穿心蓮內(nèi)酯抗心律失常作用及機(jī)制研究

曾雪亮　李蓓　曾韜慧　鐘文敏

【摘要】 目的：研究穿心蓮內(nèi)酯對大鼠心律失常的作用機(jī)制。方法：將2019年10月-2020年10月從江西省實驗動物中心購買的90只清潔級雄性大鼠，隨機(jī)分為氯仿誘發(fā)心律失常組（A組，n=10）和氯仿誘發(fā)心律失常并穿心蓮內(nèi)酯組（B組，n=10）;腎上腺素誘發(fā)心律失常組（C組，n=10）和腎上腺素誘發(fā)心律失常并穿心蓮內(nèi)酯組（D組，n=10）;氯化鈣誘發(fā)心律失常組（E組，n=10）和氯化鈣誘發(fā)心律失常并穿心蓮內(nèi)酯組（F組，n=10）;烏頭堿誘發(fā)心律失常組（G組，n=10）和烏頭堿誘發(fā)心律失常并穿心蓮內(nèi)酯組（H組，n=10）;正常對照組（I組，n=10）。觀察A～F組心律失常出現(xiàn)時間和心律失常持續(xù)時間，比較G、H組室性早搏（VP）、室性心動過速（VT）和室顫（VF）的持續(xù)時間，比較A～I(xiàn)組大鼠血清Ca²⁺、LDH水平。結(jié)果：B組與A組、D組與C組、F組與E組比較，心律失常出現(xiàn)時間均顯著推遲，心律失常持續(xù)時間均顯著縮短，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。H組VP、VT、VF均顯著短于G組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與I組比較，A、C、E、G組大鼠Ca²⁺、LDH水平均顯著升高（P<0.05）;B組與A組、D組與C組、F組與E組、H組與G組比較，血清中Ca²⁺、LDH水平均顯著降低（P<0.05）。結(jié)論：穿心蓮內(nèi)酯對氯仿、腎上腺素、氯化鈣、烏頭堿引起心律失常具有對抗作用，能夠降低血清LDH與Ca²⁺水平，是抗心律失常的有效藥物。

【關(guān)鍵詞】 穿心蓮內(nèi)酯 心律失常 心律失常出現(xiàn)時間 心律失常持續(xù)時間

Anti-arrhythmic Effects and Mechanism of Andrographolide/ZENG Xueliang， LI Bei， ZENG Taohui， ZHONG Wenmin. //Medical Innovation of China， 2021， 18（15）： 00-010

[Abstract] Objective： To study the mechanism of Andrographolide on arrhythmia in rats. Method： A total of 90 clean male rats who purchased from Jiangxi Provincial Laboratory Animal Center from October 2019 to October 2020 were randomly divided into Chloroform-induced arrhythmia group （group A， n=10） and Chloroform-induced arrhythmia combined with Andrographolide group （group B， n=10）， Adrenerinol-induced arrhythmias （group C， n=10） and Adrenerinol-induced arrhythmias combined with Andrographolide group （group D， n=10）， CaCl2-induced arrhythmia group （group E， n=10） and CaCl2-induced arrhythmia combined with Andrographolide group （F group， n=10）， Aconitonine-induced arrhythmia group （group G， n=10） and Aconitine-induced arrhythmia combined with Andrographolide group （group H， n=10）， normal control group （group I， n=10）. The occurrence time and duration of arrhythmia in group A to F were observed. The duration of ventricular premature beats （VP）， ventricular tachycardia （VT） and ventricular fibrillation （VF） in group G and group H were compared. The levels of serum Ca²⁺and LDH in group A to I were compared. Result： Compared with group A， group B， group D and group C， and group F and group E， the occurrence time of arrhythmia were significantly delayed and the duration of arrhythmia were significantly shortened， the differences were statistically significant （P<0.05）. VP， VT and VF in group H were significantly shorter than those in group G， the differences were statistically significant （P<0.05）. Compared with group I， the Ca²⁺and LDH levels in group A， group C， group E and group G were significantly increased （P<0.05）. Compared with group A， group D， group C， group F and group E， and group H and group G， serum Ca²⁺and LDH levels were significantly decreased （P<0.05）. Conclusion： Andrographolide can antagonize arrhythmia induced by chloroform， Adrenerinol， calcium chloride and aconitine， reduce serum LDH and Ca²⁺levels， and is an effective drug against arrhythmia.

[Key words] Andrographolide Arrhythmia Occurrence time of arrhythmia Duration of arrhythmia

First-authors address： The First Affiliated Hospital of Gannan Medical College， Ganzhou 341000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.15.002

心律失常為內(nèi)科易發(fā)癥狀，表現(xiàn)為心臟搏動異常，引起胸悶、低血壓、心悸等癥狀[1-2]?？蓡为毎l(fā)病或與心血管病并發(fā)，導(dǎo)致心臟衰竭或猝死[3-4]。中醫(yī)對于心律失常的治療手段通過中藥配方實現(xiàn)心肌微循環(huán)，擴(kuò)張血管改善心律失常，治療效果顯著[5-6]。穿心蓮內(nèi)酯作為中藥提取物，具有多靶點的特點，在多種疾病中發(fā)揮作用[7-8]。臨床對于中成藥緩解心律失常研究的選藥范圍小，本次研究首次以穿心蓮內(nèi)酯作為實驗藥劑，通過建立多種模型，探討穿心蓮內(nèi)酯對不同原因?qū)е滦穆刹积R的作用機(jī)制，為心律失常藥物治療提供數(shù)據(jù)支持。現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 2019年10月-2020年10月從江西省實驗動物中心購買清潔級雄性大鼠90只（體質(zhì)量230～250 g），隨機(jī)分為9組，氯仿誘發(fā)心律失常組（A組，n=10）和氯仿誘發(fā)心律失常并穿心蓮內(nèi)酯組（B組，n=10）;腎上腺素誘發(fā)心律失常組（C組，n=10）和腎上腺素誘發(fā)心律失常并穿心蓮內(nèi)酯組（D組，n=10）;氯化鈣誘發(fā)心律失常組（E組，n=10）和氯化鈣誘發(fā)心律失常并穿心蓮內(nèi)酯組（F組，n=10）;烏頭堿誘發(fā)心律失常組（G組，n=10）和烏頭堿誘發(fā)心律失常并穿心蓮內(nèi)酯組（H組，n=10）;正常對照組（I組，n=10）。各組適應(yīng)喂養(yǎng)一個月后建立模型。麻醉實驗符合一般動物實驗倫理學(xué)原則。

1.2 實驗儀器 生物機(jī)能實驗處理系統(tǒng)（正華生物儀器設(shè)備有限公司），恒速泵（益邦生物醫(yī)療公司），低速自動平衡離心機(jī)（麥科儀科技有限公司），可見分光光度計（菲勒儀器有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 氯仿誘發(fā)心律失常模型 B組大鼠尾部靜脈勻速注射穿心蓮內(nèi)酯，將4 mL氯仿棉球放在倒置的600 mL燒杯內(nèi)，依次放入A、B組大鼠于該燒杯內(nèi)，每換1次大鼠加1 mL氯仿，大鼠吸入氯仿至呼吸停止即刻轉(zhuǎn)移至操作臺，打開大鼠胸腔，查看大鼠心室狀況，計算心律失常出現(xiàn)時間及持續(xù)時間。

1.3.2 腎上腺素誘發(fā)心律失常模型 C、D組大鼠禁食12 h，麻醉并固定大鼠，針狀電極刺進(jìn)四肢和胸腔皮下，建模后采用生物機(jī)能實驗系統(tǒng)查看并記錄大鼠心電圖。0.5 h后舌下靜脈注入腎上腺素（生產(chǎn)廠家：上海禾豐制藥有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H31021062，規(guī)格：1 mL︰1 mg）40 μg/kg，

D組10 s內(nèi)快速靜脈注射穿心蓮內(nèi)酯（生產(chǎn)廠家：重慶漢華制藥有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字Z50020470，規(guī)格：50 mg/片），藥片在研缽中研碎，緩慢加入純化水，邊加邊研磨（藥片及純化水比例1︰1.5），加入0.05%維生素E抗氧，觀察記錄由腎上腺素引起的心律失常出現(xiàn)時間及持續(xù)時間。

1.3.3 氯化鈣誘發(fā)心律失常 E、F組大鼠禁食12 h，麻醉并固定大鼠，針狀電極刺進(jìn)四肢和胸腔皮下，建模后采用生物機(jī)能實驗系統(tǒng)查看并記錄大鼠心電圖。0.5 h后頸外靜脈注射3.5%氯化鈣注射液（生產(chǎn)廠家：國藥集團(tuán)容生制藥有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H20065400，規(guī)格：10 mL︰0.3 g）120 mg/kg，F(xiàn)組10 s內(nèi)快速靜脈注射穿心蓮內(nèi)酯，查看大鼠心室狀況，計算心律失常出現(xiàn)時間及持續(xù)時間。

1.3.4 烏頭堿誘發(fā)心律失常模型 G、H組大鼠禁食12 h，麻醉并固定大鼠，針狀電極刺進(jìn)四肢和胸腔皮下，建模后采用生物機(jī)能實驗系統(tǒng)查看并記錄大鼠心電圖。0.5 h后舌下靜脈注射烏頭堿溶液（生產(chǎn)廠家：甘肅蘭藥藥業(yè)有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H62021137）2 μg/min，H組10 s內(nèi)快速靜脈注射穿心蓮內(nèi)酯，監(jiān)測心電圖變化，觀察記錄由烏頭堿引起的室性早搏（ventricularprematurebeat， VP）、室性心動過速（ventriculartachycardia， VT）和室顫（ventricularfibrillation， VF）持續(xù)時間。

1.3.5 各組大鼠LDH、Ca²⁺水平 采集各組大鼠眼眶血液離心得到上清液，使用Ca²⁺測定試劑盒、LDH測定試劑盒測定各組大鼠血清中Ca²⁺、LDH水平，操作按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 21.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗;計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用χ²檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 穿心蓮內(nèi)酯對氯仿所致大鼠心律失常的影響 與A組比較，B組大鼠心律失常出現(xiàn)時間延后，心律失常持續(xù)時間縮短，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 穿心蓮內(nèi)酯對腎上腺素所致大鼠心律失常的影響 與C組比較，D組大鼠心律失常出現(xiàn)時間顯著推遲，心律失常持續(xù)時間明顯縮短，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.3 穿心蓮內(nèi)酯對氯化鈣所致大鼠心律失常的影響 與E組比較，F(xiàn)組大鼠心律失常出現(xiàn)時間顯著推遲，心律失常持續(xù)時間也顯著縮短，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表3。

2.4 穿心蓮內(nèi)酯對烏頭堿所致大鼠心律失常的影響 G、H組注入烏頭堿即刻發(fā)生心律失常。與G組比較，H組VP、VT、VF均縮短，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表4。

2.5 各組大鼠LDH、Ca²⁺水平比較 與I組比較，A、C、E、G組大鼠Ca²⁺、LDH水平均顯著升高（P<0.05）;B組與A組、D組與C組、F組與E組、H組與G組比較，血清中Ca²⁺、LDH水平均顯著降低（P<0.05）。見表6。

3 討論

心律失常包括室性早搏、室性心動過速和心室顫動。室性早搏是心臟興奮性過高，導(dǎo)致心室沖動過早的室性收縮[9]。心律失常發(fā)展具有持續(xù)性，從心悸、早搏逐漸可發(fā)展為惡性心律失常，最終引起眩暈，且不同階段癥狀預(yù)后差異不大，并無直接的相關(guān)性[10]。室性心動過速是心肌傳導(dǎo)纖維、心室肌等部位的快速性心律失常，頻率高于100次/min，有單形和多形室性心動過速，單行室性心動過速包括非持續(xù)性和持續(xù)性室性心動過速[11-12]。室性心動最終演變?yōu)槭翌?，引起患者急性猝死[13]。心室顫動表現(xiàn)為心室肌高頻率收縮致心臟暫停排血，大面積局部組織缺血[14]。研究證明，離子通道受阻與心律失常密切相關(guān)，建立動物模型用于研究中藥抗心律失常具有特異性。氯仿進(jìn)入機(jī)體引起神經(jīng)麻痹，進(jìn)而影響離子通路[15]。腎上腺素促進(jìn)交感神經(jīng)沖動，Ca²⁺離子通道開放，膜外離子內(nèi)流，心肌自律性提高，出現(xiàn)心律失常[16]。氯化鈣改變多種離子流向，Na⁺離子內(nèi)流改變?nèi)O化速率，引起Ca²⁺離子內(nèi)流，進(jìn)而促使心肌細(xì)胞鉀離子電導(dǎo)異常出現(xiàn)振蕩電位，最終導(dǎo)致心律失常[17]。烏頭堿促使細(xì)胞Na⁺離子通道打開，加速Na⁺離子內(nèi)流，加強(qiáng)心房傳導(dǎo)組織自律性，引起室性、室上性異位節(jié)律，等多種心律失常[18]。穿心蓮內(nèi)酯具有抗炎、抗菌效果，在心血管疾病治療中也具有使用價值[19]。

本實驗首次以穿心蓮內(nèi)酯研究心律失常，在建立心律失常模型后，注射穿心蓮內(nèi)酯后大鼠心律失常發(fā)生時間推遲，持續(xù)時間減少，結(jié)果與李亞萍等[20]研究結(jié)果類似，表明穿心蓮內(nèi)酯與安神定志湯對氯仿、氯化鈣、腎上腺素和烏頭堿引起的心律失常具有對抗作用。有研究表明甘松提取物具有膜的穩(wěn)定作用，阻滯心肌鈣離子通道開放[21]，根據(jù)本實驗對大鼠血清檢測結(jié)果，注射穿心蓮內(nèi)酯大鼠血清Ca²⁺離子水平和LDH明顯改善，可能與穿心蓮內(nèi)酯促進(jìn)離子通道開放有關(guān)，進(jìn)而促進(jìn)機(jī)體物質(zhì)代謝。引起心律失常的原因眾多，本實驗首次選用穿心蓮內(nèi)酯對建模大鼠心律失常的影響，但并未建立較為新穎的心律失常模型，可根據(jù)心律失常致病原因做進(jìn)一步研究。

綜上所述，穿心蓮內(nèi)酯對心律失常具有拮抗作用，可以用于心律失常的治療，具有研究意義和治療價值。

參考文獻(xiàn)

[1]劉春鋼.胺碘酮對急診快速型心律失?；颊叩寞熜Ъ捌鋵Ψ€(wěn)定血壓的影響[J].抗感染藥學(xué)，2018，15（8）：1425-1427.

[2]陳肖藝，王翩翩，陳冰.散點圖與24 h動態(tài)心電圖診斷心律失常準(zhǔn)確率對比分析[J/OL].心電圖雜志（電子版），2018，7（4）：12-13.

[3]陳司坤，解夢莉，韓毅，等.非肽類孤啡肽受體拮抗劑C-24對大鼠急性心肌缺血后心律失常的影響[J].天津醫(yī)藥，2021，49（1）：11-15.

[4]呂佳譽(yù)，崔向?qū)?，蘇文革.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討生脈散治療心律失常作用機(jī)制[J].中醫(yī)學(xué)報，2021，36（1）：153-159.

[5]李賽賽，李平，康楠，等.PI3K/Akt信號通路與心血管疾病關(guān)系的研究進(jìn)展[J].北京醫(yī)學(xué)，2021，43（1）：66-69，72.

[6]魏言昭，李威，楊雙，等.C1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白9對大鼠心肌梗死后室性心律失常的影響[J].中國心臟起搏與心電生理雜志，2020，34（6）：583-588.

[7]母育成，邢相宜，晏子俊，等.穿心蓮內(nèi)酯的抗菌作用研究進(jìn)展[J].貴州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2021，43（1）：85-89.

[8]張劉紅，王長虹.穿心蓮內(nèi)酯理化性質(zhì)及其制劑研究進(jìn)展[J].上海醫(yī)藥，2021，42（1）：19-31.

[9]楊光輝.雙腔心臟起搏器和單腔心臟起搏器治療老年緩慢性心律失常的效果對比[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2019，16（1）：23-26.

[10]齊欣，郭書文，黃琨，等.早搏性心律失常的多重危險因素及病理特征臨床研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2017，35（1）：81-84.

[11]邵芳芳，郭潤民，梁偉鈞.糖尿病伴發(fā)心律失常機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2017，14（28）：142-145.

[12]華琴.動態(tài)心電圖對冠狀動脈粥樣硬化性心律失常的診斷價值探討[J].江西醫(yī)藥，2020，55（6）：772-773.

[13]黃琳.參松養(yǎng)心膠囊對心房顫動射頻消融術(shù)后心律失常的療效觀察[J].江西醫(yī)藥，2017，52（11）：1156-1158.

[14]劉世林.穩(wěn)心顆粒與卡托普利聯(lián)合治療肺心病合并心律失常的可行性研究[J].江西醫(yī)藥，2017，52（10）：1019-1021.

[15]楊峰.CircITGA7對缺血性心律失常大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響[J].基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，2020，39（2）：769-774.

[16]吳鳳珠，俞瑞群，張家美.針刺內(nèi)關(guān)穴調(diào)節(jié)心率機(jī)制的研究概況[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2019，17（7）：1026-1029.

[17]韓垚，秦田雨，劉紅旭，等.調(diào)脈飲及其拆方對快速心律失常大鼠心肌L型鈣通道m(xù)RNA表達(dá)的影響[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2018，24（20）：123-128.

[18]翟旭峰，王瑾，鄭爽，等.鐵皮石斛對缺血再灌注誘導(dǎo)的心律失常的保護(hù)作用[J].現(xiàn)代食品科技，2017，33（7）：1-8.

[19]謝璇，任瑩璐，張惠敏，等.穿心蓮內(nèi)酯的藥理作用和應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2018，16（19）：2809-2812.

[20]李亞萍，張明昊，章金濤.安神定志湯對實驗性大鼠心律失常的作用[J].中醫(yī)學(xué)報，2019，34（5）：967-971.

[21]曾夢柳.穿心蓮內(nèi)酯通過抑制Na⁺和Ca²⁺電流發(fā)揮抗心律失常作用[D].武漢：武漢科技大學(xué)，2017.

（收稿日期：2021-03-17） （本文編輯：姬思雨）