腸道菌群應(yīng)用于針灸臨床及機(jī)理研究的文獻(xiàn)計(jì)量學(xué)分析＊

羅月紅，金芮玉，陳 丹，劉 慶，余 陽(yáng)，陳星宇，趙 凌

（成都中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院 成都 610000）

腸道菌群是寄居在胃腸道的龐大微生物群體，因其數(shù)量豐富、種類繁雜，目前對(duì)腸道菌群的分類方式各有側(cè)重。腸道菌群在正常機(jī)體內(nèi)始終處于動(dòng)態(tài)平衡，維持著人體內(nèi)環(huán)境的“穩(wěn)態(tài)”[1]，這對(duì)維持人體健康有著重要作用。當(dāng)它受到外界環(huán)境以及藥物等多種致病因素的影響失衡時(shí)，則會(huì)通過一系列復(fù)雜的病理變化，誘發(fā)全身多系統(tǒng)疾病[2]。腸道菌群的調(diào)控作用已成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)，被認(rèn)為是疾病治療的潛在重要靶標(biāo)[3]。針灸是中醫(yī)外治法的主要手段，目前研究表明針灸作為一種非特異性刺激作用于機(jī)體局部時(shí)，依靠經(jīng)絡(luò)腧穴的傳導(dǎo)作用，實(shí)現(xiàn)對(duì)整個(gè)機(jī)體陰陽(yáng)、營(yíng)衛(wèi)氣血的調(diào)節(jié)，發(fā)揮其平衡陰陽(yáng)、調(diào)和氣血、扶正祛邪的作用，從而治療全身疾病。針灸治療過程中體現(xiàn)的整體觀和平衡觀，與促使腸道菌群恢復(fù)平衡來治療全身疾病的思路不謀而合。因此越來越多的研究者開始著手于針灸與腸道菌群、疾病三者關(guān)系的相關(guān)研究。多項(xiàng)研究表明針灸能通過對(duì)不同穴位的刺激作用，改善和調(diào)節(jié)腸道菌群的種類、數(shù)量以及菌群之間的比例，對(duì)腸道菌群起“維穩(wěn)”作用，從而達(dá)到治療相關(guān)疾病的目的[4,5]。因此，本文采用文獻(xiàn)計(jì)量學(xué)方法，從文獻(xiàn)的發(fā)表年代、期刊分布、作者單位、是否受基金項(xiàng)目支持、文獻(xiàn)類型、文獻(xiàn)被引用頻次、研究方法、研究載體、數(shù)據(jù)分析方法及內(nèi)容等方面對(duì)針灸治療疾病的文獻(xiàn)進(jìn)行分析，總結(jié)腸道菌群在針灸治病機(jī)理研究中的應(yīng)用概況，提出未來該領(lǐng)域研究的切入點(diǎn)，為今后更高水平的研究提供參考。

1 資料與方法

1.1 資料來源

采用計(jì)算機(jī)檢索的方式，檢索范圍設(shè)定為中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)（CNKI）、維普數(shù)據(jù)庫(kù)（VIP）和萬方知識(shí)服務(wù)平臺(tái)（WF）三大中文數(shù)據(jù)庫(kù)以及PubMed 英文數(shù)據(jù)庫(kù)。

1.2 檢索策略

將中文檢索詞限定為“針刺/艾灸/電針”且“腸道菌群/腸道微生物”，英文檢索詞限定為“acupuncture or moxibustion or electroacupuncture”和“gut microbiota or gut flora or intestinal flora or bowel flora or intestinal microorganism or enteric microorganism or gut microbes or intestinal microflora”，時(shí)間均限定為1999 年7 月1日-2019年12月1日，語言限定為中文及英文。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn)

①文獻(xiàn)的表年代為1999 年7 月1 日-2019 年12 月1日；②第一作者國(guó)籍為中國(guó)；③干預(yù)措施包含針灸治療方式（針刺、艾灸、電針）；④文獻(xiàn)類型可為臨床研究、實(shí)驗(yàn)研究、綜述。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn)

①未涉及針灸治療（針刺、艾灸、電針）與腸道菌群或腸道微生物相關(guān)性的文獻(xiàn)；②醫(yī)案、個(gè)人經(jīng)驗(yàn)報(bào)道等文獻(xiàn)；③內(nèi)容雷同、重復(fù)發(fā)表或不能獲取原文的文獻(xiàn)。

1.5 數(shù)據(jù)管理與分析方法

圖1 文獻(xiàn)檢索步驟

下載所檢索文獻(xiàn)全文，將其建立數(shù)據(jù)庫(kù)，然后由2位研究者獨(dú)立閱讀所建數(shù)據(jù)庫(kù)的文獻(xiàn)全文，分別按照提前設(shè)定的納入、排除標(biāo)準(zhǔn)對(duì)文獻(xiàn)進(jìn)行篩選，當(dāng)遇到分歧時(shí)，則尋求第三方協(xié)助裁定，2 位研究者分別將納入排除后的檢索記錄以及需要分析的文獻(xiàn)內(nèi)容錄入Excel 2010 軟件。本文主要對(duì)文獻(xiàn)的發(fā)表年代、期刊分布、作者單位、是否受基金項(xiàng)目支持、文獻(xiàn)類型、文獻(xiàn)被引用頻次、研究方法、研究載體、數(shù)據(jù)分析方法及內(nèi)容等進(jìn)行計(jì)量學(xué)分析，根據(jù)數(shù)據(jù)分布特征，以描述性統(tǒng)計(jì)作為主要的分析方法[6]。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢索結(jié)果

根據(jù)檢索詞共檢索到可能符合標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)261篇（圖1）。

2.2 納入文獻(xiàn)的年代分布

文獻(xiàn)量的多少能夠從一定程度上反映該領(lǐng)域目前的發(fā)展情況，通過對(duì)文獻(xiàn)量隨著年代分布情況的分析，確定文獻(xiàn)量與時(shí)間變化的關(guān)系，可大致揭示科學(xué)發(fā)展的某些特點(diǎn)和規(guī)律[3]。通過對(duì)CNKI、VIP、WF 三大中文數(shù)據(jù)庫(kù)以及PubMed 英文數(shù)據(jù)的檢索，共納入82 篇文獻(xiàn)（圖2）。由圖2 可知探索針灸與腸道菌群相關(guān)性的文獻(xiàn)較少，從2009 年才出現(xiàn)相關(guān)研究，至2019年，文獻(xiàn)量總體呈上升趨勢(shì)，于2018 年達(dá)到峰值27篇。從文獻(xiàn)年代分布情況來看，針灸與腸道菌群相關(guān)性的研究正在受到更多的重視，說明該領(lǐng)域值得更進(jìn)一步的探索，并且還有很大的發(fā)展空間。

2.3 納入文獻(xiàn)的期刊分布

圖2 文獻(xiàn)發(fā)表年代統(tǒng)計(jì)

圖3 文獻(xiàn)收錄期刊統(tǒng)計(jì)

表1 第一作者單位統(tǒng)計(jì)

納入的82 篇文獻(xiàn)中有20 篇碩博士學(xué)位論文以及4 篇會(huì)議論文，剩余58 篇文獻(xiàn)分別收錄在41 種期刊上，載文量較多的期刊有7 種，其中最多的是《針灸臨床雜志》，載文5 篇，載文僅1 篇的有32 種期刊?？闯鰵v年來核心期刊收錄文章較少，文獻(xiàn)質(zhì)量有待商榷（圖3）。

表2 受基金項(xiàng)目支持統(tǒng)計(jì)

2.4 納入文獻(xiàn)的作者單位分布

統(tǒng)計(jì)納入文獻(xiàn)中第一作者的單位（表1），共31 個(gè)單位發(fā)表相關(guān)文獻(xiàn)，其中成都中醫(yī)藥大學(xué)研究最多，累計(jì)發(fā)表14篇文獻(xiàn)，有18個(gè)單位均發(fā)表1篇文獻(xiàn)。從發(fā)表和集中性方面的分析表明，成都中醫(yī)藥大學(xué)與遼寧中醫(yī)藥大學(xué)是該領(lǐng)域研究的主要力量，較其他機(jī)構(gòu)的研究起步更早，更深入、更重視。

2.5 納入文獻(xiàn)的基金項(xiàng)目支撐情況

在納入的82 篇文獻(xiàn)中，有52 篇文獻(xiàn)受基金項(xiàng)目支撐，占文獻(xiàn)量百分比63.41%（表2）。其中受國(guó)家自然科學(xué)基金支撐的最多，共有36 篇。接受大于1 項(xiàng)基金項(xiàng)目支持的有31 篇文獻(xiàn)（37.80%）。證明針灸與腸道菌群相關(guān)性的研究是受到廣泛認(rèn)同和支持的，具有研究?jī)r(jià)值。

2.6 納入文獻(xiàn)的類型分布

82 篇文章中，臨床研究17 篇（占20.73%），實(shí)驗(yàn)研究35 篇（占42.68%），綜述等文獻(xiàn)30 篇（占36.59%）（圖4）。目前針對(duì)腸道菌群與針灸治療效應(yīng)及作用機(jī)理的相關(guān)性的臨床及實(shí)驗(yàn)研究較少，綜述類文獻(xiàn)居多。而被納入的30 篇綜述類文獻(xiàn)中引用的文獻(xiàn)大都來自于成澤東[7,8]、周莉萍[9]、侯天舒[10]等團(tuán)隊(duì)的實(shí)驗(yàn)研究，這從另一角度也說明目前對(duì)于腸道菌群與針灸治療效應(yīng)及作用機(jī)理的相關(guān)性的研究還較少，研究角度有待進(jìn)一步創(chuàng)新，研究?jī)?nèi)容也有待拓展和深入。

2.7 文獻(xiàn)被引用頻次

在最終納入的82 篇文獻(xiàn)中，有46 篇文獻(xiàn)曾被引用，占文獻(xiàn)量百分比為56.10%，其中被引用頻次大于20 次的文獻(xiàn)僅有9 篇，大于100 次的文獻(xiàn)僅有1 篇（表3），而未被引用過的文獻(xiàn)數(shù)量較大，占43.90%。研究腸道菌群與針灸治療效應(yīng)及作用機(jī)理的相關(guān)性的文獻(xiàn)質(zhì)量有待提高，同時(shí)也提示目前針對(duì)這方面的研究尚少。

圖4 文獻(xiàn)類型分布

表3 文獻(xiàn)被引用頻次統(tǒng)計(jì)

2.8 臨床及實(shí)驗(yàn)研究文獻(xiàn)的研究方法及研究載體

在納入的82篇文獻(xiàn)中，臨床及實(shí)驗(yàn)研究文獻(xiàn)共52篇，均設(shè)立對(duì)照組，其中1 篇[9]為自身對(duì)照，45 篇隨機(jī)對(duì)照研究文獻(xiàn)中有23 篇明確表示采用了隨機(jī)數(shù)字表法，2 篇[10,11]采用計(jì)算機(jī)完全隨機(jī)，余18 篇未具體描述隨機(jī)方法。所納入文獻(xiàn)中均未提到盲法、隨訪、病例脫失等。在納入的52篇臨床及實(shí)驗(yàn)研究文獻(xiàn)中，17篇臨床研究文獻(xiàn)中均分析患有不同疾病的人群的腸道菌群情況，包括肥胖病、肝硬化、急性胰腺炎合并胃腸功能障礙、危重癥患者腸道菌群失調(diào)、2 型糖尿病、糖尿病腹瀉、脾腎虛寒型泄瀉、腸易激綜合征、腎虛督寒型強(qiáng)直性脊柱炎、膿毒癥胃腸功能損傷，以內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)疾病為主（圖5）；其中有3篇文獻(xiàn)比較了病人與健康人的腸道菌群差異。而35 篇文獻(xiàn)以動(dòng)物為研究載體，其中采用家兔作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的有2篇文獻(xiàn)，余下的33 篇文章均使用鼠（大鼠26 篇，小鼠7 篇）；在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中對(duì)腸道菌群的研究分為健康動(dòng)物（3項(xiàng)研究）和模型動(dòng)物，模型動(dòng)物的疾病包括慢性疲勞綜合征、酒疸、便秘、潰瘍性結(jié)腸炎、消化性潰瘍、腸易激綜合征、肥胖病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、抑郁、心肌缺血、動(dòng)脈粥樣硬化、帕金森病、焦慮等多個(gè)系統(tǒng)的疾病，以消化系統(tǒng)疾病為主（圖6）；有30 篇文獻(xiàn)對(duì)比分析了患病動(dòng)物與健康動(dòng)物腸道菌群之間的差異。

2.9 針灸對(duì)腸道菌群的調(diào)節(jié)

2.9.1 腸道菌群與各系統(tǒng)疾病的關(guān)系

此次納入的實(shí)驗(yàn)研究與臨床研究中，主要圍繞消化系統(tǒng)、內(nèi)分泌及代謝系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等各系統(tǒng)疾病來展開。腸道菌群寄居于腸道，其紊亂可直接誘發(fā)消化系統(tǒng)疾病。根據(jù)納入研究可見，針灸能調(diào)節(jié)腸道菌群的多樣性、有益菌的豐度和各菌群之間的比例，使失調(diào)的腸道菌群恢復(fù)平衡從而治療相關(guān)疾病。成澤東等[12]認(rèn)為腸道菌群和腦腸肽可通過腦-腸軸影響胃腸動(dòng)力，使腸道能夠正常蠕動(dòng)。一旦菌群失調(diào)，胃腸蠕動(dòng)減弱，腸道的自我凈化能力下降，其清除有害物質(zhì)的效率大打折扣；同時(shí)路過菌群接觸、粘附的機(jī)會(huì)將會(huì)增多，極易導(dǎo)致菌群的過度生長(zhǎng)與繁殖。此外，腸道菌群在菌群-腸-腦軸中還通過5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）調(diào)控胃腸蠕動(dòng)，維持胃腸穩(wěn)態(tài)，5-HT 在體內(nèi)轉(zhuǎn)換的任意環(huán)節(jié)異常，均可引發(fā)相應(yīng)的胃腸疾病，出現(xiàn)多種胃腸道的不適癥狀，如腹痛、腹脹、腹瀉以及排便障礙等[13,14]。

圖5 臨床研究所含疾病種類

圖6 實(shí)驗(yàn)研究動(dòng)物模型的疾病種類

腦-腸-菌軸是近年來的醫(yī)學(xué)研究熱點(diǎn)，吳孝軍等[15]認(rèn)為腸道菌群作為該理論的核心，能夠通過神經(jīng)遞質(zhì)、免疫、內(nèi)分泌以及菌群代謝產(chǎn)物等途徑影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)（Central nervous system，CNS）的功能。例如，腸道菌群失調(diào)會(huì)導(dǎo)致調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞和IL-17γδT 細(xì)胞的生成障礙，而加重腦缺血[16]；藍(lán)藻菌可產(chǎn)生強(qiáng)毒性產(chǎn)物，使大腦功能退化，從而誘發(fā)癡呆、帕金森病等。菌群失調(diào)還會(huì)減少γ-氨基丁酸、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)（細(xì)胞誘向）因子在腦內(nèi)的表達(dá)，導(dǎo)致CNS 功能紊亂，產(chǎn)生認(rèn)知障礙、性格改變。

腸道菌群與心血管疾病（Cardiovascular disease，CVD）的相關(guān)性也是目前研究的重要著眼點(diǎn)。CVD 的發(fā)生發(fā)展與很多臟腑功能都有關(guān)系。張巍[17]認(rèn)為，中醫(yī)學(xué)理論中“心”與“脾”的關(guān)系最為密切，脾胃功能失調(diào)是誘發(fā)胸痹心痛的主要病因，而腸道菌群及其代謝產(chǎn)物可能是“脾”生理、病理功能的現(xiàn)代生物學(xué)基礎(chǔ)之一。因此張巍等人從腸道菌群與中醫(yī)“脾胃學(xué)說”的相關(guān)性入手，探討了針灸通過腸道菌群途徑防治心血管疾病的可行性。成澤東團(tuán)隊(duì)[18]認(rèn)為腸道作為機(jī)體的應(yīng)激反應(yīng)中心，當(dāng)機(jī)體內(nèi)發(fā)生過度應(yīng)激反應(yīng)則會(huì)引起腸道破壞、菌群失調(diào)，然而CVD 屬于應(yīng)激性疾病，與腸道菌群密切相關(guān)。應(yīng)激反應(yīng)擾亂腸道菌群的生存環(huán)境，導(dǎo)致菌群紊亂，菌群紊亂反作用于應(yīng)激系統(tǒng)，加劇應(yīng)激反應(yīng)，從而形成惡性循環(huán)。而該循環(huán)還可誘發(fā)神經(jīng)、免疫的異常改變，使CVD 癥狀的惡化與神經(jīng)精神癥狀同步?？梢?，借助神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)控網(wǎng)絡(luò)造成惡性循環(huán)的應(yīng)激-腸道菌群-心臟互動(dòng)機(jī)制，是CVD發(fā)病的重要病理基礎(chǔ)。因此該機(jī)制任何一個(gè)環(huán)節(jié)的異常均可以影響CVD的病情變化。

此外，有實(shí)驗(yàn)表明，腸道菌群能夠產(chǎn)生短鏈脂肪酸（Short-chain fatty acids，SCFA），該物質(zhì)具有促進(jìn)脂肪合成及存儲(chǔ)的功能，同時(shí)，也能夠通過免疫和神經(jīng)內(nèi)分泌機(jī)制調(diào)節(jié)食物能量的代謝[19]。周莉萍[9]運(yùn)用細(xì)菌培養(yǎng)和代謝組學(xué)的分析方法，探討了腸道菌群在人體生理代謝活動(dòng)中發(fā)揮的重要作用，認(rèn)為其對(duì)能量代謝、脂代謝、體內(nèi)多種活性物質(zhì)均有影響，腸道菌群種類和數(shù)量的差異，可導(dǎo)致肥胖癥、糖尿病等內(nèi)分泌及代謝系統(tǒng)疾病。

2.9.2 針灸與腸道菌群的關(guān)系

所納入文章的干預(yù)措施包括單純針刺、艾灸、電針、聯(lián)合療法（使用2種或以上的干預(yù)措施，含針刺、艾灸、電針、西藥、中藥湯劑等），在52篇臨床及實(shí)驗(yàn)研究文獻(xiàn)中，涉及消化系統(tǒng)疾病的有21 篇，干預(yù)措施以艾灸、電針、聯(lián)合療法為主；研究?jī)?nèi)分泌系統(tǒng)疾病的有13篇，干預(yù)措施以電針、單純針刺、聯(lián)合療法為主；關(guān)于神經(jīng)系統(tǒng)疾病的有7 篇，干預(yù)措施為單純針刺、艾灸、電針；此外4篇關(guān)于循環(huán)系統(tǒng)疾病的文獻(xiàn)以電針、聯(lián)合療法為主要干預(yù)措施（表4）。

表4 干預(yù)措施統(tǒng)計(jì)

在生物體內(nèi)，腸道菌群與疾病常常相互影響、互為因果，針灸治療是中國(guó)自古流傳至今的傳統(tǒng)治療手段，從納入的文獻(xiàn)中可見，其具有增加腸道菌群的多樣性，在升高有益菌的數(shù)量的同時(shí)降低有害菌的比例的作用，通過這些方式能夠調(diào)節(jié)失衡的機(jī)體功能，治療相關(guān)疾病。通過對(duì)所選文獻(xiàn)的分析可知，不同的疾病種類、干預(yù)措施以及所選穴位，對(duì)菌群的影響有所不同。如：不同疾病腸道菌群的改變不同，在肥胖病當(dāng)中主要表現(xiàn)為厚壁菌、普氏菌和瘤胃球菌相對(duì)豐度升高，擬桿菌、乳酸菌和雙歧桿菌相對(duì)豐度降低[4,5]，在潰瘍性結(jié)腸炎中主要表現(xiàn)為雙酶梭菌、脆弱擬桿菌和大腸桿菌相對(duì)豐度增加，毛螺科菌、雙歧桿菌、乳酸桿菌相對(duì)豐度降低[10,20]；不同干預(yù)方式對(duì)同一疾病的腸道菌群影響不同，電針與艾灸均能降低擬桿菌目（Bacteroidales）下 的 擬 桿 菌 目S24-7 組（norank_f_Bacteroidales_S24-7_group） 及 紫 單 胞 菌 科（Porphyromonadaceae）的歐氏桿菌屬（Odoribacter）豐度，但電針的作用強(qiáng)于艾灸[21]；選取穴位不同對(duì)腸道菌群的調(diào)節(jié)作用不同，正常大鼠以顫螺旋菌屬、普雷沃氏菌科和柔膜菌門為優(yōu)勢(shì)菌種，而對(duì)于消化性潰瘍大鼠，艾灸胃經(jīng)穴后α-變形菌、放線菌目和芽孢桿菌目成為優(yōu)勢(shì)菌種，艾灸膽經(jīng)穴后硬壁菌門、梭狀芽胞桿菌、毛螺科菌成為優(yōu)勢(shì)菌種[22]。

納入的多數(shù)研究主要從微觀角度分析上述干預(yù)措施與腸道菌群的相關(guān)性，如司原成等[23]在治療肥胖病時(shí)發(fā)現(xiàn)腸道菌群能夠通過“腦-腸-菌”軸來調(diào)節(jié)肥胖的慢性炎性反應(yīng)，降低腦腸中TLR4 的分布密度，使腸道菌群重新恢復(fù)平衡，從而實(shí)現(xiàn)減肥的目的。其他多項(xiàng)研究也表明上述干預(yù)措施可以通過調(diào)節(jié)腸道菌群的菌種多樣性、有益菌豐度、各菌種間的比例、菌種的分布密度等來糾正菌群失調(diào)。

也有部分文獻(xiàn)從腸道菌群與中醫(yī)理論的相關(guān)性論述針灸與腸道菌群之間的聯(lián)系，例如孔令玉[24]等從“肝胃相關(guān)理論”探討肝臟脂代謝及胃腸道菌群失調(diào)的關(guān)系以及針灸的肝胃相關(guān)理論；另有多項(xiàng)研究[25-28]則闡述了腸道菌群與中醫(yī)整體觀念、陰陽(yáng)學(xué)說、脾胃學(xué)說的聯(lián)系；寧玉樓等[29]分析腸道菌群與氣機(jī)升降理論之間的關(guān)系；以及一些文獻(xiàn)所分析的針灸通過調(diào)節(jié)腸道菌群治療各種疾病的中醫(yī)機(jī)理。

2.10 腸道菌群的檢測(cè)方法

目前腸道菌群的主要檢測(cè)方法如圖7所示。

傳統(tǒng)的直接培養(yǎng)與涂片法更為經(jīng)濟(jì)、便捷、操作簡(jiǎn)單，但在分子生物學(xué)層面的分析有所欠缺，已無法滿足人們對(duì)腸道菌群的探索分析。近年來新興的分子生物學(xué)技術(shù)等對(duì)探索腸道菌群生物多樣性、群落結(jié)構(gòu)、菌群基因研究及功能代謝提供了技術(shù)支持，在研究腸道菌群與疾病關(guān)系的領(lǐng)域中發(fā)揮了尤為重要的作用，但也存在著過程繁瑣復(fù)雜、檢測(cè)結(jié)果相對(duì)不精確、價(jià)格較貴等缺點(diǎn)[30,31]。

此次納入的臨床及實(shí)驗(yàn)研究中，部分研究仍采用傳統(tǒng)的細(xì)菌培養(yǎng)法檢測(cè)腸道菌群接受干預(yù)措施前后的變化。王樹東等[8]采集慢性腹瀉模型大鼠的新鮮糞便，將糞便進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)后運(yùn)用生化鑒定和比濁法檢測(cè)腸道菌群的變化，發(fā)現(xiàn)對(duì)關(guān)元穴施以溫和灸能夠增加雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量。賀璐[32]采取應(yīng)激小鼠的腸道內(nèi)容物，也應(yīng)用細(xì)菌培養(yǎng)法，觀察到針刺對(duì)小鼠腸道微生物中乳酸菌、大腸埃希菌、雙歧桿菌的影響。另有多項(xiàng)研究也都采用細(xì)菌培養(yǎng)方法對(duì)腸道微生物進(jìn)行檢測(cè)。

更多研究人員采用了先進(jìn)的分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)腸道菌群進(jìn)行微觀分析。吳生兵[33]在一項(xiàng)電針干預(yù)心肌缺血模型大鼠的實(shí)驗(yàn)中，在分析腸道菌群時(shí)便使用了基于PCR 的16s RNA 技術(shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)放線菌門、梭桿菌門、變形菌門、擬桿菌門數(shù)量在電針干預(yù)后均有所下降；相反厚壁菌門數(shù)量以及厚壁菌門與擬桿菌門比例明顯上升。張星星等[34]則運(yùn)用熒光定量PCR評(píng)估了接收干預(yù)措施后腸道菌群的數(shù)量與定植抗力變化。侯天舒團(tuán)隊(duì)[35]另一項(xiàng)研究也采用了DGGE-PCR、優(yōu)勢(shì)條帶鑒定等方法，試圖尋找出在針灸治療機(jī)制中發(fā)揮關(guān)鍵作用的細(xì)菌。

圖7 腸道菌群檢測(cè)方法

就腸道菌群檢測(cè)方法對(duì)納入文獻(xiàn)進(jìn)行簡(jiǎn)單分類后，可以明確兩點(diǎn)：①不同檢測(cè)方法對(duì)研究結(jié)果的觀察和研究結(jié)論會(huì)有所影響。傳統(tǒng)方法的觀察指標(biāo)常局限于乳酸桿菌、大腸桿菌，或者腸道菌群球桿比等，研究結(jié)論基本類似；而分子生物學(xué)技術(shù)甚至能深入觀察菌群基因的細(xì)微差異，且由于觀察指標(biāo)多樣而結(jié)論有所創(chuàng)新；②不同檢測(cè)方法成本效益有別。分子生物學(xué)技術(shù)需要投入的財(cái)力、精力要求都更高，缺乏基金支持的項(xiàng)目基本不考慮這種檢測(cè)方法。傳統(tǒng)方法相比之下簡(jiǎn)單且易于操作。但隨著對(duì)腸道菌群研究的深入，新興的檢測(cè)方法越來越受當(dāng)前研究者的青睞。微觀層面的研究，其結(jié)論似乎也更具說服力，為了獲得更可靠的數(shù)據(jù)，相信分子生物學(xué)技術(shù)未來會(huì)更受歡迎。

3 結(jié)果與小結(jié)

3.1 針灸腸道菌群相關(guān)性研究較少，研究質(zhì)量有待提高

以上文獻(xiàn)計(jì)量學(xué)分析結(jié)果表明，目前國(guó)內(nèi)對(duì)于腸道菌群與針灸治療效應(yīng)及作用機(jī)理的相關(guān)性的研究較少，自2009 年才開始有相關(guān)中文文獻(xiàn)出現(xiàn)，盡管研究數(shù)量仍舊較少，但文獻(xiàn)量隨著時(shí)間總體呈現(xiàn)不斷增長(zhǎng)趨勢(shì)，也從側(cè)面反映出目前相關(guān)學(xué)科對(duì)腸道菌群與該學(xué)科的關(guān)聯(lián)認(rèn)識(shí)尚不足，但這可能是由于目前對(duì)相關(guān)內(nèi)容的研究仍處于初步探索階段，迄今為止10年的時(shí)間對(duì)于相關(guān)內(nèi)容的研究尚不夠明朗與充分，就目前趨勢(shì)來看，未來應(yīng)該會(huì)有更多基于腸道菌群與針灸治療效應(yīng)及作用機(jī)理的相關(guān)性的研究。在納入的文獻(xiàn)中，被核心期刊收錄的文章數(shù)量少，且文章被引用量小；實(shí)驗(yàn)研究載體以消化系統(tǒng)疾病模型大鼠為主，臨床研究載體以肥胖類代謝疾病患者為主，部分臨床研究設(shè)計(jì)為半隨機(jī)或非隨機(jī)，且所有文獻(xiàn)均未提及盲法、隨訪等，從而降低了研究的可信度，這說明目前對(duì)于該領(lǐng)域的研究依舊不夠嚴(yán)謹(jǐn)和系統(tǒng)，相關(guān)文獻(xiàn)質(zhì)量不高。

3.2 腸道菌群與針灸治療效應(yīng)及作用機(jī)理的相關(guān)性研究有待繼續(xù)深入

腸道菌群具有幫助宿主進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)吸收以及能量代謝的功能。一般在正常情況下，腸道菌群始終維持著一種動(dòng)態(tài)的平衡，可為抵御外來病原入侵構(gòu)建重要屏障，然而當(dāng)受到環(huán)境等影響時(shí)，將會(huì)打破原來的平衡狀態(tài)，導(dǎo)致腸道菌群失調(diào)，從而引起不同的疾病[36]。

近幾年，隨著對(duì)腸道菌群研究的逐漸深化，其在宿主中所產(chǎn)生的重要影響已得到更多的關(guān)注，盡管多項(xiàng)研究表明針灸能夠通過調(diào)節(jié)腸道菌群來達(dá)到治療疾病的目的，但目前國(guó)內(nèi)對(duì)于腸道菌群與針灸治療效應(yīng)及作用機(jī)理的相關(guān)性的研究尚少，該部分內(nèi)容尚缺乏可靠的理論依據(jù)支撐，故對(duì)此應(yīng)該繼續(xù)深入研究。

據(jù)文獻(xiàn)統(tǒng)計(jì)[37]，對(duì)于腸道菌群的相關(guān)研究中，消化、內(nèi)分泌及神經(jīng)、精神類疾病研究領(lǐng)域在申請(qǐng)、資助項(xiàng)目均排在前三位，這與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)腸道微生態(tài)研究的熱點(diǎn)解讀相契合，同時(shí)也與本文所得結(jié)果一致。根據(jù)圖5、圖6 再細(xì)化來看，三個(gè)研究領(lǐng)域分別主要圍繞潰瘍性結(jié)腸炎、腸易激綜合征、肥胖、抑郁等疾病展開，但大多研究?jī)H說明針灸可以通過調(diào)節(jié)腸道菌群來改善疾病狀態(tài)，卻少有對(duì)腸道菌群與針灸治療效應(yīng)及作用機(jī)理的研究。

從納入文獻(xiàn)所知，腸道菌群常被看作是研究針灸作用機(jī)制的途徑，疾病與腸道菌群相互影響，胃腸道及心腦血管等疾病常由腸道菌群失調(diào)所引起，同時(shí)隨著疾病的發(fā)生發(fā)展常導(dǎo)致腸道菌群失調(diào)，在疾病的治療過程中，針灸通過調(diào)節(jié)腸道菌群群落豐度、數(shù)量、比例等，使失去平衡的腸道菌群再次實(shí)現(xiàn)相對(duì)動(dòng)態(tài)平衡，達(dá)到治療目的，這揭示了針灸治療疾病的某種可能性機(jī)制，如納入文獻(xiàn)中提到的“菌心說”“腦腸軸”“大腦-腸道-骨髓軸”機(jī)制等，這與中醫(yī)的整體觀念、陰陽(yáng)平衡等理論不謀而合，故相關(guān)研究者也從中醫(yī)角度來分析問題。

3.3 展望

在82 篇文獻(xiàn)中有52 篇文獻(xiàn)受基金項(xiàng)目支撐，接受大于1 項(xiàng)基金項(xiàng)目支持的有31 篇文獻(xiàn)，截至2018年，中醫(yī)學(xué)科代碼下有關(guān)腸道微生態(tài)研究申請(qǐng)和資助數(shù)目中H2718（中醫(yī)針灸）均排在第二位，而資助率排在第一位[37]，這反映出目前國(guó)家對(duì)于該領(lǐng)域研究支持態(tài)度較為積極。但由于疾病的種類、治療方法及穴位的選擇對(duì)腸道菌群的影響有所不同，從文獻(xiàn)分析可知消化系統(tǒng)及內(nèi)分泌系統(tǒng)相關(guān)疾病與腸道菌群關(guān)系十分密切，針灸治療對(duì)此類疾病療效佳[38]，因此是否可以從腸道菌群相關(guān)性來探討針灸對(duì)該類疾病治療機(jī)理值得我們思考，今后可以通過更多系統(tǒng)化的試驗(yàn)，加強(qiáng)對(duì)針灸調(diào)節(jié)腸道菌群的機(jī)制以及腸道菌群與各系統(tǒng)疾病之間的聯(lián)系的研究，待相關(guān)研究達(dá)到高水平后，制定出科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)慕y(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，再深入開展臨床研究，將針灸與腸道菌群這一熱門著手點(diǎn)運(yùn)用于臨床上，從而有效地指導(dǎo)臨床。