老年胃癌患者缺氧誘導(dǎo)因子-1α及-2α的表達(dá)及其臨床意義

李文金，張先俊，余世界

(1湖北省第三人民醫(yī)院陽邏院區(qū)消化內(nèi)科，武漢 430415；2潛江市中心醫(yī)院消化內(nèi)科，武漢 433199；3武漢大學(xué)人民醫(yī)院消化內(nèi)科，武漢 430060)

胃癌能夠?qū)е禄颊哒w死亡率上升[1]。部分地區(qū)的流行病學(xué)研究顯示，胃癌的發(fā)病率可超過848/10萬。在具有相關(guān)高危因素的群體中，胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)可進(jìn)一步上升[2]。對于胃癌的發(fā)生機(jī)理，越來越多的研究關(guān)注到細(xì)胞因子或者腫瘤相關(guān)蛋白的改變。缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factor-1 alpha，HIF-1α)及HIF-2α的陽性表達(dá)，能夠通過誘導(dǎo)局部缺氧環(huán)境的形成，加劇癌細(xì)胞核DNA的轉(zhuǎn)錄速度，提高癌細(xì)胞的浸潤和黏附能力[3]。相關(guān)研究探討了HIF-1α和HIF-2α的表達(dá)與婦科惡性腫瘤或者肝臟惡性腫瘤的關(guān)系，認(rèn)為HIF-1α和HIF-2α的陽性表達(dá)與惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)[4]，但對二者在胃癌患者中的分析研究尚不足。本研究選取在湖北省第三人民醫(yī)院陽邏院區(qū)消化內(nèi)科接受治療的老年胃癌患者為研究對象，探討HIF-1α和HIF-2α的表達(dá)與胃癌的病情關(guān)系，報(bào)道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2017年2月至2018年3月期間在我院接受治療的老年胃癌患者100例，其中男性65例，女性35例，年齡65～84(72.4±4.2)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)≥65歲；(2)經(jīng)病理診斷確診為胃癌；(3)無其他部位原發(fā)腫瘤。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)臨床資料不全；(2)合并其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病。選取同期在我院接受胃鏡檢查的健康老年人(≥65歲)100名作為對照組，其中男性50例，女性50例，年齡65～85(72.4±5.0)歲。本項(xiàng)研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)評審?fù)ㄟ^，患者或家屬均簽署知情同意書。

1.2 方法

收集2組研究對象基本資料，并觀察2組HIF-1α和HIF-2α的表達(dá)情況。比較不同臨床病理特征胃癌患者HIF-1α和HIF-2α表達(dá)的差異，分析影響胃癌患者HIF-1α和HIF-2α表達(dá)的因素。

胃鏡下采集胃癌組患者的病灶組織，對照組取上皮良性病變組織。石蠟包埋，連續(xù)性切片厚度3 μm，60℃烤片60 min，常規(guī)脫水后，采用EDTA進(jìn)行抗原修復(fù)，加入10 μl蒸餾水，10%過氧化氫5 μl，室溫下孵育30 min，磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS)洗滌3次，3 min/次，加入HIF-1α及HIF-2α蛋白的單克隆抗體(1∶1000，購自羅氏公司)，37℃孵育60 min，PBS洗滌3次，3 min/次，加入辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)標(biāo)記的HIF-1α及HIF-2α蛋白二抗(1∶2000，購自羅氏公司)，37℃孵育20 min，PBS洗滌3次，3 min/次，加入顯色劑后，PBS沖洗和復(fù)染，脫水后在顯微鏡下進(jìn)行觀察。

HIF-1α及HIF-2α蛋白的陽性著色表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，偶可見表達(dá)于細(xì)胞核，二者的陽性表達(dá)均呈黃色、棕黃色、褐色。免疫組化結(jié)果判定可根據(jù)：(1)著色強(qiáng)度：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；(2)陽性細(xì)胞比例：≤10%為1分、11%～50%為2分、51%～75%為3分、>75%為4分。兩種積分相乘總分<3分為陰性、≥3分為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 2組研究對象一般資料比較

2組研究對象的年齡、性別等一般資料差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05；表1)。

表1 基線資料比較

BMI: body mass index.

2.2 2組研究對象HIF-1α及HIF-2α表達(dá)的比較

胃癌組患者的HIF-1α及HIF-2α陽性表達(dá)率均顯著高于對照組(P<0.001；表2)。

表2 2組研究對象HIF-1α及HIF-2α陽性表達(dá)率的比較

HIF: hypoxia inducible factor.

2.3 影響胃癌患者HIF-1α及HIF-2α表達(dá)的單因素分析

臨床分期、組織學(xué)分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況對胃癌患者HIF-1α及HIF-2α陽性表達(dá)率有顯著影響(P<0.05；表3)。

2.4 影響胃癌患者HIF-1α及HIF-2α表達(dá)的多因素logistic分析

將單因素分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的因素作為自變量，將HIF-1α及HIF-2α陽性表達(dá)作為因變量進(jìn)行多因素logistic回歸分析，結(jié)果顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和臨床分期是影響胃癌患者HIF-1α及HIF-2α陽性表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05；表4)。

3 討 論

幽門螺桿菌感染、飲食習(xí)慣或者攜帶遺傳易感基因，均能夠促進(jìn)胃癌發(fā)生[5]。老年胃癌患者的病死率可達(dá)35%以上，無瘤生存時(shí)間不足34個(gè)月[6,7]。對于胃癌患者的病情評估具有重要的意義。雖然血清糖類抗原125(carbohydrate antigen 125，CA125)或者癌胚抗原(carcino-embryonic antigen，CEA)等腫瘤相關(guān)抗原能夠在胃癌的診療過程中發(fā)揮作用，但部分單中心的臨床分析研究發(fā)現(xiàn)，二者評估胃癌病情與實(shí)際病情的一致性率較低[8]。

缺氧誘導(dǎo)因子是炎癥性誘導(dǎo)相關(guān)因子，能夠通過誘導(dǎo)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄上游啟動(dòng)子激活，提高其對于癌細(xì)胞周期調(diào)控的影響程度，促進(jìn)癌細(xì)胞核異常分裂。缺氧誘導(dǎo)因子能夠通過結(jié)合癌細(xì)胞膜表面的糖蛋白配體，促進(jìn)癌細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)通路的激活，改變癌細(xì)胞腫瘤生物學(xué)特征[9]。相關(guān)研究還認(rèn)為，缺氧誘導(dǎo)因子能夠促進(jìn)局部腫瘤新生毛細(xì)血管形成，提高腫瘤病灶組織的血流灌注程度，進(jìn)而加劇惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展[10,11]。部分研究者已經(jīng)探討了缺氧誘導(dǎo)因子表達(dá)與胃癌的關(guān)系，認(rèn)為缺氧誘導(dǎo)因子的陽性表達(dá)與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)[12]，但缺乏對于缺氧誘導(dǎo)因子表達(dá)與胃癌臨床病理特征關(guān)系的研究。

本研究結(jié)果表明，胃癌組患者的HIF-1α及HIF-2α陽性表達(dá)率均顯著高于對照組(P<0.001)，提示缺氧誘導(dǎo)因子能夠參與到胃癌的病情進(jìn)展過程，考慮與如下因素有關(guān)[13,14]。(1)HIF-1α及HIF-2α陽性表達(dá)，能夠促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡比例下降，導(dǎo)致癌細(xì)胞凋亡速度減慢；(2)HIF-1α及HIF-2α能夠激活癌細(xì)胞細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子-κB信號(hào)通路，提高癌細(xì)胞持續(xù)性自我增殖的速度。王偉宏等[15]研究認(rèn)為，在胃癌患者中， 缺氧誘導(dǎo)因子的陽性表達(dá)率可平均上升45%以上，在合并明顯腫瘤惡病質(zhì)或者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者中，缺氧誘導(dǎo)因子的陽性表達(dá)率上升更為顯著。本研究結(jié)果表明，臨床分期、組織學(xué)分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況對胃癌患者HIF-1α及HIF-2α陽性表達(dá)率有顯著影響(P<0.05)，提示缺氧誘導(dǎo)因子的表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系。這主要由于缺氧誘導(dǎo)因子的陽性表達(dá)，能夠提高癌細(xì)胞的浸潤深度，促進(jìn)癌細(xì)胞黏附淋巴結(jié)組織，進(jìn)而加劇了胃癌患者臨床病理特征進(jìn)展。但不同性別來源的患者，其缺氧誘導(dǎo)因子的表達(dá)差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)并無明顯的性別分布差別。進(jìn)一步的多因素logistic回歸分析結(jié)果表明，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和臨床分期是影響胃癌患者HIF-1α及HIF-2α陽性表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)，提示了缺氧誘導(dǎo)因子的表達(dá)與胃癌患者綜合性病情的關(guān)系。

表3 影響胃癌患者HIF-1α及HIF-2α表達(dá)的單因素分析

HIF: hypoxia inducible factor.

表4 影響胃癌患者HIF-1α及HIF-2α表達(dá)的多因素logistic分析

HIF: hypoxia inducible factor.

綜上所述，在胃癌患者中，HIF-1α及HIF-2α的陽性表達(dá)率明顯上升，同時(shí)缺氧誘導(dǎo)因子的表達(dá)與胃癌患者的臨床病理特征具有密切聯(lián)系。后續(xù)研究希望可以探討缺氧誘導(dǎo)因子的表達(dá)與胃癌患者生存預(yù)后的關(guān)系。