基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的墨旱蓮-女貞子藥對“異病同治”糖尿病腎病與糖尿病視網(wǎng)膜病變的機(jī)制研究*

王娟 ，韓旭 ，李立 ，韓森 ，趙寧 ，崔趙麗 ，丁治國 ，王光磊 ，姜淼 ，顧浩

（1.中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)臨床基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所，北京 100700；2.濰坊市中醫(yī)院科教部，濰坊 262699；3.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院東區(qū)內(nèi)分泌科，北京 101100；4.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院東區(qū)外科，北京 101100；5.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院體檢中心，北京 100700）

糖尿病是一種多因素導(dǎo)致的糖代謝異常疾病，2019年全球糖尿病患病率為9.3%，預(yù)計2030年將上升到10.2%[1]，糖尿病腎?。―N）與糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）是臨床常見糖尿病微血管并發(fā)癥，是血糖異常導(dǎo)致的腎臟病變與眼底病變。對于糖尿病患者來說，DN發(fā)病率能達(dá)到30%～40%[2]，DR患病率約為23%[3]，兩者分別是末期腎病和成人致盲的主要原因。

DN是由糖脂代謝障礙、氧化應(yīng)激失衡、炎癥因子失調(diào)和血液微循環(huán)失調(diào)等原因?qū)е碌哪I小球病變[4]，DR是由高血糖、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)和神經(jīng)保護(hù)因子等因素引起的視力逐漸減退，最終導(dǎo)致失明[5]。理論上，DN與DR都屬于糖尿病微血管并發(fā)癥，兩者可能有共同的發(fā)病機(jī)制，如高糖毒性、自由基作用、多元醇代謝異常、炎癥介質(zhì)氧化應(yīng)激及遺傳因素等[6]，并且有研究表明，眼底檢查可提示糖尿病患者的腎臟病變[7]。傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為，肝腎同源，腎為肝之體，肝為腎之用，腎的疾病往往離不開肝的失調(diào)，同時，肝開竅于目，五臟六腑之精皆上注于目，故肝與目在生理病理上密切相關(guān)，并且目的生理正常離不開腎精的調(diào)養(yǎng)，這就提示了DN與DR之間的密切聯(lián)系，兩者之間的發(fā)生與治療可能存在相通的地方。目前DN與DR主要采用藥物治療和手術(shù)治療，但是其存在藥物抵抗和術(shù)后并發(fā)癥等不良反應(yīng)。西醫(yī)療法聯(lián)合中藥治療DN與DR在臨床上很常見，但是大部分以單方劑為主，很少使用復(fù)方作為主要治療藥物，主要原因就是中藥的有效成分和藥理作用機(jī)制尚不明確。

國醫(yī)大師呂仁和教授在臨床治療DN與DR時，常配伍墨旱蓮-女貞子對藥，以滋補(bǔ)肝腎，明目涼血，治療肝腎陰虛所導(dǎo)致的DN與DR等糖尿病并發(fā)癥，補(bǔ)陰以制陽亢[8]。墨旱蓮記載于《新修本草》，能夠滋補(bǔ)肝腎，涼血止血；女貞子首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，主要功效是滋補(bǔ)肝腎，明目烏發(fā)，兩藥均具有抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、治療糖尿病等藥理作用[9-10]。但是這一藥對治療DN、DR的具體作用機(jī)制尚不明確，因而限制了其在臨床實(shí)踐中的推廣應(yīng)用。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是基于系統(tǒng)生物學(xué)和多向藥理學(xué)的角度，對藥物治療疾病的作用成分、作用靶點(diǎn)和作用通路進(jìn)行解析，構(gòu)建整體網(wǎng)絡(luò)模型，從多角度深入探討藥物治療疾病的藥理作用機(jī)制，并且現(xiàn)在已經(jīng)有許多研究證明了網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對探索中藥治療疾病作用機(jī)制的可靠性和準(zhǔn)確性。Guo等[11]利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究了左金丸治療肝癌的作用機(jī)制，并且驗(yàn)證了左金丸通過PI3K-NF-κB、EGFR-MAPK和CCND1通路對肝癌細(xì)胞的抑制作用。馬林等[12]通過構(gòu)建成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)模型，預(yù)測了丹七片治療冠心病可能是通過絲氨酶/基氨酸/蛋白激酶（AKT1）、白細(xì)胞介素（IL）-6、腫瘤壞死因子（TNF）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK1）等關(guān)鍵靶點(diǎn)。利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)從成分、靶點(diǎn)、通路、生物過程等方面整體分析探索墨旱蓮-女貞子藥對“異病同治”DN與DR的作用機(jī)制，符合中醫(yī)理論的整體作用特點(diǎn)，也為中藥復(fù)方制劑的機(jī)制研究提供一種新思路新方法。

傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為“異病同治”指不同的疾病在發(fā)生發(fā)展過程中出現(xiàn)了相同病機(jī)，故而可以采用同樣的方法加以治療，墨旱蓮-女貞子藥對滋補(bǔ)肝腎以治療DN與DR符合“異病同治”的理念。本文利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，探索墨旱蓮-女貞子藥對的有效成分、關(guān)鍵作用靶點(diǎn)和通路，以明確其作用機(jī)制，為中藥復(fù)方治療DN與DR的藥理作用研究提供參考，以期進(jìn)一步推進(jìn)中醫(yī)藥治療糖尿病慢性并發(fā)癥的臨床應(yīng)用。

1 資料和方法

1.1 墨旱蓮-女貞子藥對化學(xué)成分的搜集與篩選 通過中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫和分析平臺（TCMSP，http：//lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php）和中藥化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫（TCMID，http：//119.3.41.228：8000/tcmid/）搜索關(guān)鍵詞“墨旱蓮”和“女貞子”，得到藥物所含活性成分相關(guān)信息，篩選符合條件的化合物作為藥物有效成分，本研究篩選條件為口服生物利用度（OB）≥30%，脂水分配系數(shù)（Alogp）＜5，氫鍵供體數(shù)（Hdon）＜5，氫鍵受體數(shù)（Hacc）＜10，腸上皮通透性（Caco-2）＞0，類藥性（DL）≥0.1，藥物半衰期（HL）≥4[13]。

1.2 墨旱蓮-女貞子藥對靶點(diǎn)的篩選 將篩選得到的藥對有效成分逐一輸入TCMSP數(shù)據(jù)庫，得到每個成分對應(yīng)作用靶點(diǎn)，再利用蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫（Uniprot，https：//www.uniprot.org/）的 UniProtKB 功能，逐一錄入靶點(diǎn)并將物種限定為人，將所有靶點(diǎn)校正為官方名稱（official symbol），即為墨旱蓮-女貞子藥對的作用靶點(diǎn)。

1.3 DN與DR的靶點(diǎn)篩選 利用GeneCards數(shù)據(jù)庫（http：//www.genecards.org/）、NCBI-gene 數(shù)據(jù)庫（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/gene）和人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫 OMIM（http：//www.omim.org/）3 種數(shù)據(jù)庫，輸入關(guān)鍵詞“Diabetic Nephropathy”“Diabetic Retinopathy”查找篩選疾病相關(guān)的靶點(diǎn)。

1.4 靶點(diǎn)蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將藥對作用靶點(diǎn)輸入 String數(shù)據(jù)庫（https：//string-db.org/），置信度設(shè)置為0.9，得到藥對靶點(diǎn)蛋白相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)模型，將數(shù)據(jù)導(dǎo)出，輸入Cytoscape3.7.2軟件，進(jìn)行可視化，并利用MCODE Cluster算法[14]，按照默認(rèn)參數(shù)（Node Score Cutoff：0.2，Haircut：true，F(xiàn)luff：false，K-Core：2，Max.Depth from Seed：100）對網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行模塊劃分。

1.5 作用靶點(diǎn)與組織分布網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將共同靶點(diǎn)輸入 BioGPS（http：//biogps.org/#goto=welcome）數(shù)據(jù)庫，以大于等于中位數(shù)的基因表達(dá)量為界限篩選出每個靶點(diǎn)基因分布的器官/組織，整理胰島（Pancreatic Islet）、視網(wǎng)膜（Retina）和腎臟（Kidney）中的表達(dá)基因，利用Cytoscape3.7.2軟件構(gòu)建作用靶點(diǎn)-組織分布網(wǎng)絡(luò)圖。

1.6 基因功能和通路富集分析 通過TBtools軟件（https：//github.com/CJ-Chen/TBtools） 獲取墨旱蓮-女貞子藥對、DN、DR的共同靶點(diǎn)，將共同靶點(diǎn)輸入基因功能資源數(shù)據(jù)庫（THE GENE ONTOLOGY RESOURCE，GO，http：//geneontology.org/） 進(jìn)行基因功能富集分析，將分析得到的相關(guān)性前12個結(jié)果通過柱狀圖展示。

將共同靶點(diǎn)輸入Cytoscape3.7.2軟件插件ClueGO[15]中，計算富集結(jié)果的每個P值，并通過Bonferroni方法校正，以P＜0.05為篩選條件，根據(jù)從小到大的順序?qū)值進(jìn)行排序。

2 結(jié)果

2.1 墨旱蓮和女貞子的有效作用成分 在TCMSP數(shù)據(jù)庫中，根據(jù)篩選條件篩選得到符合要求的活性成分，墨旱蓮有10種，女貞子有5種，詳細(xì)信息見表1。

表1 墨旱蓮與女貞子的活性成分信息表

2.2 構(gòu)建墨旱蓮-女貞子藥對治療DN與DR的靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)模型 通過整理得到墨旱蓮的作用靶點(diǎn)88個，女貞子的作用靶點(diǎn)111個，去重后得到墨旱蓮-女貞子藥對的潛在作用靶點(diǎn)124個，DN相關(guān)靶點(diǎn)2 614個，DR相關(guān)靶點(diǎn)2 587個。其中墨旱蓮-女貞子藥對與DN直接相關(guān)的靶點(diǎn)88個，與DR直接相關(guān)的靶點(diǎn)69個，韋恩分析圖見開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）。利用String數(shù)據(jù)庫和Cytoscape3.7.2軟件構(gòu)建的墨旱蓮-女貞子靶點(diǎn)相互作用關(guān)系網(wǎng)絡(luò)見OSID，節(jié)點(diǎn)連接度排名前20位的靶點(diǎn)連接靶點(diǎn)數(shù)目見OSID，RXRA與 DN、DR的治療不直接相關(guān)，CDK1、CDKN1A、RB1、CASP8只與 DN 的治療直接相關(guān)，CCNA2與DR的治療直接相關(guān)，其他14個靶點(diǎn)，包括 TP53、AKT1、TNF、RELA、VEGFA、MAPK1/8/14等都與DN和DR的治療直接相關(guān)，很有可能是墨旱蓮-女貞子藥對“異病同治”DN與DR的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

2.3 基于網(wǎng)絡(luò)模塊化分析墨旱蓮-女貞子藥對治療DN與DR的靶點(diǎn) 利用MCODE網(wǎng)絡(luò)模塊劃分方法，對墨旱蓮-女貞子的靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)降維分解以便更清晰明了地觀察和分析網(wǎng)絡(luò)，最后得到8個核心模塊，結(jié)果見OSID。其中有7個模塊與DN、DR都相關(guān)，模塊6中沒有與DN或者DR直接相關(guān)靶點(diǎn)。同時，結(jié)果顯示墨旱蓮-女貞子藥對“異病同治”DN與DR的靶點(diǎn)主要分布在模塊1、2、3中，對這3個模塊中的藥對、DN、DR的共同靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG通路和生物過程（BP）富集分析，得到的結(jié)果見表2。

表2 核心模塊中“異病同治”靶點(diǎn)的KEGG通路和BP富集分析

2.4 基于靶點(diǎn)-組織分布分析墨旱蓮-女貞子的DN與DR作用機(jī)制 利用BioGPS數(shù)據(jù)庫和Cytoscape3.7.2軟件構(gòu)建墨旱蓮-女貞子藥對“異病同治”DN與DR的作用靶點(diǎn)-組織分布網(wǎng)絡(luò)圖，見圖1。圖中共有66個節(jié)點(diǎn)，130條邊，其中邊的粗細(xì)代表了靶點(diǎn)在組織中的表達(dá)量大小，從圖中可以看出，APP、VEGFA、GSTP1、INSR、VCAM、ACHE 和 SELE 等 11個作用靶點(diǎn)均在胰島、視網(wǎng)膜和腎臟組織中高表達(dá)，其具體信息見圖2。

圖2 3個組織中同時高表達(dá)的作用靶點(diǎn)的相關(guān)信息柱狀圖

2.5 墨旱蓮-女貞子藥對作用于DN、DR靶點(diǎn)的GO分析 對墨旱蓮-女貞子藥對作用于DN與DR取交集，得到墨旱蓮-女貞子既直接作用于DN又直接作用于DR的靶點(diǎn)有63個，對這63個靶點(diǎn)進(jìn)行GO分析，發(fā)現(xiàn)1 686個BP、68種細(xì)胞成分（CC）和136個分子功能（MF）可能與墨旱蓮-女貞子藥對“異病同治”DN與DR的機(jī)制相關(guān)。其中富集得到的前15個GO分析結(jié)果具體信息見圖3。

圖3 墨旱蓮-女貞子藥對作用于DN、DR靶點(diǎn)的GO分析結(jié)果

圖1 作用靶點(diǎn)-組織分布網(wǎng)絡(luò)圖

2.6 墨旱蓮-女貞子藥對治療DN與DR的KEGG通路分析 通過ClueGo對墨旱蓮-女貞子藥對既直接作用于DN又直接作用于DR的63個靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG通路富集分析，得到115條通路（P＞0.05），提取P值最小的前20條通路進(jìn)行可視化分析，見圖4，其中前10條通路詳細(xì)信息見表3。

表3 前10條KEGG通路信息

圖4 墨旱蓮-女貞子藥對治療DN與DR的KEGG通路分析

3 討論

3.1 墨旱蓮-女貞子藥對治療DN與DR的有效成分分析 墨旱蓮-女貞子藥對治療DN與DR包含木犀草素、金合歡素和山奈酚等14種有效成分，其中木犀草素是墨旱蓮與女貞子的共同作用成分，而且關(guān)聯(lián)了 AKT1、INSR、MAPK1、TNF、VEGFA 等關(guān)鍵靶點(diǎn)，表明木犀草素可能是墨旱蓮-女貞子藥對發(fā)揮協(xié)同作用的主要成分，研究發(fā)現(xiàn)，木犀草素能夠通過降低TLR4與JNKmRNA的水平以改善2型糖尿病大鼠胰島素的抵抗作用，可能通過增加超氧化物歧化酶（SOD）含量，激活Nrf2/HO-1通路而延緩糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病變過程，而且能夠明顯減輕糖尿病引起的血管并發(fā)癥[16-18]。此外，墨旱蓮的有效成分金合歡素也能改善DN與DR患者的炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡[19-20]，女貞子的有效成分山奈酚能夠通過一定途徑控制糖尿病患者的血糖水平[21-23]。

3.2 基于KEGG富集與GO富集分析墨旱蓮-女貞子藥對“異病同治”DN與DR的機(jī)制 從藥對的靶點(diǎn)-組織分布網(wǎng)絡(luò)和靶點(diǎn)蛋白PPI網(wǎng)絡(luò)可以看出，VEGFA、GSTP1、INSR、TNF、AKT1、VCAM1、IL-6 和MAPK1等靶點(diǎn)可能是墨旱蓮－女貞子“異病同治”DN與DR的關(guān)鍵靶點(diǎn)，而且這些重要靶點(diǎn)大部分在糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE信號通路、TNF信號通路、IL-17信號通路、PI3K-Akt信號通路和HIF-1信號通路中都可富集到。糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE信號通路是DN與DR發(fā)生發(fā)展過程中的重要一環(huán)，能夠激活核轉(zhuǎn)錄因子－κB（NF－κB），刺激血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）的產(chǎn)生，誘導(dǎo)單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）表達(dá)[24]，從而促使腎小球硬化、腎纖維化、炎癥反應(yīng)發(fā)生、血栓形成和視網(wǎng)膜心血管生成。TNF-α是TNF信號通路中的核心基因，抑制NF-κB/TNF-α信號通路的活化，可以減少促炎因子TNF-α、IL-1β的表達(dá)，進(jìn)而對腎臟起到保護(hù)作用[25]，改善DN與DR患者的炎癥反應(yīng)和視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。IL-17信號通路介導(dǎo)了炎癥反應(yīng)和相關(guān)的腎組織損傷與腎小球硬化[26]，抑制IL-17信號通路能夠緩解DN、DR的炎癥反應(yīng)和腎臟損傷。PI3K-Akt信號通路參與了高糖誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞凋亡過程[27]，通過PI3K-AKT/mTOR信號通路上調(diào)自噬，能夠減輕氧化低密度脂蛋白膽固醇（ox-LDL）誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷[28]。抑制HIF-1信號通路可以降低增殖性DR的病理性視網(wǎng)膜血管生成[29]，改善糖尿病狀態(tài)下腎臟腎小管上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化及腎小管間質(zhì)纖維化[30]，從而改善DN、DR。

墨旱蓮-女貞子藥對直接作用于DN和DR的63個共同靶點(diǎn)的GO分析結(jié)果表明，墨旱蓮-女貞子藥對“異病同治”DN與DR的靶點(diǎn)主要集中在膜區(qū)、細(xì)胞質(zhì)核周區(qū)域、膜封閉腔和胞質(zhì)溶膠等細(xì)胞成分，同時影響酶結(jié)合、蛋白質(zhì)結(jié)合、信號受體結(jié)合和BH3域結(jié)合等分子功能，并參與了對含氧化合物的反應(yīng)、細(xì)胞對化學(xué)刺激的反應(yīng)、對脂質(zhì)的反應(yīng)和細(xì)胞群增殖的調(diào)節(jié)等生物過程，進(jìn)而對機(jī)體的氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、糖脂代謝等過程進(jìn)行調(diào)節(jié)，以影響DN與DR的病理進(jìn)程。

3.3 墨旱蓮-女貞子治療DN與DR的核心模塊分析與潛在作用靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn) 生物網(wǎng)絡(luò)的聚類模塊分析是識別功能模塊和預(yù)測蛋白質(zhì)功能的重要方法之一，聚類結(jié)果的可視化對于揭示生物網(wǎng)絡(luò)的結(jié)構(gòu)至關(guān)重要。在對模塊分析結(jié)果中的3個核心模塊進(jìn)行KEGG通路和生物過程富集分析發(fā)現(xiàn)，這些核心模塊中與DN、DR直接相關(guān)的靶點(diǎn)主要涉及腫瘤、免疫和細(xì)胞因子傳導(dǎo)相關(guān)通路，參與細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)、增殖和活化等生物過程，進(jìn)一步驗(yàn)證了墨旱蓮-女貞子藥對治療DN與DR作用靶點(diǎn)對免疫系統(tǒng)和細(xì)胞增殖與凋亡的影響。此外，GSK3β與MAPK8、JUN、AR在同一功能模塊5中，而MAPK8、JUN、AR與DN、DR的病理機(jī)制直接相關(guān)，這表明GSK3β與DN、DR的病理作用是可能存在間接聯(lián)系的，而且通過查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，GSK3β是NF-κB介導(dǎo)的對TNF-α的抗凋亡反應(yīng)所必須的[31]，調(diào)控NF-κB信號通路和TNF-α表達(dá)能夠影響腎小球系膜的氧化應(yīng)激反應(yīng)和腎纖維化[32-33]，從而影響DN、DR的病理進(jìn)程。XIAP與CASP7、CASP9在同一功能模塊7中，CYP1A1與CYP1B1、AHR在同一功能模塊9中，但是數(shù)據(jù)顯示XIAP、CYP1A1與DN直接相關(guān)而不與DR直接相關(guān)。查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，XIAP能夠調(diào)節(jié)BMP信號通路以及SMAD和MAP3K7/TAK1依賴性通路[34]，從而導(dǎo)致NF-κB和JNK活化，抑制JNK信號通路能夠減少細(xì)胞凋亡，改善DR[35]；CYP1A1參與NADPH依賴性電子轉(zhuǎn)運(yùn)途徑，NADPH減少能夠?qū)е逻€原性谷胱甘肽生成減少，從而降低細(xì)胞的抗氧化能力，加速細(xì)胞壞死[36]，這可能與DR的發(fā)生密切相關(guān)。這些研究表明，GSK3β、XIAP和 CYP1A1可能是墨旱蓮-女貞子藥對“異病同治”DN與DR的潛在作用靶點(diǎn)，具有一定的研究價值，對后續(xù)新藥研發(fā)和臨床研究具有一定的啟示作用。

3.4 利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對“異病同治”理論的研究優(yōu)勢 中醫(yī)“異病同治”理論是對疾病的病機(jī)和癥狀進(jìn)行歸納總結(jié)并且在臨床實(shí)踐中得到了驗(yàn)證，但是由于現(xiàn)代臨床狀況和社會因素的影響，“異病同治”理論的病理發(fā)生機(jī)制和治療機(jī)制均未得到充分的研究，這就限制了“異病同治”方法在臨床中的應(yīng)用，并且可能會錯過某些疾病的良好治療方法。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是大數(shù)據(jù)時代利用計算機(jī)技術(shù)構(gòu)建跨越藥物、分子、細(xì)胞、組織、器官、患者和疾病種類之間的整體網(wǎng)絡(luò)，實(shí)現(xiàn)對靶標(biāo)、通路、生物過程的篩選和臨床研究前的預(yù)測和驗(yàn)證，能夠節(jié)省大量的科研資源與經(jīng)費(fèi)，直接得到最關(guān)鍵的研究思路與研究方向。

在本研究中，利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對墨旱蓮-女貞子藥對對DN與DR的“異病同治”作用進(jìn)行研究，探索了DN與DR兩種疾病的共同靶點(diǎn)、共同通路和涉及的生物過程、分子功能及細(xì)胞成分，從多方面驗(yàn)證了“異病同治”理論的科學(xué)性，如共同關(guān)鍵靶點(diǎn)VEGFA、AKT1、TNF和VCTM1等，這些靶點(diǎn)已經(jīng)被證實(shí)在DN與DR的病理過程中起到重要作用：VEGFA水平下降可能導(dǎo)致HIF1A升高，進(jìn)而導(dǎo)致DN腎纖維化，使腎小球?yàn)V過率下降[37]，而且調(diào)節(jié)VEGFA能夠抑制新血管生成和血管通透性增加進(jìn)而緩解DR進(jìn)程[29]；降低TNF-α的表達(dá)水平，能夠抑制DN患者的微炎癥反應(yīng)，改善腎功能[38]，調(diào)節(jié)TNF表達(dá)能夠降低DR患者視網(wǎng)膜血管通透性增高和血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖[39]。而且這些關(guān)鍵靶點(diǎn)在腎臟、視網(wǎng)膜和胰島中都有高表達(dá)，富集得到的相關(guān)通路也對DN、DR的治療意義重大。這些網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果都從多方面驗(yàn)證了“異病同治”方法在臨床應(yīng)用中的準(zhǔn)確性和可靠性，兩種不同的疾病在分子水平、細(xì)胞水平和組織器官水平的關(guān)聯(lián)都得到了解析，由此可見“異病同治”理論的科學(xué)性以及這種方法廣泛應(yīng)用于臨床的可行性。

3.5 前景與展望 本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法探索墨旱蓮-女貞子藥對“異病同治”DN與DR的作用機(jī)制，意在從藥物成分、靶點(diǎn)和通路層面研究中藥藥對的藥理作用原理，但是中藥在炮制及煎煮過程中可能會產(chǎn)生新的成分，而且機(jī)體的生理狀態(tài)與病理狀態(tài)下的中藥吸收、分布、代謝、排泄（ADME）過程可能會有所不同，可能會影響藥物的作用途徑。而且，對于個體化的治療數(shù)據(jù)以及數(shù)據(jù)的定量化分析，對疾病的治療具有重要意義，這就有待實(shí)驗(yàn)研究和臨床研究中相關(guān)數(shù)據(jù)的補(bǔ)充，為中藥的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究提供更全面和科學(xué)的數(shù)據(jù)平臺。

4 結(jié)論

綜上所述，墨旱蓮-女貞子藥對“異病同治”DN與DR可能通過木犀草素、金合歡素和山奈酚等21種有效成分，作用于 VEGFA、INSR、IL-6、AKT1、VACM1等關(guān)鍵靶點(diǎn)，進(jìn)而調(diào)節(jié)糖尿病并發(fā)癥中的AGERAGE信號通路、TNF信號通路和IL-17信號通路等，調(diào)節(jié)機(jī)體的氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)和糖脂代謝過程等生物反應(yīng)過程，以達(dá)到對DN和DR“異病同治”的治療作用。同時，GSK3B、XIAP和CYP1A1可能是墨旱蓮-女貞子藥對“異病同治”DN與DR的潛在作用靶點(diǎn)，為臨床新藥的研發(fā)提供了一定思路。

利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，對墨旱蓮-女貞子藥對“異病同治”DN與DR的作用機(jī)制進(jìn)行了研究，結(jié)果表明不論從作用靶點(diǎn)還是相關(guān)通路方面，墨旱蓮-女貞子藥對治療DN和DR的作用機(jī)制都十分相似，這也從網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的角度進(jìn)一步印證了“異病同治”這一中醫(yī)理論的科學(xué)性，驗(yàn)證了呂仁和教授的臨床經(jīng)驗(yàn)，為中藥的臨床應(yīng)用與開發(fā)提供了一定的研究方向。