氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析八仙湯及其組方藥材揮發(fā)性成分

蔣燕霞，林榜建，徐瑞超，肖禮娥，唐富麗，董自亮

（太極集團重慶涪陵制藥廠有限公司，重慶 408099）

八仙湯出自《圣濟總錄》卷六十五，由桑白皮，桔梗，麻黃，茯苓，柴胡，陳皮，苦杏仁、馬兜鈴8味藥材組成，主治久患?xì)馑?，發(fā)即奔喘，坐臥不安，喉中氣欲絕。目前對于八仙湯中單味藥的成分和藥理活性研究較多，而對于整方的研究特別是物質(zhì)基礎(chǔ)和配伍效應(yīng)研究則無相關(guān)報道。

為探討八仙湯組方藥材中揮發(fā)性成分在組方中的作用，尋找八仙湯作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）對八仙湯中揮發(fā)性成分進行分析研究，并模擬相同條件對各單味藥材進行分析比較，以為八仙湯的物質(zhì)基礎(chǔ)與配伍機理研究奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 7890A-5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，包括Agilent GC-MSD工作站，HP型毛細(xì)管柱（250μm×30 m，0.25 μm）（美國Agilent Technologies公司）； KQ2200E型超聲清洗器（昆山超聲儀器公司）；BP211D 型電子分析天平（梅特勒-托利多）；ALPHAi-4LSC冷凍干燥機（德國Christ）。

1.2 材料

藥材購于重慶桐君閣大藥房，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)王光志教授鑒定為正品。其中麻黃為麻黃科植物草麻黃Ephedra sinicaStapf的干燥根和根莖，苦杏仁為薔薇科植物山杏Prunus armemacaL.var.ansu Maxim.的干燥成熟種子，陳皮為蕓香科植物橘Citrus reticulataBlanco的干燥成熟果皮，桑白皮為?？浦参锷orus albaL.的干燥根皮，茯苓為多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.) Wolf的干燥菌核，其他藥味均符合《中國藥典》2015年版一部項下要求。所用試劑均為分析純，水為三重水。

2 方法

2.1 GC-MS分析

參考文獻[1-4]，并進行了改進，確定了以下分析條件。

色譜條件：色譜柱為HP 型毛細(xì)管柱（250μm×30 m，0.25 μm）；進樣口溫度200 ℃；柱溫為程序升溫：初始溫度60 ℃，以4 ℃/min的速率升溫至150 ℃，保持3 min，再以25 ℃/min的速率升溫至200 ℃，保持10 min；分流比40:1；進樣量1μl；載氣為氦氣（純度＞ 99.99 %），流速為1.0 ml/min。分析時間：42 min。

質(zhì)譜條件：電子轟擊（EI）離子源，電離電壓70 eV，離子源溫度220 ℃，加速電壓200 eV；掃描質(zhì)量m/z35～550。

2.2 揮發(fā)油的提取

取總處方飲片180 g，置圓底燒瓶中，加入10倍量水，浸泡30 min，采用水蒸氣蒸餾法提取8 h，得到揮發(fā)油，無水Na2SO4干燥，封裝，備用，得油率為0.10 %（v/w）。同法制得麻黃、苦杏仁、陳皮、桑白皮單味藥材揮發(fā)油。

3 結(jié)果

圖1 八仙湯揮發(fā)油總離子流圖譜

圖2 麻黃揮發(fā)油總離子流圖譜

圖3 苦杏仁揮發(fā)油總離子流圖譜

圖4 陳皮揮發(fā)油總離子流圖譜

圖5 桑白皮揮發(fā)油總離子流圖譜

按上述分析條件，對各揮發(fā)油進行GC-MS分析，總離子流圖見圖1～5，以峰面積歸一化法計算各揮發(fā)油中各組分的相對含量，采用化學(xué)工作站對各質(zhì)譜圖的色譜峰進行NIST標(biāo)準(zhǔn)譜庫檢索，選擇匹配度最高的化學(xué)結(jié)構(gòu)作為最佳鑒定結(jié)果，從而確定各揮發(fā)性成分的結(jié)構(gòu)，結(jié)果見表1。

表1 八仙湯與麻黃、苦杏仁、陳皮、桑白皮揮發(fā)油的化學(xué)成分

注：“-”未檢測到

經(jīng)分析，初步指認(rèn)了70種化合物，經(jīng)面積歸一化計算占總揮發(fā)油的96.66 %，其中主要含有：苯甲醛、D-檸檬烯、γ-松油烯、α-松油醇，在八仙湯中分別占揮發(fā)油含量的43.03 %，28.35 %，2.82 %，2.25 %，其他還有烯類、烷類等物質(zhì)。八仙湯揮發(fā)油中歸屬于麻黃揮發(fā)油的化學(xué)成分有26個，如苯甲醛、D-檸檬烯、四甲基吡嗪等，歸屬于苦杏仁揮發(fā)油的化學(xué)成分有20個，如苯甲醛、D-檸檬烯、γ-松油烯、麝香草酚等，歸屬于陳皮揮發(fā)油的化學(xué)成分有25個，如(1R)-2,6,6-三甲基[3.1.1]庚-2-烯、β-月桂烯、D-檸檬烯、γ-松油烯等，歸屬于桑白皮揮發(fā)油的化學(xué)成分有3個，如苯甲醛、D-檸檬烯、十八甲基環(huán)壬硅氧烷等。

Hexana、4-亞甲基-1-（1 -甲基乙基）環(huán)己烯、氧化檸檬烯等在八仙湯揮發(fā)油中發(fā)現(xiàn)而在單味藥材中未檢測到；而單味藥材揮發(fā)性成分化學(xué)信號只有部分在八仙湯揮發(fā)油中檢測到，且在量上亦有一定的變化。由此可見，富含揮發(fā)性成分藥材在組方的煎湯過程中可能存在著一系列成分間的相互作用與轉(zhuǎn)化，其轉(zhuǎn)化過程及轉(zhuǎn)化產(chǎn)物及含不同類型揮發(fā)性成分水煎煮和蒸餾過程中在媒介中分配系數(shù)的不同、油/水兩相間飽和曲線與動態(tài)平衡的關(guān)系等改變可能導(dǎo)致復(fù)方揮發(fā)油成分的組成與量的變化，從而影響復(fù)方整體治療功效。

4 討論

本實驗采用GC-MS首次對八仙湯及其單味藥材中揮發(fā)油類成分進行了鑒定和分析，初步指認(rèn)了苯甲醛、D-檸檬烯、γ-松油烯、α-松油醇等70種成分，占揮發(fā)油總量的96.66 %。而八仙湯中其他未歸屬的揮發(fā)油，可能來自方中其他藥材，也有可能是藥材之間的相互配伍產(chǎn)生的新的揮發(fā)油成分，有待于進一步考察。主要成分苯甲醛、D-檸檬烯等具有較強的抑菌及抗癌作用，初步揭示了揮發(fā)油類的藥效作用物質(zhì)，為揭示其效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)和配伍機理奠定基礎(chǔ)，也為后期的制劑研究提供基礎(chǔ)。