• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    不同陳釀期松針酵素生物活性變化規(guī)律研究

    2019-12-04 01:40:16周文化羅奡劼陳嘉琳陳露茜劉裕龍譚越兮
    中國釀造 2019年11期
    關(guān)鍵詞:陳釀松針酵素

    李 彥,周文化 *,羅奡劼,陳嘉琳,陳露茜,劉裕龍,譚越兮

    (1.中南林業(yè)科技大學 特醫(yī)食品加工湖南省重點實驗室,湖南 長沙 410004;2.中南林業(yè)科技大學食品科學與工程學院,湖南 長沙 410004;3.湖南恩松生物科技有限公司,湖南 湘潭 411100)

    松針(Pinus armandiFranch)為松科(Pinaceae)松屬(Pinus)植物的葉,含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)和生理活性成分,具有鎮(zhèn)咳、祛痰、抗突變、降血脂、降血壓、抗衰老、消炎抑菌等[1]作用。松針在我國分布廣泛,價格低廉,將松針資源進行深度開發(fā)和利用具有重要的意義。

    酵素食品是指以一種或多種新鮮蔬菜、水果、菌菇、藥食同源中草藥等為原料,經(jīng)多種有益菌發(fā)酵而成的功能性產(chǎn)品,含有豐富的酶、維生素、礦物質(zhì)和次生代謝產(chǎn)物等營養(yǎng)成分[2],具有抗氧化[3]、美白[4]、增強免疫力[5]及改善肥胖[6]的功效。近年來,關(guān)于酵素酶系及抗氧化活性研究較多,如張夢梅等[7]檢測了市售酵素的酶系;趙光遠等[8]研究了紅棗酵素在發(fā)酵過程中的活性酶系及相關(guān)代謝產(chǎn)物的變化規(guī)律;王輝等[9]研究了青梅酵素的抗氧化活性、活性酶系及抑菌效果等,這些報道集中在某種酵素的活性物質(zhì)的檢測或是發(fā)酵過程中活性物質(zhì)的變化研究,關(guān)于酵素陳釀期間生物活性的變化研究鮮有報道。

    本研究以不同陳釀期的松針酵素為研究對象,采用國標中的方法及試劑盒準確測定松針酵素中的活性酶系,并以還原力、超氧陰離子自由基(O2-·)清除能力、羥基自由基(·OH)清除能力、1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力和2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(2,2'-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate,ABTS)自由基清除能力為抗氧化性指標對松針酵素的抗氧化性能進行檢測分析。以期探討松針酵素陳釀過程中活性酶系及抗氧化活性的變化規(guī)律,科學評價松針酵素的抗氧化活性及其品質(zhì),為評估松針酵素的功能及產(chǎn)品質(zhì)量的改善提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    1.1.1 材料與菌株

    松針、松花粉、松子、沙棘、柚子、胡蘿卜、菊花、檸檬、橘子、玫瑰花、桂花:湖南恩松生物科技有限公司;安琪牌葡萄酒用高活性干酵母、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)CECT5716、短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve)M-16V:中科院微生物研究所。

    1.1.2 試劑

    DPPH、乙醇、ABTS、過硫酸鉀、鐵氰化鉀、三氯化鐵、硫酸亞鐵、水楊酸、雙氧水、Tris、鄰苯三酚、淀粉酶試劑盒、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)試劑盒、鹽酸、酪蛋白、酪氨酸、福林酚、碳酸鈉、三氯乙酸、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、聚乙烯醇、橄欖油、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、乙酸、乙酸鈉、葡萄糖、羧甲基纖維素鈉、無水硫酸鈉、酒石酸鈉、苯酚、3,5-二硝基水楊酸(3,5-dinitrosalicylic acid,DNS):國藥集團化學試劑有限公司。實驗所用試劑均為分析純。

    1.2 儀器與設備

    YP-B10001分析天平:上海光正醫(yī)療儀器有限公司;BlueStar B紫外可見分光光度計:北京萊伯泰科儀器股份有限公司;PHSJ-3FpH計:上海圣科儀器設備有限公司;TG16MW臺式高速冷凍離心機:湖南赫西儀器裝備有限公司;84-1磁力攪拌器:上海梅穎浦儀器儀表制造有限公司;FA25-D剪切機:上海弗魯克科技發(fā)展公司;BET-40生化培養(yǎng)箱:天津天大天發(fā)科技有限公司;SpectraMa酶標儀:美國Molecular Device公司。

    1.3 實驗方法

    1.3.1 松針酵素制備工藝流程及操作要點

    原料→清洗→熱燙、瀝干→研磨→酵母發(fā)酵→混合發(fā)酵→后熟→松針酵素

    操作要點:選取松針、松花粉、松子等原料,用清水洗滌后熱燙15 min,冷卻瀝干后加水研磨得到混合果漿,加入22%紅糖和33%冰糖,溶解均勻,再加入0.8%活化后的干酵母,置于22 ℃條件下發(fā)酵18 d,再接種6%短雙岐桿菌M-16V和發(fā)酵乳桿菌CECT5716的混合菌液(短雙岐桿菌M-16V∶發(fā)酵乳桿菌CECT5716=1.0∶1.5),混合發(fā)酵結(jié)束后即得松針酵素成品。松針酵素于4 ℃低溫陳釀,分別取陳釀半年、一年、兩年、三年、四年的松針酵素,4 000 r/min、4 ℃條件下離心15 min,取上清液測定各指標。

    1.3.2 活性酶的測定

    蛋白酶:參照SB/T 10317—1999《蛋白酶活力測定法》,以酪氨酸的質(zhì)量濃度(x)為橫坐標,吸光度值(y)為縱坐標繪制酪氨酸標準曲線,按照標準曲線回歸方程y=0.174 8x-0.055 6(R2=0.999 1)計算樣品中酪氨酸的含量。蛋白酶活力定義:在40 ℃條件下每分鐘水解酪蛋白產(chǎn)生l μg酪氨酸定義為1個蛋白酶活力單位(U)。

    纖維素酶:參照NY/T 912—2004《纖維素酶活力的測定-分光光度計法》,以葡萄糖的質(zhì)量濃度(x)為橫坐標,吸光度值(y)為縱坐標繪制葡萄糖標準曲線,按照標準曲線回歸方程y=0.907 3x+0.085 5(R2=0.999 6)計算樣品中纖維素酶水解羧甲基纖維素鈉產(chǎn)生的還原糖含量,再根據(jù)公式換算成樣品中纖維素酶的含量。纖維素酶活力定義:在37℃、pH值為5.5的條件下,每分鐘從質(zhì)量濃度為4 mg/mL的羧甲基纖維素鈉溶液中降解釋放1 μmol還原糖所需的酶量為一個酶活力單位(U)。

    脂肪酶:參照GB/T 23535—2009《脂肪酶制劑》中的電位滴定法測定。脂肪酶活力定義:1 g固體酶粉(或1 mL液體酶),在一定溫度和pH值條件下,1 min水解底物產(chǎn)生1 mol可滴定的脂肪酸即為1個酶活力單位(U)。

    淀粉酶:參考淀粉酶試劑盒內(nèi)說明書測定。淀粉酶活力定義:在60 ℃、pH值6.0的條件下,1 h液化1 g可溶性淀粉所需的酶量為一個酶活力單位(U)。

    SOD:參考SOD試劑盒內(nèi)說明書測定。SOD活力定義:25 ℃時抑制鄰苯三酚自氧化速率50%時所需的SOD量為一個活力單位(U)。

    1.3.3 抗氧化能力的測定

    DPPH自由基清除能力的測定參考SHARMA O P等[10]的方法;ABTS自由基清除能力的測定參照MUSTAFA O等[11]的方法;羥基自由基清除能力的測定參照SHUANG L X等[12]的方法;超氧自由基清除能力的測定參照DU G等[13]的方法;還原力的測定參考SABOKBAR N等[14]的方法。

    1.3.4 數(shù)據(jù)處理

    在Excel 2013中對試驗數(shù)據(jù)進行整理。采用OriginPro8.0分析軟件對數(shù)據(jù)進行差異顯著性分析及相關(guān)性分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 松針酵素陳釀期間活性酶的變化

    酵母菌發(fā)酵混合果漿不但保留了原材料中的營養(yǎng)成分,而且通過微生物的代謝產(chǎn)生了新的活性酶,賦予了松針酵素極強的保健功能,這些活性酶主要包括SOD、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶。SOD是一種特殊的金屬酶,能有效清除機體內(nèi)的的超氧陰離子自由基,對生物體來說是一道保護屏障,且具有抗氧化、防衰老、抗輻射等多種功效,廣泛應用于醫(yī)藥領域[15];蛋白酶不僅能促進蛋白質(zhì)的水解,還能分解瀕臨凋亡的細胞,具有促消化和美容的功效[16];脂肪酶是一類水解油脂的酶類,主要作用于油脂中的脂肪酸和甘油相連接的酯鍵,水解底物一般為天然油脂,廣泛應用于減肥產(chǎn)品及保健品中[17];淀粉酶能夠催化淀粉水解,具有促進人體消化的功能;纖維素酶能夠?qū)⒗w維素分解為葡萄糖,改善人體的消化系統(tǒng)。松針酵素陳釀期間活性酶活力的變化見圖1。

    圖1 松針酵素陳釀期間活性酶活力的變化Fig.1 Changes of active enzyme activities in pine needle Jiaosu during aging periods

    由圖1可知,在松針酵素中存在SOD、淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶和纖維素酶,且5種酶活性均隨陳釀時間的延長逐漸降低。與之前研究相符,不同陳釀期松針酵素的蛋白質(zhì)含量隨著陳釀時間的延長而降低[18]。陳釀初期,蛋白酶活力和SOD活力較高,分別為427.66 U/mL、258.67 U/mL;淀粉酶、纖維素酶以及脂肪酶活力較低,分別為12.95 U/mL、6.92 U/mL和1.90 U/mL。陳釀末期,蛋白酶活力最高,其次是SOD、纖維素酶和淀粉酶,脂肪酶活力最低,分別為241.54 U/mL、163.51 U/mL、4.98 U/mL、1.52 U/mL、0.33 U/mL。在整個陳釀期間,淀粉酶和脂肪酶活力下降最多,分別下降88.26%和82.63%;蛋白酶、SOD、纖維素酶活力分別下降43.52%、36.79%、28.03%。

    董銀卯等[3]使用酵母菌發(fā)酵制備火龍果酵素,測得其SOD、淀粉酶和脂肪酶活力分別為300 U/mL、33.2 U/mL、1.8 U/mL;周偏等[19]研究發(fā)現(xiàn),諾麗酵素活性較高,其中SOD活性和淀粉酶活性分別達到376.43U/mL和17.65U/mL;崔國庭等[20]研究發(fā)現(xiàn),草莓酵素的SOD活力為35.4 U/mL,淀粉酶活力為3.26 U/mL;邵穎等[21]考察了植物酵素發(fā)酵過程中SOD、纖維素酶、蛋白酶等幾種酶活性的變化規(guī)律,發(fā)現(xiàn)在發(fā)酵終點時,SOD活力為(49.29±2.02)U/mL、纖維素酶活力為(319.71±8.19)U/mL、蛋白酶活力為(12.51±1.31)U/mL。與火龍果酵素相比,松針酵素中的SOD、淀粉酶活力略低,但脂肪酶活力相差不大;與諾麗酵素相比,SOD及淀粉酶活性較弱;松針酵素中的SOD及蛋白酶活性高于植物酵素,但纖維素酶活性卻低于植物酵素;草莓酵素中的SOD及淀粉酶活性遠不及松針酵素。各個酵素中酶活力出現(xiàn)不同的原因,可能是由于酵素生產(chǎn)工藝的不同,如高溫殺菌致使酵素中的酶失活;也有可能是原料種類及比例的不同,在未發(fā)酵之前,原料本身含有的活性物質(zhì)會有很大的差異;還有可能是菌種的選擇、發(fā)酵方式、發(fā)酵時間的不同引起的。

    2.2 松針酵素陳釀期間抗氧化能力的變化趨勢

    松針酵素經(jīng)酵母發(fā)酵、短雙歧桿菌和發(fā)酵乳桿菌混合發(fā)酵后得到具有較高活性物質(zhì)以及活性酶的松針發(fā)酵液,這些功能活性成分會增加松針發(fā)酵液的體外抗氧化活性,通過對發(fā)酵過程中各類抗氧化活性指標(還原力、ABTS自由基清除能力、DPPH自由基清除能力、超氧陰離子自由基清除能力及羥基自由基清除能力)的檢測,從而判斷松針酵素在陳釀期抗氧化活性的變化趨勢。

    2.2.1 松針酵素陳釀期間還原力的變化趨勢

    圖2 松針酵素陳釀期間還原力的變化趨勢Fig.2 Change of reducing power of pine needle Jiaosu during aging periods

    由圖2可知,隨著陳釀時間的延長,松針酵素還原力逐漸減小,還原力由最初的0.54下降至0.39,下降27.78%,說明陳釀會導致松針酵素還原能力減弱。分析原因可能是陳釀期間發(fā)酵體系中各分子進行氧化還原、酯化、縮合、聚合等一系列反應,導致還原能力減弱。

    2.2.2 松針酵素陳釀期間超氧陰離子自由基清除率的變化趨勢

    圖3 松針酵素陳釀期間超氧陰離子自由基清除率的變化趨勢Fig.3 Change of superoxide anion radical scavenging rate of pine needle Jiaosu during aging periods

    由圖3可知,陳釀半年的松針酵素對超氧陰離子自由基清除能力高達92.93%,隨著陳釀時間的延長,呈現(xiàn)稍有下降的趨勢,總體下降6.9%。分析原因可能與陳釀期間SOD活力不斷下降有關(guān),ZYRACKA E等[15]研究表明,SOD能催化超氧陰離子自由基發(fā)生歧化反應,從而達到清除超氧陰離子自由基的目的;另一方面可能是因為陳釀期間發(fā)酵液體系中活性物質(zhì)持續(xù)下降。

    2.2.3 松針酵素陳釀期間羥基自由基清除率的變化趨勢

    圖4 松針酵素陳釀期間羥基自由基清除率的變化趨勢Fig.4 Change of hydroxyl radical scavenging rate of pine needle Jiaosu during aging periods

    由圖4可知,陳釀半年的松針酵素對羥基自由基清除能力最高達60.57%,但隨著陳釀期的延長羥基自由基清除能力不斷減弱,陳釀第4年羥基自由基清除率只有31.77%,總體下降28.8%。其原因可能是陳釀期間松針酵素中的營養(yǎng)物質(zhì)不斷下降,發(fā)酵菌的生長繁殖受到抑制,產(chǎn)生可以清除羥基自由基的抗氧化酶類也隨之減少;也有文獻報道,發(fā)酵菌本身就具備抗氧化能力,如酵母菌的細胞多糖能有效清除羥基自由基[22]。LEE J等[23]研究發(fā)現(xiàn),黃酮類化合物能有效清除羥基和超氧陰離子自由基,與金屬形成復合物,并抑制金屬引發(fā)的脂質(zhì)氧化。因此,松針酵素對羥基自由基清除能力與發(fā)酵菌、抗氧化酶類以及黃酮類化合物有關(guān)。

    2.2.4 松針酵素陳釀期間DPPH自由基清除率的變化趨勢

    圖5 松針酵素陳釀期間DPPH自由基清除率的變化趨勢Fig.5 Change of DPPH radical scavenging rate of pine needle Jiaosu during aging periods

    由圖5可知,松針酵素的DPPH自由基清除能力隨著陳釀時間的延長呈升高后略下降的趨勢。韋仕靜等[24-25]研究發(fā)現(xiàn),酚類物質(zhì)含量與DPPH自由基清除率呈一定的相關(guān)性;SHAHIDI F等[25]研究發(fā)現(xiàn),有機酸、維生素和具有自由羥基的酚類物質(zhì)都可以有效清除自由基。因此,松針酵素對DPPH自由基的清除能力不僅與發(fā)酵液體系中的多酚物質(zhì)有關(guān),還與有機酸、維生素等其他活性物質(zhì)相關(guān)。

    2.2.5 松針酵素陳釀期間ABTS自由基清除率的變化趨勢

    圖6 松針酵素陳釀期間ABTS自由基清除率的變化趨勢Fig.6 Change of ABTS radical scavenging rate of pine needle Jiaosu during aging periods

    由圖6可知,松針酵素對ABTS自由基清除率高達98.91%,且在陳釀期間,變化較小,說明不同陳釀時間松針酵素發(fā)酵液均表現(xiàn)出很強的ABTS自由基清除能力,且對ABTS的清除能力非常穩(wěn)定。孫淑夷[26]研究發(fā)現(xiàn),荔枝汁酵素在發(fā)酵16 h后ABTS自由基清除率高達98%,發(fā)酵16 h后ABTS自由基清除率較為穩(wěn)定;陳小偉等[27]研究發(fā)現(xiàn),不同發(fā)酵時間諾麗酵素對ABTS自由基的清除率差異不大。因此,松針酵素不僅對ABTS自由基的清除率高,且能在一定時間范圍內(nèi)保持穩(wěn)定。

    綜上,松針酵素的抗氧化活性隨著陳釀時間的延長而降低,但對DPPH自由基的清除率稍有增加。

    2.3 松針酵素陳釀過程中活性酶和抗氧化能力的相關(guān)性分析

    采用Pearson法對松針酵素陳釀過程中脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶、SOD和纖維素酶與DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、超氧陰離子自由基清除能力、羥基自由基清除能力和總還原力能力的相關(guān)性進行分析,結(jié)果見表1。

    由表1可知,DPPH、超氧陰離子自由基清除能力與羥基自由基清除能力、淀粉酶活力及蛋白酶活力呈顯著相關(guān)(P<0.05),DPPH自由基清除能力與纖維素酶活力呈極顯著相關(guān)(P<0.01),超氧陰離子自由基清除能力與還原力呈極顯著相關(guān)(P<0.01),與SOD活力呈顯著相關(guān)(P<0.05);羥基自由基清除能力除與ABTS自由基清除能力無顯著相關(guān)外(P>0.05),與其他指標都相關(guān),其中與還原力、淀粉酶活力及SOD活力呈極顯著相關(guān)(P<0.01);還原力與SOD活力呈極顯著相關(guān)(P<0.01);脂肪酶活力與淀粉酶活力、蛋白酶活力呈極顯著相關(guān)(P<0.01);淀粉酶與蛋白酶活力呈極顯著相關(guān)(P<0.01);ABTS與各指標無顯著相關(guān)性(P>0.05)。5種活性酶活力與5個抗氧化指標具有一定的相關(guān)性,可以通過測定松針酵素中的活性酶含量來表征其抗氧化特性。

    表1 松針酵素中活性酶和抗氧化能力的相關(guān)性分析Table 1 Correlation analysis of active enzymes and antioxidant ability in pine needle Jiaosu

    3 結(jié)論

    不同陳釀期松針酵素中含有豐富的活性酶類,包括SOD、淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶和纖維素酶,在陳釀初期,5種酶活力最高,分別為258.67 U/mL、12.95 U/mL、427.66 U/mL、1.90 U/mL、6.92 U/mL;但隨陳釀時間的延長,5種活性酶活力均逐漸降低,酶活力分別下降36.79%、88.26%、43.52%、82.63%、28.03%。

    不同陳釀期松針酵素具有良好的抗氧化能力,在整個陳釀期間,對超氧陰離子自由基清除能力和ABTS自由基清除能力均>85%,相對穩(wěn)定。隨著陳釀時間的延長,還原力和羥基自由基清除能力減弱,而DPPH自由基清除能力增加。

    松針酵素活性酶與抗氧化性相關(guān)分析結(jié)果表明,5種活性酶活力與5個抗氧化指標具有一定的相關(guān)性,可以通過測定松針酵素中的活性酶含量來表征其抗氧化特性。

    猜你喜歡
    陳釀松針酵素
    松針
    都市(2023年6期)2023-12-28 07:56:52
    陳釀方式對赤水曬醋醋醅的影響研究
    中國釀造(2022年11期)2022-12-11 08:12:36
    厲害了!農(nóng)作物“喝”上環(huán)保酵素
    酵素真的是減肥神藥嗎?
    杜建奇美術(shù)作品
    松針掃把
    橡木桶陳釀葡萄酒技術(shù)應用探討
    檸檬酵素
    自制酵素 能否保健
    松針入藥驗方選
    中老年健康(2015年5期)2015-05-30 06:21:18
    91午夜精品亚洲一区二区三区| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 色尼玛亚洲综合影院| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 最近的中文字幕免费完整| 国产一级毛片在线| 赤兔流量卡办理| 插逼视频在线观看| 日韩精品有码人妻一区| 国产一区二区激情短视频| 一夜夜www| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 99久久成人亚洲精品观看| 国产伦理片在线播放av一区 | www日本黄色视频网| 五月玫瑰六月丁香| 日本一二三区视频观看| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 韩国av在线不卡| 欧美区成人在线视频| 久久久久久久久久久丰满| 午夜福利视频1000在线观看| 国产视频首页在线观看| 九色成人免费人妻av| 亚州av有码| 国产视频首页在线观看| 日韩成人av中文字幕在线观看| 亚洲四区av| 国产久久久一区二区三区| 久久久久久久久中文| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 欧美日韩在线观看h| 国产亚洲91精品色在线| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 女人被狂操c到高潮| 青春草视频在线免费观看| 国产黄片美女视频| 99热网站在线观看| 最后的刺客免费高清国语| 久久草成人影院| 国产精品不卡视频一区二区| 尾随美女入室| 一级av片app| 日韩中字成人| 日韩精品青青久久久久久| 波野结衣二区三区在线| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 一个人看的www免费观看视频| 精品一区二区三区人妻视频| 人妻夜夜爽99麻豆av| 中文资源天堂在线| 最近手机中文字幕大全| 一区二区三区四区激情视频 | 99热这里只有是精品50| 久久久精品大字幕| 国产探花在线观看一区二区| 一个人看视频在线观看www免费| 久久久久久久久久成人| 国产伦理片在线播放av一区 | 成人三级黄色视频| 3wmmmm亚洲av在线观看| 国产一级毛片七仙女欲春2| 久久久久久九九精品二区国产| 日韩精品青青久久久久久| 国产不卡一卡二| 国产精品精品国产色婷婷| 国产精品久久视频播放| 91久久精品国产一区二区成人| 69av精品久久久久久| 亚洲av免费高清在线观看| 少妇熟女欧美另类| 国产乱人偷精品视频| 亚洲在线自拍视频| 一个人看视频在线观看www免费| 欧美三级亚洲精品| 亚洲欧美精品专区久久| 人人妻人人澡欧美一区二区| 美女大奶头视频| 成人国产麻豆网| 国产精品一区二区三区四区久久| 日韩三级伦理在线观看| 国产精品日韩av在线免费观看| 偷拍熟女少妇极品色| 性插视频无遮挡在线免费观看| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 免费人成视频x8x8入口观看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 日韩精品有码人妻一区| 日韩一本色道免费dvd| 久久热精品热| 日韩欧美精品v在线| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 久久久久久九九精品二区国产| 一进一出抽搐gif免费好疼| 网址你懂的国产日韩在线| 欧美人与善性xxx| 色尼玛亚洲综合影院| 日韩av在线大香蕉| 五月玫瑰六月丁香| 精品人妻偷拍中文字幕| 联通29元200g的流量卡| 日本欧美国产在线视频| 两个人视频免费观看高清| 成年女人永久免费观看视频| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 欧美激情国产日韩精品一区| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 十八禁国产超污无遮挡网站| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 麻豆av噜噜一区二区三区| 可以在线观看的亚洲视频| 亚洲国产色片| 亚洲成人久久爱视频| 亚洲人与动物交配视频| 国产淫片久久久久久久久| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 日日干狠狠操夜夜爽| 99久久精品国产国产毛片| 可以在线观看的亚洲视频| 欧美高清性xxxxhd video| 日韩视频在线欧美| 一个人看的www免费观看视频| 一级黄色大片毛片| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国内揄拍国产精品人妻在线| 欧美性猛交黑人性爽| 国产黄色小视频在线观看| 久久久久网色| 性欧美人与动物交配| 啦啦啦啦在线视频资源| 女人被狂操c到高潮| 99久久人妻综合| 欧美变态另类bdsm刘玥| 中文资源天堂在线| 久久精品人妻少妇| 久久综合国产亚洲精品| 午夜福利成人在线免费观看| 在线观看66精品国产| 美女国产视频在线观看| 一级毛片我不卡| 成人综合一区亚洲| av在线观看视频网站免费| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国内精品宾馆在线| 久久久欧美国产精品| 成人毛片a级毛片在线播放| 久久99热这里只有精品18| 精品久久久久久久末码| 午夜精品一区二区三区免费看| 我的老师免费观看完整版| 久久精品国产清高在天天线| 久99久视频精品免费| 中文字幕av在线有码专区| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲最大成人av| 婷婷色av中文字幕| 成年女人看的毛片在线观看| 久久久精品94久久精品| 99热这里只有是精品在线观看| 国产亚洲精品av在线| 亚洲欧美精品专区久久| 国产精品久久视频播放| 成人欧美大片| 色噜噜av男人的天堂激情| 亚洲精品影视一区二区三区av| 日韩欧美国产在线观看| 在线观看av片永久免费下载| 国产黄色小视频在线观看| 中文字幕制服av| 成人特级黄色片久久久久久久| 色噜噜av男人的天堂激情| 午夜福利在线观看吧| 中文在线观看免费www的网站| 亚洲电影在线观看av| 国产精品,欧美在线| 国内精品宾馆在线| 国产免费男女视频| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲在线自拍视频| 欧美日韩精品成人综合77777| 日韩av在线大香蕉| 午夜视频国产福利| 91av网一区二区| 高清毛片免费观看视频网站| 国产色婷婷99| 在线观看66精品国产| 久久精品国产清高在天天线| 好男人在线观看高清免费视频| 国产色婷婷99| av在线观看视频网站免费| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 欧美+日韩+精品| 看非洲黑人一级黄片| 中国美女看黄片| a级一级毛片免费在线观看| 人人妻人人澡欧美一区二区| 搡老妇女老女人老熟妇| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| a级毛片免费高清观看在线播放| 久久精品久久久久久久性| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产伦精品一区二区三区视频9| videossex国产| 波多野结衣巨乳人妻| 美女大奶头视频| 午夜福利视频1000在线观看| 国产亚洲精品av在线| 色噜噜av男人的天堂激情| 午夜福利视频1000在线观看| 欧美人与善性xxx| 久久中文看片网| 国产视频内射| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产成人福利小说| 亚洲第一电影网av| 日本色播在线视频| 亚洲成人久久爱视频| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 日本一本二区三区精品| 久久国产乱子免费精品| 亚洲最大成人手机在线| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲av免费在线观看| 午夜激情福利司机影院| 亚洲欧美成人精品一区二区| 日日撸夜夜添| 夜夜夜夜夜久久久久| 网址你懂的国产日韩在线| 国产男人的电影天堂91| 特大巨黑吊av在线直播| 成人毛片60女人毛片免费| 中文字幕熟女人妻在线| 久久久久久久久久久丰满| 蜜臀久久99精品久久宅男| 久久韩国三级中文字幕| 18+在线观看网站| 国产精品久久久久久精品电影| 欧美色视频一区免费| 麻豆成人av视频| 国产伦精品一区二区三区视频9| 男插女下体视频免费在线播放| 日韩欧美在线乱码| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产成人aa在线观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产精品无大码| 亚洲av免费高清在线观看| 色5月婷婷丁香| 亚洲18禁久久av| 欧美丝袜亚洲另类| 免费av不卡在线播放| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 欧美色欧美亚洲另类二区| 婷婷亚洲欧美| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 别揉我奶头 嗯啊视频| 三级国产精品欧美在线观看| 日韩av在线大香蕉| 免费看光身美女| 九色成人免费人妻av| 男人狂女人下面高潮的视频| 男的添女的下面高潮视频| 欧美性猛交黑人性爽| 国产69精品久久久久777片| 在线观看免费视频日本深夜| 一级二级三级毛片免费看| 级片在线观看| 五月伊人婷婷丁香| 日本黄色片子视频| ponron亚洲| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲成人久久爱视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 亚洲成人久久爱视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 成人午夜精彩视频在线观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 日日摸夜夜添夜夜爱| 麻豆av噜噜一区二区三区| 国产探花极品一区二区| 国产成人福利小说| 成人综合一区亚洲| 国产高清视频在线观看网站| 精品久久久久久成人av| 久久热精品热| 1024手机看黄色片| 美女脱内裤让男人舔精品视频 | 亚洲内射少妇av| 欧美高清性xxxxhd video| 人妻夜夜爽99麻豆av| 嫩草影院新地址| 亚洲三级黄色毛片| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 日日撸夜夜添| 亚洲第一电影网av| 精华霜和精华液先用哪个| 久久久色成人| 亚洲国产高清在线一区二区三| 免费看美女性在线毛片视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 热99在线观看视频| 中文字幕制服av| 国产三级在线视频| 桃色一区二区三区在线观看| 黑人高潮一二区| 国产精品伦人一区二区| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久韩国三级中文字幕| 青春草视频在线免费观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 日韩亚洲欧美综合| 国产精品久久久久久久电影| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产av一区在线观看免费| 国产三级在线视频| 麻豆av噜噜一区二区三区| 日本-黄色视频高清免费观看| 欧美一区二区亚洲| 亚洲三级黄色毛片| 欧美精品国产亚洲| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲自拍偷在线| 精品无人区乱码1区二区| av福利片在线观看| 一区二区三区四区激情视频 | 亚洲精品国产成人久久av| 级片在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 成人性生交大片免费视频hd| 午夜视频国产福利| 国产高清激情床上av| 插阴视频在线观看视频| 亚洲五月天丁香| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产精品久久久久久久久免| 少妇的逼水好多| 只有这里有精品99| 综合色av麻豆| 国产精品av视频在线免费观看| 国产高清激情床上av| 一区二区三区免费毛片| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 欧美变态另类bdsm刘玥| 日韩精品青青久久久久久| 超碰av人人做人人爽久久| 免费观看的影片在线观看| 国产午夜精品一二区理论片| 国产一区二区三区av在线 | 国产色婷婷99| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲精品久久国产高清桃花| 久久精品国产亚洲av天美| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 人人妻人人澡欧美一区二区| 日韩成人av中文字幕在线观看| 亚洲不卡免费看| 午夜福利高清视频| 国产精品久久久久久av不卡| 国产成人精品一,二区 | 亚洲欧美精品综合久久99| 伦理电影大哥的女人| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 欧美日本亚洲视频在线播放| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产在线精品亚洲第一网站| 免费观看在线日韩| 日本av手机在线免费观看| 国产日韩欧美在线精品| 欧美+亚洲+日韩+国产| 欧美成人a在线观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 成人毛片a级毛片在线播放| 中文字幕熟女人妻在线| 国产精品久久久久久久久免| 日本黄色视频三级网站网址| 中文字幕熟女人妻在线| 日本三级黄在线观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 又粗又硬又长又爽又黄的视频 | 国产精品不卡视频一区二区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 美女内射精品一级片tv| 欧美日本视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 色视频www国产| 国产乱人视频| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产伦精品一区二区三区四那| av国产免费在线观看| 69av精品久久久久久| 级片在线观看| 看非洲黑人一级黄片| av女优亚洲男人天堂| 一个人看的www免费观看视频| 国产成人福利小说| av黄色大香蕉| 在线观看一区二区三区| 日韩亚洲欧美综合| 国产伦精品一区二区三区四那| 热99在线观看视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 婷婷亚洲欧美| 久久精品影院6| 99久久人妻综合| 日本与韩国留学比较| 观看美女的网站| av黄色大香蕉| 草草在线视频免费看| 久久久国产成人免费| 搞女人的毛片| 国产精品爽爽va在线观看网站| 内地一区二区视频在线| 午夜福利高清视频| 亚洲高清免费不卡视频| 精品久久久噜噜| 久久精品国产自在天天线| 久久国内精品自在自线图片| 国产欧美日韩精品一区二区| 一个人看的www免费观看视频| 热99在线观看视频| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 岛国毛片在线播放| 欧美一区二区亚洲| av专区在线播放| 亚洲av.av天堂| 中文字幕制服av| 蜜臀久久99精品久久宅男| 最后的刺客免费高清国语| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国产精品久久久久久精品电影| 99热全是精品| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 亚洲精品国产av成人精品| 日本一本二区三区精品| 少妇被粗大猛烈的视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产极品天堂在线| 老司机福利观看| 日韩制服骚丝袜av| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 国产一级毛片在线| 亚洲av男天堂| 国产伦精品一区二区三区四那| 中国国产av一级| a级一级毛片免费在线观看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频 | 18禁黄网站禁片免费观看直播| 99久国产av精品| 免费av毛片视频| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 九色成人免费人妻av| 日韩一区二区视频免费看| 欧美一区二区国产精品久久精品| 欧美日本视频| 嫩草影院新地址| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲精品成人久久久久久| 精品久久久久久久末码| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产午夜福利久久久久久| 欧美激情在线99| 日韩成人伦理影院| 变态另类丝袜制服| av黄色大香蕉| 少妇丰满av| 啦啦啦啦在线视频资源| 午夜福利高清视频| 日韩亚洲欧美综合| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 美女高潮的动态| 我的老师免费观看完整版| 欧美日韩乱码在线| 国产精品人妻久久久久久| 久久中文看片网| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 中文字幕熟女人妻在线| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲高清免费不卡视频| 永久网站在线| 欧美丝袜亚洲另类| 婷婷六月久久综合丁香| 亚洲国产精品国产精品| 波多野结衣高清作品| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲内射少妇av| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 黄色欧美视频在线观看| 国产精品,欧美在线| 免费观看精品视频网站| 我要看日韩黄色一级片| 岛国毛片在线播放| 国产片特级美女逼逼视频| 中文亚洲av片在线观看爽| 男人的好看免费观看在线视频| 国产高潮美女av| 免费看日本二区| 美女黄网站色视频| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 在线观看美女被高潮喷水网站| 少妇高潮的动态图| 简卡轻食公司| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 99久久人妻综合| 亚洲国产欧美人成| 亚洲色图av天堂| 国产精品嫩草影院av在线观看| 亚洲av中文av极速乱| 嘟嘟电影网在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 久久久欧美国产精品| 日日干狠狠操夜夜爽| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 美女cb高潮喷水在线观看| 99视频精品全部免费 在线| 日韩亚洲欧美综合| av免费观看日本| 国产日韩欧美在线精品| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲,欧美,日韩| 午夜老司机福利剧场| 我的老师免费观看完整版| 欧美色欧美亚洲另类二区| 一区福利在线观看| 中文字幕久久专区| 欧美日韩乱码在线| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久99热6这里只有精品| 日韩精品有码人妻一区| 成人综合一区亚洲| 久久6这里有精品| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 日韩欧美三级三区| 亚洲无线观看免费| 给我免费播放毛片高清在线观看| 午夜福利在线在线| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 国产老妇伦熟女老妇高清| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 淫秽高清视频在线观看| 精品久久久久久久久久久久久| 黄片wwwwww| 高清毛片免费看| 欧美精品国产亚洲| 成人午夜精彩视频在线观看| 久久人人爽人人爽人人片va| 久久人妻av系列| 国产精品,欧美在线| 高清毛片免费看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 日本三级黄在线观看| 久久人人精品亚洲av| 国产日本99.免费观看| 99国产极品粉嫩在线观看| a级毛色黄片| 久久国产乱子免费精品| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 大型黄色视频在线免费观看| 国产成人影院久久av| 日本成人三级电影网站| 我要搜黄色片| 国产精品乱码一区二三区的特点| АⅤ资源中文在线天堂| 国产大屁股一区二区在线视频| 丰满的人妻完整版| 国产av一区在线观看免费| 久久亚洲精品不卡| 国产精品久久电影中文字幕| 婷婷六月久久综合丁香| 在线播放国产精品三级| 亚洲av男天堂| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产精品精品国产色婷婷| 国产探花极品一区二区| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产精品.久久久| 可以在线观看的亚洲视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 青春草视频在线免费观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 三级国产精品欧美在线观看| 嘟嘟电影网在线观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 欧美人与善性xxx| 亚洲国产精品成人久久小说 | a级毛色黄片| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 天天一区二区日本电影三级| 国产精品嫩草影院av在线观看| 成人三级黄色视频| 久久这里有精品视频免费| 免费搜索国产男女视频| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲图色成人| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产熟女欧美一区二区| 色视频www国产| 国产黄a三级三级三级人| 一个人看视频在线观看www免费| 99久国产av精品国产电影| 日本色播在线视频| 中文字幕av在线有码专区| 在线观看午夜福利视频|