HPLC法測定傷風(fēng)停膠囊中歐前胡素的含量

張杰 何艷

【摘?要】?目的：建立采用高效液相色譜法測定傷風(fēng)停膠囊中歐前胡素含量的方法。方法：色譜柱為Thermo Hypersil Gold-C18（4.6mm×250mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液（50：50），流速1.0mL·min-1，柱溫35℃，檢測波長為300nm。結(jié)果：歐前胡素在0.87～10.46μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9999），平均回收率為102.42%（RSD=1.11%）。結(jié)論：所建立的方法結(jié)果準(zhǔn)確，專屬強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可用于測定傷風(fēng)停膠囊中歐前胡素的含量。

【關(guān)鍵詞】?傷風(fēng)停膠囊;歐前胡素;高效液相色譜;含量測定

【中圖分類號(hào)】R284???【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A????【文章編號(hào)】1007-8517（2020）5-0032-03

Determination of imperatorin in Shangfengting Capsules by HPLC

ZHANG Jie?HE Yan*

School of Pharmacy，Xiang Nan University，Chenzhou 423000，China

Abstract：

Objective ?To establish a method of determining imperatorin in Shangfengting Capsules by HPLC. Methods The samples was separated on the column Thermo Hypersil Gold-C18 （4.6 mm×250 mm，5 μm），which the mobile phase was consisted of acetonitrile and 0.1% phosphoric acid at 50：50. The flow rate was 1.0 mL·min-1. The column temperature was set at 35 ℃，and the detection wavelength was 300 nm. Results ?A good linearity of imperatorin was in the range of 0.87～10.46 μg·mL-1 （r=0.9999） and the average recoveries was 102.42%（RSD=1.11%）for imperatorin. Conclusion The method is special，repeatable and the results were accurate，and can be applied in the content determination of imperatorin in Shangfengting Capsules.

Key?words：Shangfengting Capsules; Imperatorin; HPLC;Content determination

傷風(fēng)停膠囊由麻黃、荊芥、白芷、蒼術(shù)（炒）、陳皮和甘草組成的復(fù)方制劑，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十三冊(cè)中，具有發(fā)散風(fēng)寒之功效，用于外感風(fēng)寒、頭痛、鼻塞肢體酸重等癥狀。方中白芷具解表散寒、宣鼻通竅之功效，主治風(fēng)寒表證、頭痛、痹痛、鼻塞不通等癥;歐前胡素是白芷中含有的主要香豆素類成分，具抗炎、抗菌、鎮(zhèn)痛等藥理作用[1-3]?！吨袊幍洹?015年版一部收載的白芷質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中采用HPLC法測定歐前胡素作為評(píng)價(jià)指標(biāo)[4]，而傷風(fēng)停膠囊現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[5]中白芷藥材的質(zhì)量控制僅采用薄層鑒別，無含量測定項(xiàng)，無法有效控制其質(zhì)量。為此，本實(shí)驗(yàn)建立HPLC法測定傷風(fēng)停膠囊中歐前胡素含量的方法，此法結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，為有效控制該制劑的質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)。

1?儀器與試藥

1.1?儀器?Agilent 1260高效液相色譜儀（美國Agilent公司），AUW-220D電子天平（島津公司，感量：0.01mg），電熱恒溫水浴鍋（北京市永明醫(yī)療儀器有限公司），超聲清洗器（昆山超聲儀器有限公司）。

1.2?試藥?傷風(fēng)停膠囊（云南A廠家，批號(hào)：WXCC1802、WXFA1705和WXEC1805），歐前胡素對(duì)照品（中國食品藥品鑒定研究院，批號(hào)：110862-201616，純度：99.6%）。甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑、試藥均為分析純，水為超純水。

2?方法與結(jié)果

2.1?色譜條件?色譜柱為Thermo Hypersil Gold-C18（4.6mm×250mm，5μm）;流動(dòng)相為乙腈- 0.1%磷酸（50∶50），檢測波長300nm;流速1.0mL·min-1，柱溫35℃，進(jìn)樣量10μL。在上述色譜條件下，歐前胡素與其他色譜峰分離較好，且陰性樣品無干擾。結(jié)果如圖1所示。

2.2?對(duì)照品溶液的制備?精密稱取歐前胡素對(duì)照品適量，置100mL量瓶中，用70%甲醇溶液定容至刻度，得歐前胡素對(duì)照品儲(chǔ)備溶液（17.44μg·mL-1）。

2.3?供試品溶液的制備?取傷風(fēng)停膠囊樣品適量，研細(xì)，取約1g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入70%甲醇溶液50mL，稱定重量，超聲提取40min，放冷至室溫，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，即得。

2.4?陰性樣品溶液的制備?取按處方工藝制成不含白芷的陰性樣品適量，研細(xì)，按“2.3”項(xiàng)下方法制成缺白芷的陰性樣品溶液。

2.5?線性關(guān)系考察?精密量取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、5.0、6.0mL，分別置于10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10μL，注入高效液相色譜儀中，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定其峰面積，以進(jìn)樣質(zhì)量濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)（X），峰面積（A）為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸。歐前胡素在0.87～10.64μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=25.762X+0.181，r=0.9999。

2.6?精密度試驗(yàn)?精密吸取歐前胡素對(duì)照品溶液10μL，注入液相色譜儀中，連續(xù)進(jìn)樣6次，測得其峰面積并計(jì)算，歐前胡素峰面積的RSD為0.65%，結(jié)果表明儀器的精密度良好。

2.7?穩(wěn)定性試驗(yàn)?精密吸取同一供試品（批號(hào)：WXCC1802）溶液10μL，分別在0、2、4、6、10、18h依次進(jìn)樣，測定其峰面積并計(jì)算，歐前胡素峰面積的RSD為0.70%，結(jié)果表明供試品溶液在18h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8?重復(fù)性試驗(yàn)?精密稱取同一批樣品（批號(hào)：WXCC1802）6份，照“2.3”項(xiàng)下制備，得供試品溶液，進(jìn)樣10μL依法測定峰面積，歐前胡素含量為0.1339mg·g-1，RSD為1.14%（n=6），表明該方法重復(fù)性較好。

2.9?加樣回收率試驗(yàn)?取已知含量的樣品（批號(hào)：WXCC1802）6份，各約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入50mL含歐前胡素（1.308μg·mL-1）對(duì)照品溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法，制備供試品液，進(jìn)樣10μL，測定歐前胡素含量，計(jì)算回收率，結(jié)果歐前胡素平均回收率102.42%，RSD= 1.11%。結(jié)果見表1。

2.10?含量測定?取不同批號(hào)的樣品，研細(xì)，約1g，精密稱定，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別吸取供試品溶液各10μL，依法測定峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果顯示3批傷風(fēng)停膠囊中歐前胡素的含量分別為0.1339mg·g-1、0.1607mg·g-1和0.3809mg·g-1。

3?討論

3.1?測定波長的選擇?采用二極管陣列檢測器在波長190～400nm對(duì)歐前胡素照品溶液進(jìn)行紫外掃描，其在248nm和300nm附近具有最大吸收峰，參考《中華人民共和國藥典》2015年版一部“白芷”項(xiàng)下歐前胡素的檢測波長[3]，故本實(shí)驗(yàn)選用300nm作為檢測波長。

3.2?洗脫系統(tǒng)的選擇?依據(jù)文獻(xiàn)方法[6-7]，本實(shí)驗(yàn)比較了甲醇-0.1%磷酸溶液、甲醇-水溶液、乙腈-0.1%磷酸溶液作為流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用乙腈-0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相，歐前胡素的分離效果較好，干擾成分少，分離度達(dá)到要求。

3.3?供試品制備方法的選擇?本實(shí)驗(yàn)比較了不同溶劑（乙醇、70%乙醇、甲醇、70%甲醇）進(jìn)行超聲和加熱回流提取，結(jié)果顯示，采用70%甲醇超聲提取時(shí)，歐前胡素提取率高，且干擾少;同時(shí)考察了超聲提取30、40、50、60min，試驗(yàn)結(jié)果表明超聲提取40min時(shí)，歐前胡素基本提取完全，故選擇超聲提取40min。

3.4?含量測定結(jié)果的分析?3批傷風(fēng)停膠囊樣品含量測定結(jié)果表明，該制劑中歐前胡素的含量相差約3倍，其原因可能是不同批次原藥材的差異所致，因此生產(chǎn)廠家應(yīng)予以重視。

綜上所述，所建立的高效液相方法簡單易行，專屬性好，為提高傷風(fēng)停膠囊質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

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（收稿日期：2019-12-17?編輯：陶希睿）