二麻湯對自發(fā)性高血壓大鼠血壓及血管活性物質的影響*

閆玉冰 王 磊 楊博鴻 柴欣樓

（北京中醫(yī)藥大學，北京 100000）

高血壓病是我國最常見的心血管疾病，在我國18歲以上的成年人的發(fā)病率高達25.2%［1］，嚴重影響了人們的生命財產安全，但尚未引起人們足夠的重視。在一項針對中國170萬基層人群的疾病篩查中［1］，發(fā)現(xiàn)超過81%的高血壓病患者只服用一種降壓藥物，且缺乏相應的血壓管理，尤其是在西部和農村地區(qū)。高血壓病除了可能引發(fā)的種種并發(fā)癥以外，可能還會引發(fā)精神神經癥狀。相關研究表明［2］，高血壓病的發(fā)病與慢性情緒障礙密切相關，且抑郁焦慮在高血壓人群中的發(fā)生率明顯高于非高血壓人群［3］，可見高血壓的管理和情緒調節(jié)有著極為重要的意義，而中醫(yī)藥治療情志疾病的功效不可小覷，從這個角度來講，中醫(yī)藥治療具有無可比擬的優(yōu)勢。臨床研究表明，中西藥合用，既可以發(fā)揮西藥起效快的長處，又可以通過減輕用藥量實現(xiàn)減輕副作用的目的［4］。本實驗以二麻湯為研究對象，以穩(wěn)定的高血壓大鼠病證結合動物模型［5］為基礎，以符合現(xiàn)代中醫(yī)臨床特點的病證結合診療模式為評價標準，評價二麻湯對SHR的降壓作用及初步探究其降壓的作用機理?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 選用SPF級、11周齡、雄性高血壓對照模型（WKY）大鼠10只，自發(fā)性高血壓（SHR）大鼠40只，購于北京維通利華實驗動物技術有限公司，證書號：SCXK（京）2012-0001。飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學科學實驗動物中心SPF級環(huán)境。

1.2 試藥與儀器 1）藥物。二麻湯：天麻10 g，羅布麻10 g（免煎顆粒，北京康仁堂藥業(yè)有限公司統(tǒng)一提供，生產批號：201712019）。陽性對照藥：硝苯地平緩釋片，10 mg/片（成都地奧集團藥業(yè)股份有限公司，國藥準字H10930145）。2）試劑。大鼠血管緊張素Ⅱ（ANGⅡ）ELISA試劑盒 （批號：201609014.QS41752）、 大鼠去甲腎上腺素 （NE）ELISA試劑盒 （批號：201606024.RGB-60075R）、大鼠內皮素（ET）ELISA 試劑盒（批號：201706016.QS42101）、大鼠一氧化氮（NO）ELISA 試劑盒（批號：201606024.qs41893）、大鼠降鈣素基因相關肽（CGRP）ELISA 試劑盒（批號：201606024.E02C0744）、大鼠血栓素B2（TXB2）酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒（批號：201606024.QS42057）。3）儀器：DSWY-1 型大鼠無創(chuàng)尾動脈測壓儀（成都儀器廠）；ZH-SZ型平衡旋轉儀（淮北正華生物儀器設備有限公司）；動物行為記錄分析系統(tǒng)（EthoVision 3.1，Noldus荷蘭）；Sartorius-SECURA213-1CN型電子天平 （上海速展計量儀器有限公司）；BIOBASE TG-18W型高速離心機（濟南來寶醫(yī)療器械有限公司）；全自動多功能酶標儀（MULTISKAN MK3，Thermo，USA）；MINI shaker（MH-1，kylin-Bell Lab Instruments QILINBEIER）。

1.3 實驗分組 11周齡SHR與WKY大鼠適應性喂養(yǎng)1周，12周齡測量血壓基線、采集宏觀表征和行為學試驗適應性訓練后進行證候屬性判別，均屬肝火亢盛證。隨機將40只高血壓大鼠分為4組，分別為模型組、陽性藥組、二麻湯1組、二麻湯2組；WKY大鼠10只，作為正常組。

1.4 給藥方法 高血壓大鼠14周起灌胃給藥，每日1次，連續(xù)用藥5周，低劑量灌胃相當于60 kg成人等效劑量的6倍；灌胃體積10 mL/kg，高劑量相當于低劑量的9倍；依據二麻湯（20 g/d）一日成人用量進行折算：二麻湯1組予二麻湯高劑量為6 g/（kg·d），二麻湯2組予二麻湯低劑量為0.67 g/（kg·d）。硝苯地平緩釋片生藥含量為0.002 g/（kg·d）；正常組與模型組分別灌胃等體積的去離子水10 mL。每周給大鼠稱體質量1次，并適時調整給藥劑量。

1.5 觀察指標 治療前和治療1～5周后，檢測大鼠以下指標。1）一般情況，測量大鼠體質量、收縮壓。2）血壓測量。應用DSWY-1型大鼠無創(chuàng)尾動脈測壓儀測量大鼠尾動脈收縮壓（SBP）。測量過程完全嚴格按照血壓計操作手冊規(guī)范進行。3）旋轉耐受實驗。將大鼠置于平衡旋轉儀旋轉平臺上，設置轉速為60 r/min，記錄大鼠從開始旋轉到跌下平臺的時長，若超過2 min仍不跌下，則終止測試，該只大鼠的旋轉耐受時間記錄為120 s。4）易激惹程度評分［6］。 5）理化指標：ELISA 法檢測血清中 ANGⅡ、NE、ET、NO、CGRP、TXB2 水平。

1.6 統(tǒng)計學處理 應用SPSS20.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（x±s）表示，符合正態(tài)分布且方差齊的數據比較差異性用方差分析（ANOVA）；數據不符合正態(tài)分布或方差不齊使用非參數檢驗的方法 比較組間差異，兩兩比較采用最小顯著差值法（LSD）。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 各組大鼠給藥前后易激惹程度評分比較 見表1。模型組易激惹程度明顯高于正常組（P＜0.05）；陽性藥組大鼠給藥后易激惹程度較給藥前降低（P＜0.05）；與模型組比較，二麻湯1組、二麻湯2組易激惹程度隨給藥時間的延長而降幅增大，相比較而言，二麻湯1組的易激惹程度降低幅度更大；給藥4周后，二麻湯2組易激惹程度才開始明顯減輕（P＜0.05）。

2.2 各組大鼠給藥前后體質量比較 見表2。各組隨著給藥時間的延長，體質量均有不同程度的增加，正常組大鼠的體質量最大；同一給藥時間不同組別之間的體質量比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

表1 各組大鼠給藥前后易激惹程度評分比較（分，x±s）

表2 各組大鼠給藥前后體質量比較（g，x±s）

2.3 各組大鼠給藥前后各時間段收縮壓比較 見表3。正常組和模型組的收縮壓隨周齡增長而增加；自給藥3周后起，陽性藥組、二麻湯1組、二麻湯2組與模型組比較，隨給藥時間增長均有較大程度地降壓或抑制血壓升高的作用（P＜0.01）；其中陽性藥組降壓作用優(yōu)于其他藥物干預組（P＜0.001）。二麻湯1組優(yōu)于二麻湯2組，即有量效關系。

表3 各組大鼠給藥前后各時間段收縮壓比較（mmHg，x±s）

2.4 各組大鼠給藥前后各時間段旋轉耐受時間比較見表4。隨著給藥時間增長，正常組旋轉耐受時間無明顯變化；與模型組比較，陽性藥組隨給藥時間延長旋轉耐受時間有所增加，但幅度較小且差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；與模型組比較，自給藥3周后起二麻湯1組、二麻湯2組隨給藥時間的延長旋轉耐受時間均有不同程度地增加（P＜0.05）；且二麻湯1組的旋轉耐受時間增加顯著（P＜0.01）。

表4 各組大鼠給藥前后各時間段旋轉耐受時間比較（s，x±s）

2.5 各組大鼠理化指標比較 見表5。與正常組比較，模型組血清ANGⅡ、NE、ET、TXB2的水平高于正常組（P＜0.001）；與模型組比較，陽性藥組、二麻湯1組、二麻湯2組血清ANGⅡ、NE、ET、TXB2水平均低于模型組（P＜0.05），二麻湯2組血清ANGⅡ與模型組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。與正常組比較，模型組血清CGRP的水平低于正常組（P＜0.001）；與模型組比較，陽性藥組、二麻湯1組、二麻湯2組血清CGRP濃度均有高于模型組的趨勢；其中二麻湯1組血清CGRP水平高于模型組 （P＜0.05）；二麻湯2組血清CGRP水平高于模型組但無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。與正常組比較，模型組與正常組血清NO水平，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；陽性藥組、二麻湯1組、二麻湯2組與模型組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

表 5 各組大鼠血清 ANGⅡ、NE、ET、TXB2水平比較（x±s）

3 討 論

天麻，味甘性平，歸肝經，始見于《神農本草經》，具有平肝息風、祛風止痛之功效，現(xiàn)代藥理研究表明，其具有降壓、鎮(zhèn)靜、擴血管等多種作用［7-8］，臨床應用比較廣泛；羅布麻，味甘苦性涼，歸肝經，始見于《救荒本草》，具有平抑肝陽、清熱利尿之功效，現(xiàn)代藥理研究表明羅布麻葉中降壓的有效成分主要是榭皮素、總黃酮和碳水化合物［9］，具有降壓、抗抑郁、調脂、改善眩暈、頭痛癥狀等多種作用［10-11］，近年來相關的研究日益增多。兩者藥性均較和緩，一潤一燥，陰陽共濟，同入肝經，效宏而力專，臨床上常常配伍使用，治療高血壓效果良好。截止到目前，高血壓的具體機制尚未完全闡明，很多因素參與其中，各種因子的作用亦不容忽視。ANGⅡ可直接使小動脈平滑肌收縮、外周血管阻力增加，繼而交感神經的活性增強，醛固酮分泌水平升高，從而體內存在水鈉潴留，最終導致血壓升高［12］。原發(fā)性高血壓發(fā)病與交感神經系統(tǒng)活動性增強有關，文獻報道血清中NE水平在一定程度上能定量反映交感神經系統(tǒng)的活性，NE濃度越高，說明交感神經的興奮性越強［13］，可以在一定程度上反映有無高血壓的發(fā)病趨勢；ET是目前已知的作用最強烈且效力維持時間最久的收縮血管的因子，其主要成分為活性多肽，由血管內皮細胞分泌，合成或降解過程的失衡會導致異常的血管緊張度升高，進而引起外周阻力改變，使血壓增高。ET對絕大多數種屬各異的動、靜脈和微血管的體內和離體實驗都有強烈而持久的收縮作用，其中對動脈的收縮作用更強［14］，血管的這種變化可能是長期性血壓調節(jié)的一個重要機制。NO是一種擴血管物質，主要由內皮細胞產生，能降低全身平均動脈壓，對維護血管舒張和收縮的功能，穩(wěn)定血壓改善血管彈性具有積極意義［15］。NO和ET的失調在高血壓病的全過程中都起著非常重要的作用。與ET的作用剛好相反，CGRP是目前已知的作用最強烈的內源性舒血管活性多肽，且CGRP對ET具有拮抗作用，一旦CGRP含量降低，拮抗作用就會相應減弱，ET使血管收縮，從而造成血壓升高［16］。TXA2是血小板花生四烯酸（ARA）的代謝產物，具有強烈的收縮血管和促血小板聚集作用［17］，但其生物半衰期僅30 s，迅速轉化為TXB2，因此常以其代謝產物TXB2反映其濃度。

以上實驗結果表明，天麻-羅布麻二麻湯具有顯著的降壓作用，作用機理可能與降低血清中ANGⅡ、NE、ET含量，增加血清中CGRP含量相關，且存在量效關系。各組血清NO無明顯差異，提示硝苯地平及二麻湯的降壓機制可能與改變NO的含量無關。隨著給藥時間的延長，二麻湯組大鼠旋轉耐受時間、易激惹程度評分亦有不同程度的改善，說明不僅在血壓指標上有明顯效果，在改善眩暈、易怒等癥狀的方面效果也收效良好［18］，這是一般降壓藥物所不具備的，凸顯了中藥的獨特優(yōu)勢，值得在臨床上深入研究。