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    雞蛋中角黃素液相色譜法測定的比較

    2020-11-13 09:40:13李瑞云華鑫玲
    中國食品 2020年20期
    關(guān)鍵詞:丙酮標(biāo)準(zhǔn)溶液乙腈

    李瑞云 華鑫玲

    角黃素天然存在于蛋類、肝臟、魚類等中,主要用作動物飼料添加劑,尤其在蛋類中比較容易殘留。之前我們都認(rèn)為,蛋黃越黃證明雞蛋品質(zhì)越好,但實際上這也可能是角黃素的積聚。據(jù)部分研究所得,攝取大量角黃素,可導(dǎo)致色素積聚于視網(wǎng)膜,對身體造成極大危害。本文比較了乙腈提取法、乙腈丙酮提取法、石油醚提取法的優(yōu)劣,從而得到了提取角黃素的最佳條件。

    一、實驗部分

    1.儀器與試劑。試劑:樣品基質(zhì)(雞蛋)、角黃素標(biāo)準(zhǔn)品、乙腈、丙酮、石油醚、乙腈丙酮提取劑(50:50)。儀器:高效液相色譜儀(安捷倫1200)、高效液相色譜儀(Waters e2695)、組織勻漿機(jī)、離心機(jī)、氮吹機(jī)、電子天平。

    2.標(biāo)準(zhǔn)曲線制備。角黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液(9.5μg/mL):準(zhǔn)確稱取純度為95%的角黃素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1.0mg于100mL容量瓶,選用乙腈為溶劑溶解標(biāo)準(zhǔn)品,完全溶解后定容、混勻,其中角黃素濃度為9.5μg/mL。標(biāo)準(zhǔn)溶液置于-18℃冰箱中避光保存。

    角黃素標(biāo)準(zhǔn)工作液:分別吸取1.00mL、2.00mL、4.00mL、8.00mL、10.00mL角黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液于10mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度。其中角黃素工作液濃度為0.95μg/mL、1.9μg/mL、3.8μg/mL、7.6μg/mL、9.5μg/mL。

    3.分析步驟。試樣制備:取多個雞蛋,洗凈去殼后用組織勻漿機(jī)充分?jǐn)嚢杈鶆?,放入玻璃瓶中。試樣保存:將試樣?18℃避光條件下保存。提?。喊幢?所示進(jìn)行提取。

    二、結(jié)果與討論

    1.線性關(guān)系。以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo),角黃素峰面積為縱坐標(biāo),建立回歸方程y=33.342x-1.375,R2=0.9997。

    2.回收率試驗。以雞蛋為基質(zhì)空白樣品數(shù)據(jù),見表2。然后采取空白試樣加標(biāo)回收法,確定方法回收率。稱取2g空白試樣,精密加入9.5μg/mL角黃素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1mL,最后計算出回收率。

    3.精密度試驗。精密吸取角黃素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(0.95μg/mL、3.8μg/mL、9.5μg/mL),連續(xù)進(jìn)樣6次,RSD分別為0.06%、0.02%、0.01%,測定結(jié)果表明,儀器精密度良好。

    同時,為測定斑蝥黃的穩(wěn)定性,在室溫20℃的條件下分別取濃度為1.9μg/mL、3.8μg/mL、7.6μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,于0h、12h、24h不同時間進(jìn)樣,RSD分別為4.4%、3.9%、8.7%。測定結(jié)果表明,24h內(nèi)角黃素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不穩(wěn)定。

    4.儀器比對。準(zhǔn)備相同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液,0.95μg/mL、1.9μg/mL、3.8μg/mL、7.6μg/mL、9.5μg/mL,在安捷倫1200與Waters e2695同時上機(jī)。結(jié)果顯示,色譜圖中峰型均良好,Waters e2695出峰較早、峰面積較大、峰高較高,且儀器比對信噪比≥3,均適宜角黃素測定。結(jié)果見表3。

    5.結(jié)論。 (1)三種提取液比較中,乙腈丙酮(50:50)提取劑回收率115.22%,石油醚提取劑回收率98.80%,乙腈提取劑回收率91.18%,可見乙腈丙酮(50:50)提取劑更適合角黃素提取。

    (2)9.5μg/mL標(biāo)準(zhǔn)品分別室溫放置0h、12h、24h后上機(jī)檢測,RSD%均小于10%,說明角黃素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)室溫放置24小時內(nèi)穩(wěn)定。

    (3)角黃素標(biāo)準(zhǔn)品3.87μg/mL在安捷倫1200與Waters e2695同時上機(jī),峰型均較好且信噪比均≥3,說明兩種儀器均適合角黃素檢測。

    (4)角黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液9.5μg/mL在370nm、470nm、570nm下比對,發(fā)現(xiàn)470nm左右為最大吸收波長、響應(yīng)度最高,且峰型較好,570nm峰型最差,則470nm較適合角黃素檢測。

    綜上,提取角黃素的最佳條件為:乙腈丙酮提取法,回收率115.22%,采用高效液相色譜法測定,色譜柱為C18(4.6mm×150mm),流動相為甲醇-水,流速1.0mL/min,柱溫:30℃,檢測波長:471nm。在上述條件下,角黃素在0.95-9.5μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,R2=0.9997。

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