江西省宜春地區(qū)雞新城疫流行情況調(diào)查

朱錢龍，張 鴻，劉 平，曾作財(cái)，堯國(guó)榮

（江西農(nóng)業(yè)工程職業(yè)學(xué)院，江西 樟樹 331200）

江西省是我國(guó)養(yǎng)雞大省之一，宜春地區(qū)為江西的養(yǎng)雞大區(qū)，其養(yǎng)殖量占整個(gè)江西養(yǎng)雞的份額較大。但其養(yǎng)殖水平相對(duì)落后，養(yǎng)殖密度過(guò)于集中，造成疾病控制的難度加大，各種呼吸道疾病有增無(wú)減，特別是像非典型新城疫（ND）［1］這樣以呼吸道癥狀為主、發(fā)病率高、死亡率低、使生產(chǎn)性能降低的疾病，其發(fā)生給養(yǎng)雞戶造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。主要對(duì)宜春地區(qū)的雞新城疫在2016年3月—2017年3月的流行情況進(jìn)行調(diào)查，以期為防控該病提供科學(xué)的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：宜春地區(qū)樟樹、豐城、高安、宜春、萬(wàn)載5個(gè)縣（市）的疑似患有ND的31個(gè)雞群，其中蛋雞群16個(gè)、肉雞群15個(gè)。SPF種蛋及非免疫雞均購(gòu)自濟(jì)南斯派福瑞禽業(yè)科技有限公司。

表1 宜春地區(qū)肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)新城疫疑似病例的調(diào)查結(jié)果

1.1.2 試驗(yàn)儀器：恒溫箱、微型振蕩器、微量加液器、離心機(jī)、96孔U型板及電冰箱、高壓蒸汽滅菌器、-80℃超低溫冰箱、9700型PCR擴(kuò)增儀、電泳儀、紫外線透視儀等。

1.1.3 主要試驗(yàn)試劑及生物制品：1%雞紅細(xì)胞懸液，為江西農(nóng)業(yè)工程職業(yè)學(xué)院牧醫(yī)實(shí)驗(yàn)室制備；禽流感（H5、H9）標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清、EDS-76標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清、雞新城疫標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清、雞新城疫標(biāo)準(zhǔn)HA抗原，均購(gòu)自哈爾濱獸醫(yī)研究所。

1.2 方法

1.2.1 流行情況調(diào)查

1.2.1.1 現(xiàn)場(chǎng)問(wèn)詢：通過(guò)走訪以上5個(gè)縣（市）的各種規(guī)模養(yǎng)雞場(chǎng)，了解雞場(chǎng)新城疫的發(fā)病情況、雞場(chǎng)對(duì)疫病的防控措施、免疫程序的制定、用藥情況等。

1.2.1.2 跟蹤調(diào)查：在走訪的過(guò)程中，若遇上發(fā)生了新城疫的雞場(chǎng)，則對(duì)其發(fā)病的情況（包括發(fā)病特征、剖檢病變、發(fā)病率、死亡率、用藥情況等）進(jìn)行全程的跟蹤。

1.2.1.3 病理變化：采用臨床癥狀與病理變化相結(jié)合的方法，對(duì)發(fā)病和死亡的雞只，進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)剖檢，觀察各臟器病理變化。在觀察病變時(shí)，重點(diǎn)觀察呼吸器官和腸道的病理變化。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)室診斷：對(duì)以上5個(gè)縣（市）31個(gè)疑似發(fā)生ND的雞場(chǎng)采樣，無(wú)菌采集到發(fā)病雞只腦、肺及脾等組織病料共214份。

1.2.2.1 病料的采集與預(yù)處理：采集的樣品加0.85%的生理鹽水研磨制成10倍的組織勻漿，每毫升加入青、鏈霉素各1 000 IU，作用24 h后5 000 r/min離心20min，取上清液通過(guò)0.22 μm細(xì)菌濾器濾過(guò)除菌，濾液置于－20℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2.2 病毒的分離：取上述制備好的病料液，接種至9日齡SPF雞胚的尿囊腔內(nèi)，每個(gè)雞胚接種0.1 mL，每個(gè)樣品接種3枚雞胚，于37.5℃的恒溫箱內(nèi)孵育，每天照蛋2次，棄去24 h內(nèi)死亡的雞胚［2］。將24 h后死亡的雞胚取出立即放入冰箱內(nèi)，持續(xù)觀察4 d，將4 d后死亡及沒有死亡的雞胚均放入冰箱內(nèi)。待最后1枚雞胚放入冰箱4 h后，取出所有的雞胚無(wú)菌收集尿囊液。

1.2.2.3 血清學(xué)試驗(yàn)：參照GB/T 16550—2008《新城疫診斷技術(shù)》的標(biāo)準(zhǔn)，將上述采集的雞胚尿囊液用96孔U型板先進(jìn)行血凝試驗(yàn)（HA），對(duì)于能凝集雞的紅細(xì)胞的尿囊液，再進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)（HI）。對(duì)無(wú)血凝現(xiàn)象的樣品則盲傳3代，如仍無(wú)血凝現(xiàn)象出現(xiàn)則判斷該樣品為新城疫病毒陰性樣品。

1.2.2.4 禽流感、EDS-76陽(yáng)性血清中和試驗(yàn)：將以上HA及HI試驗(yàn)初步判定為ND陽(yáng)性的樣品再用禽流感、EDS-76標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清進(jìn)行中和試驗(yàn)。結(jié)果判定：如果新城疫標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清能抑制待檢雞胚尿囊液對(duì)雞紅細(xì)胞的凝集，且不被禽流感、EDS-76標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清所中和，則說(shuō)明尿囊液中含有新城疫病毒（即該樣品中含有新城疫病毒）。

表2 宜春地區(qū)蛋雞養(yǎng)殖戶新城疫疑似病例的調(diào)查結(jié)果

1.2.2.5 新城疫病毒分離株的毒力測(cè)定：參照GB/T 16550—2008《新城疫診斷技術(shù)》的標(biāo)準(zhǔn)，將以上經(jīng)檢測(cè)為NDV的雞胚尿囊液進(jìn)行最小致死量致死雞胚平均死亡時(shí)間 （MDT）、1日齡雛雞腦內(nèi)接種致病指數(shù)（ICPI）和6周齡雞靜脈接種致病指數(shù)（IVPI）3個(gè)指標(biāo)的試驗(yàn)并計(jì)算相應(yīng)的結(jié)果。

1.2.2.6 新城疫病毒分離株的攻毒試驗(yàn)：將330只30日齡非免疫雞隨機(jī)分為22組，每組15只，其中21組為試驗(yàn)組，1組為對(duì)照組。采用含有經(jīng)以上試驗(yàn)判定為強(qiáng)毒的NDV分離株的雞胚尿囊液10倍稀釋后每羽肌注0.1 mL進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，每天注意觀察3次，連續(xù)觀察15 d，并記錄各雞只的發(fā)病情況及發(fā)病后的死亡率。攻毒試驗(yàn)在隔離舍內(nèi)進(jìn)行。

2 結(jié)果及分析

2.1 宜春地區(qū)養(yǎng)雞戶新城疫疑似病例調(diào)查結(jié)果

宜春地區(qū)養(yǎng)雞戶的新城疫疑似病例調(diào)查結(jié)果見表1及表2。從表1可以看出，宜春地區(qū)肉雞新城疫的發(fā)病率為20.1%～29.5%，死亡率為9.0%～24.9%；發(fā)病的季節(jié)主要在冬季（9/15），其次為春季（4/15），夏、秋季節(jié)發(fā)病最少（2/15）；發(fā)病日齡為8～83日齡。

從表2可以看出，宜春地區(qū)蛋雞的發(fā)病率為20.1%～30.8%，死亡率為9.2%～25.4%，產(chǎn)蛋下降率為15.3%～38.8%，發(fā)病的季節(jié)主要也在冬季（7/16），其次為春季（4/16），夏季（3/16），秋季發(fā)病最少（2/16）；發(fā)病日齡在182～324日齡。

通過(guò)以上的調(diào)查結(jié)果可以看出，宜春地區(qū)雞新城疫發(fā)生頻率最高的季節(jié)為冬季（16/31），其次為春季（8/31），夏、秋季節(jié)（7/31）雞新城疫發(fā)生頻率相對(duì)更低些。發(fā)病雞只的日齡無(wú)差異性，各階段的雞只均可發(fā)生；雞群整體發(fā)病率為20.1%～30.8%，死亡率為9.0%～25.4%，產(chǎn)蛋下降率為15.3%～38.8%。

2.2 雞新城疫病毒分離鑒定結(jié)果

在31個(gè)疑似發(fā)生新城疫雞場(chǎng)的214份病料中，共分離出27株具有血凝性的病毒，其中有2株對(duì)雞紅細(xì)胞的凝集不能被新城疫陽(yáng)性血清抑制，另有2株可被禽流感H9陽(yáng)性血清所抑制，以上毒株的血凝現(xiàn)象均不被EDS-76陽(yáng)性血清所抑制，結(jié)果見表3。

表3 27株血凝性病毒HI試驗(yàn)結(jié)果 株

2.3 雞新城疫病毒毒力測(cè)定結(jié)果

參照GB/T 16550—2008《新城疫診斷技術(shù)》的標(biāo)準(zhǔn)及國(guó)內(nèi)較公認(rèn)的毒力分類標(biāo)準(zhǔn) （見表4），以上23株被鑒定為NDV毒株中，除了2株毒力（ZS-06和GA-02）不能確定之外，其余21株均為NDV強(qiáng)毒株（見表5）。

表4 雞新城疫毒力測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)

表5 雞新城疫病毒分離株毒力測(cè)定結(jié)果

2.4 雞新城疫病毒強(qiáng)毒株攻毒試驗(yàn)結(jié)果

將以上21株已鑒定為強(qiáng)毒的NDV用30日齡非免疫雞進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果見表6。由表6可看出，各試驗(yàn)組均有發(fā)病，對(duì)照組均健康無(wú)病，發(fā)病率為80%～100%，死亡率為60%～100%，且發(fā)病雞只均出現(xiàn)雞新城疫感染的典型癥狀及病變。

3 討論

宜春地區(qū)養(yǎng)雞場(chǎng)存在著較嚴(yán)重的新城疫病毒感染，且大部分雞場(chǎng)存在著強(qiáng)毒感染。但由于在發(fā)病前幾乎所有的雞場(chǎng)都進(jìn)行了雞新城疫的免疫，以急性暴發(fā)出現(xiàn)的新城疫較少見，新城疫在大部分雞場(chǎng)以非典型性的方式出現(xiàn)。據(jù)梁華麗等［3］分析，非典型性新城疫出現(xiàn)的原因可能是由于免疫不當(dāng)，而導(dǎo)致其抗體水平高低不一，當(dāng)自然野毒進(jìn)入后，會(huì)在新城疫抗體水平低下的雞體內(nèi)迅速增殖而引起發(fā)病。這也導(dǎo)致了很多雞場(chǎng)技術(shù)人員對(duì)該病做出誤診［4］，結(jié)果錯(cuò)過(guò)了最佳的治療時(shí)間，使疾病得不到及時(shí)的控制。

新城疫的傳播途徑較廣泛，除了發(fā)病的雞群排毒外，飼養(yǎng)人員及其他禽類的流動(dòng)、被污染的設(shè)備和飼料、其他帶毒動(dòng)物或昆蟲、雞舍內(nèi)被污染的空氣等都可傳播該病。特別是不良的環(huán)境衛(wèi)生條件是引發(fā)新城疫的一個(gè)重要因素。許多養(yǎng)殖戶嫌麻煩，在一批雞上市后，只對(duì)雞舍及周圍環(huán)境做簡(jiǎn)單的打掃或噴灑消毒，而不愿去徹底消毒（有些養(yǎng)殖戶根本沒有徹底消毒的概念）［5］。結(jié)果致使環(huán)境中的新城疫病毒沒有被徹底殺滅，在下一批雞進(jìn)入雞舍后，就有可能發(fā)病。據(jù)楊芬俠等［6］分析，若環(huán)境被污染后，新城疫病毒的數(shù)量過(guò)多，往往會(huì)突破雞群的免疫力而引起輕重不一的發(fā)病癥狀。

易感性高的雞不斷增多也可能是宜春地區(qū)近期新城疫流行的一個(gè)重要因素。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，各養(yǎng)雞戶對(duì)雞只的管理較粗放，且在調(diào)查期間氣溫變化較大，養(yǎng)殖戶沒有及時(shí)做好防寒及防暑工作（筆者在調(diào)查過(guò)程中發(fā)現(xiàn)很多雞舍均無(wú)防寒保暖及防暑降溫的相應(yīng)設(shè)施），致使雞只易發(fā)生中暑或感冒等疾病，必然導(dǎo)致雞體的抵抗力下降，若此時(shí)環(huán)境中存在新城疫病毒，則雞只必然會(huì)因感染新城疫病毒而發(fā)病。同時(shí)在被調(diào)查的雞場(chǎng)還發(fā)現(xiàn)有些養(yǎng)殖戶為了節(jié)省成本，采用自配的飼料喂雞，但其飼料配方中一些必需的維生素、微量元素及蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與需要量相差較大，造成了營(yíng)養(yǎng)不良［7］，因此也增加了雞群對(duì)新城疫的易感性。

表6 雞新城疫病毒分離強(qiáng)毒株攻毒試驗(yàn)結(jié)果