ELISA檢測梅毒抗體假陽性率與年齡相關(guān)性探究

尹亞牛

摘要：目的 分析應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測梅毒抗體假陽性與年齡的關(guān)系;方法 選取≥60歲的425例接受梅毒抗體檢測患者作為實(shí)驗(yàn)組，選取<60歲的1935例接受梅毒抗體檢測患者作為對(duì)照組，先用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)初檢，針對(duì)結(jié)果為陽性的患者采用梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）確診，比較兩組患者的假陽性率;結(jié)果 ≥60歲患者假陽性率83.33%高于<60歲患者假陽性率10.26%，且P<0.05;結(jié)論 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測梅毒抗體假陽性率與年齡因素密切相關(guān)，大于60歲患者中假陽性率高達(dá)80%左右，應(yīng)謹(jǐn)慎對(duì)待。

關(guān)鍵詞：梅毒抗體;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn);假陽性

【中圖分類號(hào)】R183??? 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A??? 【文章編號(hào)】2107-2306（2019）03-062-02

梅毒作為臨床上比較常見的一類傳染性疾病，其傳播途徑主要為性傳播和母嬰垂直傳播，主要是感染蒼白密螺旋體導(dǎo)致。近年來，我國梅毒的發(fā)病率呈現(xiàn)出不斷上升的趨勢，在全球發(fā)病人數(shù)位居第五位。病毒會(huì)引起人體多種器官功能形態(tài)發(fā)生改變，具有較高的致殘率和致死率，因此針對(duì)梅毒早檢測、早治療顯得至關(guān)重要[1]。當(dāng)前臨床上檢測梅毒的方法較多，其中以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）最為常見，但是隨著酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)廣泛應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)其檢測結(jié)果存在假陽性的情況，本文就酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測梅毒抗體假陽性率與年齡相關(guān)性進(jìn)行分析，詳細(xì)情況見下：

1.資料與方法

1.1一般資料

本研究一般資料選自2018年1月～2018年10月我院接受梅毒抗體檢測的2360例患者。其中男性患者共1246例，女性患者為1114例，患者最小年齡為6歲，最大年齡為98歲，中位年齡為（55.36±12.14）歲。將其中≥60歲的425例患者作為實(shí)驗(yàn)組，將<60歲的1935例患者作為對(duì)照組。排除伴有惡性腫瘤和多臟器功能衰竭患者。

1.2方法

1.2.1所需儀器和試劑。本次檢測所需儀器為北京普朗洗板機(jī)及普朗全自動(dòng)酶標(biāo)儀，TP-ELISA的試劑盒由珠海麗珠試劑股份有限公司提供，TPPA試劑盒選用日本富士瑞必歐珠式會(huì)社產(chǎn)品。

1.2.2檢測方法。所有接受檢測的對(duì)象均在清晨空腹的狀態(tài)下，抽取其靜脈血3ml，然后將其置于離心機(jī)上以4000r/min離心處理15min后，常規(guī)分離血清待檢，整個(gè)檢測過程全部由我院檢驗(yàn)科的專業(yè)人員嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程規(guī)范開展。所有待測血清均先采用TP-ELISA進(jìn)行檢測，針對(duì)檢測結(jié)果為陽性的標(biāo)本再采用梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）予以確診。

1.3觀察指標(biāo)

統(tǒng)計(jì)兩組對(duì)象的假陽性率。其中真陽性的判定標(biāo)準(zhǔn)為：TP-ELISA和TPPA結(jié)果均為陽性即為真陽性，假陽性的判定標(biāo)準(zhǔn)：TP-ELISA結(jié)果呈陽性，TPPA的結(jié)果呈陰性，并且2周內(nèi)復(fù)查結(jié)果未改變便提示為假陽性[2]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析用SPSS21.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料用（%）表示，用卡方檢驗(yàn)，結(jié)果以P<0.05表示差異明顯。

2.結(jié)果

實(shí)驗(yàn)組425例患者經(jīng)TP-ELISA檢測，結(jié)果呈陽性12例，經(jīng)TPPA檢測，結(jié)果為陽性共2例，假陽性有10例，假陽性率為83.33%，對(duì)照組1935例患者經(jīng)TP-ELISA檢測，結(jié)果呈陽性76例，經(jīng)TPPA檢測，結(jié)果為陽性共68例，假陽性為8例，假陽性率為10.26%，由此可見實(shí)驗(yàn)組患者的假陽性率明顯高于對(duì)照組（P<0.05）。

3.討論

梅毒主要指的是因?yàn)楦腥久范韭菪w而引起的一類慢性全身性傳播疾病，該病具有較強(qiáng)的傳染性，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，病程較長。梅毒傳播的主要途徑為性接觸，除此之外，母嬰垂直傳播、吸毒、注射藥品等也會(huì)傳播。當(dāng)前臨床上診斷梅毒的方法較多，大多數(shù)診斷在實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果的基礎(chǔ)上，而梅毒抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）和梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)則是實(shí)驗(yàn)室血清檢測梅毒螺旋體的常見方法。TP-ELISA在臨床上的使用比較常見，但是這類檢測方法容易受到各種因素的影響，以至于檢測值處于臨界區(qū)域中，無法得到準(zhǔn)確的診斷結(jié)果，從而影響了梅毒的治療[3]。

在本研究中，通過對(duì)比了≥60歲和<60歲以上的人群開展梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)監(jiān)測和TPPA檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)≥60歲患者的假陽性率為83.33%明顯高于<60歲患者假陽性率為10.26%，導(dǎo)致這一結(jié)果的主要原因可能為：一、絕大部分老年患者合并有其他慢性疾?。ㄈ纾禾悄虿?、肝硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、丙型肝炎、淋巴肉瘤等），這些疾病可能引起機(jī)體釋放誘導(dǎo)產(chǎn)生抗類脂抗體和抗梅毒螺旋體的交叉抗原，除此之外，患者因?yàn)樯頎顩r改變也可能引起梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)結(jié)果為假陽性;二、個(gè)別老年患者體內(nèi)可能同時(shí)存在其他螺旋體，這些螺旋體會(huì)誘導(dǎo)產(chǎn)生抗屬、群或者特異抗原的交叉反應(yīng)抗體;三、當(dāng)前TP試驗(yàn)所需的商品試劑盒，只有FTA-ABS配備了吸收劑，其他的TPPA和ELISA全部未配置吸收劑。導(dǎo)致需要檢測的血清全部沒有使用吸收劑來吸除同非梅毒螺旋體交叉反應(yīng)的抗體。

導(dǎo)致梅毒抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測結(jié)果為假陰性的原因眾多，除了上述的年齡因素外，還有學(xué)者認(rèn)為主要有以下幾個(gè)方面因素：（1）樣本因素。樣本因素主要體現(xiàn)在四個(gè)方面：①樣本處理不完全。待抽取檢驗(yàn)者的血液后未等到完全凝固便將其放置在離心機(jī)上將血清分離，導(dǎo)致纖維蛋白沒有全部析出，容易在板孔上形成絮狀物或者纖維蛋白薄膜，引起洗板時(shí)不干凈，板孔內(nèi)存在殘留酶，引起吸光度值偏高，導(dǎo)致檢測結(jié)果呈假陽性。②樣本溶血。當(dāng)樣本溶血時(shí)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)液各類活性酶和擁有酶樣活性的物質(zhì)非特異性與底物接觸，溶血后反應(yīng)孔非特異性地吸附血紅蛋白，若沒有將其清洗干凈，便會(huì)導(dǎo)致催化底物出現(xiàn)一定顯色，增加了本底吸光度值，引起假陽性。③樣本被污染。為了避免血清樣本被污染，要求在新鮮時(shí)便檢測，一旦血清樣本被污染，一些細(xì)菌中存在的內(nèi)源性辣根過氧化物酶便會(huì)形成非特異性感染，引起結(jié)果出現(xiàn)假陽性。④樣本保存不當(dāng)。針對(duì)在 5天內(nèi)檢測的血清樣本需要將其保存在4℃的環(huán)境中，如果超過1周檢測的樣本則需要低溫冷凍保存。（2）操作因素。在洗滌過程中伴有溢出的情況，導(dǎo)致強(qiáng)陽性樣本的反應(yīng)液對(duì)周邊的陰性孔造成污染而產(chǎn)生假陽性，當(dāng)洗滌的次數(shù)少或者洗滌時(shí)間短，導(dǎo)致洗滌不夠充分，板孔內(nèi)殘留酶試劑導(dǎo)致檢測結(jié)果呈假陽性，另外底物液反復(fù)使用長時(shí)間遭受強(qiáng)光照射或者被污染時(shí)也會(huì)導(dǎo)致檢測結(jié)果呈陽性[4]。

綜上所述，梅毒血清學(xué)檢查作為臨床中診斷梅毒的重要依據(jù)，但是并非唯一依據(jù)。在梅毒的診斷方面，除了要結(jié)合化驗(yàn)結(jié)果，還需要結(jié)合患者的生活史和既往病史，再結(jié)合詳細(xì)的體格檢查，并在梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)過程中，控制好樣本的質(zhì)量，以免樣本分離不當(dāng)，引起樣本溶血或者被細(xì)菌污染等等。在實(shí)施梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測過程中，必須嚴(yán)格按照相關(guān)操作規(guī)程執(zhí)行，針對(duì)檢測結(jié)果為陽性，需要進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)來確診，從而降低假陽性率。

參考文獻(xiàn)

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