人意，手術(shù)治療是唯一的根治方法。

從中醫(yī)角度而言，此三種病雖分屬“癥瘕”、“乳癖”、“癭瘤”等不同疾病，其病異而本同也，如《圣濟總錄》云“癥瘕結(jié)癖者，積聚之異名也。證狀不一，原其根本，大略相類”。根據(jù)經(jīng)絡(luò)循行部位及疾病病機特點，可將其歸為任脈癥瘕類病。任脈起于胞宮，循腹由下而上貫穿子宮、甲狀腺、乳腺各器官。任脈瘀滯，互結(jié)于經(jīng)絡(luò)，積而成癥，聚而成瘕則易產(chǎn)生癥瘕類疾病。中醫(yī)辨證論治對此類疾病治療有較好的成效，故從“異病同治”角度出發(fā)，將其歸為一類，運用經(jīng)方桂枝茯苓丸進行論治可為臨床提供新思路。

桂枝茯苓丸是《金匱要略》經(jīng)典名方，有通脈化癥、緩消瘀結(jié)的作用。文獻研究發(fā)現(xiàn)，桂枝茯苓丸可緩解子宮腺肌病患者痛經(jīng)程度，降低雌激素水平[9]，亦可發(fā)揮調(diào)節(jié)內(nèi)分泌及雌激素等作用治療甲狀腺結(jié)節(jié)和乳腺結(jié)節(jié)[10]。本課題組前期對子宮腺肌病病機與治療已進行深入挖掘與研究，在臨床及實驗方面證明桂枝茯苓丸治療子宮腺肌病的有效性，數(shù)據(jù)挖掘結(jié)果顯示，赤芍、桃仁、茯苓在子宮腺肌病治療中出現(xiàn)頻次最高[11]，動物實驗中已被證實有治療效果。且已有研究證明子宮、乳腺、甲狀腺發(fā)病有明顯相關(guān)性，為了進一步佐證實驗的準確性，拓寬課題研究思路，探索疾病之間共同機制及桂枝茯苓丸在“異病同治”過程中所發(fā)揮的分子生物學作用，故進行網(wǎng)絡(luò)藥理學研究，以期為后續(xù)實驗驗證提供初步證據(jù)與發(fā)掘?qū)颉?/p>

1 方法

1.1 桂枝茯苓丸有效作用成分的篩選及靶點的獲取

借助中藥系統(tǒng)藥理學數(shù)據(jù)庫和分析平臺（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP，https://tcmspw.com/tcmsp.php）對桂枝茯苓丸中5味中藥桂枝、茯苓、牡丹皮、赤芍、桃仁的化學成分進行篩選，并根據(jù)成分藥物代謝動力學參數(shù)進行選擇，以口服生物利用度（Oral Bioavailability，OB）≥30%和 類 藥 性（Drug-Likeness，DL）≥0.18為標準，初步獲得有效作用成分及蛋白質(zhì)靶點。之后通過Uniprot數(shù)據(jù)庫（https://www.uniprot.org）對相關(guān)靶點名稱進行規(guī)范。

1.2 有效成分-疾病共有靶點的獲取

在GenCards數(shù)據(jù)庫（https://www.genecards.org）、DisGeNET數(shù)據(jù)庫（http://www.disgenet.org)、DrugBank（https://www.drugbank.com）數(shù)據(jù)庫中以“adenomyosis”、“thyroid nodule”、“breast nodule”為關(guān)鍵詞獲取AMs、TN、BN相關(guān)疾病靶點，并通過韋恩圖獲取中藥在任脈癥瘕類病“異病同治”過程中的所存在的共有數(shù)據(jù)庫。

1.3 復方網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析

將桂枝茯苓丸方中中藥、有效成分、靶點上傳至Cytoscape3.7.2，利用Merge功能將其合并，最終繪制成復方網(wǎng)絡(luò)圖。

將有效成分-疾病共有靶點上傳至STRING數(shù)據(jù)庫（https://string-db.org/），物種選擇為“人類”，下載靶點蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖及蛋白互作網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)文件，并導入Cytoscape3.7.2進行蛋白質(zhì)間相互作用分析（Protein-Protein Interaction，PPI）。

1.4 生物學及通路富集分析

運用DAVID（https://david.ncifcrf.gov/）數(shù)據(jù)庫對共有靶點進行基因本體功能富集（Gene Ontology，GO）與京都基因與基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomics，KEGG）通路富集分析，并對結(jié)果根據(jù)P值進行排序，以備后續(xù)處理。

為了深入研究通路關(guān)鍵靶標在桂枝茯苓丸“異病同治”任脈癥瘕類疾病中發(fā)揮的作用，選取通路關(guān)鍵靶 標，通 過BioGPS（http://biogps.org/）、Genecards、DisGENET數(shù)據(jù)庫獲取相關(guān)組織、亞細胞分布及蛋白歸屬信息。

1.5 分子對接

選取桂枝茯苓丸中度值（Degree）排名前十的有效成分與Degree值≥中位數(shù)的關(guān)鍵靶點。從TCMSP中下載配體的mol2結(jié)構(gòu)，經(jīng)Autodock Tools處理后，保存為pdbqt結(jié)構(gòu)；從RCSB中獲取受體3D結(jié)構(gòu)，經(jīng)Discovery Studio去除水分子、分離配體、受體后，利用Autodock Tools進行加氫，并計算結(jié)合位點，將受體另存為pdbqt文件。通過Autodock Vina進行對接模擬運算（PDB ID及對接相關(guān)參數(shù)見表1），根據(jù)對接后得到的配體-受體最低結(jié)合能，構(gòu)建熱圖并分析相關(guān)結(jié)合位點及氨基酸殘基相互作用力。

表1 受體蛋白PDB ID及對接相關(guān)參數(shù)表

2 結(jié)果

2.1 桂枝茯苓丸有效作用成分的篩選及靶點的獲取

初步提取，桂枝茯苓丸有效成分共494個，其中桂枝220個，茯苓34個，赤芍119個，牡丹皮55個，桃仁66個。經(jīng)過篩選后，共獲得化合物有效成分85個，相關(guān)靶點102個。對有效成分進行歸納梳理發(fā)現(xiàn)，常春藤素（hederagenin）為茯苓、桃仁共有活性成分，(+)-兒茶素[(+)-catechin]、谷甾醇（sitosterol）為桂枝、牡丹皮、赤芍的共有活性成分，分布范圍廣泛，且出現(xiàn)頻次較高。預測其可能對任脈癥瘕類病的治療發(fā)揮較大的作用，可對下一步深入細化研究提供方向。

2.2 有效成分-疾病共有靶點的獲取

通過對AMs、TN、BN的疾病基因進行檢索，分別獲得AMs疾病靶點291個，TN靶點2564個，BN靶點2828個，將上述疾病靶點與桂枝茯苓丸102個作用靶點取交集并構(gòu)建韋恩圖，最終獲取桂枝茯苓丸治療AMs、TN、BN的共有靶點為24個（圖1）。

圖1 桂枝茯苓丸治療子宮腺肌病、甲狀腺結(jié)節(jié)、乳腺結(jié)節(jié)共有靶點韋恩圖

2.3 復方網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分

利用Cytoscape3.7.2軟件對桂枝茯苓丸5味中藥，有效成分及其靶點進行處理，構(gòu)建桂枝茯苓丸復方網(wǎng)絡(luò)圖（圖2）。151個節(jié)點通過386條邊相連接，其中，藍色節(jié)點代表5味中藥，綠色節(jié)點代表作用靶點，其余不同顏色代表不同藥物的有效成分?？梢钥闯?，桂枝茯苓丸有效成分及作用靶點在分子生物學層面存在多層次、多維度交叉對應關(guān)系，構(gòu)成一個復雜網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)。其中桂枝茯苓丸中關(guān)鍵有效成分黃芩素（baicalein，degree=38）、鞣花酸（ellagic acid，degree=21）、β-谷甾醇（beta-sitosterol，degree=36）、(+)-兒茶素[(+)-catechin，degree=15]、豆 甾 醇（Stigmasterol，degree=28）等主要通過環(huán)加氧酶2（PTGS2，degree=20）、雌激素受體（ESR1，degree=6）等共有關(guān)鍵靶點對AMs、TN、BN發(fā)揮“異病同治”作用。

圖2 桂枝茯苓丸中藥-有效成分-靶點網(wǎng)絡(luò)圖

通過STRING和Cytoscape3.7.2構(gòu)建共有靶點PPI網(wǎng)絡(luò)圖（圖3A）。由24個節(jié)點，175條邊組成，平均節(jié)點度值（average node degree）是14.6，平均中心聚類系數(shù)（avg.local clustering coefficient）為0.815，中位 數(shù)（median）為17。篩選degree≥17的靶點有12個（圖3B），分別為：TP53、AKT1、VEGFA、IL6、MMP9、TNF、PTGS2、MMP2、CXCL8、ESR1、TGFB1、HIF1A。由此分析，這12個靶點為此網(wǎng)絡(luò)核心靶點，可能在桂枝茯苓丸干預AMs、TN、BN過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

圖3 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖及核心靶點條形圖

2.4 生物學及通路富集分析

運用DAVID數(shù)據(jù)庫對共有靶點進行GO富集分析，主要包含生物過程（Biological Process，BP）、細胞組成（Cellular Component，CC）、分 子 功 能（MolecularFunction，MF），并按P值進行排序（圖4）。結(jié)果顯示，桂枝茯苓丸治療AMs、TN、BN過程中，主要集中在凋亡過程的正調(diào)控、炎癥反應、機體免疫反應及平滑肌細胞增殖的正向調(diào)節(jié)等生物過程中；主要包含細胞、RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄因子復合體等細胞組成。此外，轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)DNA結(jié)合、酶結(jié)合、類固醇激素受體活性等分子功能亦參與其中。

圖4 桂枝茯苓丸治療子宮腺肌病、甲狀腺結(jié)節(jié)、乳腺結(jié)節(jié)GO富集分析

為了研究桂枝茯苓丸在干預AMs、TN、BN過程中通路發(fā)揮的關(guān)鍵作用，故進行KEGG分析。結(jié)果顯示，72條信號通路參與桂枝茯苓丸對任脈癥瘕類疾病的調(diào)控中，根據(jù)P值大小，選取前20位信號通路進行可視化分析（圖5）。結(jié)果顯示，Toll樣受體信號通路（Toll-like receptor signaling pathway）、TNF信號通路（TNF signaling pathway）、雌激素信號通路（Estrogen signaling pathway）等與桂枝茯苓丸治療AMs、TN、BN 的過程密切相關(guān)。

圖5 KEGG信號通路氣泡圖（TOP20）

2.5 通路關(guān)鍵靶標的獲取及其組織分布、亞細胞分布、蛋白歸屬信息

為了深入挖掘各通路中的關(guān)鍵靶標及相關(guān)分布信息，根據(jù)P值對其進行排序，保留前6條信號通路，即腫瘤信號通路（Pathways in cancer）、蛋白聚糖腫瘤（Proteoglycans in cancer）信號通路、內(nèi)分泌抵抗（Endocrine resistance）等信號通路。通過STRING數(shù)據(jù)庫及Cytoscape3.7.2對此6條通路的靶點進行分析，選取度值≥中位數(shù)且出現(xiàn)次數(shù)≥平均數(shù)的靶點為通路關(guān)鍵靶標，共8個（表2）。結(jié)果顯示，這些靶標可通過調(diào)控不同的信號通路對AMs、TN、BN發(fā)揮“異病同治”的作用。

表2 通路關(guān)鍵靶標

將上述關(guān)鍵靶標上傳至BioGPS數(shù)據(jù)庫獲取其在體內(nèi)組織分布情況，根據(jù)基因表達情況保留前5位組織分布信息。利用Cytoscape3.7.2進行分析，獲取關(guān)鍵靶標-組織分布信息網(wǎng)絡(luò)圖（圖6-A），并按照度值對其進行排序。其中，紅色V型代表關(guān)鍵靶標，綠色橢圓形代表組織分布，其中平滑?。⊿mooth Muscle，degree=2）、721-B淋巴細胞（721-B-lymphoblasts，degree=3）、CD33+髓細胞（CD33+Myeloid，degree=3）等器官組織在桂枝茯苓丸“異病同治”中意義重大，分析發(fā)現(xiàn)，淋巴細胞、CD33+髓細胞度值排名靠前，故推測免疫細胞在提高機體免疫功能，治療此類疾病中發(fā)揮較大作用。此外，子宮（Uterus，degree=1），甲狀腺（Thyroid，degree=1）可能作為桂枝茯苓丸治療過程中的靶器官發(fā)揮“異病同治”作用。

通過Gnencards數(shù)據(jù)庫獲取其亞細胞分布相關(guān)信息，根據(jù)其confidence值進行排序，將前五位的亞細胞分布信息上傳至Cytoscape3.7.2軟件繪制靶標-亞細胞分布信息網(wǎng)絡(luò)圖（圖6-B），其中紅色V型代表關(guān)鍵靶標，紫色橢圓形代表亞細胞分布信息。結(jié)果顯示，關(guān)鍵靶標多分布于細胞核（nucleus，degree=8）、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（endoplasmic reticulum，degree=5）、細 胞 骨 架（cytoskeleton，degree=5）、線 粒 體（mitochondrion，degree=5）等一系列重要的細胞器中。

圖6 關(guān)鍵靶標-組織分布網(wǎng)絡(luò)圖（A）和關(guān)鍵靶標-亞細胞分布網(wǎng)絡(luò)圖（B）

將關(guān)鍵靶標上傳至DisGeNET數(shù)據(jù)庫獲取其蛋白歸屬信息（見表3），其主要涉及信號分子（Signaling）、轉(zhuǎn) 錄因子（Transcription factor）、激 酶（Kinase）、酶（Enzyme）等。

表3 關(guān)鍵靶標-蛋白歸屬信息表

2.6 分子對接

為了深入探析桂枝茯苓丸干預AMs、TN、BN關(guān)鍵分子機制，篩選10個有效成分作為配體，12個靶點蛋白作為受體，對接結(jié)果如圖7所示。橫坐標代表桂枝茯苓丸有效成分，縱坐標代表靶點蛋白，顏色深淺代表結(jié)合能的大小。結(jié)果顯示，β-谷甾醇、山奈酚、槲皮素、豆甾醇等10個有效成分與IL-6、AKT1、TP53等12個靶點蛋白對接所得最低結(jié)合能均小于-5.0kJ·mol-1,其中，（+）-兒茶素、豆甾醇分別與基質(zhì)金屬蛋白酶9（Matrix Metallo Proteinase 9，MMP9）、趨 化 因 子8（Interleukin-8，CXCL8）結(jié)合能力較優(yōu)。

圖7 有效成分與靶點蛋白分子對接最低結(jié)合能熱圖

根據(jù)分子對接最低結(jié)合能篩選出結(jié)合能力較優(yōu)的前三組蛋白，如圖8所示。其中，（+）-兒茶素通過Ala417、Leu397、Glu402、Ala189氨基酸殘基形成四條氫鍵，與MMP9緊密結(jié)合（圖8A）；豆甾醇通過Glu48氨基酸殘基形成1條氫鍵，β-谷甾醇通過Arg6、Cys7形成2條氫鍵，二者均與CXCL8結(jié)合較緊密（圖8B、8C）。由此看來，此三種化合物及兩種蛋白可能為桂枝茯苓丸“異病同治”中的關(guān)鍵化合物及核心靶點蛋白，也為進一步實驗驗證提供了分子生物學基礎(chǔ)。

圖8 桂枝茯苓丸關(guān)鍵化合物與核心靶點蛋白分子對接圖

3 討論

中醫(yī)認為，AMs、TN、BN雖分別屬于“癥瘕”、“乳癖”、“癭瘤”等不同疾病，但其病位及病機均有極大關(guān)聯(lián)性與相似性，任脈阻瘀貫穿其發(fā)病始終，故在中醫(yī)學上可將其歸納為任脈癥瘕類病進行“異病同治”研究。古籍記載桂枝茯苓丸多用于婦人癥病的治療，但其溫通經(jīng)脈，治血兼治水之功，亦可用于經(jīng)脈不通，任脈瘀阻所導致的癥瘕類病。方中桂枝、茯苓相配溫經(jīng)脈、滲痰濕，桃仁配丹皮，消癥結(jié)，涼血瘀，寓通因通用之意，赤芍調(diào)營陰，緩急痛，全方共奏通脈化癥、緩消瘀結(jié)之功。藥理研究表明，桂枝茯苓丸有調(diào)節(jié)免疫功能及抗炎的功效，其可能與促進腫瘤壞死因子-α（Tumor Necrosis Factor，TNF-α）的分泌，活化自然殺傷細胞（NK細胞）有關(guān)，除此之外，桂枝茯苓丸可降低體內(nèi)雌激素，具有雌激素樣活性[12]。桂枝茯苓配伍可降低血液中前列腺素E2（Prostaglandin E2，PGE2）、TNF-α的含量，提高小鼠胸腺及脾臟重量，提高免疫能力[13]，對任脈癥瘕類病有一定治療作用。

通過前期對桂枝茯苓丸“異病同治”AMs、TN、BN有效化合物進行篩選并用分子對接技術(shù)進行驗證，發(fā)現(xiàn)（+）-兒茶素、豆甾醇在桂枝茯苓丸中分布范圍最廣，且分子對接中分別與CXCL8、MMP9結(jié)合最緊密，黃芩素、β-谷甾醇degree值較高，提示可能在桂枝茯苓丸治療AMs、TN、BN中發(fā)揮較大作用。（+）-兒茶素屬于酚類活性物質(zhì)，可通過多種途徑發(fā)揮不同藥理作用，可與體內(nèi)雌激素受體結(jié)合[14]，從而發(fā)揮抗雌激素作用，通過降低體內(nèi)VEGF生成從而抑制子宮內(nèi)膜異位病灶的生長[15]。豆甾醇通過增加體內(nèi)IL-2及γ-干擾素（INF-γ）的含量，活化NK細胞，增強免疫功能，可應用于AMs、TN、BN的治療[16]。黃芩素為黃酮類化合物，有抗炎、抗腫瘤等作用，可通過PI3K/AKT通路誘導腫瘤細胞凋亡[17]，亦可上調(diào)CD4+、CD8+表達而增強機體免疫功能，對于乳腺、甲狀腺惡性結(jié)節(jié)有較好的抑制作用[18]。β-谷甾醇能提高血清IgM和IgB的含量，優(yōu)化免疫系統(tǒng)，改善甲狀腺功能[19]。

桂枝茯苓丸治療AMs、TN、BN過程中主要涉及AKT1、VEGFA、IL6、MMP9、TNF、CXCL8、ESR1、TGFB1等靶點蛋白，與炎癥、腫瘤、免疫、雌激素等密切相關(guān)，其中CXCL8、MMP9為分子對接中結(jié)合最優(yōu)的活性靶點蛋白。CXCL8作為趨化因子，參與細胞黏附、侵襲過程，通過增加基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrix Metalloproteinases，MMPs）表達和血管生成，促進AMs異位細胞、乳腺癌、甲狀腺癌的侵襲遷移[20-22]。MMP9在促進血管生成及病灶黏附過程中發(fā)揮重要作用，研究表明[23]，對于子宮內(nèi)膜異位細胞，桂枝茯苓丸能阻止其血管再生及異位病灶黏附，抑制體內(nèi)MMP9及血管內(nèi)皮生長因子（Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF）水平，也可通過旁分泌刺激甲狀腺內(nèi)VEGF受體的增加進而促進血管的生成。蛋白激酶B（protein kinase B，AKT1 or PKB）參與調(diào)控細胞增殖侵襲、細胞

分化及組織纖維化的過程，主要通過轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGFβ1）結(jié)合成纖維細胞膜上受體，激活PI3K/Akt通路，進而磷酸化激活AKT因子來完成[24]。已有研究證明[25]，TGF-β1與子宮腺肌病異位病灶纖維化及甲狀腺結(jié)節(jié)、乳腺結(jié)節(jié)密切相關(guān)。雌激素受體α（Estrogen Receptor 1，ESR1）主要發(fā)揮調(diào)節(jié)雌激素的作用，在AMs、TN、BN中表達增高[26]，桂枝茯苓丸通過降低其受體水平，達到抑制乳腺上皮細胞、子宮內(nèi)膜細胞的增生的作用。本研究對于桂枝茯苓丸治療AMs、TN、BN過程中有效化合物及靶點蛋白進行篩選分析，發(fā)現(xiàn)干預過程通過多靶點、多角度發(fā)揮作用，由此推測，此三種疾病發(fā)病機理及藥物作用靶點具有較大一致性，且文獻研究發(fā)現(xiàn)，部分結(jié)果已通過實驗研究進行驗證，對臨床有一定指導作用，但仍有部分基因有待于深入分析研究。

通過GO和KEGG富集分析得知桂枝茯苓丸通過多途徑、多通路發(fā)揮多種治療作用。結(jié)合分析結(jié)果及文獻研究發(fā)現(xiàn)，桂枝茯苓丸發(fā)揮治療作用與Pathways in cancer、Toll樣受體、TNF、雌激素等信號通路關(guān)系較密切，其主要涉及腫瘤、炎癥因子、免疫調(diào)控、雌激素等不同環(huán)節(jié)。Toll樣受體大多存在于機體免疫細胞、上皮細胞表面，通過識別并結(jié)合病原微生物等，誘發(fā)免疫應答[27]，也參與子AMs、TN、BN發(fā)展過程中[28]。TNF信號通路主要參與AMs、TN、BN的免疫、炎癥反應的過程[29-31]，文獻表明，桂枝茯苓丸分泌TNF-α可促進集落刺激因子及NK細胞的活化，以治療免疫、內(nèi)分泌失調(diào)所致的任脈癥瘕類疾病[12]。桂枝茯苓丸對于體內(nèi)雌激素異常所致的此類疾病中具有類雌激素作用[12,32]。為進一步預測桂枝茯苓丸作用的主要組織及器官，通過BioGPS分析發(fā)現(xiàn)，共有關(guān)鍵靶點主要存在于平滑肌、淋巴細胞、甲狀腺、子宮等組織器官中，這可能與AMs、TN、BN發(fā)病過程中炎癥免疫反應、平滑肌細胞增殖及組織器官纖維化密切相關(guān)。AMs常表現(xiàn)為子宮局部組織纖維化、肌層回聲欠均及子宮腺肌瘤。這一過程多由于增生的內(nèi)膜向肌層侵入，形成內(nèi)膜-肌層結(jié)合帶，進而使局部平滑肌細胞增殖而形成[7]，BN形成的過程多有組織纖維化的形成，且缺氧環(huán)境可加速膠原纖維的沉積[33]。分析發(fā)現(xiàn)，桂枝茯苓丸通過多途徑、多通路發(fā)揮對AMs、TN、BN的治療，對進一步分析研究有較深的指導意義，但由于通路篩選是根據(jù)所在通路靶點富集數(shù)目而定，故篩選的通路及關(guān)鍵靶點仍存在一定的不準確性，其作用機制較為復雜，還需進一步驗證。

本課題組前期已通過數(shù)據(jù)挖掘、藥效學研究、多維指紋圖譜及動物實驗驗證桂枝茯苓丸有效成分通過減少VEGF、Caspase-3、Caspase-9、TNF-α等表達從而抑制血管生成、細胞增殖及炎癥反應，達到抗子宮腺肌病的目的[11,34]，一定程度佐證了網(wǎng)絡(luò)藥理學的準確性，并為下一步實驗提供方向。且基于中醫(yī)理論及文獻研究發(fā)現(xiàn)，AMs、TB、BN有極大關(guān)聯(lián)性，故推而廣之，試從分子生物學角度進一步探索桂枝茯苓丸對任脈癥瘕類病治療的機制與靶點，為TN、BN的治療探索新方向。然而網(wǎng)絡(luò)藥理學由于數(shù)據(jù)庫的不完善性及欠缺相應的基因數(shù)據(jù)庫，其在體內(nèi)的生物過程及作用通路仍尚不明確，仍需進一步實驗研究。但桂枝茯苓丸治療AMs、TN、BN過程中所篩選的關(guān)鍵靶點、信號通路及分子對接結(jié)果與發(fā)病機制及目前研究方向較為一致，主要包含炎癥反應、免疫調(diào)節(jié)、雌激素變化等多個過程，也證明了桂枝茯苓丸多成分、多靶點、多通路的治療作用，為后續(xù)進一步實驗研究及中醫(yī)學“異病同治”更深層次的探討提供了參考。