三葉木通果肉提取物的體外抗氧化及抑制α-葡萄糖苷酶和乙酰膽堿酯酶能力

丁林玲 謝穎欣 高偉 于麗娟 李宏 王振興 張雪春

摘要：【目的】研究三葉木通果肉提取物的體外抗氧化及抑制α-葡萄糖苷酶和乙酰膽堿酯酶的能力，為三葉木通的開發(fā)利用提供參考依據(jù)?！痉椒ā恳匀~木通果肉為原料，經(jīng)乙醇提取得到粗提物，再經(jīng)不同溶劑依次萃取后得到石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇相萃取物和水層殘余物;以DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、鐵還原能力及氧化自由基吸收能力為指標，評估各萃取物的體外抗氧化活性;以各萃取物對α-葡萄糖苷酶和乙酰膽堿酯酶的抑制能力為指標，考察其體外降血糖和防治老年癡呆的能力?！窘Y(jié)果】三葉木通果肉石油醚相萃取物的DPPH自由基清除能力最強，為54.02 mg Trolox/g;氯仿相的ABTS自由基清除能力和氧化自由基吸收能力最強，分別為320.66和266.87 mg Trolox/g;粗提物的鐵還原能力最強，為557.36 mg FeSO4/g;氯仿相抑制α-葡萄糖苷酶和乙酰膽堿酯酶的能力均最強，半抑制濃度（IC50）分別為0.93和1.22 mg/mL。相關分析結(jié)果表明，除ABTS自由基清除能力與鐵還原能力之間的相關性不顯著（P>0.05，下同）外，4個抗氧化能力測定結(jié)果間均呈極顯著正相關（P<0.01），相關系數(shù)為0.659～0.970;α-葡萄糖苷酶抑制能力的IC50與4個抗氧化能力測定結(jié)果之間相關性不顯著，相關系數(shù)為-0.485～-0.412;乙酰膽堿酯酶抑制能力的IC50與鐵還原能力呈顯著負相關（相關系數(shù)為-0.556，P<0.05），與DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力和氧化自由基吸收能力之間相關性不顯著，相關系數(shù)為-0.541～-0.434?！窘Y(jié)論】三葉木通果肉提取物具有一定的體外抗氧化及α-葡萄糖苷酶和乙酰膽堿酯酶抑制能力，有被開發(fā)為具有降血糖、防治老年癡呆活性的天然抗氧化劑和保健食品的潛力。

關鍵詞： 三葉木通;果肉;體外抗氧化;α-葡萄糖苷酶;乙酰膽堿酯酶

中圖分類號： S567.19;TS209? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標志碼： A 文章編號：2095-1191（2021）04-1058-08

In vitro antioxidant activities， α-glucosidase and acetylcholinesterase inhibition ability of

Akebia trifoliata pulp extracts

DING Lin-ling1， XIE Ying-xin2， GAO Wei3， YU Li-juan4， LI Hong4，

WANG Zhen-xing1， ZHANG Xue-chun1*

（1College of Life Sciences， Southwest Forestry University，Kunming? 650224， China; 2Zhuhai No.4 Middle School，Zhuhai， Guangdong? 519015， China; 3Jiangxi Academy of Forestry， Nanchang? 330013， China; 4Research Institute of Product Processing， Yunnan Academy of Agricultural Sciences， Kunming? 650033， China）

Abstract：【Objective】In order to provide a theoretical basis for the development and utilization of Akebia trifoliata，the in vitro antioxidant，α-glucosidase inhibition，and acetylcholinesterase inhibition ability of Akebia trifoliata pulp extract were investigated. 【Method】The A. trifoliata pulp was extracted with ethanol，and the crude extract was further partitioned using different polarity solvents，where petroleum ether，chloroform，ethyl acetate，n-butanol phase extract and water residue were obtained. The in vitro antioxidant activity was evaluated using the DPPH radical scavenging ability，ABTS radical scavenging ability，ferric reducing antioxidant power，and oxygen radical absorbance ability. The α-glucosidase inhibition ability and acetylcholinesterase inhibition ability were carried out to quantify the potential of hypoglycemic effect and anti-Alzheimer effect. 【Result】The petroleum ether phase extract exhibited the strongest DDPH radical scavenging ability with the value of 54.02 mg Trolox/g，and chloroform phase extract posed the strongest ABTS radical scavenging ability （320.66 mg Trolox/g） and oxygen radical absorbance ability（266.87 mg Trolox/g），while the crude extract showed the highest ferric reducing antioxidant power（557.36 mg FeSO4/g）. The chloroform phase extract showed the strongest α-glucosidase ability with the half inhibition concentration rate（IC50） value of 0.93 mg/mL，and chloroform phase extract showed the strongest acetylcholinesterase inhibition ability， and IC50 value was 1.22 mg/mL. The correlation analysis showed that the relationships among all antioxidant assay results were extremely significant（P<0.01）， correlation coefficient range was 0.659-0.970， except the relationship between ABTS radical scavenging capacity and ferric reducing antioxidant power（P>0.05， the same below）. The IC50 of α-glucosidase inhibition ability had? not significant correlation with four antioxidant abilities（correlation coefficient range was between -0.485 and -0.412）. A significant negative correlation was found between the IC50 of acetylcholinesterase inhibition ability and ferric reducing antioxidant power（correlation coefficient was -0.556，P<0.05），while there were no significant correlation with the DPPH radical scavenging ability， ABTS radical scavenging ability，and oxygen radical absorbance ability（correlation coefficient range was between -0.541 and -0.434）. 【Conclusion】The above results indicate that A. trifoliata pulp extracts have certain in vitro antioxidant ability，α-glucosidase inhibition ability，and acetylcholinesterase inhibition ability. A. trifoliata has the potential to be developed as a natural antioxidant and healthy food with antidiabetic and anti-Alzheimer activity.

Key words： Akebia trifoliata; pulp; in vitro antioxidation; α-glucosidase; acetylcholinesterase

Foundation item： Major Science and Technology Project of Yunnan（2018ZG004）; The Joint Special Youth Project of Basic Agricultural Research in Yunnan（2017FG001（-078））; Scientific Research Fund Project of Yunnan Education Department（2016ZZX150）

0 引言

【研究意義】三葉木通（Akebia trifoliata，AT）又稱八月瓜、八月炸，為木通科木通屬植物，廣泛分布于我國長江流域及南方各省份。其營養(yǎng)價值高，色香味俱佳，可食用也可藥用，具有消熱利尿、通經(jīng)活絡、鎮(zhèn)靜止痛、抗炎消腫和排乳等功效（劉勇等，2004;吳連花等，2010），目前已在貴州、江西、廣西等地大量種植，成為當?shù)氐闹攸c發(fā)展產(chǎn)業(yè)之一。研究表明，三葉木通富含黃酮類、酚類、脂肪酸類、三萜、糖苷、皂苷和木脂素類等成分，具有抗氧化、抗癌等功能活性（李香等，2008;劉巖庭等，2012;盧旭然等，2014;鄭勇等，2018）。三葉木通的可食用部位主要為果肉，約占鮮果重的50%，但對其果肉的研究相對較少，不同組分的成分和活性區(qū)別尚不明確，因此，針對果肉的成分和功能進行研究，對于三葉木通資源的開發(fā)利用具有重要意義?！厩叭搜芯窟M展】目前對于三葉木通果肉部位的研究主要集中在營養(yǎng)成分分析和食品開發(fā)（仲偉敏和馬玉華，2015;任攀等，2016;余興恒等，2019），對其抗氧化活性和酪氨酸酶抑制活性等也有一些研究報道。彭滌非等（2008）采用80%乙醇提取法進行三葉木通果皮、果肉和種子中有效成分的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同部位的乙醇提取物對體外酪氨酸酶活性均有一定的抑制作用，其中果肉的抑制作用最佳。張孟琴等（2008）采用圓紙片擴散法對提取的三葉木通果皮果膠進行抑菌和殺菌性能研究，結(jié)果表明三葉木通果皮果膠無抑菌和殺菌作用。邵顯會（2012）研究發(fā)現(xiàn)三葉木通多糖達到一定濃度時其抗氧化能力僅次于維生素C（VC），三葉木通粗黃酮和純化后黃酮的抗氧化能力僅次于2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）。陸俊等（2016）采用超聲波提取法對三葉木通不同部位進行提取研究，結(jié)果測得三葉木通藤莖提取物的1，1-二苯基-2-苦基肼（DPPH）自由基清除能力、2，2'-聯(lián)氮基-雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）（ABTS）自由基清除能力和鐵還原能力值分別為380.86、337.18和387.41 ?mol Trolox/g。郭林新等（2017a）發(fā)現(xiàn)三葉木通提取物的正丁醇萃取部位具有顯著利尿作用，其主要化學成分為苷類化合物?！颈狙芯壳腥朦c】目前，尚未見針對三葉木通果肉不同溶劑萃取物的功能活性進行分析和比較的文獻報道?！緮M解決的關鍵問題】以三葉木通果肉為研究對象，經(jīng)乙醇提取得到粗提物，再經(jīng)不同溶劑依次萃取后得到不同溶劑萃取物，研究各萃取物的體外抗氧化能力及對α-葡萄糖苷酶和乙酰膽堿酯酶的抑制能力，以評估三葉木通抗氧化、降血糖和防治阿爾茨海默病的潛力，為三葉木通的開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

供試材料為黎平盛竹聯(lián)創(chuàng)木通農(nóng)林發(fā)展有限公司提供的三葉木通，采集自貴州省黔東南州黎平縣敖市鎮(zhèn)梧寨村。釀酒酵母α-葡萄糖苷酶、阿卡波糖、4-甲基傘形酮-α-D-吡喃葡萄糖苷（4-MUG）和乙酰膽堿酯酶（AChE）購自Sigma-Aldrich公司;ABTS、DPPH、2，4，6-三吡啶基三嗪（TPTZ）、2，2'-偶氮-雙-（2-脒基丙烷）氯化二氫（AAPH）、熒光素鈉、碘化硫代乙酰膽堿（ATCI）、加蘭他敏、5，5'-二硫代雙（2-硝基苯甲酸）（DTNB）、奎諾二甲基丙烯酸酯（Trolox）、VC和BHT等均為分析純。主要儀器設備：TGL-10C型高速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）、SHB-III型循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）、RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）、SYNERGY H1型多功能酶標儀（美國BIOTEK公司）、HH-2型數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州國華電器有限公司）、DGH-9140A型數(shù)顯電熱鼓風干燥箱（上海一恒科學儀器有限公司）和SG5200HDT型超聲波清洗器（上海冠特超聲儀器有限公司）。

1. 2 試驗方法

1. 2. 1 樣品提取 稱取200 g果肉，按1∶20的固液比（w/v）加入4000 mL 70%乙醇混合，調(diào)節(jié)pH至5，加入0.67%纖維素酶（活力3 U/mg）和0.05%果膠酶（活力40 U/mg），在超聲波功率500 W、溫度50 ℃的條件下提取60 min后，4000 r/min離心15 min，收集上清液，殘渣在相同條件下提取2次;合并所有上清液，減壓濃縮至500 mL，依次用不同極性有機溶劑萃取，得到石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇相萃取物、水層殘余物及粗提物，50 ℃下真空旋干后冷凍干燥，將所得凍干樣品置于-20 ℃保存用于后續(xù)分析。

1. 2. 2 體外抗氧化活性測定

1. 2. 2. 1 DPPH自由基清除能力 參考Zhang等（2016）的方法，凍干樣品用凍干粉復溶至適合濃度，取100 ?L樣品溶液，加入100 ?L 0.15 mmol/L DPPH溶液，室溫避光反應30 min，在517 nm處測定其吸光值As，以樣品溶劑代替樣品為樣品空白組Ac，以70%甲醇溶液代替DPPH溶液為樣品控制組Ab，按公式（1）計算清除率。同時以不同濃度（0～25 ?g/mL）Trolox溶液代替樣品與DPPH溶液反應，計算其清除率，繪制Trolox濃度與清除率的標準曲線，樣品的DPPH自由基清除能力用Trolox當量表示，即為每克樣品相當于標準抗氧化劑Trolox的質(zhì)量（mg），以Vc和BHT為陽性對照。

清除率（%）=[AC-（AS-Ab）AC]×100? （1）

1. 2. 2. 2 ABTS自由基清除能力 參考Zhang等（2017）的方法，取50 ?L樣品溶液，加入200 ?L ABTS溶液，室溫避光反應6 min，在734 nm處測定其吸光值，清除率計算同公式（1）。樣品的ABTS自由基清除能力同樣用Trolox當量表示，以VC和BHT為陽性對照。

1. 2. 2. 3 鐵還原能力（FRAP）? 參考Escribano等（2017）的方法并略加修改，取30 ?L樣品溶液，加入240 ?L FRAP工作液，37 ℃避光溫育10 min，在593 nm處測定其吸光值，計算同公式（1）。同時以不同濃度（0～100 ?g/mL）FeSO4溶液代替樣品與FRAP工作液反應，繪制FeSO4濃度與吸光值的標準曲線，樣品的FRAP值用FeSO4當量表示，即為每克樣品相當于FeSO4質(zhì)量（mg），以VC和BHT為陽性對照。FRAP值越大，則樣品的鐵還原能力越強。

1. 2. 2. 4 氧化自由基吸收能力（ORAC） 參考Romero-Díez等（2018）的方法，取25 ?L樣品溶液，加入150 ?L熒光素鈉溶液（8×10-5 mol/L），振蕩5 min，37 ℃溫育10 min，迅速加入50 ?L AAPH溶液啟動反應。以激發(fā)波長485 nm、發(fā)射波長535 nm進行測定并記錄熒光值，測定時間為2 h，每隔1 min測定一次熒光值，每次測定前中速振動酶標板10 s。計算各孔不同時間點的熒光強度與初始熒光強度的比值f，以測定時間為橫坐標、f為縱坐標繪制樣品的熒光衰變曲線，采用近似積分法計算熒光衰退曲線面積（AUC）。計算同公式（1），式中As為樣品的AUC值，以樣品溶劑代替樣品為樣品空白組Ac，以70%甲醇溶液代替AAPH溶液為樣品控制組Ab，同時以不同濃度Trolox溶液代替樣品與熒光素鈉稀釋液和AAPH溶液反應，繪制Trolox濃度與AUC的標準曲線，樣品的ORAC值用Trolox當量表示。以VC和BHT為陽性對照。

1. 2. 3 抑制α-葡萄糖苷酶能力測定 參考Liao和Banbury（2015）的方法并略加修改，取50 μL樣品溶液，加入20 μL α-葡萄糖苷酶溶液（0.175 U/mL，pH 6.8磷酸鉀緩沖液配制）和50 μL 4-MUG（0.84 μmol/L，pH 6.8磷酸鉀緩沖液配制），充分混勻，37 ℃避光溫育20 min后，加入100 μL甘氨酸鈉溶液（100 mmol/L，pH 10.6）振蕩30 s終止反應。以激發(fā)波長355 nm、發(fā)射波長460 nm進行測定并記錄熒光值，以阿卡波糖為陽性對照。抑制率按公式（2）進行計算，式中As為樣品的熒光值，以樣品溶劑代替樣品為樣品空白組Ac，以磷酸鉀緩沖液代替酶液為樣品控制組Ab。

清除率（%）=[（AC-Ab）-（AS-Ab）AC-Ab]×100? （2）

1. 2. 4 抑制乙酰膽堿酯酶能力測定 參考Malar等（2017）的方法，取50 μL樣品溶液，加入15 μL ATCI溶液（15 mmol/L）和75 μL DTNB溶液（3 μmol/L，pH 8.0磷酸鈉緩沖液配制），30 ℃孵化10 min后，加入20 μL乙酰膽堿酯酶溶液（0.1 U/mL，pH 8.0磷酸鈉緩沖液配制）充分混勻，最后加入50 μL磷酸鈉緩沖液（pH 8.0）振蕩10 s終止反應，在405 nm處測定其吸光值（As），每隔1 min測定一次，共測5次，每次測定前中速振動酶標板10 s，以加蘭他敏為陽性對照。抑制率計算同公式（2），以樣品溶劑代替樣品為樣品空白組Ac，以磷酸鈉緩沖液代替酶液的反應體系樣品控制組Ab。

1. 3 統(tǒng)計分析

所有試驗平行測定3次，試驗結(jié)果以平均值±標準偏差表示。采用SPSS 22.0進行單因素方差分析（ANOVA）及相關分析，以Origin 2017進行曲線擬合計算半抑制濃度（IC50）。

2 結(jié)果與分析

2. 1 體外抗氧化能力測定結(jié)果

2. 1. 1 DPPH自由基清除能力 DPPH自由基是一種以氮為中心的穩(wěn)定自由基，常用于反映樣品抗氧化能力強弱（王曉宇等，2012）。由表1可知，三葉木通各萃取物及對照的DPPH自由基清除能力排序為VC>石油醚相>氯仿相>粗提物>BHT>正丁醇相>乙酸乙酯相>水層殘余物。石油醚相、氯仿相和粗提物表現(xiàn)出較強的DPPH自由基清除能力，雖低于陽性對照VC，但均顯著高于BHT（P<0.05，下同）;正丁醇相和乙酸乙酯相清除DPPH自由基的能力顯著低于石油醚相、氯仿相和粗提物，而水層殘余物清除DPPH自由基效果最差。

2. 1. 2 ABTS自由基清除能力 ABTS溶液可釋放穩(wěn)定的有機自由基，與樣品中還原性物質(zhì)提供的電子反應，因此可通過測定反應體系吸光度的變化，來反映樣品抗氧化能力的大?。‵atiha et al.，2015）。三葉木通各萃取物及對照清除ABTS自由基能力的排序為VC>BHT>氯仿相>石油醚相>粗提物>正丁醇相>乙酸乙酯相>水層殘余物（表1）;各萃取物均具有一定的抗氧化活性，其中氯仿相清除ABTS自由基的能力最強，水層殘余物的ABTS自由基清除能力遠低于其他萃取物，各萃取物清除ABTS自由基的能力與陽性對照VC和BHT比較仍有一定差距。

2. 1. 3 FRAP FRAP與DPPH自由基清除能力和ABTS自由基清除能力不同，不是針對一種自由基的清除活性，其測定的是抗氧化物質(zhì)氧化還原的潛力（王曉宇等，2012）。由表1可知，三葉木通各萃取物及對照的FRAP值排序依次為VC>BHT>粗提物>石油醚相>氯仿相>正丁醇相>乙酸乙酯相>水層殘余物。各萃取物均具有一定的FRAP，但均弱于陽性對照VC和BHT;各萃取物中，以粗提物的FRAP最強，顯著高于其他萃取物的鐵還原能力，而水層殘余物的FRAP最弱。

2. 1. 4 ORAC ORAC反映樣品的總抗氧化能力，具有專一性強、生物相關性強、可標準化和自動化等優(yōu)點。三葉木通各萃取物的ORAC值見表1，粗提物的氧化自由基吸收能力未測出，其余各萃取物及對照的ORAC值排序依次為VC>氯仿相>石油醚相>BHT>乙酸乙酯相>正丁醇相>水層殘余物。各萃取物中氯仿相和石油醚相的ORAC較強，雖低于陽性對照VC但顯著高于BHT;乙酸乙酯相和正丁醇相的ORAC顯著低于氯仿相和石油醚相，水層殘余物的ORAC最弱。

2. 2 α-葡萄糖苷酶抑制能力測定結(jié)果

各萃取物抑制α-葡萄糖苷酶能力如圖1所示，其中石油醚相萃取物抑制α-葡萄糖苷酶的IC50未測出，其余各萃取物及對照的IC50排序為阿卡波糖（0.19±0.02 mg/mL）>氯仿相（0.93±0.06 mg/mL）>乙酸乙酯相（0.94±0.04 mg/mL）>粗提物（3.67±0.29 mg/mL）>正丁醇相（8.11±2.20 mg/mL）>水層殘余物（62.60±1.58 mg/mL）。氯仿相和乙酸乙酯相具有較強的抑制α-葡萄糖苷酶能力，且與阿卡波糖無顯著差異（P>0.05）;粗提物和正丁醇相次之，而水層殘余物的抑制活性最低。

2. 3 乙酰膽堿酯酶抑制能力測定結(jié)果

各萃取物抑制乙酰膽堿酯酶能力如圖2所示，其中粗提物抑制乙酰膽堿酯酶的IC50未測出，其余各萃取物的IC50排序依次為氯仿相（1.22±0.01 mg/mL）>石油醚相（1.32±0.04 mg/mL）>乙酸乙酯相（1.52±0.06 mg/mL）>正丁醇相（5.35±0.46 mg/mL）>水層殘余物（157.96±0.28 mg/mL）。雖然各萃取物的IC50均顯著高于陽性對照加蘭他敏（1.12±0.32 μg/mL），但仍表現(xiàn)出一定的抑制能力;其中，氯仿相、石油醚相和乙酸乙酯相的抑制活性較高，正丁醇相次之，而水層殘余物的抑制活性最低。

2. 4 相關分析結(jié)果

利用SPSS 22.0對抗氧化能力測定結(jié)果與α-葡萄糖苷酶、乙酰膽堿酯酶（AChE）抑制能力的IC50進行相關分析，結(jié)果見表2。DPPH自由基清除能力與ABTS自由基清除能力、FRAP和ORAC的相關系數(shù)分別為0.659、0.694和0.945，均呈極顯著正相關（P<0.01，下同）;ORAC與ABTS自由基清除能力和FRAP的相關系數(shù)分別為0.970和0.930，也呈極顯著正相關。

α-葡萄糖苷酶抑制能力的IC50與4種抗氧化能力測定結(jié)果均呈負相關，且相關性不顯著，其相關系數(shù)為-0.485～-0.412;乙酰膽堿酯酶抑制能力的IC50與4種抗氧化能力測定結(jié)果也呈負相關，相關系數(shù)為 -0.556～-0.434，其中與FRAP呈顯著負相關，與其他3個抗氧化指標的相關性不顯著。

3 討論

體外抗氧化研究結(jié)果表明，三葉木通的主要抗氧化活性部位為石油醚相、氯仿相萃取物和粗提物，其中石油醚相萃取物的DPPH自由基清除能力、氯仿相萃取物的ABTS自由基清除能力和氧化自由基吸收能力、粗提物的鐵還原能力均接近或超過商業(yè)抗氧化劑BHT。三葉木通清除DPPH自由基的活性成分主要存在于氯仿相和石油醚相中，與郭林新等（2017b）、郭艷玲（2017）的研究結(jié)果一致;各萃取物對ABTS自由基清除能力的變化趨勢與DPPH自由基清除能力類似，與李華等（2008）的研究結(jié)果一致。4種抗氧化能力測定結(jié)果間的相關性較好，可共同作為評價樣品抗氧化能力的有效指標。劉曦等（2013）分別采用不同極性溶劑對藍莓葉進行提取，發(fā)現(xiàn)其不同相的抗氧化活性與其多酚和黃酮類物質(zhì)的含量相關，而多酚和黃酮是樣品呈現(xiàn)抗氧化能力的主要活性成分。由此推測三葉木通石油醚相、氯仿相萃取物和粗提物中的多酚和黃酮含量較高，可能是這幾個萃取相抗氧化活性較高的主要原因。

糖尿病是一種常伴有并發(fā)癥的慢性代謝紊亂性疾病，目前已成為危害人類健康的全球第三大疾病。糖尿病有四大類型，其中Ⅱ型糖尿病占90%以上。α-葡萄糖苷酶抑制劑是對Ⅱ型糖尿病有確切療效的口服降糖藥，其通過競爭性抑制小腸上α-葡萄糖苷酶的活性，從而阻礙多糖的分解和延緩葡萄糖的吸收，使餐后血糖水平降低（許芹永，2012）。本研究中，三葉木通各萃取物表現(xiàn)出一定的α-葡萄糖苷酶抑制能力，其活性成分集中于氯仿相和乙酸乙酯相中。阿爾茨海默?。ˋlzheimer disease，AD），又稱老年性癡呆，是一種慢性神經(jīng)衰退癥。目前AD的發(fā)病機制尚不明確，利用乙酰膽堿酯酶抑制劑（AChEIs）來抑制乙酰膽堿酯酶活性是臨床上治療AD的重要手段（張耀東等，2012;楊赟等，2013）。本研究中，乙酰膽堿酯酶抑制活性成分集中于氯仿相、石油醚相和乙酸乙酯相中。雖然這些萃取物的IC50低于陽性對照藥物阿卡波糖和加蘭他敏，但高于一些中藥材提取物，如金銀花、五指毛桃、雞血藤、藜蒿等（殷帥文等，2012;周思多等，2015;丁運華等，2017;謝星等，2020）。姚志仁等（2020）探究黃花倒水蓮醇提物不同萃取物的抗氧化和降血糖活性，發(fā)現(xiàn)黃花倒水蓮抑制α-葡萄糖苷酶的可能活性成分為多酚類物質(zhì)，因此本研究推測三葉木通抑制α-葡萄糖苷酶和乙酰膽堿酯酶抑制活性成分可能是氯仿相、石油醚相和乙酸乙酯相中的多酚類物質(zhì)。后續(xù)擬對三葉木通果肉中活性成分進行進一步分離和結(jié)構鑒定、體內(nèi)活性評估等研究。在體外降血糖活性篩選的基礎上，選擇活性最佳的成分或組分，建立糖尿病小鼠模型，對其灌胃喂養(yǎng)活性成分，通過考察小鼠生理理化指標、血糖變化等評價其體內(nèi)降血糖能力。

4 結(jié)論

三葉木通果肉不同溶劑萃取物具有一定的體外抗氧化及抑制α-葡萄糖苷酶和乙酰膽堿酯酶能力，有被開發(fā)為具有降血糖、防治老年癡呆活性的天然抗氧化劑和保健食品的潛力。

參考文獻：

丁運華，郭少敏，劉燕，鄭建靈. 2017. 10種南藥植物提取物乙酰膽堿酯酶抑制活性的篩選模型研究[J]. 熱帶作物學報，38（8）：1451-1455. doi：10.3969/j.issn.1000-2561.2017. 08.013. [Ding Y H，Guo S M，Liu Y，Zheng J L. 2017. Evaluation of acetylcholinesterase inhibitory activity of 10 southern Chinese herbs by screening model[J]. Chinese Journal of Tropical Crops，38（8）：1451-1455.]

郭林新，馬養(yǎng)民，李夢云，喬珂，王健. 2017a. 三葉木通利尿活性部位篩選及其化學成分[J]. 中國實驗方劑學雜志，23（3）：66-70. doi：10.13422/j.cnki.syfjx.2017030066. [Guo L X，Ma Y M，Li M Y，Qiao K，Wang J. 2017a. Scree-ning of diuretic activity fractions and chemical compositions in rattan of Akebia trifoliate[J]. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae，23（3）：66-70.]

郭林新，馬養(yǎng)民，喬珂，李夢云，王娜娜. 2017b. 三葉木通化學成分及其抗氧化活性[J]. 中成藥，39（2）：338-342. doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2017.02.022. [Guo L X，Ma Y M，Qiao K，Li M Y，Wang N N. 2017b. Chemical consti-tuents from Akebia trifoliate and their anti-oxidant activities[J]. Chinese Traditional Patent Medicine，39（2）：338-342.]

郭艷玲. 2017. 三葉木通化學成分及抗氧化活性實驗研究[J]. 社區(qū)醫(yī)學雜志，15（17）：84-86. [Guo Y L. 2017. Experimental study on chemical composition and antioxidant activity of Akebia trifoliata[J]. Community Medicine Journal，15（17）：84-86.]

李華，李佩洪，王曉宇，李勇. 2008. 抗氧化檢測方法的相關性研究[J]. 食品與生物技術學報，27（4）：6-11. doi：10.3321/ j.issn：1673-1689.2008.04.002. [Li H，Li P H，Wang X Y，Li Y. 2008. Relativity about ten antioxidant methods[J]. Journal of Food Scienceand Biotechnology，27（4）：6-11.]

李香，孫濟平，彭小冰. 2008. 三葉木通中總黃酮的提取工藝研究[J]. 遼寧中醫(yī)藥大學學報，10（12）：152-153. doi：10.13194/j.jlunivtcm.2008.12.154.lix.083. [Li X， Sun J P， Peng X B. 2008. Study on extraction technics of flavonoids in Akebia trifoliate[J]. Journal of Liaoning University of Chinese Medicine，10（12）：152-153.]

劉曦，祝連彩，王伯初. 2013. 藍莓葉不同溶劑提取物抗氧化活性研究[J]. 食品工業(yè)科技，34（12）：101-105. doi：10. 13386/j.issn1002-0306.2013.12.076. [Liu X，Zhu L C，Wang B C. 2013. Antioxidant activities of different solvent extracts from Vaccinium blueberry leaves[J]. Science and Technology of Food Industry，34（12）：101-105.]

劉巖庭，侯雄軍，謝月，馮育林，歐陽勝，楊世林. 2012. 木通屬植物化學成分及藥理作用研究進展[J]. 江西中醫(yī)學院學報，24（4）：87-93. [Liu Y T，Hou X J，Xie Y，F(xiàn)eng Y L，Ouyang S，Yang S L. 2012. Overview of research on chemical constituents and pharmacological activities of Akebia Dence[J]. Journal of Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，24（4）：87-93.]

劉勇，林劍鳴，王棟. 2004. 江西木通科藥用植物資源[J]. 江西中醫(yī)學院學報，16（5）：56-57. [Liu Y，Lin J M，Wang D. 2004. Medicinal plant resources of Lardizabalaceae in Jiangxi[J]. Journal of Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，16（5）：56-57.]

盧旭然，劉爍，王滿元，龔慕辛，王智民，陳筱清. 2014. 五指那藤三萜類化學成分研究[J]. 中國中藥雜志，39（23）：4629-4636. doi：10.4268/cjcmm20142329. [Lu X R，Liu S，Wang M Y，Gong M X，Wang Z M，Chen X Q. 2014. Triterpenoids from Stauntonia obovatifoliola Hayata subsp. intermedia stems[J]. China Journal of Chinese Materia Medica，39（23）：4629-4636.]

陸俊，羅丹，張佳琦，黃暉，富春亞，李忠海. 2016. 三葉木通不同部位多酚、黃酮含量及抗氧化活性比較[J]. 食品與機械，32（8）：132-135. doi：10.13652/j.issn.1003-5788.2016. 08.032. [Lu J，Luo D，Zhang J Q，Huang H，F(xiàn)u C Y，Li Z H. 2016. Comparative study on polyphenol，flavonoid and antioxidant activities from different parts of Akebia trifoliata[J]. Food and Machinery，32（8）：132-135.]

彭滌非，鐘彩虹，周海燕，曾斌，王中炎. 2008. 三葉木通（Akebia trifoliata）果實乙醇提取物對酪氨酸酶體外活性的影響[J].武漢植物學研究，26（2）：183-185. doi：10.3969/j.issn.2095-0837.2008.02.014. [Peng D F，Zhong C H，Zhou H Y，Zeng B，Wang Z Y. 2008. The inhibitory effects in vitro of ethanol extracts from the fruit of Akebia trifo-liata on the tyrosinase activity[J]. Journal of Wuhan Botanical Research，26（2）：183-185.]

任攀，羅知，廖黎，賀江. 2016. 三葉木通果酒釀造工藝研究[J]. 釀酒科技，（5）：89-91. doi：10.13746/j.njkj.2016006. [Ren P，Luo Z，Liao L，He J. 2016. The production of Akebia trifoliata wine[J]. Liquor-Making Science & Technology，（5）：89-91.]

邵顯會. 2012. 三葉木通總黃酮和多糖的提取純化及生物活性研究[D]. 西安：陜西師范大學. [Shao X H. 2012. Extraction，purification and biological activity of total flavonoids and polysaccharides from Akebia trifoliata[D]. Xi an：Shaanxi Normal University.]

王曉宇，杜國榮，李華. 2012. 抗氧化能力的體外測定方法研究進展[J]. 食品與生物技術學報，31（3）：247-252. [Wang X Y，Du G R，Li H. 2012. Progress of analytical me-thods for antioxidant capacity in vitro[J]. Journal of Food Science and Biotechnology，31（3）：247-252.]

吳連花，徐文芬，何順志. 2010. 我國木通科藥用植物的種類與分布[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學，38（26）：14325-14326. doi：10. 3969/j.issn.0517-6611.2010.26.053. [Wu L H，Xu W F，He S Z. 2010. Species and distribution of medicinal plants of Lardizabalaceae in China[J]. Journal of Anhui Agricultural Sciences，38（26）：14325-14326.]

謝星，涂宗財，王輝，張露，王淑好，王振興. 2020. 野生和種植藜蒿不同部位提取物的抗氧化活性和酶抑制活性[J]. 中國食品學報，20（3）：58-65. doi：10.16429/j.1009-7848. 2020.03.008. [Xie X，Tu Z C，Wang H，Zhang L，Wang S H，Wang Z X. 2020. Antioxidant and enzyme inhibitory activities of extracts from various parts of wild and cultivated Artemisia selengensis Turcz[J]. Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology，20（3）： 58-65.]

許芹永. 2012. 藥食兩用中藥抑制α-葡萄糖苷酶活性及作用機制研究[D]. 大連：大連工業(yè)大學. [Xu Q Y. 2012. Study on a-glucosidase inhibitory activities of edible Chinese medicine and inhibition mechanism[D]. Dalian：Dalian University of Technology.]

楊赟，劉敏，李建，張玉強，陸亮. 2013. 藥用植物中乙酰膽堿酯酶抑制活性和抗氧化活性的篩選[J]. 中國實驗方劑學雜志，19（2）：213-218. doi：10.13422/j.cnki.syfjx.2013. 02.065. [Yang Y，Liu M，Li J，Zhang Y Q，Lu L. 2013. Screening of some medicinal plants for acetylcholineste-rase inhibition and antioxidant activity[J]. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae，19（2）：213-218.]

姚志仁，李豫，朱開梅，唐輝，顧生玖. 2020. 黃花倒水蓮不同極性部位抗氧化和降血糖活性研究[J]. 食品工業(yè)科技，41（7）：55-59. doi：10.13386/j.issn1002-0306.2020.07.010. [Yao Z R，Li Y，Zhu K M，Tang H，Gu S J. 2020. Antio-xidant and hypoglycemic activities of different partitioned from the ethanol extract of Polygala fallax Hemsl[J]. Science and Technology of Food Industry，41（7）：55-59.]

殷帥文，劉麗萍，王安萍，毛愷俊，熊欣. 2012. 15種植物不同溶劑萃取物乙酰膽堿酯酶抑制活性的初步研究[J]. 井岡山大學學報（自然科學版），33（4）：52-56. doi：10.3969/j.issn.1674-8085.2012.04.012. [Yin S W，Liu L P，Wang A P，Mao K J，Xiong X. 2012. Primary study on the acetylcholinesterase inhibitory activity of different plant extracts[J]. Journal of Jinggangshan University（Natural Science Edition），33（4）：52-56.]

余興恒，劉龍飛，蔡艷梅，周方艷，黃艷麗. 2019. 木通果酵素發(fā)酵工藝研究[J]. 食品與發(fā)酵科技，55（2）：19-21. doi：10.3969/j.issn.1674-506X.2019.02-004. [Yu X H，Liu L F，Cai Y M，Zhou F Y，Huang Y L. 2019. Study on fermentation technology of Akebia trifoliata[J]. Food and Fermentation Sciences & Technology，55（2）：19-21.]

張孟琴，田野，李興平，田愛琴. 2009. 三葉木通果皮果膠抑菌作用的研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學，37（17）：7835-7836. doi：10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.17.085. [Zhang M Q，Tian Y，Li X P，Tian A Q. 2009. Study on bacteriostasis of pectins from Akebia trifoliate koiaz peels[J]. Journal of Anhui Agricultural Sciences，37（17）： 7835-7836.]

張耀東，蔡亞楠，張琦，齊宗利，高裙裙. 2012. 淫羊藿苷對乙酰膽堿酯酶的抑制作用[J]. 藥學學報，47（9）：1141-1146. doi：10.16438/j.0513-4870.2012.09.003. [Zhang Y D，Cai Y N，Zhang Q，Qi Z L，Gao Q Q. 2012. Inhibitory effect of icariin on acetylcholinesterase[J]. Acta Pharmaceutica Sinica，47（9）：1141-1146.]

鄭勇，廖勤儉，周韓玲，安明哲，李楊華. 2018. 三葉木通果皮活性成分的研究[J]. 食品與發(fā)酵科技，54（6）：57-60. doi：10.3969/j.issn.1674-506X.2018.06-011. [Zheng Y，Liao Q J，Zhou H L，An M Z，Li Y H. 2018. Study on active components of the peel of Akebia trifoliate[J]. Food and Fermentation Sciences & Technology，54（6）：57-60.]

仲偉敏，馬玉華. 2015. 三葉木通優(yōu)選單株果實的營養(yǎng)品質(zhì)特性[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學，43（1）：140-142. doi：10.3969/j.issn. 1001-3601.2015.01.036. [Zhong W M，Ma Y H. 2015. Fruit nutrition quality of a good Akebia trifoliate plant[J]. Guizhou Agricultural Sciences，43（1）：140-142.]

周思多，王曉，馮金紅，耿巖玲，趙恒強. 2015. 基于微量篩選模型的48種中草藥提取物乙酰膽堿酯酶抑制活性篩選及評價[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，27（2）：328-332. doi：10.16333/j.1001-6880.2015.02.026. [Zhou S D，Wang X，F(xiàn)eng J H，Geng Y L，Zhao H Q. 2015. Screening and evaluation of acetylcholinesterase inhibitory activity based on microscale screening model of 48 traditional Chinese medicines[J]. Natural Product Research and Development，27（2）：328-332.]

Escribano J，Cabanes J，Jiménez-Atiénzar M，Iba?ez-Tremolada M，Gómez-Pando L R，García-Carmona F，Gandía-Herrero F. 2017. Characterization of betalains，saponins and antioxidant power in differently colored quinoa（Chenopodium quinoa） varieties[J]. Food Chemistry，234：285-294. doi：10.1016/j.foodchem.2017.04.187.

Fatiha B，Didier H，Naima G，Khodir M，Martin K，Léocadie K，Caroline S，Mohamed C，Pierre D. 2015. Phenolic composition，in vitro antioxidant effects and tyrosinase inhibitory activity of three Algerian Mentha species：M. spicata（L.），M. pulegium（L.） and M. rotundifolia（L.） Huds（Lamiaceae）[J]. Industrial Crops and Products，74：722-730. doi：10.1016/j.indcrop.2015.04.038.

Liao H，Banbury L. 2015. Different proportions of Huangqi（Radix Astragali Mongolici） and Honghua（Flos Carthami） injection on α-glucosidase and α-amylase activities[J]. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine， 2015：785193. doi：10.1155/2015/785193.

Malar D S，Shafreen R B，Pandian S K，Devi K P. 2017. Cholinesterase inhibitory，anti-amyloidogenic and neuroprotective effect of the medicinal plant Grewia tiliaefolia-An in vitro and in silico study[J]. Pharmaceutical Biology，55（1）：381-393. doi：10.1080/13880209.2016.1241811.

Romero-Díez R，Rodríguez-Rojo S，Cocero M J，Duarte C M M，Matias A A，Bronze M R. 2018. Phenolic characterization of aging wine lees：Correlation with antioxidant activities[J]. Food Chemistry，259：188-195. doi：10.1016/j.foodchem.2018.03.119.

Zhang L，Tu Z C，Xie X，Lu Y，Wang Z X，Wang H，Sha X M. 2016. Antihyperglycemic，antioxidant activities of two Acer palmatum cultivars，and identification of phenolics profile by UPLC-QTOF-MS/MS： New natural sources of functional constituents[J]. Industrial Crops and Products，89：522-532. doi：10.1016/j.indcrop.2016.06.005.

Zhang L，Tu Z C，Xie X，Wang H，Wang H，Wang Z X，Sha X M，Lu Y. 2017. Jackfruit（Artocarpus heterophyllus Lam.） peel：A better source of antioxidants and a-glucosidase inhibitors than pulp，flake and seed，and phytochemical profile by HPLC-QTOF-MS/MS[J]. Food Chemistry，234：303-313. doi：10.1016/j.foodchem.2017.05.003.

（責任編輯 羅 麗）