PCR、細(xì)菌培養(yǎng)法于陰道細(xì)菌檢驗(yàn)的應(yīng)用

閆清

山東國(guó)欣頤養(yǎng)集團(tuán)淄博中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東淄博 255120

細(xì)菌性陰道炎是臨床比較常見疾病， 主要是因?yàn)榧?xì)菌感染產(chǎn)生陰道菌群紊亂， 該疾病容易導(dǎo)致陰道內(nèi)有益菌突然降低，并且被致病菌所取代[1]。 相關(guān)臨床數(shù)據(jù)指出， 目前我國(guó)細(xì)菌性陰道炎的發(fā)病率為1.00%左右，如果該疾病患者未得到有效、及時(shí)處理，則病情進(jìn)一步發(fā)展的同時(shí)， 病情惡化， 臨床相關(guān)癥狀進(jìn)一步加重，并且誘發(fā)子宮內(nèi)膜炎疾病、慢性盆腔炎疾病等。 而且對(duì)于女性患者生殖系統(tǒng)而言， 細(xì)菌性陰道炎容易造成嚴(yán)重?fù)p傷，導(dǎo)致不孕等[2]。 由于細(xì)菌性陰道炎患者中大部分的病情緩解發(fā)展，因而未表現(xiàn)明顯臨床癥狀，致使患者自身及家屬均未加以高度重視， 從而當(dāng)臨床就診時(shí)，已演變?yōu)榕枨徊∽兝奂扒闆r等。 所以，臨床結(jié)合細(xì)菌性陰道炎疾病特點(diǎn)， 需給予開展早期臨床檢查診斷。 目前臨床針對(duì)細(xì)菌性陰道炎的常規(guī)檢查診斷方法為細(xì)菌培養(yǎng)法，但是該檢查方法的耗時(shí)較長(zhǎng)，而且檢查診斷率較低，需要多次細(xì)菌培養(yǎng)等劣勢(shì)，因而未能進(jìn)行臨床廣泛應(yīng)用。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢驗(yàn)法是一種簡(jiǎn)易DNA 擴(kuò)增法，隨著該技術(shù)逐步成熟，已被越來越運(yùn)用在臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中[3]。 該次研究方便選擇2018 年6月—2019 年12 月期間該院50 例細(xì)菌性陰道炎患者設(shè)為對(duì)照組，將同時(shí)間段50 例細(xì)菌性陰道炎患者設(shè)為研究組，旨在探討聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢驗(yàn)法和細(xì)菌培養(yǎng)法于陰道細(xì)菌檢驗(yàn)的應(yīng)用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采用隨機(jī)數(shù)字表方法設(shè)計(jì)，方便選取該院50 例細(xì)菌性陰道炎患者設(shè)為對(duì)照組，將同時(shí)間段50 例細(xì)菌性陰道炎患者設(shè)為研究組。 研究組有50 例， 年齡23～59歲，平均（31.05±3.20）歲；病程 1～4 年，平均（1.65±0.35）年。 對(duì)照組有 50 例，年齡 25～57 歲，平均（30.85±3.85）歲；病程 2～5 年，平均（1.70±0.30）年。 兩組的一般資料進(jìn)行比較，結(jié)果顯示差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 提示具有臨床可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn):①具有齊全的臨床資料；②伴有細(xì)菌性陰道炎相關(guān)典型癥狀；③18 周歲以上；④配合完成該次研究工作。 排除標(biāo)準(zhǔn):①臨床相關(guān)資料不齊全者；②伴有傳染性疾病者；③伴有精神障礙疾病者；④不配合或者不自愿參與者。 該研究所選病例經(jīng)過倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者或家屬均知情同意。

1.2 方法

陰道分泌物采集具體操作如下:選擇無菌陰道鏡，以充分暴露患者宮頸， 于陰道后穹窿處以棉簽取適量陰道分泌物，置于無菌時(shí)光中作保存，送實(shí)驗(yàn)室檢查。

研究組（50 例）接受PCR 檢驗(yàn)法，具體操作如下:首先放置試管于離心機(jī)， 轉(zhuǎn)速調(diào)整為12 000 r/min，持續(xù)離心10 min，離心結(jié)束后，取上清液，并加入適量堿性裂解液；予以加熱持續(xù)10 min，保持溫度處于98℃；接著再放置于離心機(jī)，轉(zhuǎn)速調(diào)整為12 000 r/min，持續(xù)離心5 min，離心結(jié)束后，取上清液；制作DNA 模板，添加DNA 即陽(yáng)性，未添加DNA 即陰性；密切監(jiān)測(cè)PCR 反應(yīng)產(chǎn)物，予以擴(kuò)增；常規(guī)提取無菌去離子水；作石蠟覆蓋表面；行PCR 反應(yīng)循環(huán)（總環(huán)數(shù)為32 環(huán)）。

對(duì)照組（50 例）接受細(xì)菌培養(yǎng)法，具體操作如下:將陰道分泌物取出，需保障在無菌環(huán)境下進(jìn)行操作；選擇無菌接種環(huán)并置于細(xì)菌分離培養(yǎng)基上進(jìn)行接種；CO2培養(yǎng)箱溫度調(diào)整為35℃，時(shí)間調(diào)整為48 h；持續(xù)觀察培養(yǎng)物，并取出典型菌落；接著完成生化檢驗(yàn)。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩組的檢測(cè)應(yīng)用效果， 包括檢查陽(yáng)性率以及檢查結(jié)果（腸球菌、棒狀桿菌及加特納菌的檢出情況）。細(xì)菌培養(yǎng)檢驗(yàn)陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)具體為:具有典型菌落，而且菌落為陽(yáng)性（+）；PCR 陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)具體為:邊緣整齊，且條帶寬度＜1 mm，而且需注意和假陽(yáng)性進(jìn)行區(qū)別。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

經(jīng)SPSS 23.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料采用[n(%)]表示，組間差異比較用 χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組檢查陽(yáng)性率的比較

研究組的檢查陽(yáng)性率高于對(duì)照組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 見表 1。

表1 兩組檢查陽(yáng)性率的比較

2.2 兩組的檢查結(jié)果比較

研究組的腸球菌陽(yáng)性率、 棒狀桿菌陽(yáng)性率及加特納菌陽(yáng)性率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組的檢查結(jié)果比較[n（%）]

3 討論

經(jīng)臨床相關(guān)文獻(xiàn)資料查閱獲知， 女性人群的身體健康狀態(tài)與其自身白帶存在密切相關(guān)性， 臨床通過給予女性人群開展白帶檢查， 從而可以有效了解自身身體健康情況，若伴有明顯的白帶分泌物增多，則需要加強(qiáng)重視，應(yīng)該盡早接受早期敏感化驗(yàn)檢查項(xiàng)目，并結(jié)合檢查結(jié)果從而及時(shí)判斷是否出現(xiàn)細(xì)菌感染[4]。 隨著社會(huì)高速發(fā)展及經(jīng)濟(jì)進(jìn)步的影響下，人們生活壓力、工作壓力隨之加重，以及日常生活習(xí)慣、飲食習(xí)慣等較大變化等因素影響，導(dǎo)致女性陰道疾病發(fā)生率也隨之升高，尤其是陰道炎疾病。 就陰道炎疾病的發(fā)生發(fā)展而言，均與女性人群自身陰道內(nèi)寄生菌群間平衡特點(diǎn)相關(guān)。 女性陰道內(nèi)寄生菌的正常表現(xiàn)是相互平衡狀態(tài)現(xiàn)象， 若出現(xiàn)失衡現(xiàn)象， 則會(huì)表現(xiàn)為大量的重要維持細(xì)菌平衡的細(xì)菌死亡， 并促使致病菌增殖明顯， 進(jìn)而出現(xiàn)失衡現(xiàn)象。 病菌繁殖期間會(huì)消耗大量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并且影響陰道上皮細(xì)胞代謝功能，從而出現(xiàn)酸堿水平紊亂現(xiàn)象，并且誘發(fā)陰道炎癥[5]。

細(xì)菌性陰道炎的臨床感染狀態(tài)其實(shí)是因?yàn)榛旌详幍绤捬蹙c陰道加特納菌相互作用而形成， 從而導(dǎo)致陰道內(nèi)微生態(tài)發(fā)生失衡現(xiàn)象， 并演變?yōu)轱@著的陰道分泌物含量增加，以及伴有嚴(yán)重瘙癢灼熱癥狀、伴有白帶有魚腥臭味情況。 經(jīng)臨床相關(guān)研究顯示，細(xì)菌性陰道炎主要包括4 種類型: ①嗜血桿菌類型； ②棒狀桿菌類型；③厭氧菌類型；④加特納菌類型[6]。 在實(shí)際臨床細(xì)菌性陰道炎的發(fā)病比較緩慢，而且無顯著臨床癥狀表現(xiàn)，或者與其他常見婦科病癥存在相似癥狀， 因此該疾病容易被忽視， 而在臨床常規(guī)檢查中也容易發(fā)生漏診情況[7]。 細(xì)菌性陰道炎如果未得到及時(shí)有效的診斷與治療，則隨著疾病逐步發(fā)展，可演變?yōu)榕枨谎住m頸炎等，個(gè)別嚴(yán)重者甚至致使不孕不育癥，影響其身心健康、生活質(zhì)量。 因此，臨床需盡早檢查、盡早發(fā)現(xiàn)、盡早診斷以及盡早給予積極治療，以改善預(yù)后[8]。 PCR 檢驗(yàn)法和細(xì)菌培養(yǎng)法均作為常用的臨床診斷輔助措施， 可以將陰道內(nèi)的感染類型、 感染程度及陰道內(nèi)菌群失調(diào)情況等準(zhǔn)確體現(xiàn)。 細(xì)菌培養(yǎng)法是婦科陰道疾病目前的臨床診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”，可以取得較好的臨床檢驗(yàn)效果。 但是細(xì)菌培養(yǎng)法的臨床檢出率不理想，而且需要高要求相關(guān)檢驗(yàn)設(shè)備，且操作時(shí)間長(zhǎng)，因此未能適合推廣于臨床工作中[9]。PCR 檢驗(yàn)法是新型的陰道細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)， 又稱為熒光定量檢驗(yàn)法。 PCR 檢驗(yàn)法主要是選用一段DNA 作為模板，借助DNA 聚合酶儀器與核苷酸底物的參與作用影響，擴(kuò)增上述DNA 到足夠數(shù)量，從而有助于臨床進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析、功能分析[10]。 其次，該檢驗(yàn)方法的PCR 敏感性良好，其檢驗(yàn)精準(zhǔn)度、檢驗(yàn)檢出率均較高。 參考相關(guān)臨床研究發(fā)現(xiàn)，PCR 檢驗(yàn)法的操作較簡(jiǎn)便，而且相對(duì)而言，檢驗(yàn)設(shè)備要求較低，故此可以利于預(yù)防出現(xiàn)或者減少偏差等不良情況的發(fā)生。

從該次研究結(jié)果數(shù)據(jù)可知: ①與實(shí)施細(xì)菌培養(yǎng)法的對(duì)照組相比較， 實(shí)施PCR 檢驗(yàn)法的研究組的檢查陽(yáng)性率（90.00%）顯著提高（P＜0.05）； 表明開展 PCR 檢驗(yàn)法可以更利于臨床檢驗(yàn)效果的提高， 從而使細(xì)菌性陰道炎患者可以盡早接受積極對(duì)癥治療，以改善預(yù)后。 ②研究組的腸球菌陽(yáng)性率 （22.00%）、 棒狀桿菌陽(yáng)性率（28.00%）、加特納菌陽(yáng)性率（80.00%）均顯著提高（P＜0.05）。 研究結(jié)果與陳文霞[11]的研究結(jié)果“研究組陽(yáng)性檢出率（88.00%）明顯高于參照組（54.00%）（P＜0.05）；研究組的腸球菌檢出率 （24.00%）、 棒狀桿菌檢出率（28.00%）、加特納菌檢出率（36.00%）均顯著高于參照組（14.00%、24.00%、16.00%）（P＜0.05）。 ”相符合。 證實(shí)臨床進(jìn)行陰道細(xì)菌檢驗(yàn)過程中運(yùn)用PCR 檢驗(yàn)法的檢驗(yàn)優(yōu)勢(shì)顯著，可以快速取得結(jié)果，爭(zhēng)取更多臨床治療時(shí)間以及提高臨床治療效果，改善疾病預(yù)后。 綜合所得結(jié)果可知， 在細(xì)菌性陰道炎檢驗(yàn)中實(shí)施PCR 檢驗(yàn)法有更好效果，而且可以取得更高陽(yáng)性檢出率[12]。

綜上所述，臨床依據(jù)細(xì)菌性陰道炎疾病特點(diǎn)，在臨床進(jìn)行檢查診斷過程中， 與細(xì)菌培養(yǎng)法相比較， 應(yīng)用PCR 檢驗(yàn)法的檢查陽(yáng)性率更高， 可以廣泛應(yīng)用于臨床檢查診斷中。