靈芝多糖預(yù)防及抑制腫瘤機(jī)制研究進(jìn)展

譚禮浩

摘 要：靈芝多糖是靈芝提取物中最關(guān)鍵的藥效成分之一，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗氧化、降血糖、抗炎、抗菌、抗糖尿病及其并發(fā)癥等藥理作用。在藥用資源和功能食品添加物方面具有很大的開發(fā)利用價(jià)值。本文將從動(dòng)物、臨床兩方面靈芝多糖的抗腫瘤功效進(jìn)行闡述，并從分子層面對(duì)靈芝多糖抗腫瘤功效機(jī)制進(jìn)展進(jìn)行介紹。

關(guān)鍵詞：靈芝多糖;免疫;抗腫瘤

靈芝（Ganoderma lucidum）屬于真菌界、真菌門、擔(dān)子菌亞門層菌綱、非褶菌目、靈芝科、靈芝屬真菌。作為一種藥食兩用資源，靈芝在東方國(guó)家，如中國(guó)，韓國(guó)，日本使用已經(jīng)有兩千多年的歷史。靈芝多糖（Ganoderma lucidum polysaccharides，GLP）由雜多糖、葡萄糖和肽多糖等組成的混合物，與氨基酸、三萜、甾醇、生物堿、核苷一樣，為中藥?kù)`芝的主要活性成分之一。其藥理作用廣泛，具有活血化瘀、抗輻射、免疫調(diào)節(jié)、抗衰老、抗腫瘤等作用，其中，靈芝多糖的抗腫瘤作用尤其引人關(guān)注。硏究發(fā)現(xiàn)，靈芝多糖對(duì)肝癌、肺癌、黑色素瘤、宮頸癌、卵巢癌、胃癌、結(jié)腸癌及白血病等腫瘤疾病具有廣泛的抑制作用，并且對(duì)正常體細(xì)胞無毒或低毒，受到了國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)界的關(guān)注[2]。

1 靈芝多糖的抗腫瘤功效

1.1動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)

目前，小鼠模型為靈芝多糖抗腫瘤實(shí)驗(yàn)的主要實(shí)施對(duì)象，移植惡性腫瘤細(xì)胞進(jìn)小鼠體內(nèi)并繁殖;再利用靈芝多糖或靈芝提取物注射進(jìn)小鼠體內(nèi)，或?qū)π∈筮M(jìn)行灌胃;數(shù)周后觀察小鼠體內(nèi)腫瘤變化情況，以及巨噬細(xì)胞、T、B淋巴細(xì)胞，NK細(xì)胞，DC細(xì)胞等細(xì)胞因子的活性、增殖變化情況。

高凌等采用小鼠抗移植性腫瘤實(shí)驗(yàn)方法，分別以150mg/kg、300 mg/kg、和600 mg/kg劑量靈芝孢子多糖連續(xù)12天灌胃給藥，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，靈芝孢子多糖對(duì)小鼠移植性肝癌Heps的抑瘤率為53.77%-65.25%;連續(xù)8天灌胃給藥，對(duì)小鼠移植性肉瘤S180的抑瘤率為50.39%-55.04%;皆呈良好的抑瘤作用。

Hikino H[1]等在小鼠的足趾和腋皮下接種了Lewi肺癌和結(jié)腸癌，灌胃靈芝多糖一周后，發(fā)現(xiàn) Lewi 肺癌的抑制率高達(dá) 59.13%，結(jié)腸癌的抑制率最高為49.14%，同時(shí)此靈芝多糖還增強(qiáng)了小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬殺傷能力，強(qiáng)化機(jī)體免疫力，抑制腫瘤的生長(zhǎng)。

Chen YouGuo[2]等通過建立卵巢癌小鼠模型，設(shè)置對(duì)照組、模型組和多糖處理組，每組8支。利用靈芝多糖對(duì)小鼠進(jìn)行喂養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后測(cè)定大鼠血清抗氧化酶含量。結(jié)果表明，靈芝多糖顯著降低了MDA的產(chǎn)量，和提高了血清抗氧化酶活性，小鼠免疫力能得到提升，表明靈芝多糖可能對(duì)卵巢癌治療有益。

根據(jù)各國(guó)學(xué)者的研究發(fā)現(xiàn)，靈芝多糖能顯著提升動(dòng)物模型免疫水平，抑制腫瘤生長(zhǎng)（S180 肉瘤、Lewis肺癌、肝癌Heps、宮頸癌U-14、膀胱癌T24、結(jié)腸癌、卵巢癌、惡性腦膠質(zhì)瘤等），延長(zhǎng)生存期，并且在常規(guī)劑量?jī)?nèi)使用，對(duì)體內(nèi)正常細(xì)胞沒有細(xì)胞毒性。

1.2 臨床研究

許多臨床研究均證明，靈芝制劑與化療或放療合用時(shí)，對(duì)一些腫瘤如胃癌、食管癌、肺癌、肝癌、膀胱癌、腎癌、大腸癌、前列腺癌和子宮癌等有較好的輔助治療效果。能增患者細(xì)胞免疫功能、減少常規(guī)治療的不良反應(yīng)、提升生存質(zhì)量。

焉本魁等報(bào)道，運(yùn)用老君仙靈芝口服液配合化療治療中晚期非小細(xì)胞性肺癌， 隨機(jī)分成治療組（35例）和對(duì)照組（21例），有效率分別為65 .71 %和42 .85%（P <0.01）。觀察結(jié)果表明老君仙靈芝口服液能夠減輕化療毒副作用，提高化療治療效果，改善腫瘤患者生活質(zhì)量。能減少化療對(duì)骨髓造血功能的抑制，使化療前后白細(xì)胞和血小板無明顯減少，提高腫瘤患者被抑制的細(xì)胞免疫功能，對(duì)抑制腫瘤的發(fā)展產(chǎn)生積極作用。

林能俤等將經(jīng)病理學(xué)、細(xì)胞學(xué)和CT檢查證實(shí)的114例癌癥（胃癌、食管癌、肺癌、肝癌、宮頸癌、結(jié)腸癌和膀胱癌）患者隨機(jī)分為化療+靈芝組（66例）和單純化療組（48例）進(jìn)行治療前后比較，觀察靈芝提取物配合化療治療癌癥的療效。治療組：從化療開始及化療后服靈芝提取物膠囊，每次服4粒，每日4次，40 d為1療程。治療前、后;化療+靈芝組NK 細(xì)胞（自然殺傷細(xì)胞）活性分別為51.24±7.90和48.10±7.90（P>0.05）;單純化療組分別為51.40±6.62和44.43±7.19（P<0.05）;化療+靈芝組治療前后CD3，CD4，CD8 細(xì)胞亞型（%）無顯著改變，但單純化療組治療后CD3，CD4，CD8 細(xì)胞亞群百分率明顯降低（P<0.05）?；?靈芝組患者的中醫(yī)臨床癥狀、生活質(zhì)量亦獲改善。結(jié)果表明，靈芝提取物膠囊配合化療可明顯改善癌癥患者的細(xì)胞免疫功能，降低腫瘤治療給身體帶來的副作用。

黃建明等[4]報(bào)道，26例非小細(xì)胞肺癌（鱗癌、腺癌）患者，14 例接受CD3AK細(xì)胞治療（A組）;12例接受CD3AK細(xì)胞治療同時(shí)服用靈芝合劑（B組）（靈芝合劑以靈芝、黃芪、黨參為主組方，每日1劑，水煎服），患者在治療前及治療1個(gè)月后采用放射免疫分析法測(cè)定癌胚抗原。結(jié)果顯示，兩組患者的“復(fù)發(fā)”時(shí)間有所不同，A組為7.82±3.59月，而B組為3.26±5.5月，差異有顯著意義（P<0.01）。B組的平均生存時(shí)間為23.5±14.39個(gè)月，A 組為15.75±8.30個(gè)月，差異有顯著意義（P<0.05）?？梢婌`芝合劑與CD3AK 細(xì)胞合用，可增強(qiáng)CD3AK 細(xì)胞對(duì)肺癌的臨床療效。

2 靈芝多糖抗腫瘤機(jī)制

2.1靈芝多糖抗腫瘤細(xì)胞機(jī)制研究概況

通過研究發(fā)現(xiàn)，靈芝多糖增強(qiáng)主要通過以下幾種不同的途徑來強(qiáng)化機(jī)體的免疫系統(tǒng)以達(dá)到抗腫瘤目的[5]：

（1）活化巨噬細(xì)胞，促進(jìn)T淋巴細(xì)胞（TH細(xì)胞）轉(zhuǎn)化為活性TC細(xì)胞，增加B淋巴細(xì)胞和自然殺傷（NK）細(xì)胞的數(shù)量與活性;促進(jìn)IL-1、TNF-α、IL-2等細(xì)胞因子的分泌，提高機(jī)體的免疫監(jiān)視功能，從而減少腫瘤的發(fā)生;

（2）激活網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)和補(bǔ)體系統(tǒng)，誘生各種免疫因子，如IFN（干擾素）、TNF（腫瘤壞死因子）等實(shí)現(xiàn)殺滅腫瘤細(xì)胞作用;

（3）調(diào)節(jié)機(jī)體神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫系統(tǒng)網(wǎng)絡(luò);

（4）促進(jìn)細(xì)胞中核糖核酸（RNA）、脫氧核糖核酸（DNA）以及蛋白質(zhì)的合成，增加細(xì)胞內(nèi)環(huán)核苷酸（cGMP、cAMP）的水平。

（5）活化DC細(xì)胞，啟動(dòng)樹突狀細(xì)胞的免疫反應(yīng)，一方面DC細(xì)胞誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞活化;另一方面DC接受已活化T淋巴細(xì)胞反饋回來的活化信號(hào)如CD40L 而活化，表達(dá)共刺激分子并分泌其他活化因子如IL-12，誘導(dǎo)Th1 型應(yīng)答的生成;DC作為激發(fā)T淋巴細(xì)胞免疫反應(yīng)的重要輔助細(xì)胞，在初次抗體反應(yīng)、混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)、促有絲分裂反應(yīng)及抗腫瘤免疫應(yīng)答中均具有重要作用。

2.2 靈芝多糖抗腫瘤分子機(jī)制研究概況

2.2.1 TLR4（TOLL樣受體）是靈芝多糖激活巨噬細(xì)胞的最重要受體

作者運(yùn)用 Western-blotting 法測(cè)定了各組荷瘤模型小鼠TLR4、NF-κB、IκBα以及pp38 等蛋白的表達(dá)情況[6-7]。結(jié)果顯示，各組荷瘤小鼠中，靈芝多糖組腹腔巨噬細(xì)胞的膜蛋白TLR4 表達(dá)顯著增加，核蛋白NF-κB表達(dá)水平也呈劑量依賴性升高;而細(xì)胞質(zhì)中IκBα的蛋白表達(dá)量逐漸降低，并且磷酸化蛋白pp38表達(dá)也顯著增強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示靈芝多糖通過作用于腹腔巨噬細(xì)胞膜上的TLR4受體，將信號(hào)傳遞進(jìn)入細(xì)胞，然后激活NF-κB和p38 MAPK信號(hào)通路，促進(jìn)TNF-α的分泌，強(qiáng)化機(jī)體免疫力，間接地發(fā)揮抗腫瘤的作用。

2.2.2 靈芝多糖可以通過激活cAMP/PKA信號(hào)途徑，下調(diào)DG-PKC信號(hào)通路來誘導(dǎo)并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡

作者通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了各組荷瘤模型小鼠的腫瘤細(xì)胞的凋亡程度，測(cè)定結(jié)果顯示靈芝多糖能顯著地誘導(dǎo)荷瘤小鼠腫瘤細(xì)胞的凋亡。通過ELISA活性試劑盒檢測(cè)發(fā)現(xiàn)靈芝多糖能顯著提高荷瘤小鼠腫瘤細(xì)胞中的cAMP、PKA、AC活性，下調(diào)DG、cGMP、PKC的活性;Western Blotting法檢測(cè)PKA和PKC蛋白的表達(dá)[8]，結(jié)果顯示靈芝多糖顯著地促進(jìn)了PKA蛋白的表達(dá)，下調(diào)了PKC的蛋白表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示靈芝多糖可以通過激活cAMP/PKA信號(hào)途徑，下調(diào)DG-PKC信號(hào)通路來誘導(dǎo)并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，從而抑制抗腫瘤的生長(zhǎng)。

2.2.3靈芝多糖能夠通過激活線粒體凋亡通路，實(shí)現(xiàn)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用

采用流式細(xì)胞術(shù)觀察各組荷瘤小鼠腫瘤細(xì)胞的線粒體膜電位變化和ROS的產(chǎn)生，發(fā)現(xiàn) 靈芝多糖能有效地促進(jìn)線粒體膜電位的降低和ROS的產(chǎn)生，Western Blotting檢測(cè)細(xì)胞色素 C、凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2和p53的表達(dá)，結(jié)果顯示：靈芝多糖顯著地提高了促凋亡蛋白Bax和p53的表達(dá)水平，減少了抑制凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)量，同時(shí)還促進(jìn)了線粒體中細(xì)胞色素C釋放到細(xì)胞質(zhì)中。通過檢測(cè)Caspase-9， -3的活性發(fā)現(xiàn)，靈芝多糖有效地活化了Caspase-9， -3。實(shí)驗(yàn)提示靈芝多糖通過激活線粒體凋亡通路，實(shí)現(xiàn)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用，從而發(fā)揮抗腫瘤活性[9-10]。

3 展望

靈芝多糖具有廣泛的功效，特別是其抗腫瘤作用近年來得到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。隨著人們對(duì)靈芝多糖生物活性評(píng)價(jià)的不斷深入，其作用機(jī)制將更加清晰，未來靈芝多糖在預(yù)防及抑制腫瘤方面將會(huì)有更廣泛的應(yīng)用。

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