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    雞新城疫病毒抗原制備參數(shù)優(yōu)化相關(guān)性研究

    2015-11-23 09:18:30趙英娜楊平賈紅梅陳申秒
    山東畜牧獸醫(yī) 2015年7期
    關(guān)鍵詞:尿囊液量血凝

    趙英娜 楊平 賈紅梅 陳申秒

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    雞新城疫病毒抗原制備參數(shù)優(yōu)化相關(guān)性研究

    趙英娜 楊平 賈紅梅 陳申秒

    (山東濱州沃華生物工程有限公司 256606)

    本試驗(yàn)主要以NDV弱毒株為試驗(yàn)對(duì)象探討了幾種培養(yǎng)因素對(duì)雞胚尿囊液收量和血凝效價(jià)的影響。試驗(yàn)選擇 9、10、11 日齡非免疫雞胚以3個(gè)接種劑量分別接種NDV Lasota株病毒液于雞胚尿囊腔中。結(jié)果表明,選用10日齡雞胚接種劑量為0.1ml/枚時(shí)獲得尿囊液量和血凝效價(jià)為最高。

    新城疫病毒 雞胚尿囊液 接種劑量 血凝效價(jià)

    新城疫(Newcastle disease, ND)是威脅養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的一種重要傳染病,給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失,OIE將其與高致病性禽流感一起列為危害養(yǎng)禽業(yè)必須報(bào)告的疫病,該病在我國時(shí)有發(fā)生。同時(shí)NDV也是誘導(dǎo)全血產(chǎn)生細(xì)胞因子的重要誘導(dǎo)劑如NDV誘導(dǎo)生產(chǎn)血源性干擾素[1, 2,3]。近年來,在生產(chǎn)上出現(xiàn)了高致病性的強(qiáng)毒株,甚至超強(qiáng)毒株,一旦發(fā)生,難于控制,往往出現(xiàn)極高的死亡率,給養(yǎng)雞業(yè)帶來毀滅性的打擊。防制本病的有效方法是對(duì)雞群進(jìn)行免疫接種,常用的疫苗有弱毒疫苗和滅活疫苗。隨著毒株毒力的加強(qiáng),常常要結(jié)合ND油乳劑滅活苗接種才能取得較好的效果而在滅活苗的生產(chǎn)中,目前仍主要采用雞胚作為病毒的繁殖載體。因此,獲得高效價(jià)的病毒液(尿囊液)是制苗的關(guān)鍵。試驗(yàn)對(duì)如何獲得高效價(jià)的尿囊液,確定接種時(shí)種毒的最佳濃度及雞胚尿囊液的最佳收集時(shí)間進(jìn)行探討。通過對(duì)不同日齡的雞胚接種不同劑量的NDV,觀察其對(duì)雞胚尿囊液量及血凝效價(jià)的影響,評(píng)價(jià)最佳種毒接種日齡、接種劑量及其實(shí)用性,旨在為ND油乳劑滅活苗的規(guī)?;a(chǎn)提供科學(xué)的依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    (1)非免疫雞胚,由濟(jì)南、德州等地種雞場(chǎng)提供;(2)新城疫Lasota病毒株,由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供;(3)電熱恒溫培養(yǎng)箱SKP—02.600,購自黃石市恒豐醫(yī)療器械有限公司;(4)移液器QY-100ml,購自北京青云卓立精密設(shè)備有限公司;(5)1%雞紅細(xì)胞懸液,0.01mol /L PBS液(pH值7.4)等按常規(guī)方法配制。

    1.2 方法

    1.2.1 雞胚的孵化 取非免疫種蛋180枚,隨機(jī)分為9組,每組20枚,放置同一培養(yǎng)箱孵化,孵化溫度37.0℃,相對(duì)濕度51%~55%,每隔2h翻蛋1次。5d頭照檢出無精蛋和死精蛋;9d起每6h照蛋1次,檢出死胚,24h內(nèi)死亡的剔除。

    1.2.2 接種 用NDV -Lasota株分別尿囊腔接種9日齡(I組)10日齡(II組)11日齡(Ⅲ組)雞胚,接種劑量分別為:I--1組、II--1組、Ⅲ--1組0.10ml/枚,I--2組、II--2組、Ⅲ--2組0.15ml/枚,I--3組、II--3組、Ⅲ--3組0.20ml/枚。

    1.2.3 檢測(cè)方法 接種后96~120h放4℃冰箱過夜,次日收獲。吸出尿囊液置50ml量筒中分別量取每個(gè)雞胚中的尿囊液量。用血液凝集試驗(yàn)(HA)分別測(cè)每組雞胚尿囊液中新城疫病毒的平均效價(jià)。

    2 結(jié)果

    2.1 尿囊液量與接種劑量的關(guān)系

    9、10、11日齡雞胚分別按3個(gè)不同劑量接種NDV后,各組雞胚產(chǎn)生的尿囊液量的差異(見附表)。

    附表 雞胚接種不同劑量NDV對(duì)雞胚尿囊液的影響(ml/枚、log2)

    項(xiàng)目9日齡10日齡11日齡 I-1I-2I-3II-1II-2II-3III-1III-2III-3 接種劑量0.100.150.200.100.150.200.100.150.20 尿囊液收量13.5413.4413.4313.7313.6313.5913.6713.6413.61 平均HA效價(jià)212212212212212212211211211

    由附表可以得出,接種0.1ml/枚的收量顯著高于0.2ml/枚的,而接種0.15ml/枚的和0.2ml/枚的則無顯著差異。從生成的尿囊液量多少來看,接種0.1ml/枚的所得尿囊液量最多,0.15ml/枚的次之,0.2ml/枚的最少。

    2.2 尿囊液量與接種日齡的關(guān)系

    表1~3表明,不同接種日齡所取得的尿囊液量有顯著差異,在10、11日齡組中,所取得的尿囊液量顯著高于9日齡所取得的尿囊液量,其平均值分別為13.47ml/枚、13.65ml/枚、13.64ml/枚,10、11日齡之間無顯著差異。

    2.3 尿囊液血凝效價(jià)與接種劑量、接種日齡的關(guān)系

    從試驗(yàn)結(jié)果可知,9日齡與10日齡接種組的平均效價(jià)無明顯差異,但高于11日齡組的HA效價(jià),尿囊液血凝效價(jià)與接種劑量關(guān)系不大。

    3 討論

    (1)試驗(yàn)結(jié)果表明,接種劑量對(duì)雞胚尿囊液量有顯著影響,接種劑量增大,則尿囊液量逐漸減少;接種劑量對(duì)雞胚尿囊液的效價(jià)影響不大;接種日齡對(duì)雞胚尿囊液量有顯著影響。(2)NDV接種后的血凝效價(jià)受到很多因素的影響,如雞胚種源差異、孵化技術(shù)﹑培養(yǎng)溫度、接種劑量、接種日齡、種毒稀釋倍數(shù)等,而NDV血凝效價(jià)易受接種病毒量的影響,因此,NDV接種量、培養(yǎng)溫度以及接種胚齡的選擇是獲得NDV高收量和高效價(jià)的關(guān)鍵。本試驗(yàn)結(jié)果表明選擇10日齡接種,接種劑量為0.1ml/枚的Ⅱ-1組為最佳接種組,可獲得多量高效價(jià)的尿囊液。(3)雞胚接種受環(huán)境影響較嚴(yán)重,因此接種操作應(yīng)嚴(yán)格按照有關(guān)規(guī)定,采用無菌操作,接種雞胚時(shí)應(yīng)避開胚體和血管,以免影響胚體發(fā)育,使病毒增殖速度減緩或停止,從而減少尿囊液的收集量。(4)不同病毒的增殖有不同的接種途徑,同一種病毒接種不同日齡雞胚所獲得的病毒量也不同。在實(shí)際生產(chǎn)中,應(yīng)根據(jù)不同病毒培養(yǎng)所需要的時(shí)間選擇恰當(dāng)?shù)慕臃N日齡和接種劑量以獲得最高的病毒液量。

    [1] 王興龍, 金寧一, 丁壯. 新城疫病毒F基因在新型桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)及重組病毒的免疫原性[J]. 中國獸醫(yī)學(xué)報(bào),2001, 21 (6): 533-535.

    [2] 鄺榮祿, 禽病學(xué)[M], 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2003.

    [3] 周杰等. 種毒接種劑量與雞胚尿囊液量的相關(guān)性研究[J].中國家禽, 1999, 21(12): 6-7.

    [4] Schsper U M,Full FJ,Ward M DW, et al Virology, 1998, 165: 291-295.

    [5] 曹殿軍, 李祥瑞, 盧景良等. 新城疫病毒的遺傳變異[J]. 國外獸醫(yī)學(xué)-畜禽傳染病, 2005, 12(2): 8-10.

    [6] 王興龍等. 新城疫病毒(青島株)F蛋白基因的克隆和序列分析[J]. 中國獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2004, 19(2): 109-113.

    [7] 魏建忠等. 新城疫含硒油佐劑疫苗增強(qiáng)肉雞免疫效果的研究[J]. 中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 1995(2).

    (2015–03–17)

    S852.65+9

    A

    1007-1733(2015)07-0006-02

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