藏藥獨(dú)一味抗類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用及其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究

張燕飛 陳瑞鑫 袁茂華 楊枝中 黃婷 陳素先 蔣運(yùn)斌

摘 要 目的：研究藏藥獨(dú)一味抗類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）的作用及其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。方法：將56只SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組（0.5%羧甲基纖維素鈉溶液），模型組（0.5%羧甲基纖維素鈉溶液），甲氨蝶呤組（陽(yáng)性對(duì)照組，3 mg/kg），獨(dú)一味水提液低、中、高劑量組（0.5、1、2 g/kg，以生藥量計(jì)）和獨(dú)一味總黃酮組（200 mg/kg，以黃酮提取物計(jì)），每組8只。除正常對(duì)照組外，其余各組大鼠均于右后足墊注射弗氏完全佐劑（FCA）復(fù)制佐劑性關(guān)節(jié)炎模型。注射FCA次日，各組大鼠灌胃相應(yīng)藥物，每天給藥1次（僅甲氨蝶呤組每3天給藥1次），連續(xù)給藥30天。給藥第15、30天時(shí)，分別測(cè)定大鼠左后足的足腫脹度，計(jì)算其關(guān)節(jié)炎指數(shù)。第30天給藥結(jié)束后，采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定各組大鼠血清中腫瘤壞死因子α（TNF-α）、 白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、IL-6、IL-10水平，計(jì)算其胸腺指數(shù)、脾指數(shù)，并采用蘇木精-伊紅染色法觀察各組大鼠踝關(guān)節(jié)的病理學(xué)變化。結(jié)果：與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠給藥第15、30天時(shí)的足腫脹度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)以及給藥第30天時(shí)的脾指數(shù)和血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平均顯著升高（P<0.01）;給藥第30天時(shí)的胸腺指數(shù)、IL-10水平均顯著降低（P<0.01）;踝關(guān)節(jié)可見(jiàn)明顯的滑膜細(xì)胞增生、浸潤(rùn)關(guān)節(jié)腔等病理學(xué)改變。與模型組比較，各給藥組大鼠給藥第15、30天時(shí)的足腫脹度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)以及給藥第30天時(shí)的脾指數(shù)和血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平均顯著降低（P<0.01）;給藥第30天時(shí)的胸腺指數(shù)和血清中IL-10水平均顯著升高（P<0.01）;關(guān)節(jié)炎病理學(xué)變化明顯改善。與獨(dú)一味水提液高劑量組比較，獨(dú)一味總黃酮組大鼠給藥第15天時(shí)的足腫脹度以及給藥第15、30天時(shí)的關(guān)節(jié)炎指數(shù)、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)、炎癥細(xì)胞因子水平、踝關(guān)節(jié)病理學(xué)變化等差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：藏藥獨(dú)一味具有良好的抗RA作用，總黃酮可能是其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞 獨(dú)一味;類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎;佐劑性關(guān)節(jié)炎;藥效物質(zhì)基礎(chǔ);總黃酮;大鼠

中圖分類(lèi)號(hào) R285 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2021）05-0578-06

ABSTRACT? ?OBJECTIVE：To study the effects and active ingredients of Tibetan medicine Lamiophlomis rotata? against rheumatoid arthritis （RA）. METHODS： Fifty-six SD rats were randomly divided into normal control group （0.5% sodium carboxymethylcellulose），model group （0.5% sodium carboxymethylcellulose）， methotrexate group （positive control group，3? ? ?mg/kg）， L. rotata water extract low-dose， medium-dose and high-dose groups （0.5，1， 2 g/kg，by crude drug）， L. rotata total flavonoid group （200 mg/kg，by flavonoid extat）， with 8 rats in each group. Except for normal control group， other groups were given Freunds complete adjuvant （FCA） on the rats right hind footpad to induce adjuvant-induced arthritis model. The next day after injection of FCA， rats in all groups were given relevant medicine intragastrically， once a day （once every 3 days for methotrexate group） for 30 days. At 15th and 30th day of administration，the degree of paw swelling of left hind foot was measured， and the arthritis index， spleen index were calculated. At the end of 30th day of administration， the levels of TNF-α， IL-1β， IL-6 and IL-10 in rat serum were determined by ELISA assay，the thymus index and spleen index were? calculated， the pathological changes of the ankle joints were observed by HE staining. RESULTS： Compared with normal control group，degree of paw swelling，arthritis index at 15th and 30th day of administration as well as the spleen index and the levels of TNF-α，IL-1β，IL-6 in serum at 30th day of administration were significantly increased in model group （P<0.01）; while the thymus index and IL-10 level at 30th day of administration were significantly decreased（P<0.01）; synovial cell proliferation and infiltration of articular cavity were observed in ankle joint. Compared with model group，degree of paw swelling，arthritis index at 15th and 30th day of administration as well as the spleen index and the levels of TNF-α，IL-1β，IL-6 in serum at 30th day of administration were significantly decreased in each medicine group （P<0.01）; while the thymus index and IL-10 level at 30th day of administration were significantly increased （P<0.01）;the pathological changes of arthritis were significantly improved. Compared with L. rotata water extract high-dose group， there were no significant differences in degree of paw swelling at 15th day of administration as well as the arthritis index，spleen index ，levels of inflammatory cytokines and pathological changes of ankle joint in L. rotata total flavonoid group （P>0.05）. CONCLUSIONS：Tibetan medicine L. rotata shows well anti-RA activity，and total flavonoids may be the active ingredients of its efficacy.

KEYWORDS? ?Lamiophlomis rotata; Rheumatoid arthritis; Adjuvant-induced arthritis; Active ingredients; Total flavonoids; Rat

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一種常見(jiàn)的自身免疫性疾病，病因尚不清楚，其發(fā)病機(jī)制可能與免疫紊亂、環(huán)境、遺傳易感等因素相關(guān)[1]，其特征是滑膜炎癥和增生、自身抗體產(chǎn)生（如類(lèi)風(fēng)濕因子和抗瓜氨酸化蛋白抗體）、軟骨和骨破壞以及全身性癥狀（包括心血管、肺、骨骼和心理疾病等）[2]。RA是一種慢性疾病，可造成患者生活質(zhì)量、生理功能和心理功能等的下降，對(duì)個(gè)人和社會(huì)都造成了沉重負(fù)擔(dān)[3]。而研究顯示，中醫(yī)藥在改善RA癥狀、延緩RA骨破壞等方面發(fā)揮著重要作用[4]。

獨(dú)一味系藏族習(xí)用藥材，為唇形科植物獨(dú)一味Lamiophlomis rotata （Benth.） Kudo的干燥地上部分。2020年版《中國(guó)藥典》（一部）中記載，獨(dú)一味具有活血止血、祛風(fēng)止痛的功效，用于跌打損傷、外傷出血、風(fēng)濕痹痛等[5]。目前關(guān)于獨(dú)一味的研究主要集中在其活血止血的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制上[6-8]，而對(duì)其祛風(fēng)止痛功效的研究較少。獨(dú)一味祛風(fēng)止痛的功效主要用于治療風(fēng)濕痹痛相關(guān)疾病，而風(fēng)濕痹痛又是RA的典型特征[9]。王麗娟等[10]以足腫脹、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、胸腺指數(shù)、腎上腺指數(shù)、足前列腺素含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，證實(shí)了獨(dú)一味能明顯抑制佐劑性關(guān)節(jié)炎（AA）模型大鼠原發(fā)性和繼發(fā)性病變;臨床研究也表明，獨(dú)一味對(duì)RA患者具有較好的臨床療效和安全性[11]。但目前還未見(jiàn)基于中醫(yī)藥整體觀的獨(dú)一味抗RA的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究報(bào)道。本課題組前期采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)對(duì)獨(dú)一味抗RA的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行了預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)獨(dú)一味黃酮類(lèi)成分可能是其潛在活性成分群[12]。鑒于此，本研究基于能體現(xiàn)RA發(fā)病機(jī)制的大鼠AA模型，以更豐富的評(píng)價(jià)指標(biāo)對(duì)獨(dú)一味水提液和總黃酮的抗RA作用進(jìn)行考察，為闡明獨(dú)一味抗RA的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器有Elx800型酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio Tek公司）、DFC310 FX型生物顯微鏡（德國(guó)Leica公司）、MNT-150型游標(biāo)卡尺（上海美耐特實(shí)業(yè)有限公司）、EL240型分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）和Elix型超純水儀（美國(guó)Millipore公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

獨(dú)一味藥材于2018年收集于青海玉樹(shù)縣，經(jīng)重慶三峽醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校藥學(xué)院馬羚副教授鑒定為唇形科植物獨(dú)一味L. rotata （Benth.） Kudo的干燥地上部分，藥材標(biāo)本（編號(hào)duyiwei2018.12）保存于西南大學(xué)藥學(xué)院·中醫(yī)藥學(xué)院。弗氏完全佐劑（FCA，批號(hào)7027）購(gòu)自美國(guó)Chondrex公司;甲氨蝶呤片（批號(hào)036190309，規(guī)格2.5 mg/片）購(gòu)自上海上藥信誼藥廠有限公司;腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、IL-6、IL-10酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）檢測(cè)試劑盒（批號(hào)分別為T(mén)AE-569r、TAE-370r、TAE-385r、TAE-371r）均購(gòu)自天津安諾瑞康生物技術(shù)有限公司;蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒（批號(hào)C0105S）購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司;羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）購(gòu)自成都市科龍化工試劑廠;其余試劑均為分析純，水為超純水。

1.3 動(dòng)物

本研究所用動(dòng)物為健康雄性SD大鼠，共56只，5～6周齡，體質(zhì)量120～140 g，購(gòu)自重慶恩斯維爾生物科技有限公司[動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（湘）2016-0002）]。飼養(yǎng)期間大鼠自由進(jìn)食和飲水，予自然光照。飼養(yǎng)室環(huán)境溫度為（22±2） ℃，相對(duì)濕度為40%～70%。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)4天后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)方案符合西南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理審查委員會(huì)對(duì)動(dòng)物倫理的要求。

2 方法

2.1 獨(dú)一味水提液和總黃酮的制備

將獨(dú)一味藥材剪碎至0.5～2 cm長(zhǎng)短，加5倍量（mL/g，下同）水浸泡1.5 h后，再加12倍量水煎煮提取1.5 h，過(guò)濾，收集濾液;濾渣再加12倍量水煎煮提取1.5 h，過(guò)濾，收集濾液。合并2次濾液，以80 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至質(zhì)量濃度為0.5 g/mL（以生藥量計(jì)），作為母液。以0.5%CMC-Na溶液稀釋母液，分別得到質(zhì)量濃度為0.05、0.1、0.2 g/mL的獨(dú)一味水提液（以生藥量計(jì)），備用。

參考賈正平等[6]的方法制備獨(dú)一味總黃酮：取適量質(zhì)量濃度為0.5 g/mL的獨(dú)一味水提液于燒杯中，加5倍體積水，充分?jǐn)嚢韬?，上樣于已處理好的聚酰胺色譜柱;先以水洗脫至無(wú)色，然后用70%乙醇溶液洗脫色譜柱，并收集70%乙醇洗脫液，減壓濃縮，即得獨(dú)一味總黃酮，得率為9.91%。根據(jù)2020年版《中國(guó)藥典》（一部）獨(dú)一味片中總黃酮含量測(cè)定方法[5]進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果所制獨(dú)一味總黃酮樣品的純度以蘆丁計(jì)為63.86%。

2.2 分組、造模與給藥

將56只大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組，模型組，甲氨蝶呤組（陽(yáng)性對(duì)照組），獨(dú)一味水提液低、中、高劑量組和獨(dú)一味總黃酮組，每組8只。造模前先用游標(biāo)卡尺測(cè)定各組大鼠的左后足掌厚度，記為第0天的足掌厚度。除正常對(duì)照組外，其余各組大鼠均于右后足墊注射FCA 0.05 mL復(fù)制AA模型[13];正常對(duì)照組大鼠注射等體積生理鹽水。注射FCA次日，陽(yáng)性對(duì)照組大鼠灌胃甲氨蝶呤（3 mg/kg[14]，以0.5%CMC-Na溶液為溶劑制成混懸液）;獨(dú)一味水提液低、中、高劑量組大鼠分別灌胃獨(dú)一味水提液[0.5、1、2 g/kg（以生藥量計(jì)），劑量參考2020年版《中國(guó)藥典》（一部）中獨(dú)一味片的臨床使用劑量進(jìn)行換算后制定[5]];獨(dú)一味總黃酮組大鼠灌胃總黃酮提取物（200 mg/kg，以0.5%CMC-Na溶液為溶劑制成混懸液，劑量相當(dāng)于獨(dú)一味水提液高劑量組中黃酮類(lèi)成分的量）;正常對(duì)照組和模型組大鼠灌胃等體積0.5% CMC-Na溶液。僅甲氨蝶呤組大鼠每3天給藥1次，其余各組大鼠均每天給藥1次，給藥體積均為10 mL/kg，連續(xù)給藥30天。

2.3 大鼠一般情況觀察

給藥第15天時(shí)，觀察各組大鼠的精神、活動(dòng)狀態(tài)和飲食、體毛色澤及關(guān)節(jié)紅腫情況，并測(cè)定其體質(zhì)量。根據(jù)大鼠未注射FCA的另外3只肢體的關(guān)節(jié)紅腫情況判斷是否造模成功[15]。

2.4 大鼠足腫脹度的測(cè)定

分別于第15、30天給藥4 h后，采用游標(biāo)卡尺測(cè)定各組大鼠左后足掌的厚度（mm），并計(jì)算其足腫脹度（足腫脹度=第15天或第30天的左后足掌厚度/第0天的左后足掌厚度）。

2.5 大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)的測(cè)定

第15、30天給藥4 h后，按5級(jí)評(píng)分法對(duì)大鼠未注射FCA的其余3只肢體的病變程度進(jìn)行評(píng)分[15]：無(wú)紅腫，0分;足小趾關(guān)節(jié)紅腫，1分;趾關(guān)節(jié)和足趾均腫脹，2分;踝關(guān)節(jié)以下的足爪均腫脹，3分;包括踝關(guān)節(jié)在內(nèi)的全部足爪紅腫，4分。3只肢體評(píng)分之和即為關(guān)節(jié)炎指數(shù)。

2.6 大鼠炎癥細(xì)胞因子水平的測(cè)定

第30天給藥后，大鼠禁食不禁水12 h，測(cè)定大鼠體質(zhì)量，觀察大鼠左后足掌腫脹情況并拍照。然后腹腔注射3.5%水合氯醛（10 mL/kg）將大鼠麻醉，腹主動(dòng)脈采血，在4 ℃下放置過(guò)夜，然后在4 ℃下以3 000 r/min離心10 min，取上層血清。按相應(yīng)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)方法操作，分別檢測(cè)血清中致炎細(xì)胞因子（TNF-α、IL-? ? 1β、IL-6）和抗炎細(xì)胞因子（IL-10）的水平。

2.7 大鼠胸腺指數(shù)和脾指數(shù)的測(cè)定

大鼠腹主動(dòng)脈采血后，立即剝離其胸腺和脾臟，用濾紙輕輕擦拭干凈，稱(chēng)質(zhì)量，計(jì)算胸腺指數(shù)和脾指數(shù)：胸腺指數(shù)=胸腺質(zhì)量（mg）/體質(zhì)量（g）;脾指數(shù)=脾質(zhì)量（mg）/體質(zhì)量（g）。

2.8 大鼠踝關(guān)節(jié)病理學(xué)變化的觀察

取大鼠左踝關(guān)節(jié)，以4%多聚甲醛固定，再經(jīng)過(guò)脫鈣、脫水、常規(guī)石蠟包埋、切片（厚度4～5 μm），行常規(guī)HE染色后，在顯微鏡下觀察大鼠踝關(guān)節(jié)的病理學(xué)變化（包括炎癥反應(yīng)、滑膜增生、軟骨破壞等）。

2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以x±s表示，同組間不同給藥時(shí)間的比較采用配對(duì)t檢驗(yàn);多組間比較采用單因素方差分析，方差齊者組間兩兩比較采用LSD法，方差不齊者組間兩兩比較采用Dunnetts T3法。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 獨(dú)一味水提液和總黃酮對(duì)AA模型大鼠一般情況的影響

給藥第15天時(shí)，與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠表現(xiàn)出精神倦怠、活動(dòng)減少、食欲下降、被毛失去光澤、體質(zhì)量減輕等癥狀，且未注射FCA的其余3只肢體均出現(xiàn)不同程度的關(guān)節(jié)紅腫，表明造模成功。上述現(xiàn)象在各給藥組大鼠中均有所改善。

3.2 獨(dú)一味水提液和總黃酮對(duì)AA模型大鼠足腫脹度的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠給藥第15、30天時(shí)的足腫脹度均顯著升高（P<0.01）。與模型組比較，各給藥大鼠給藥第15、30天時(shí)的足腫脹度均顯著降低（P<0.01）。與同組給藥第15天時(shí)比較，各給藥組大鼠給藥第30天時(shí)的足腫脹度均顯著降低（P<0.01），而模型組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與獨(dú)一味水提液高劑量組比較，獨(dú)一味總黃酮組大鼠給藥第15天時(shí)的足腫脹度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但給藥第30天時(shí)的足腫脹度顯著升高（P<0.05）。給藥第15、30天時(shí)各組大鼠的足腫脹度測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

3.3 獨(dú)一味水提液和總黃酮對(duì)AA模型大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠給藥第15、30天時(shí)的關(guān)節(jié)炎指數(shù)均顯著升高（P<0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠給藥第15、30天時(shí)的關(guān)節(jié)炎指數(shù)均顯著降低（P<0.01）。與同組給藥第15天時(shí)比較，各給藥組大鼠給藥第30天時(shí)的關(guān)節(jié)炎指數(shù)均顯著降低（P<0.05或P<0.01），而模型組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與獨(dú)一味水提液高劑量組比較，獨(dú)一味總黃酮組大鼠給藥第15、30天時(shí)的關(guān)節(jié)炎指數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。給藥第30天時(shí)各組大鼠的左后足掌見(jiàn)圖1，給藥第15、30天時(shí)各組大鼠的關(guān)節(jié)炎指數(shù)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

3.4 獨(dú)一味水提液和總黃酮對(duì)AA模型大鼠血清中炎癥因子水平的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平均顯著升高（P<0.01），IL-10水平顯著降低（P<0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平均顯著降低（P<0.01），IL-10水平均顯著升高（P<0.01）。各組大鼠血清中TNF-α、 IL-1β、IL-6和IL-10水平測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

3.5 獨(dú)一味水提液和總黃酮對(duì)AA模型大鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠胸腺指數(shù)顯著降低（P<0.01），脾指數(shù)顯著升高（P<0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠的胸腺指數(shù)均顯著升高（P<0.01），脾指數(shù)均顯著降低（P<0.01）。各組大鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。

3.6 獨(dú)一味水提液和總黃酮對(duì)AA模型大鼠踝關(guān)節(jié)病理學(xué)變化的影響

正常對(duì)照組大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整、排列整齊，細(xì)胞下為疏松結(jié)締組織，無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠踝關(guān)節(jié)組織可見(jiàn)明顯的滑膜細(xì)胞增生、浸潤(rùn)關(guān)節(jié)腔，滑膜細(xì)胞下的結(jié)締組織因膠原纖維增生而變得緊密，間質(zhì)可見(jiàn)明顯的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。與模型組比較，各給藥組大鼠上述癥狀均不同程度地好轉(zhuǎn)，滑膜細(xì)胞向關(guān)節(jié)腔的浸潤(rùn)、間質(zhì)的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)均不同程度地減輕。各組大鼠踝關(guān)節(jié)病理學(xué)變化顯微圖見(jiàn)圖2。

4 討論

AA是一種經(jīng)典的免疫炎癥模型，其發(fā)病機(jī)制和病理表現(xiàn)與人體RA相似，目前已被廣泛用于抗RA藥物研發(fā)的基礎(chǔ)研究中[16-17]。甲氨蝶呤是在臨床上用于治療RA的首選藥物之一，其在開(kāi)發(fā)治療RA藥物的基礎(chǔ)研究中常被用作陽(yáng)性藥物[13，18]。故本研究以甲氨蝶呤為陽(yáng)性對(duì)照藥物，采用AA大鼠模型來(lái)研究獨(dú)一味水提液和總黃酮的抗RA作用。在RA中，致炎細(xì)胞因子和抗炎細(xì)胞因子之間的不平衡會(huì)誘導(dǎo)自身免疫、慢性炎癥的發(fā)生，并由此引起關(guān)節(jié)損傷[19]。TNF-α、IL-1β、IL-6是常見(jiàn)的致炎細(xì)胞因子，IL-10是常見(jiàn)的抗炎細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子廣泛參與了RA的發(fā)病進(jìn)程[19-20]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，在RA患者的血清中TNF-α水平顯著升高，其與RA患者的炎癥和關(guān)節(jié)破壞直接相關(guān)[21]。TNF-α可通過(guò)多方面因素介導(dǎo)RA的發(fā)生與發(fā)展，如刺激B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞的增殖和分化，誘導(dǎo)產(chǎn)生其他促炎細(xì)胞因子（如IL-1、IL-6），促進(jìn)滑膜細(xì)胞上調(diào)溶血素、膠原酶、前列腺素、粒細(xì)胞單核細(xì)胞集落刺激因子的分泌，通過(guò)成纖維細(xì)胞刺激黏附分子（如細(xì)胞內(nèi)黏附分子1）的表達(dá)等[22]。IL-1β可通過(guò)增加滑膜成纖維細(xì)胞的細(xì)胞因子、趨化因子、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶等的釋放，介導(dǎo)RA的發(fā)生與發(fā)展[23];IL-6可通過(guò)作用于嗜中性粒細(xì)胞而引起炎癥和關(guān)節(jié)的破壞，從而參與到RA的發(fā)生與發(fā)展中[24]。而IL-10可通過(guò)多個(gè)途徑阻滯RA的發(fā)生與發(fā)展，如減少TNF-α、IL-1β、IL-6的形成和抑制TNF-α誘導(dǎo)的滑膜成纖維細(xì)胞產(chǎn)生前列腺素等[25]。因此，降低TNF-α、IL-1β、IL-6水平，升高IL-10的水平，對(duì)阻滯RA的發(fā)生與發(fā)展至關(guān)重要。

胸腺、脾是機(jī)體中非常重要的免疫器官。其中，胸腺主要參與細(xì)胞免疫，脾主要參與體液免疫，胸腺質(zhì)量和脾質(zhì)量與免疫細(xì)胞數(shù)量及免疫功能直接相關(guān)，故胸腺指數(shù)、脾指數(shù)可在一定程度上反映機(jī)體的免疫功能狀態(tài)[26]。而RA是一種自身免疫性疾病，發(fā)病后可使機(jī)體的胸腺指數(shù)、脾指數(shù)偏離正常狀態(tài)[27]。

本研究結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠的足腫脹度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、脾指數(shù)以及血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平均顯著升高，胸腺指數(shù)和血清中IL-10水平均顯著降低，踝關(guān)節(jié)組織可見(jiàn)明顯的病理學(xué)改變（如炎癥反應(yīng)、滑膜增生等），均提示造模成功。與模型組比較，甲氨蝶呤組和獨(dú)一味各給藥組大鼠的足腫脹度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)、炎癥細(xì)胞因子水平、踝關(guān)節(jié)病理學(xué)變化等均顯著改善;且通過(guò)各給藥組大鼠給藥第15、30天時(shí)的足腫脹度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)的比較可以發(fā)現(xiàn)，各給藥組大鼠上述指標(biāo)水平均隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)而顯著降低，而模型組大鼠的上述指標(biāo)水平并未隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的推移發(fā)生顯著變化。綜合以上結(jié)果可知，獨(dú)一味水提液、總黃酮均具有良好的抗RA的作用。進(jìn)一步通過(guò)與獨(dú)一味水提液高劑量組比較發(fā)現(xiàn)，獨(dú)一味總黃酮組大鼠在給藥第15天時(shí)的足腫脹度以及在給藥第15、30天時(shí)的關(guān)節(jié)炎指數(shù)、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)、炎癥細(xì)胞因子水平、踝關(guān)節(jié)病理學(xué)變化等差異均不顯著。以上結(jié)果提示，總黃酮可能是獨(dú)一味抗RA的主要藥效成分群，這與本課題組前期基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的獨(dú)一味抗RA的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)預(yù)測(cè)結(jié)果一致[12]。

綜上，藏藥獨(dú)一味具有良好的抗RA作用，總黃酮可能是其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。但其確切的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機(jī)制等尚需進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2020-10-29 修回日期：2021-01-26）

（編輯：林 靜）