龍巖地區(qū)HLA-B27基因亞型與強直性脊柱炎臨床特征分析

李曼　謝永欣

【摘要】 目的：調(diào)查龍巖地區(qū)人類白細(xì)胞抗原B27（HLA-B27）基因亞型的分布情況，分析其與疾病臨床特征的關(guān)系。方法：收集龍巖市第二醫(yī)院風(fēng)濕免疫科2020年6月-2021年9月就診的強直性脊柱炎（AS）患者98例為AS組，同期健康體檢者200例為健康對照組。采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-序列特異性引物法（PCR-SSP）檢測兩組的HLA-B27基因及亞型。結(jié)果：AS組HLA-B27陽性率88.78%，明顯高于健康對照組的8.00%（P<0.05）。AS組患者中共檢測出HLA-B*2702、HLA-B*2704、HLA-B*2705、HLA-B*2708四種基因亞型，未檢測到HLA-B*2710。健康對照組中檢測出HLA-B*2702、HLA-B*2704、HLA-B*2705、HLA-B*2708、HLA-B*2710五種基因亞型。AS組和健康對照組均以HLA-B*2704和HLA-B*2705亞型為主;AS組較健康對照組HLA-B*2704陽性率高（P<0.05）。健康對照組較AS組HLA-B*2708、HLA-B*2710陽性率高（P<0.05）。相較于HLA-B*2704亞型，HLA-B*2705亞型外周關(guān)節(jié)炎和髖關(guān)節(jié)受累比例更高，而SpA家族史、炎性腰背痛比例更低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。髖關(guān)節(jié)炎組和非髖關(guān)節(jié)炎組的起病年齡、病程、IL-6水平、首發(fā)髖關(guān)節(jié)炎占比及HLA-B*2705占比比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：本地區(qū)AS患者的HLA-B27基因亞型以HLA-B*2704、HLA-B*2705為主，此兩型與疾病臨床特征關(guān)系密切，有助于AS患者的早期診斷和干預(yù)。

【關(guān)鍵詞】 強直性脊柱炎 基因亞型 基因分型檢測 基因多態(tài)性

HLA-B27 Gene Subtypes and Clinical Characteristics of Ankylosing Spondylitis in Longyan Area/LI Man， XIE Yongxin. //Medical Innovation of China， 2021， 18（36）： -170

[Abstract] Objective： To investigate the distribution of human leukocyte antigen B27 （HLA-B27） gene subtype in Longyan area and analyze its relationship with clinical characteristics of the disease. Method： A total of 98 patients with ankylosing spondylitis （AS） who visited rheumatology Department of Longyan Second Hospital from June 2020 to September 2021 were enrolled as the AS group， and 200 healthy subjects were enrolled as the healthy control group during the same period. HLA-B27 gene and subtype were detected by polymerase chain reaction with sequence specific primer （PCR-SSP）. Result： The positive rate of HLA-B27 in AS group was 88.78%， which was significantly higher than 8.00% in healthy control group （P<0.05）. Four subtypes of HLA-B*2702， HLA-B*2704， HLA-B*2705 and HLA-B*2708 were detected in AS group， but HLA-B*2710 was not detected. Five subtypes of HLA-B*2702， HLA-B*2704， HLA-B*2705， HLA-B*2708 and HLA-B*2710 were detected in the healthy control group. HLA-B*2704 and HLA-B*2705 subtypes were dominant in AS group and healthy control group; the positive rate of HLA-B*2704 in AS group was higher than that in healthy control group （P<0.05）. The positive rates of HLA-B*2708 and HLA-B*2710 in healthy control group were higher than those in AS group （P<0.05）. Compared with HLA-B*2704 subtype， HLA-B*2705 subtype has a higher proportion of peripheral arthritis and hip involvement， while the proportion of SpA family history and inflammatory low back pain is lower， the differences were statistically significant （P<0.05）. Comparison of onset age， course of disease， IL-6 level， proportion of first-episode hip arthritis and proportion of HLA-B*2705 between hip arthritis group and non hip arthritis group， the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion： HLA-B27 gene subtypes of as patients in this region are mainly HLA-B*2704 and HLA-B*2705. These two subtypes are closely related to the clinical characteristics of the disease， which is helpful for the early diagnosis and intervention of as patients.

[Key words] Ankylosing spondylitis Genotyping Gene subtype Gene polymorphism

First-author’s address： Longyan Second Hospital， Fujian Province， Longyan 364000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.36.040

強直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）是以侵犯脊柱、關(guān)節(jié)為主的慢性炎癥性系統(tǒng)性風(fēng)濕病，具有患病率高，致殘率隨病程延長而增高的特點[1]。其中遺傳因素與發(fā)病關(guān)系緊密，數(shù)據(jù)顯示AS患者及近親親屬HLA-B27陽性率明顯高于健康人群[2]。HLA-B27基因具有種族、地域的高度多態(tài)性，關(guān)于HLA-B27及基因亞型在AS患者中的分布已有報道，但HLA-B27基因分型特點與臨床特點的分析研究尚無大樣本的報道。本研究進(jìn)行HLA-B27基因分型檢測了解本地區(qū)HLA-B27亞型分布情況及與AS臨床特征的關(guān)系，以期對AS的早期診斷及預(yù)測疾病提供幫助。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2020年6月-2021年9月在龍巖市第二醫(yī)院風(fēng)濕免疫科診斷明確的AS患者98例為AS組，選擇同期的健康體檢者200例為健康對照組。AS組納入標(biāo)準(zhǔn)：采用美國風(fēng)濕病學(xué)會1984年修訂的紐約診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，患者均符合AS診斷標(biāo)準(zhǔn)。AS組排除標(biāo)準(zhǔn)：其他類型脊柱關(guān)節(jié)炎、其他風(fēng)濕免疫性疾病。健康對照組納入標(biāo)準(zhǔn)：與AS的年齡、性別相匹配。健康對照組排除標(biāo)準(zhǔn)：慢性關(guān)節(jié)炎、慢性腰背炎性疾病、脊柱關(guān)節(jié)炎家族史、風(fēng)濕免疫性疾病史。該研究經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)，受檢者知情同意。

1.2 方法 HLA-B27基因分型檢測采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-序列特異性引物法（polymerase chain reaction with sequence specific primer，PCR-SSP）定性檢測，采用HLA-B27高分辨分型試劑盒（天津秀鵬生物技術(shù)開發(fā)有限公司）。利用樣本DNA提取物提取DNA，配置dNTP-Buffer酶混合液做成引物，設(shè)置陰性對照孔，將上述混合液引物放入PCR儀內(nèi)，設(shè)置好擴增參數(shù)，進(jìn)行擴增，循環(huán)5次，然后進(jìn)行電泳檢測，采集圖像數(shù)據(jù)，根據(jù)試劑盒提供的判讀板判斷結(jié)果。紅細(xì)胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR）采用魏氏法進(jìn)行檢測，正常值：男≤16 mm/h，女≤20 mm/h。

C-反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）采用速率散射法檢測，正常值≤3 mg/L。白介素-6（interleukin-6，IL-6）采用固相夾心法化學(xué)發(fā)光免疫量度檢測，正常值≤11.53 pg/mL。

1.3 觀察指標(biāo) 記錄所有研究對象的人口學(xué)特征和臨床特征，如年齡、病程、發(fā)病年齡、家族史、炎性腰背痛、關(guān)節(jié)受累、葡萄膜炎和疾病活動相關(guān)指標(biāo)如ESR、CRP、IL-6以及強直性脊柱炎疾病活動指數(shù)（bath ankylosing spondylitis disease activity index，BASDAI）[4]。比較不同基因亞型臨床指標(biāo)的差異。比較強直性脊柱髖關(guān)節(jié)受累組與非受累組疾病活動指標(biāo)的差異。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 23.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗;計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 AS組中男78例，女20例;年齡10～65歲，平均（34.45±13.85）歲;平均病程（5.80±0.47）年。健康對照組中男142例，女58例;年齡18～67歲，平均（38.27±15.92）歲。兩組性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 HLA-B27在AS組和健康對照組的分布情況 AS組HLA-B27陽性率88.78%，明顯高于健康對照組的8.00%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（字2=189.740，P<0.05），見表1。

2.3 HLA-B27基因亞型在AS組和健康對照組中的分布情況 AS組患者中共檢測出HLA-B*2702、HLA-B*2704、HLA-B*2705、HLA-B*2708四種基因亞型，未檢測到HLA-B*2710。健康對照組中檢測出HLA-B*2702、HLA-B*2704、HLA-B*2705、HLA-B*2708、HLA-B*2710五種基因亞型。AS組和健康對照組均以HLA-B*2704和HLA-B*2705亞型為主;AS組較健康對照組HLA-B*2704陽性率高（P<0.05）。健康對照組較AS組HLA-B*2708、HLA-B*2710陽性率高（P<0.05）。見表2。

2.4 AS患者HLA-B*2704亞型和HLA-B*2705亞型臨床特征比較 相較于HLA-B*2704亞型，HLA-B*2705亞型外周關(guān)節(jié)炎和髖關(guān)節(jié)受累比例更高，而SpA家族史、炎性腰背痛比例更低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。AS患者HLA-B*2704亞型和HLA-B*2705亞型趾炎、急性前葡萄炎占比、年齡、起病年齡、病程、BASDAI、CRP、ESR比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表3。

2.5 髖關(guān)節(jié)炎組與非髖關(guān)節(jié)炎組臨床指標(biāo)比較 AS合并髖關(guān)節(jié)炎組34例（34.7%），非髖關(guān)節(jié)炎組64例（65.3%）。兩組的起病年齡、病程、IL-6水平、首發(fā)髖關(guān)節(jié)炎占比及HLA-B*2705占比比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表4。

3 討論

強直性脊柱炎是一種病因復(fù)雜、多系統(tǒng)性炎癥性脊柱關(guān)節(jié)?。╯pondyloarthropathy，SpA），與遺傳因素HLA-B27關(guān)系密切[5-6]。國際AS評估協(xié)會（Assessment in SpondyloArthritis International Society，ASAS）將HLA-B27陽性列為中軸性SpA和外周SpA重要的分類診斷依據(jù)[7]。目前臨床上HLA-B27的檢測普遍采用血清抗原檢測法，容易受到抗原交叉反應(yīng)及抗原表達(dá)量的影響出現(xiàn)假陽性和假陰性，且HLA-B27抗原在不同血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病中亦可以表達(dá)，給臨床診斷帶來困惑。隨著基因分子生物學(xué)科的發(fā)展，迄今發(fā)現(xiàn)HLA-B27基因具有多種不同的亞型，不同亞型具有不同的流行病學(xué)特點和人種差異，跟疾病的關(guān)聯(lián)也不盡相同[2]。因此臨床要結(jié)合癥狀、體征、影像檢查，一旦檢出本地區(qū)AS強相關(guān)的B27基因亞型，將有助于早期精準(zhǔn)診斷強直性脊柱炎。

在此次研究中，共納入98例AS患者，87例患者檢出HLA-B27陽性，陽性率為88.78%，與既往研究數(shù)據(jù)一致[8]。在基因表型分布上發(fā)現(xiàn)AS組和健康對照組均以HLA-B*2704為主，其次以HLA-B*2705亞型為主。HLA-B27基因亞型在強直性脊柱炎的分布具有種族性和地域性，本結(jié)果與中國北方、上海、廣大等大部分地區(qū)的研究結(jié)果基本一致[9-11]。而亞洲地區(qū)泰國AS人群中以HLA-B*2704為主[12]，韓國地區(qū)則以HLA-B*2705為主[13]。此次研究AS組患者中未檢測到HLA-B*2710。健康對照組較AS組HLA-B*2708、HLA-B*2710檢出陽性率高（P<0.05）。推測這兩個亞型可能對AS的發(fā)病具有保護(hù)作用，但總體陽性率仍偏低，有限的樣本量尚不足以得出可靠的結(jié)論，后續(xù)需要更多的臨床數(shù)據(jù)驗證。

HLA-B27基因分型特點與AS疾病的臨床特征亦有明顯關(guān)系。既往有研究顯示HLA-B*2704和HLA-B*2707亞型病情更輕，而相較HLA-B*2704患者，HLA-B*2705的患者發(fā)作葡萄膜炎時間更遲[14-15]。本地區(qū)研究發(fā)現(xiàn)相較于HLA-B*2704亞型，HLA-B*2705亞型外周關(guān)節(jié)炎和髖關(guān)節(jié)受累比例更高，而SpA家族史、炎性腰背痛比例更低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。推測本地區(qū)HLA-B*2704基因亞型可能更易侵犯中軸關(guān)節(jié)，而HLA-B*2705基因亞型可能更易侵犯外周關(guān)節(jié)炎，可見不同基因亞型的致病性存在差異，進(jìn)一步說明AS的發(fā)病機制復(fù)雜多樣。因此分析HLA-B27基因分型特點與AS臨床特征的關(guān)系可以為本地區(qū)AS患者預(yù)后提供一定參考依據(jù)。

強直性脊柱炎容易出現(xiàn)髖關(guān)節(jié)炎而致殘，發(fā)生率24%～36%[16]。當(dāng)出現(xiàn)髖部癥狀，關(guān)節(jié)影像檢查出現(xiàn)關(guān)節(jié)硬化，往往已經(jīng)進(jìn)展至關(guān)節(jié)強直，錯過最佳藥物治療時機，需要手術(shù)干預(yù)[17-18]。國內(nèi)研究報道HLA-B27陽性、持續(xù)肌腱端炎、髖關(guān)節(jié)疼痛和脊柱炎家族史是AS早發(fā)髖關(guān)節(jié)病變的危險因素[19]。

本研究顯示AS合并髖關(guān)節(jié)炎組較非髖關(guān)節(jié)炎組起病年齡更小，病程更長，IL-6水平更高，首發(fā)髖關(guān)節(jié)炎比例及HLA-B*2705陽性比例更高（P<0.05）;有研究顯示炎癥因子IL-6可通過NF-κB受體活化因子（RANK）配基（RANKL）依賴機制增強破骨細(xì)胞的能力，促進(jìn)骨吸收，加速骨丟失，從而導(dǎo)致骨質(zhì)疏松，促進(jìn)局部髖關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展[20]。HLA-B*2705亞型是祖先基因，最早被發(fā)現(xiàn)，分布最廣，其他基因由此進(jìn)化而來，不同亞型結(jié)構(gòu)上差別導(dǎo)致致病性不同，其呈遞的抗原容易在髖關(guān)節(jié)局部產(chǎn)生炎癥，導(dǎo)致髖關(guān)節(jié)病變，被認(rèn)為是AS髖關(guān)節(jié)炎的高?；騺喰汀Ｒ虼伺R床對于HLA-B*2705亞型的高IL-6水平年輕AS患者，需要更加重視及密切隨訪，應(yīng)盡早行髖關(guān)節(jié)MRI檢測，有助于早期篩查出髖關(guān)節(jié)炎的這部分患者，盡早進(jìn)行有效的抗炎搶救性治療，避免疾病進(jìn)展，保護(hù)關(guān)節(jié)功能。

綜上所述，HLA-B27基因亞型與臨床特征關(guān)系密切，不同基因亞型的致病性存在差異，由于受樣本量、藥物經(jīng)濟學(xué)和隨訪周期短限制，尚未開展不同亞型與治療藥物反應(yīng)的研究，后續(xù)需進(jìn)一步收集臨床數(shù)據(jù)密切觀察隨訪，以期為AS的診斷、早期防治提供幫助。

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（收稿日期：2021-12-07） （本文編輯：姬思雨）