KLF5在脫氧膽酸誘導(dǎo)胃黏膜腸上皮化生中的作用*

孫杰，付立芳

（1.山東醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校 中醫(yī)學(xué)教研室 山東 臨沂 276000；2.山東省臨沂市中醫(yī)醫(yī)院 呼吸內(nèi)科，山東 臨沂 276002）

胃癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)漸進(jìn)過(guò)程，從正常胃黏膜、腸上皮化生、異型增生向胃癌的發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程中有多種基因的參與[1]。含有膽汁酸的胃十二指腸反流引起的胃黏膜慢性炎癥，進(jìn)而發(fā)生胃黏膜腸上皮化生[2]。目前有研究表明，Krüppel樣因子5（Krüppellike factor 5,KLF5）在慢性胃炎和腸上皮化生的表達(dá)與正常對(duì)照組相比，呈上升趨勢(shì)[3-4]。因此，本文通過(guò)脫氧膽酸（deoxycholic acid,DCA）誘導(dǎo)胃黏膜上皮細(xì)胞，探究KLF5是否參與DCA誘導(dǎo)的腸上皮化生的發(fā)生及其可能的作用機(jī)制。

1　材料與方法

1.1　材料與試劑

胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1（中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)）。選取山東省臨沂市中醫(yī)醫(yī)院2012～2015年的56例胃黏膜標(biāo)本，其中30例正常胃黏膜，26例腸上皮化生。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并與患者簽署知情同意書(shū)。鼠抗KLF5、TFF2、VIL1、CDX2、Wnt3a、β-catenin、多克隆抗體、β-actin鼠抗單克隆抗體、羊抗鼠二抗（HRP）購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，MTT、二甲基亞砜、二喹啉甲酸（bicinchoninic acid,BCA）試劑盒、Annexin V-FITC/PI凋亡試劑盒購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司，流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司）。

1.2　方法

1.2.1正常胃黏膜和腸上皮化生組織的選取正常胃黏膜30例，其中，男性13例，女性17例；腸上皮化生26例，其中，男性16例，女性10例。以上組織均置于-80℃中保存，用于提取蛋白和mRNA。

1.2.2胃黏膜上皮細(xì)胞的培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染GES-1細(xì)胞在含10%胎牛血清、100μ/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)，置于37℃、5%二氧化碳CO2孵箱中生長(zhǎng)。將細(xì)胞分為兩組，應(yīng)用1 mol/L氯化氫調(diào)定培養(yǎng)基pH值至7.2，采用不同濃度（100、200和500μmol/L）的DCA處理細(xì)胞12 h，置于37℃、5% CO2孵箱中孵育?？瞻讓?duì)照組為不含DCA的RPMI 1640培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)12 h。

1.2.3細(xì)胞轉(zhuǎn)染將GES-1細(xì)胞分為空白對(duì)照組、DCA組、陰性對(duì)照組及KLF5沉默組。細(xì)胞長(zhǎng)至50%～60%密度時(shí)，分別將KLF5 siRNA和陰性序列對(duì)照按50 nmol/L濃度轉(zhuǎn)染GES-1細(xì)胞，24 h后更換為不含雙抗的RPMI 1640培養(yǎng)液，并加入500μmol/L DCA或者溶劑對(duì)照（Veh）處理細(xì)胞，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h，觀察細(xì)胞感染情況。用Western blot檢測(cè)驗(yàn)證KLF5沉默的效率。

1.2.4MTT法MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖。按分組收集轉(zhuǎn)染48 h后的GES-1細(xì)胞，磷酸鹽緩沖溶液（phosphate buffer saline,PBS）清洗后加入MTT，37℃溫育4 h，加入二甲基亞砜150μl/孔，將培養(yǎng)板置于微孔板振蕩器上振蕩10 min，使結(jié)晶物溶解，用酶標(biāo)儀在570 nm處測(cè)吸光度值。

1.2.5流式細(xì)胞術(shù)按分組收集轉(zhuǎn)染48 h后的GES-1細(xì)胞，PBS清洗，參照Annexin V-FITC/PI凋亡檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)，在流式細(xì)胞儀上檢測(cè)細(xì)胞凋亡。

1.2.6Western blot檢測(cè)分別取正常胃黏膜、腸上皮化生組織，以及DCA處理GES-1細(xì)胞樣品，提取總蛋白。采用BCA法測(cè)定蛋白濃度，十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳、轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉封閉，4℃條件下用抗KLF5、Wnt3a和β-actin（均為1∶300）的一抗孵育過(guò)夜，PBST洗膜3次，二抗室溫孵育1 h，PBST洗膜3次，最后用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法發(fā)光液在暗室曝光并壓片。將GES-1細(xì)胞分為空白對(duì)照組、DCA組、陰性對(duì)照組及KLF5沉默組，按分組收集轉(zhuǎn)染48 h后的GES-1細(xì)胞，按照上述方法檢測(cè)TFF2、VIL1和CDX2蛋白的表達(dá)。將GES-1細(xì)胞分為空白對(duì)照組、DCA組、陰性對(duì)照組、KLF5沉默組、氯化鋰LiCl（Wnt通路激活劑）組及LiCl+KLF5沉默組，按分組收集轉(zhuǎn)染48 h后的GES-1細(xì)胞，按照上述方法檢測(cè)Wnt3a、β-catenin和CDX2蛋白的表達(dá)。

1.2.7實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）分別取正常胃黏膜、腸上皮化生組織，以及DCA處理GES-1細(xì)胞樣品。采用Trizol法分別提取總RNA，并檢測(cè)其純度及完整性。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)生成cDNA，擴(kuò)增cDNA，基因擴(kuò)增成功后，采用2-△△Ct法，對(duì)KLF5和Wnt3a的含量進(jìn)行分析。將GES-1細(xì)胞分為空白對(duì)照組、DCA組、陰性對(duì)照組及KLF5沉默組，按分組收集轉(zhuǎn)染48 h后的GES-1細(xì)胞，按照上述方法檢測(cè)TFF2、VIL1和CDX2 mRNA的表達(dá)。將GES-1細(xì)胞分為空白對(duì)照組、DCA組、陰性對(duì)照組、KLF5沉默組、LiCl組及LiCl+KLF5沉默組，按分組收集轉(zhuǎn)染48 h后的GES-1細(xì)胞，按照上述方法檢測(cè)Wnt3a、β-catenin和CDX2 mRNA的表達(dá)。

1.3　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較用t檢驗(yàn)或單因素方差分析，兩兩比較用SNK-q檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1　KLF5和Wnt3a在腸上皮化生組織中異常表達(dá)

2.1.1KLF5和Wnt3a蛋白腸上皮化生組織中KLF5和Wnt3a蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為（2.37±0.06）和（2.32±0.07）；正常胃黏膜中KLF5和Wnt3a蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為（1.02±0.08）和（1.00±0.07）。兩組KLF5和Wnt3a蛋白表達(dá)水平比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=80.350和98.002，均P=0.000），腸上皮化生組織中KLF5和Wnt3a蛋白表達(dá)升高。見(jiàn)圖1。

圖1　正常胃黏膜和腸上皮化生組織中KLF5、Wnt3a蛋白的表達(dá)（±s）

2.1.2KLF5和Wnt3a mRNA腸上皮化生組織中KLF5和Wnt3a mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為（2.14±0.06）和（2.22±0.07）；正常胃黏膜中KLF5和Wnt3a mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為（1.00±0.06）和（1.00±0.08）。兩組KLF5和Wnt3a mRNA表達(dá)水平比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=70.910和70.817，均P=0.000），腸上皮化生組織中KLF5和Wnt3a mRNA表達(dá)升高。見(jiàn)圖2。

圖2　正常胃黏膜和腸上皮化生組織中KLF5和Wnt3a mRNA表達(dá)水平比較（±s）

2.2　DCA誘導(dǎo)GES-1細(xì)胞中KLF5和Wnt3a的表達(dá)

2.2.1KLF5和Wnt3a蛋白100、200和500μmol/L DCA組，以及空白對(duì)照組的KLF5蛋白相對(duì)表達(dá)量分別 為（1.26±0.07）、（1.63±0.06）、（2.47±0.06） 和（1.00±0.06）；100、200和 500μmol/L DCA 組，以及空白對(duì)照組的Wnt3a蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為（1.20±0.07）、（1.59±0.09）、（2.34±0.08）和（1.00±0.07）。各組細(xì)胞中KLF5和Wnt3a蛋白表達(dá)水平比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=268.043和143.273，均P=0.000），隨著DCA濃度增加，GES-1細(xì)胞中KLF5和Wnt3a的表達(dá)水平逐漸升高。見(jiàn)圖3。

2.2.2KLF5和 Wnt3a mRNA100、200和 500μmol/L DCA組，以及空白對(duì)照組的KLF5 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為（1.24±0.08）、（1.74±0.06）、（2.21±0.06）和（1.00±0.05）；100、200 和 500μmol/L DCA 組，以及空白對(duì)照組的Wnt3a mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為（1.20±0.05）、（1.73±0.08）、（2.28±0.07）和（1.00±0.06）。各組細(xì)胞中KLF5和Wnt3a mRNA表達(dá)水平比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=179.614和209.881，均P=0.000），KLF5和Wnt3a mRNA表達(dá)水平呈劑量依賴效應(yīng)。KLF5和Wnt通路可能在胃黏膜腸上皮化生中發(fā)揮重要作用。見(jiàn)圖4。

圖3　不同濃度DCA對(duì)GES-1細(xì)胞中KLF5和Wnt3a蛋白表達(dá)的影響（±s）

圖4　不同濃度DCA對(duì)GES-1細(xì)胞中KLF5和Wnt3a mRNA 表達(dá)的影響（±s）

2.3　KLF5沉默抑制DCA誘導(dǎo)的GES-1細(xì)胞增殖并促進(jìn)凋亡

2.3.1KLF5蛋白空白對(duì)照組、DCA組、陰性對(duì)照組、KLF5沉默組的KLF5蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為（1.00±0.06）、（2.45±0.08）、（2.36±0.06）和（0.11±0.06），經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=822.422，P=0.000），si-KLF5轉(zhuǎn)染后，細(xì)胞中KLF5蛋白表達(dá)降低。見(jiàn)圖5。

圖5　各組GES-1細(xì)胞中KLF5蛋白的表達(dá)（±s）

2.3.2增殖率空白對(duì)照組、DCA組、陰性對(duì)照組、KLF5沉默組GES-1細(xì)胞增殖率分別為（100.00±3.46）%、（125.00±3.60）%、（123.00±3.60）% 和（102.00±4.58）%，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=36.136，P=0.000），DCA促進(jìn)GES-1細(xì)胞增殖，而將KLF5沉默后，DCA的促增殖作用被抑制。見(jiàn)圖6。

圖6　各組GES-1細(xì)胞增殖率比較（±s）

2.3.3凋亡率空白對(duì)照組、DCA組、陰性對(duì)照組、KLF5沉默組GES-1細(xì)胞凋亡率分別為（18.70±0.72）%、（10.30±0.70）%、（9.80±0.79）%和（17.80±0.79）%，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=119.419，P=0.000），DCA 抑制GES-1細(xì)胞凋亡，而KLF5沉默后，DCA的抑制凋亡作用被抑制。DCA可能通過(guò)KLF5影響GES-1細(xì)胞的增殖和凋亡。見(jiàn)圖 7、8。

圖7　各組GES-1細(xì)胞凋亡情況

圖8　各組GES-1細(xì)胞凋亡率比較（±s）

2.4　KLF5沉默抑制DCA誘導(dǎo)的GES-1細(xì)胞腸上皮化生

2.4.1TFF2、VIL1和CDX2蛋白空白對(duì)照組、DCA組、陰性對(duì)照組、KLF5沉默組的TFF2蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為（1.00±0.05）、（2.46±0.08）、（2.38±0.09）和（1.09±0.08），經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=301.250，P=0.000）；空白對(duì)照組、DCA組、陰性對(duì)照組、KLF5沉默組的VIL1蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為（1.00±0.05）、（2.39±0.09）、（2.37±0.07）和（1.11±0.05），經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=385.109，P=0.000）；空白對(duì)照組、DCA組、陰性對(duì)照組、KLF5沉默組的CDX2蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為（1.00±0.06）、（2.52±0.08）、（2.51±0.09）和（1.02±0.05），經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=413.707，P=0.000）。DCA升高TFF2、VIL1和CDX2蛋白表達(dá)水平，而KLF5沉默后DCA的作用被抑制。見(jiàn)圖9。

2.4.2TFF2、VIL1和CDX2 mRNA空白對(duì)照組、DCA組、陰性對(duì)照組、KLF5沉默組的TFF2 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為（1.00±0.05）、（2.35±0.05）、（2.37±0.06）和（1.11±0.08），經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=418.568，P=0.000）；空白對(duì)照組、DCA組、陰性對(duì)照組、KLF5沉默組的VIL1 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為（1.02±0.03）、（2.32±0.05）、（2.29±0.05）和（1.10±0.07），經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（531.171，P=0.000）；空白對(duì)照組、DCA組、陰性對(duì)照組、KLF5沉默組的CDX2 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為（1.00±0.04）、（2.41±0.08）、（2.43±0.05）和（1.05±0.08），經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=452.901，P=0.000）。DCA 升 高 TFF2、VIL1和CDX2 mRNA表達(dá)水平，而KLF5沉默后DCA的作用被抑制。DCA可能通過(guò)KLF5誘導(dǎo)胃黏膜腸上皮化生。見(jiàn)圖10。

圖9　各組GES-1細(xì)胞中TFF2、VIL1和CDX2 蛋白的表達(dá)（±s）

圖10　各組GES-1細(xì)胞中TFF2、VIL1和CDX2 mRNA表達(dá)水平比較（±s）

2.5　KLF5促進(jìn)DCA誘導(dǎo)的GES-1細(xì)胞腸上皮化生

2.5.1Wnt3a、β-catenin和CDX2蛋白空白對(duì)照組、DCA組、陰性對(duì)照組、KLF5沉默組、LiCl組及LiCl+KLF5沉默組的Wnt3a蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為（1.01±0.06）、（2.38±0.06）、（2.26±0.05）、（1.02±0.05）、（2.36±0.08） 和（2.32±0.08）， 經(jīng) 方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=320.400，P=0.000）；空白對(duì)照組、DCA組、陰性對(duì)照組、KLF5沉默組、LiCl組及LiCl+KLF5沉默組的β-catenin蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為（0.98±0.06）、（2.32±0.07）、（2.31±0.07）、（1.08±0.07）、（2.33±0.08） 和（2.40±0.07）， 經(jīng) 方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=266.022，P=0.000）；空白對(duì)照組、DCA組、陰性對(duì)照組、KLF5沉默組、LiCl組及LiCl+KLF5沉默組的CDX2蛋白相對(duì)表達(dá)量分 別 為（1.02±0.06）、（2.48±0.06）、（2.34±0.08）、（1.02±0.08）、（2.37±0.05） 和（2.38±0.06）， 經(jīng) 方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=312.093，P=0.000）。DCA激活Wnt通路Wnt3a、β-catenin，以及腸上皮化生標(biāo)志蛋白CDX2蛋白的表達(dá)，將KLF5沉默后，Wnt通路蛋白和腸上皮化生標(biāo)志蛋白表達(dá)下降，而Wnt激活劑則使抵消了si-KLF5的作用，激活Wnt通路并升高CDX2的表達(dá)。見(jiàn)圖11。

圖11　Wnt激動(dòng)劑對(duì)si-KLF5調(diào)節(jié)GES-1細(xì)胞中Wnt3a、β-catenin和CDX2蛋白表達(dá)的影響（±s）

2.5.2Wnt3a、β-catenin 和 CDX2 mRNA空白對(duì)照組、DCA組、陰性對(duì)照組、KLF5沉默組、LiCl組及LiCl+KLF5沉默組的Wnt3a mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為（1.00±0.06）、（2.32±0.07）、（2.28±0.06）、（1.09±0.06）、（2.26±0.06）和（2.23±0.06），經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=310.259，P=0.000）；空白對(duì)照組、DCA組、陰性對(duì)照組、KLF5沉默組、LiCl組及LiCl+KLF5沉默組的β-catenin mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為（1.00±0.05）、（2.29±0.06）、（2.25±0.08）、（1.11±0.09）、（2.21±0.08）和（2.20±0.08），經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=190.732，P=0.000）；空白對(duì)照組、DCA組、陰性對(duì)照組、KLF5沉默組、LiCl組及LiCl+KLF5沉默組的CDX2 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為（1.00±0.03）、（2.31±0.06）、（2.26±0.06）、（1.05±0.04）、（2.27±0.06）和（2.25±0.06），經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=400.107，P=0.000）。DCA激活Wnt通路Wnt3a、β-catenin，以及CDX2 mRNA的表達(dá)，將KLF5沉默后，Wnt3a、β-catenin和CDX2 mRNA表達(dá)下降，而Wnt激活劑則使抵消了si-KLF5的作用，激活Wnt通路并升高CDX2 mRNA的表達(dá)。KLF5可能通過(guò)激活Wnt/β-catenin通路促進(jìn)DCA誘導(dǎo)的胃黏膜腸上皮化生。見(jiàn)圖12。

圖12　Wnt激動(dòng)劑對(duì)si-KLF5調(diào)節(jié)GES-1細(xì)胞中Wnt3a、β-catenin和CDX2 mRNA表達(dá)的影響（±s）

3　討論

我國(guó)是胃癌高發(fā)國(guó)家，每年新發(fā)病例占全世界發(fā)病人數(shù)的絕大多數(shù)。決定胃癌患者預(yù)后的關(guān)鍵在于早期發(fā)現(xiàn)、診斷和治療。慢性萎縮性胃炎伴腸上皮化生及異型增生是重要的胃黏膜癌前病變[5-6]。因此，胃黏膜腸上皮化生發(fā)病機(jī)制的研究，可為胃黏膜異型增生甚至癌變的治療提供新思路。

Krüppel樣基因家族（Krüppel like factor,KLFs）為哺乳類動(dòng)物的轉(zhuǎn)求調(diào)節(jié)因子，屬于鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄因子家族。其中KLF5又稱為BTEB2和IKLF，屬于KLF家族[7]。KLF5在不同組織不同層次中有廣泛的表達(dá)。作為一個(gè)基本的轉(zhuǎn)錄因子，KLF5在細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞凋亡、遷移和分化中發(fā)揮必不可少的作用。另外，KLF家族成員KLF2、KLF4、KLF5及KLF8均證實(shí)作為致癌因子，促進(jìn)各種癌癥的發(fā)生、發(fā)展[8-10]。有研究證明，KLF5協(xié)同其他轉(zhuǎn)錄因子促進(jìn)胃癌的發(fā)展[11]，而其在癌前病變中的作用并無(wú)相關(guān)報(bào)道。有研究表明，DCA可以誘導(dǎo)食管癌的癌前病變[2]。因此，本文用DCA誘導(dǎo)胃黏膜細(xì)胞，觀察KLF5沉默對(duì)胃黏膜腸上皮化生的作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，與正常胃黏膜相比，KLF5在腸上皮化生中的表達(dá)升高，提示KLF5可能在胃黏膜腸上皮化生中發(fā)揮重要作用。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與正常胃黏膜上皮細(xì)胞相比，DCA誘導(dǎo)胃黏膜腸上皮化生細(xì)胞模型中KLF5的表達(dá)升高。

細(xì)胞增殖和凋亡是保持機(jī)體平衡和修復(fù)損傷的重要因素。胃黏膜上皮細(xì)胞更新非常迅速，研究認(rèn)為腸上皮化生的發(fā)生是細(xì)胞異常增生逐漸積聚的結(jié)果[12]。有研究表明，抑制KLF5能夠減輕口腔黏膜癌前病變[13]。KLF5能夠促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，從而促進(jìn)癌癥的發(fā)展[14]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，DCA促進(jìn)GES-1細(xì)胞的增殖，并抑制凋亡，而KLF5沉默后抑制DCA對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡的影響。

同源異形盒基因CDX2是一種腸上皮特異性轉(zhuǎn)錄因子，可控制腸上皮細(xì)胞的分化和成熟，在腸上皮化生黏膜中呈高表達(dá)[15]。三葉因子家族（trefoil factor family,TFF）是胃腸道黏液細(xì)胞分泌的具有≥1個(gè)三葉結(jié)構(gòu)域的小分子蛋白質(zhì)多肽，主要功能是保護(hù)黏膜、促進(jìn)損傷黏膜修復(fù)。研究發(fā)現(xiàn)，在TFF2缺陷小鼠模型實(shí)驗(yàn)中，小鼠的胃黏膜增生降低，提示TFF2可能有刺激胃黏膜增殖的作用，增加胃癌發(fā)生的危險(xiǎn)性[16]。絨毛蛋白（Villin,VIL）是一種重要的細(xì)胞支架蛋白，在刷狀緣上皮細(xì)胞分化過(guò)程中發(fā)揮重要作用。近年來(lái)研究表明，VIL1是腸上皮細(xì)胞分化和轉(zhuǎn)移性腸腺癌的標(biāo)志物，可以輔助明確轉(zhuǎn)移性腫瘤的來(lái)源[17]。因此，TFF2、VIL1和CDX2作為腸上皮化生的標(biāo)志蛋白，在腸上皮化生過(guò)程中發(fā)揮重要作用。越來(lái)越多的研究表明，Wnt信號(hào)通路除參與調(diào)控發(fā)育過(guò)程外，在癌癥的發(fā)展中也發(fā)揮重要作用。Wnt途徑激活后，相關(guān)的細(xì)胞周期和凋亡相關(guān)基因、生長(zhǎng)因子和黏附分子等開(kāi)始轉(zhuǎn)錄，參與癌癥的發(fā)生、發(fā)展[18]。有研究表明，KLF5敲除的小鼠中Wnt通路被抑制，腸上皮穩(wěn)態(tài)被破壞[19]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，KLF5沉默抑制DCA對(duì)TFF2、VIL1和CDX2的上調(diào)作用；另外，在Wnt通路干預(yù)后，si-KLF5的作用又被抑制，表明KLF5可能通過(guò)Wnt/β-catenin通路促進(jìn)DCA誘導(dǎo)的腸上皮化生。

綜上所述，本文通過(guò)DCA誘導(dǎo)胃黏膜上皮細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)KLF5沉默明顯抑制DCA誘導(dǎo)的胃黏膜上皮細(xì)胞腸上皮化生，表明KLF5可能促進(jìn)DCA誘導(dǎo)的腸上皮化生，其機(jī)制可能是通過(guò)激活Wnt/β-catenin通路來(lái)實(shí)現(xiàn)的。本研究指出KLF5參與DCA誘導(dǎo)的胃黏膜腸上皮化生的發(fā)生，為預(yù)防胃癌提供新的靶點(diǎn)。