蓮子與姜辣素組合物抗癌及止吐減毒增效作用研究

龍騰騰 ，趙成健，江海洋，李曉玲*，岳旺

本研究創(chuàng)新點(diǎn)：

首次將姜和蓮子作為對藥進(jìn)行抗嘔吐研究，二者均為食用原料，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠、無毒副作用，且聯(lián)合抗癌止吐效果良好，為一種減少嘔吐反應(yīng)的天然藥物組合物，為開發(fā)抗癌、止吐減毒增效的輔助抗癌用藥提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。

本研究不足之處：

本研究從藥理學(xué)研究蓮子與姜辣素組合物（簡稱蓮姜組合物）的抗嘔吐作用，并未在分子水平探究其分子靶點(diǎn)及機(jī)制，有待進(jìn)一步研究。

嘔吐是臨床多種疾病，如消化道疾病、暈動病、眩暈癥、腦病等常見并發(fā)癥狀，同時也是術(shù)后、癌癥放化療后及妊娠等的常見癥狀，可引起水電解質(zhì)紊亂［1-2］?；熕幬锒靖弊饔米钔纯嗟陌Y狀之一即是嘔吐，而傳統(tǒng)抗嘔吐藥對癌癥放化療后嘔吐的療效差，且常需聯(lián)合用藥。化學(xué)制劑止吐藥5-羥色胺3（5-HT3）受體拮抗劑和神經(jīng)激肽1（NK1）受體拮抗劑等適于放化療后的嘔吐治療，但仍存在作用靶點(diǎn)單一、不良反應(yīng)大的問題。因此，尋找天然、低毒、廣譜的止吐藥物成為亟待解決的問題。

姜作為中藥和調(diào)味料已有兩千年應(yīng)用史，孫思邈《備急千金要方·卷十六嘔吐噦逆》記載“凡嘔者多食生姜，此是嘔家圣藥”，姜辣素是生姜中活性成分，是一種天然、低毒的止吐藥，但在癌癥化療中的止吐效果仍不理想，前期研究表明采用對藥方式可取得較好療效［3］。蓮子為蓮科植物蓮的干燥成熟果實(shí)，味甘淡微澀，是民間食用原料，已有抗癌和止吐作用的報(bào)道［4-5］，但未見姜和蓮子作為對藥的研究，本研究利用小鼠模型及新型較理想的水貂嘔吐動物模型將蓮子與姜辣素作為對藥研究其抗癌、止吐減毒增效作用，旨在為臨床提供幫助。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物 昆明種小鼠96只，雄性，SPF級，體質(zhì)量17～19 g，由青島市實(shí)驗(yàn)動物中心提供。24 h 自然光照射，實(shí)驗(yàn)前自由飲食飲水。

健康成年黑色水貂72只，雄性，CL級，體質(zhì)量（1.5±0.2）kg，由青島市特種動物飼養(yǎng)中心提供。將其單只置于75 cm×50 cm×50 cm鐵籠內(nèi)飼養(yǎng)。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 順鉑（山東齊魯制藥有限公司，批號1303018）；鹽酸昂丹司瓊注射液（山東齊魯制藥有限公司，批號1210041）；阿撲嗎啡（Sigma，批號0202151）；注射用環(huán)磷酰胺（江蘇恒瑞藥業(yè)股份有限公司，批號12010625）；硫酸銅（沈陽遠(yuǎn)東試劑廠，批號20060606）；生姜（購自山東省平度市）。

當(dāng)前，中央電視臺大型綜藝節(jié)目《朗讀者》的熱播，對中小學(xué)階段的學(xué)生產(chǎn)生了重要的影響。很多央視的“名嘴”加入朗讀行列，對小學(xué)語文課本的朗讀，可以說是給當(dāng)前的小學(xué)生很好的示范和帶頭作用。在小學(xué)語文教學(xué)中開展朗讀訓(xùn)練，朗讀的過程同時也是閱讀的過程，久而久之有助于促進(jìn)學(xué)生語文思維能力的提升，讓學(xué)生獲得思想情感的熏陶，讓學(xué)生樂在其中，享受其中。

1.2 實(shí)驗(yàn)時間 2017年。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 蓮子與姜辣素組合物（以下簡稱蓮姜組合物）對小鼠S180肉瘤的影響 按照本課題組之前的方法［6］，抽取S180肉瘤細(xì)胞（傳代5～7 d）生長良好的乳白色的腹腔積液，以適量無菌0.9%氯化鈉溶液稀釋成瘤細(xì)胞懸液，細(xì)胞數(shù)為107/ml，每只小鼠右腋窩皮下接種0.2 ml（含瘤細(xì)胞2×106個）。接種次日將小鼠隨機(jī)分4組，每組12只。正常對照組給予蒸餾水0.5 ml灌胃；環(huán)磷酰胺組給予環(huán)磷酰胺20 g/kg腹腔注射；姜辣素組給予姜辣素10 g/kg（相當(dāng)于含生藥量）灌胃；蓮姜組合物組給予蓮姜組合物10 g/kg（相當(dāng)于含生藥量）灌胃。連續(xù)給藥10 d，期間常規(guī)飼養(yǎng)、飲水，食物不限。

停藥次日，小鼠全部脫頸椎處死，剝?nèi)∑は聦?shí)體瘤瘤塊，稱重，按下列公式計(jì)算腫瘤抑制率：腫瘤抑制率（%）=〔對照組平均瘤重（C）-實(shí)驗(yàn)組平均瘤重（T）〕/對照組平均瘤重（C）×100%。

1.3.2 蓮姜組合物對小鼠艾氏腹水瘤的影響 細(xì)胞接種、分組、劑量、給藥方式、實(shí)驗(yàn)時間與S180肉瘤相同。并按1.3.1中腫瘤抑制率計(jì)算方法計(jì)算艾氏腹水瘤抑制率。

1.3.3 姜辣素與蓮姜組合物的制備及分組 姜辣素與蓮姜組合物的制備按本課題組之前的方法制備［7］。先將72只水貂隨機(jī)分為3組，分別用于研究蓮姜組合物對順鉑（順鉑嘔吐組）、阿撲嗎啡（阿撲嗎啡嘔吐組）、硫酸銅（硫酸銅嘔吐組）3種藥物引起的嘔吐的影響，每組24只；再將順鉑嘔吐組水貂隨機(jī)分為正常對照、陽性對照、姜辣素、蓮姜組合物亞組，即正常對照亞組1、陽性對照亞組1、姜辣素亞組1、蓮姜組合物亞組1，每組6只；阿撲嗎啡嘔吐組、硫酸銅嘔吐組的亞組分組同上，每個亞組6只。

1.3.3.1 蓮姜組合物對順鉑引起的嘔吐的影響 正常對照亞組1給予5 ml 0.9%氯化鈉溶液灌胃；陽性對照亞組1給予鹽酸昂丹司瓊注射液2 mg/kg腹腔注射；姜辣素亞組1給予姜辣素10 g/kg（相當(dāng)于含生藥量）灌胃；蓮姜組合物亞組1給予蓮姜組合物10 g/kg（相當(dāng)于含生藥量）灌胃。依據(jù)本課題組之前的方法［8］，給藥30 min后，各亞組動物給予0.375%順鉑7.5 mg/kg腹腔注射，觀察水貂在給藥后6 h內(nèi)的嘔吐反應(yīng)，記錄嘔吐發(fā)生率、嘔吐潛伏期、干嘔次數(shù)、嘔吐次數(shù)。

1.3.3.2 蓮姜組合物對阿撲嗎啡引起的嘔吐的影響 正常對照亞組2、陽性對照亞組2、姜辣素亞組2、蓮姜組合物亞組2給藥方法同上，給藥30 min后，各亞組動物給予0.08%阿撲嗎啡1.6 mg/kg腹腔注射，觀察水貂在給藥后6 h內(nèi)的嘔吐反應(yīng)，記錄嘔吐發(fā)生率、嘔吐潛伏期、干嘔次數(shù)、嘔吐次數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以相對數(shù)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 正常對照組、環(huán)磷酰胺組、姜辣素組、蓮姜組合物組小鼠S180肉瘤腫瘤質(zhì)量比較及腫瘤抑制率 4組小鼠S180肉瘤腫瘤質(zhì)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；環(huán)磷酰胺組、姜辣素組、蓮姜組合物組小鼠S180肉瘤腫瘤質(zhì)量輕于正常對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表1）。環(huán)磷酰胺組、姜辣素組、蓮姜組合物組小鼠S180肉瘤腫瘤抑制率分別為65.5%、31.9%、53.4%。

表1 正常對照組、環(huán)磷酰胺組、姜辣素組、蓮姜組合物組小鼠S180肉瘤腫瘤質(zhì)量比較（±s，g）Table 1 Comparison of tumor mass among four groups of mice （S180 sarcoma model）

表1 正常對照組、環(huán)磷酰胺組、姜辣素組、蓮姜組合物組小鼠S180肉瘤腫瘤質(zhì)量比較（±s，g）Table 1 Comparison of tumor mass among four groups of mice （S180 sarcoma model）

注：a為正常對照組小鼠于灌胃第2天因灌胃不當(dāng)嗆死2只；b為蓮姜組合物組小鼠于灌胃第2天因灌胃不當(dāng)嗆死1只；與正常對照組比較，cP＜0.05

組別 只數(shù) 腫瘤質(zhì)量正常對照組a 10 3.91±1.83環(huán)磷酰胺組 12 1.35±1.69c姜辣素組 12 2.66±2.23c蓮姜組合物組b 11 1.82±1.51c F值 3.956 P值 0.014

2.2 正常對照組、環(huán)磷酰胺組、姜辣素組、蓮姜組合物組小鼠艾氏腹水瘤腫瘤質(zhì)量比較及腫瘤抑制率 4組小鼠艾氏腹水瘤腫瘤質(zhì)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；環(huán)磷酰胺組、姜辣素組、蓮姜組合物組小鼠艾氏腹水瘤腫瘤質(zhì)量輕于正常對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表2）。環(huán)磷酰胺組、姜辣素組、蓮姜組合物組小鼠艾氏腹水瘤腫瘤抑制率分別為64.7%、26.7%、54.5%。

2.3 順鉑嘔吐組中4個亞組水貂嘔吐發(fā)生率、嘔吐潛伏期、干嘔次數(shù)、嘔吐次數(shù)比較 順鉑嘔吐組中，4個亞組水貂嘔吐發(fā)生率、嘔吐潛伏期、干嘔次數(shù)、嘔吐次數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其中陽性對照亞組1、姜辣素亞組1、蓮姜組合物亞組1水貂嘔吐潛伏期長于正常對照亞組1，干嘔次數(shù)、嘔吐次數(shù)少于正常對照亞組1，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表3）。

2.4 阿撲嗎啡嘔吐組中4個亞組水貂嘔吐發(fā)生率、嘔吐潛伏期、干嘔次數(shù)、嘔吐次數(shù)比較 阿撲嗎啡嘔吐組中，4個亞組水貂嘔吐發(fā)生率、嘔吐潛伏期、干嘔次數(shù)、嘔吐次數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其中陽性對照亞組2、姜辣素亞組2、蓮姜組合物亞組2水貂嘔吐潛伏期長于正常對照亞組2，干嘔次數(shù)、嘔吐次數(shù)少于正常對照亞組2，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表4）。

2.5 硫酸銅嘔吐組中4個亞組水貂嘔吐發(fā)生率、嘔吐潛伏期、干嘔次數(shù)、嘔吐次數(shù)比較 硫酸銅嘔吐組中，4個亞組水貂嘔吐發(fā)生率、嘔吐潛伏期、干嘔次數(shù)、嘔吐次數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其中陽性對照亞組3、姜辣素亞組3、蓮姜組合物亞組3水貂嘔吐潛伏期長于正常對照亞組3，干嘔次數(shù)、嘔吐次數(shù)少于正常對照亞組3，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表5）。

表2 正常對照組、環(huán)磷酰胺組、姜辣素組、蓮姜組合物組小鼠艾氏腹水瘤腫瘤質(zhì)量比較（±s，g）Table 2 Comparison of tumor mass among four groups of mice （EAC tumor model）

表2 正常對照組、環(huán)磷酰胺組、姜辣素組、蓮姜組合物組小鼠艾氏腹水瘤腫瘤質(zhì)量比較（±s，g）Table 2 Comparison of tumor mass among four groups of mice （EAC tumor model）

組別 只數(shù) 腫瘤質(zhì)量正常對照組a 10 3.41±1.50環(huán)磷酰胺組 12 1.21±0.47c姜辣素組 12 2.50±1.09c蓮姜組合物組b 11 1.55±1.25c F值 7.927 P值 ＜0.001

表3 順鉑嘔吐組中4個亞組水貂嘔吐發(fā)生率、嘔吐潛伏期、干嘔次數(shù)、嘔吐次數(shù)比較Table 3 Comparisons of vomiting incidence，vomiting latency，retching and vomiting frequencies among four groups of minks （cisplatin model）

表4 阿撲嗎啡嘔吐組中4個亞組水貂嘔吐發(fā)生率、嘔吐潛伏期、干嘔次數(shù)、嘔吐次數(shù)比較Table 4 Comparisons of vomiting incidence，vomiting latency，retching and vomiting frequencies among four groups of minks （apomorphine model）

表5 硫酸銅嘔吐組中4個亞組水貂嘔吐發(fā)生率、嘔吐潛伏期、干嘔次數(shù)、嘔吐次數(shù)比較Table 5 Comparisons of vomiting incidence，vomiting latency，retching and vomiting frequencies among four groups of minks （copper sulfate model）

3 討論

腫瘤放化療性嘔吐是臨床最常見的毒副作用，不僅可造成患者電解質(zhì)紊亂或營養(yǎng)不良，還可因劇烈嘔吐而使患者放棄治療，因此抑制放化療嘔吐毒副作用亟待解決。順鉑是癌化療經(jīng)典藥物，可直接和間接刺激外周與中樞5-HT3受體引起嘔吐，可作為5-HT3受體激動劑的嘔吐動物模型；阿撲嗎啡可刺激中樞多巴胺受體引起嘔吐；硫酸銅可通過外周刺激引起嘔吐。水貂（mink）為新型動物嘔吐模型，研究表明硫酸銅、阿撲嗎啡、順鉑和X射線均可誘發(fā)水貂產(chǎn)生惡心、干嘔與嘔吐，其表現(xiàn)與國際理想的嘔吐動物模型——同類鼬科動物雪貂（ferret）相似，測定指標(biāo)如干嘔、嘔吐次數(shù)也與雪貂相近［8］。本研究采用順鉑、阿撲嗎啡、硫酸銅3種水貂嘔吐動物模型，研究蓮子與生姜提取物姜辣素制得的組合物（蓮姜組合物）的抗癌活性及其對癌化療后嘔吐毒副作用的影響，旨在創(chuàng)制一種天然、低毒、高效、廣譜的止吐新藥。

蓮子是睡蓮科水生草本植物荷花的種子。我國大部分地區(qū)均有產(chǎn)出，秋、冬季果實(shí)成熟?！侗静菥V目》中記載“蓮之味甘，氣溫而性澀，清芳之氣，得稼墻之味，乃脾之果也?！薄秼D人良方》中記載蓮子可治嘔吐不食。中藥姜被譽(yù)為“嘔吐圣藥”。姜辣素是從生姜中提取的活性成分，前期實(shí)驗(yàn)證明姜辣素能夠?qū)篃o機(jī)及有機(jī)毒物硫酸銅和順鉑所致嘔吐，抑制腸道嗜鉻細(xì)胞釋放致吐因子5-HT3和P物質(zhì)，作用于化療嘔吐最相關(guān)的NK1和5-HT3等受體，是多靶點(diǎn)、天然、低毒止吐藥［9-12］。

本研究采用抗腫瘤藥物的常用模型小鼠S180肉瘤和艾氏腹水瘤觀察蓮姜組合物的作用。蓮子和生姜的抗癌作用已有報(bào)道［13］。本研究結(jié)果顯示，環(huán)磷酰胺組、姜辣素組、蓮姜組合物組小鼠S180肉瘤、艾氏腹水瘤腫瘤質(zhì)量輕于正常對照組，表明蓮姜組合物有抗癌作用。

單一止吐藥療效不理想，前期研究表明采用對藥方式可取得較好療效［14］。本研究結(jié)果顯示，3種嘔吐動物模型均顯示蓮姜組合物具有抗嘔吐作用，說明該組合物抗嘔吐譜廣，可用于各類嘔吐，為其他類型的中樞、外周性嘔吐（如海洋性嘔吐、妊娠嘔吐等）研究提供了理論依據(jù)。但該組合物對NK1、5-HT3和大麻受體的胞內(nèi)機(jī)制尚待深入研究。

綜上所述，蓮姜組合物有抗癌及止吐減毒增效作用，為創(chuàng)制天然、低毒、多靶點(diǎn)的藥食同源的抗癌、止吐減毒增效劑提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。

作者貢獻(xiàn)：岳旺進(jìn)行文章的構(gòu)思與設(shè)計(jì)；龍騰騰負(fù)責(zé)研究的實(shí)施與可行性分析，撰寫論文，負(fù)責(zé)文章的質(zhì)量控制及審校；江海洋負(fù)責(zé)數(shù)據(jù)的收集、整理及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理；趙成健負(fù)責(zé)結(jié)果分析與解釋；李曉玲進(jìn)行論文修訂，英文的修訂，對文章整體負(fù)責(zé)、監(jiān)督管理。

本文無利益沖突。